植物血凝素的提取
植物凝集素提取工艺
植物血凝素也称为植物凝集素（PHA），可自制也可购自商品。
自制的方法常用生理盐水提取法。
（A）干品制备法（1）选广东鸡子豆10g，用蒸馏水冲洗，置培养皿内用75%酒精一次性浸洗，倒掉酒精留间隙置37℃。
恒温箱内24-48小时；（2）在无菌条件下研碎鸡子豆，加生理盐水30ml，摇匀后放入4℃冰箱24小时，第二天再加生理盐水70ml，再置4℃冰箱内24小时。
每8-12小时摇荡一次。
（也可一次（3）无菌条件下移入10-50ml离心管内，3000-4000rpm30性加100ml生理盐水）；分钟。
在无菌箱内把上清液分装于10ml小瓶，置冰箱冷冻层备用；（4）效价：外周血染色体制备每100ml培养基加PHA约2ml。
注：若整个过程未在无菌条件下进行，分装时用G5玻砂漏斗除菌即可。
（B）鲜品制备法：（1）选择完整无破皮鲜菜豆20g，用75%酒精浸泡10分钟；（2）在净化工作中用无菌盐水或蒸馏水漂洗二次，然后置无菌乳钵中捣成糊状，用100ml无菌盐水浸泡封口；（3）移入4℃冰箱中置24小时，中间摇动数次，次日3000rpm30分钟，在无菌情况下分装上清液于10ml小瓶内，置冰箱冷冻层备用。
（4）效价：正式使用前先用一定量作效价测定，按效价使用。
青豌豆的．提取：取青豌豆100克，加含0.15M氯化钠的0.01M pH7.0磷酸缓冲液200ml浸泡过夜，经膨胀后用组织捣碎机捣碎，倒入布袋中压榨出水提液，在沉渣中再力0入磷酸缓冲液100ml搅拌，浸泡1时，压榨出水提液，合并水提液，量出总体积。
加0.01％叠氮钠防腐。
2．蛋白质沉淀：边搅边加入固体硫酸铵达80％饱和（每升溶液加硫酸铵561克）冷藏过夜。
吸取上清液，沉淀再用二层滤纸抽气过滤至干，即得粗制青豌豆素蛋白沉淀物硫酸铵糊。
置冰箱保存。
3．亲和层析分离(1)装柱：取直径为1.0 cm，长度为25 cm的层析柱，按（实验十五）操作，自顶部缓缓加入稀薄的Sephadex G25悬液，待凝胶上升至距顶柱约3-5 cm即可，用1M NaCl溶液平衡10分钟。
植物凝集素(PHA)的提取及血凝效果研究
植物凝集素(PHA)的提取及血凝效果研究
于敏;王志德;董志芳
【期刊名称】《安徽科技学院学报》
【年(卷),期】2002(016)001
【摘要】凝集素是一类具有糖专一性、可促使细胞凝集的蛋白质或糖蛋白,本文通过提取8种豆科植物种子中的凝集素,分别与人的四种血型红细胞悬液发生凝集反应(A型、B型、O型、AB型),通过血凝反应的强弱程度来验证不同凝集素的血型专一性,并进一步测定其相对含量.
【总页数】3页(P23-25)
【作者】于敏;王志德;董志芳
【作者单位】安徽大学生命科学院,安徽,合肥,230039;安徽大学生命科学院,安徽,合肥,230039;安徽大学生命科学院,安徽,合肥,230039
【正文语种】中文
【中图分类】Q946.1
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平
5.蒜头果凝集素的提取及血凝效果研究 [J], 袁燕;袁再美;岑晓江;程霞
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植物血凝素的药理作用
一、药物构成及规格：本品又称植物血球凝集素，通过超低温萃取技术从红芸豆中提取得到的植物蛋白，主要成分为D－甘露糖、氨基葡糖醛酸衍生物所构成的低聚糖辅基与蛋白质复合物，并通过冷冻干燥技术制成。
二、理化特性1. 本品为一种植物蛋白质；2. 分子量大约为128KDa；3. 本品为白色至类白色团粉末，性质稳定；4. 本品易溶于水，溶液呈乳浊状。
三、药物特点1. 本品通过超低温提取，并通过包被制剂技术，增强了本品抗热变性能力，同时不会被动物或昆虫胃肠的蛋白酶降解，在很大的pH范围内稳定。
因而不但延长了储存周期，而且在使用时，不受胃肠道中蛋白酶的影响。
2. 本品与聚肌胞诱导干扰素有所不同。
本品主要诱导产生γ-干扰素，而聚肌胞诱导机体产生α-干扰素。
γ-干扰素有自己独有的受体，同时γ-干扰素可以发挥“抗原定位”作用，使免疫系统能够为特殊的病毒筛选出特殊的抗体，并且可以对那些能够吞噬和消灭病原体的免疫细胞产生活化作用。
本品同样对于不同动物使用都可有效诱生干扰素，无种属限制，避免了直接使用干扰素的缺陷。
3. 本品因其独特的糖蛋白复合结构，在体内可迅速代谢掉，不会造成残留危害人类健康，符合当今用药要求。
四、效果分析：1. 本品口服可以与小肠上皮细胞结合，从而促进幼仔畜胃肠道的发育和胃肠道功能成熟，减少肠道大分子的吸收，增加胰腺蛋白和胰岛素的含量，促进了仔畜的食欲，从而减弱了大多数仔畜都会发生的断奶后生长抑制；而注射给药PHA与肠外其他组织结合，增加了肝脏和脾脏的重量。
瑞典农业大学( Swedish University of Agricultural Sciences)的研究小组在2004年国际猪兽医学会(IPVS)猪健康代表大会上报告说：现已证实植物血凝素可促进哺乳仔猪和大鼠肠道的成熟。
Thomsson等研究了植物血凝素是否能促进断乳小猪肠道的发育。
结果显示，使用PHA的断乳小猪在断乳后第一周生长较快（P=0.013），腹泻指数比对照组减少（P=0.10），且采食量增加（P=0.028），小肠屏障特性增加，小肠总长度长于对照组（P=0.063）。
植物血凝素的研究应用
植物血凝素的研究应用
王建发; 张敏; 林玉才
【期刊名称】《《北方牧业》》
【年(卷),期】2008(000)008
【摘要】植物血凝素（植物血细胞凝集素，PHA）是一种从红芸豆中提取的有丝
分裂原，作为一种低聚糖与蛋白质的复合物，植物血凝素有促进淋巴细胞有丝分裂、激活免疫细胞——淋巴细胞的作用。
【总页数】1页(P28)
【作者】王建发; 张敏; 林玉才
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】S8
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断价值 [J], 丁冰玉;林萍;李擎天
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植物血凝素的不同提取方法及活性测定
植物血凝素的不同提取方法及活性测定陈元坤;廖明初;欧红萍;李超;吴学渊【摘要】Phytohaemagglutinin was extracted by distilled water at 4 ℃ from crushed beans, and its supernatant was precipitