转基因题库

名词解释

1. reverse genetics

◆Reverse genetics, 反向遗传学：由转基因小鼠体系发展而建立的,则先在体外使基因某一片段发生突变，然后导入基因组，从而研究基因结构和功能关系以及建立人类遗传病动物模型．这种从特定基因的改造到整体动物的表型分析的研究思路称为反向遗传学。

2. therapeutic cloning

◆therapeutic cloning，治疗性克隆：是指将病人体细胞核移植到去核的卵母细胞中，在核重新编程(reprogramming)后，供体体细胞核重新获得发育的全能性，并可启动胚胎发育，产生携带有病人基因组的多潜能干细胞；然后，经诱导分化成各种类型的替代细胞，来修复损伤组织或器官的过程。

3. mammary gland bioreactor

◆mammary gland bioreactor：乳腺生物反应器。是将外源基因在乳腺中特异表达，以转基因动物的乳腺组织生产药用蛋白，采用乳腺生物反应器生产药用蛋白是一种全新的生产模式，已经成为生物技术领域发展的重要方向

4. model organigms

◆model organigms 模式生物指那些遗传背景明确，生化生理特性明确特别适于基因组改造和进行相关功能研究的一些生物品系．小鼠，大鼠，线虫，果蝇，斑马鱼等。

5. gene targeting

◆Gene targeting：基因打靶技术,是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段.通过对生物活体遗传信息的定向修饰(包基因灭活,点突变引入,缺失突变,外源基因定位引入,染色体大片段删除等),并使修饰后的遗传信息在生物活体内遗传,表达突变性状,从而研究基因功能等生命科学的重大问题,以及提供相关的疾病治疗,新药筛选评价模型等.它的产生和发展建立在胚胎干细胞(embryonic stem cells)技术和同源重组技术（homologous recombination)成就的基础之上,并促进了相关技术的进一步发展。

◆gene targeting 基因打靶：是指通过DNA定点同源重组，改变基因组中的某一特定基因，从而在生物活体内研究此基因的功能。基因打靶技术是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段，它的产生和发展建立在胚胎干(ES)细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，并促进了相关技术的进一步发展。基因打靶技术将广泛应用于基因功能研究、人类疾病动物模型的研制以及经济动物遗传物质的改良等方面。

6. somatic cell nuclear transfer

◆somatic cell nuclear transfer体细胞核转移，又称体细胞克隆，它是把分化程度较高的体细胞移入去核卵母细胞中，构建新合子的生物技术。它与胚胎克隆技术相比，有两大优点:第一，同一遗传性状供体核的数量可无限获得；第二，可通过对供体细胞的遗传改造加速家畜品种改良或生产转基因动物。

◆somatic cell nuclear transfer：核移植技术，是指利用显微外科手术的方法将胚胎细胞或成体细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，构建成重组胚，通过体内或体外培养、胚胎移植，产生与供体细胞基因型相同的后代的技术过程，又称为动物克隆技术。

7. positive negative selection

◆positive negative selection：正负选择（筛选）系统，是一类定位在基因片段末端，同源区以外的附加的标记基因组。通过正选择基因和负选择基因的正负筛选标记，大大提高筛选效率。（不确定）

◆positive negative selection 正负双向选择系统(positive-negative-selection, PNS)是基因打靶的常用筛选方法之一，可以更好地筛选发生同源重组的克隆。同源重组时，只有载体的同源区以内部分发生重组，同源区以外部分将被切除。随机整合时，是在载体的两端将整个载体连入染色体内。置换型载体含有正负选择基因各一个，正选择基因多为neo基因，位于同源区内，其在随机整合和同源重组中均可正常表达。负选择基因在靶基因同源区之外，位于载体的3’末端，常用HSV-tk基因，在同源重组时，tk基因将被切除而丢失，相反在随机整合时，所有的序列均保留（包括tk）。胸苷激酶蛋白（TK）可使无毒的丙氧鸟苷（GANC）转变为毒性核苷酸，而杀死细胞，因而可用丙氧鸟苷筛选排除随机整合的细胞株。故同源重组时，G418和GANC都有抗性，随机整合时对G418有抗性，但对GANC敏感，细胞将被杀死，无整合的将被G418杀死。用G418作正筛选，选出含有neo基因的细胞株，再用丙氧鸟苷作负筛选淘汰含有tk基因的细胞株，保留未含有tk基因的同源重组细胞株。此方法是目前应用较广泛的一种策略。

图正负双向选择法示意图

a：同源重组；

b：随机整合；

neor：新霉素抗性基因；

HSV-tkc：疱疹病毒胸苷激酶基因；

GeneX：干细胞内源基因（与导入基

因同源）；

G418：新霉素；

GANC：抗致死的核苷类似物；

核苷类似物参与合成，细胞致死。

◆Positive-negative selection 1988－Capceehi Lab Mansour等发展了一种“正负筛选”（Positive-negative selection，ＰＮＳ)策略，将胸腺嘧啶激酶基因（ＴＫ）置于打靶载体外侧，作为负筛选标记．与单一正筛选标记策略相比，ＰＮＳ策略正确克隆富集的倍数要高３－１０倍．真正使得同源重组技术可以作为修饰哺乳动物细胞基因组遗传信息的常规手段并应用于生命科学研究的各个领域

8. gene trap

◆gene trap

从基因组捕捉能够表达的基因的一种策略，是目前最具应用前景的基因克隆方法之一。常用的办法是将基因组序列片段插入到基因捕获载体（不带调控元件、但含可供筛选的抗性基因、酶基因编码序列等）中，从所构建的文库中捕捉能表达的基因。