转基因题库

名词解释1. reverse genetics◆Reverse genetics, 反向遗传学：由转基因小鼠体系发展而建立的,则先在体外使基因某一片段发生突变，然后导入基因组，从而研究基因结构和功能关系以及建立人类遗传病动物模型．这种从特定基因的改造到整体动物的表型分析的研究思路称为反向遗传学。

2. therapeutic cloning◆therapeutic cloning，治疗性克隆：是指将病人体细胞核移植到去核的卵母细胞中，在核重新编程(reprogramming)后，供体体细胞核重新获得发育的全能性，并可启动胚胎发育，产生携带有病人基因组的多潜能干细胞；然后，经诱导分化成各种类型的替代细胞，来修复损伤组织或器官的过程。

3. mammary gland bioreactor◆mammary gland bioreactor：乳腺生物反应器。

是将外源基因在乳腺中特异表达，以转基因动物的乳腺组织生产药用蛋白，采用乳腺生物反应器生产药用蛋白是一种全新的生产模式，已经成为生物技术领域发展的重要方向4. model organigms◆model organigms 模式生物指那些遗传背景明确，生化生理特性明确特别适于基因组改造和进行相关功能研究的一些生物品系．小鼠，大鼠，线虫，果蝇，斑马鱼等。

5. gene targeting◆Gene targeting：基因打靶技术,是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段.通过对生物活体遗传信息的定向修饰(包基因灭活,点突变引入,缺失突变,外源基因定位引入,染色体大片段删除等),并使修饰后的遗传信息在生物活体内遗传,表达突变性状,从而研究基因功能等生命科学的重大问题,以及提供相关的疾病治疗,新药筛选评价模型等.它的产生和发展建立在胚胎干细胞(embryonic stem cells)技术和同源重组技术（homologous recombination)成就的基础之上,并促进了相关技术的进一步发展。

◆gene targeting 基因打靶：是指通过DNA定点同源重组，改变基因组中的某一特定基因，从而在生物活体内研究此基因的功能。

基因打靶技术是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段，它的产生和发展建立在胚胎干(ES)细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，并促进了相关技术的进一步发展。

基因打靶技术将广泛应用于基因功能研究、人类疾病动物模型的研制以及经济动物遗传物质的改良等方面。

6. somatic cell nuclear transfer◆somatic cell nuclear transfer体细胞核转移，又称体细胞克隆，它是把分化程度较高的体细胞移入去核卵母细胞中，构建新合子的生物技术。

它与胚胎克隆技术相比，有两大优点:第一，同一遗传性状供体核的数量可无限获得；第二，可通过对供体细胞的遗传改造加速家畜品种改良或生产转基因动物。

◆somatic cell nuclear transfer：核移植技术，是指利用显微外科手术的方法将胚胎细胞或成体细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，构建成重组胚，通过体内或体外培养、胚胎移植，产生与供体细胞基因型相同的后代的技术过程，又称为动物克隆技术。

7. positive negative selection◆positive negative selection：正负选择（筛选）系统，是一类定位在基因片段末端，同源区以外的附加的标记基因组。

通过正选择基因和负选择基因的正负筛选标记，大大提高筛选效率。

（不确定）◆positive negative selection 正负双向选择系统(positive-negative-selection, PNS)是基因打靶的常用筛选方法之一，可以更好地筛选发生同源重组的克隆。

同源重组时，只有载体的同源区以内部分发生重组，同源区以外部分将被切除。

随机整合时，是在载体的两端将整个载体连入染色体内。

置换型载体含有正负选择基因各一个，正选择基因多为neo基因，位于同源区内，其在随机整合和同源重组中均可正常表达。

负选择基因在靶基因同源区之外，位于载体的3’末端，常用HSV-tk基因，在同源重组时，tk基因将被切除而丢失，相反在随机整合时，所有的序列均保留（包括tk）。

胸苷激酶蛋白（TK）可使无毒的丙氧鸟苷（GANC）转变为毒性核苷酸，而杀死细胞，因而可用丙氧鸟苷筛选排除随机整合的细胞株。

故同源重组时，G418和GANC都有抗性，随机整合时对G418有抗性，但对GANC敏感，细胞将被杀死，无整合的将被G418杀死。

用G418作正筛选，选出含有neo基因的细胞株，再用丙氧鸟苷作负筛选淘汰含有tk基因的细胞株，保留未含有tk基因的同源重组细胞株。

此方法是目前应用较广泛的一种策略。

图正负双向选择法示意图a：同源重组；b：随机整合；neor：新霉素抗性基因；HSV-tkc：疱疹病毒胸苷激酶基因；GeneX：干细胞内源基因（与导入基因同源）；G418：新霉素；GANC：抗致死的核苷类似物；核苷类似物参与合成，细胞致死。

◆Positive-negative selection 1988－Capceehi Lab Mansour等发展了一种“正负筛选”（Positive-negative selection，ＰＮＳ)策略，将胸腺嘧啶激酶基因（ＴＫ）置于打靶载体外侧，作为负筛选标记．与单一正筛选标记策略相比，ＰＮＳ策略正确克隆富集的倍数要高３－１０倍．真正使得同源重组技术可以作为修饰哺乳动物细胞基因组遗传信息的常规手段并应用于生命科学研究的各个领域8. gene trap◆gene trap从基因组捕捉能够表达的基因的一种策略，是目前最具应用前景的基因克隆方法之一。

常用的办法是将基因组序列片段插入到基因捕获载体（不带调控元件、但含可供筛选的抗性基因、酶基因编码序列等）中，从所构建的文库中捕捉能表达的基因。

利用该技术建立的随机插入突变的突变体文库，可用于寻找、鉴定和研究大量未知功能和已知功能的活化基因，它是继自然突变、物理突变和化学突变之后发展起来的新的分子生物学方法。

基因捕获载体是带有报告基因和/或选择标记基因的不完整的基因表达载体；这些载体所带的基因只有在整合到宿主功能基因内部且与融合的宿主基因编码框一致时才能得以表达。

基因捕获的策略如图所示。

典型的基因捕获载体包括一个无启动子的报道基因，通常是neo 基因。

neo基因插入到ES细胞染色体组中，并利用捕获基因的转录调控元件实现表达的ES 克隆可以很容易地在含G418的选择培养基中筛选出来。

◆gene trap：基因陷阱或基因捕获（gene trap）是通过在基因组中创造随机插入突变，来直接获得分子特征。

基因陷阱或基因捕获载体包含一个无启动子的报告基因或选择标记，它能在插入位置（内含子）激活所在基因表达。

因这系列方法酷似以报道基因为诱饵来捕获基因，故得名基因陷阱或基因捕获。

◆Gene trap:基因捕获技术: 通过报告载体随机整合到基因组,产生插入失活突变并揭示基因表达模式及其功能，是建立高通量变大规模基因突变模型的一种便利手段9. mosaic◆Mosaic: 同源性嵌合体，即起源于同一合子发育成不同核型的细胞系所形成的个体。

10. Embryonic stem cell◆Embryonic stem cell: 胚胎干细胞（ES cell），即当受精卵发育成囊胚时，内层细胞团(Inner cell mass)的细胞即为胚胎干细胞。

胚胎干细胞具有全能性，可以自我更新并具有分化为体内所有组织的能力。

进一步说，胚胎干细胞是一种高度未分化细胞，具有发育的全能性，能分化成体动物的所有组织和器官，包括生殖细胞。

ES细胞可被培养，操纵然后注射进囊胚中，生长出胚胎的各个组成部分。

总之，ES细胞可以产生大量用于病人移植的所需的细胞。

11. reprogramming◆reprogramming（细胞核重编程）：细胞核重编程是哺乳动物正常受精胚胎和克隆胚胎发育过程中的一个重要特性,主要是对表观遗传学特征进行重新编写,包括染色质重塑、组蛋白修饰、DNA甲基化、印记基因表达、X染色体失活等表观遗传修饰的改变。

通过细胞核重编程,首先,受精卵和克隆胚胎的供体核停止其特有的基因表达程序,恢复为全能状态的基因表达程序;然后,受精胚胎和克隆胚胎的细胞再从全能状态重新进入分化状态,最终形成各种组织和器官。

12. knock in mice◆knock in mice 基因敲入小鼠是实验室里研究者用于表达一个转基因，比如cDNA 或者通过内源基因的表达调控在目标载体中构建的一个含有报告基因。

目前应用最广泛的敲入技术是将最常见的基因置换成某一报告基因LacZ或GFP，通过在成年小鼠体内检测这些报告基因来观察本身基因的表达。

◆Knock in —is a modification in which a specific mutation(s) or rearrangement is introduced and the gene remains functional. Knock in experiment are used to place a transgene , such as a CDNA or a reporter construct contained in a targeting vector, under the transscriptional control of an endogenous gene.As discussed above, most widely used knock-in strategy is the replacement the most widely used of a gene by a reporter gene such as LacZ or GFP, to monitor expression pattern of the gene during development and in the adult mouse, both in a spatial and mutation. However, it is important to note that such a temporal manner基因敲入，是指只通过特定突变或者重排，而基因功能任然存在的基因修饰技术。

基因敲入实验通常将一个转基因（例如cDNA或者打靶载体中的报告结构）置入内源性基因的转录调控中。

最广泛使用的基因敲入策略是用一个报告基因（β- 半乳糖苷酶LacZ 或者荧光蛋白GFP）取代原来的基因，在发育期和成年鼠中观察其表现型。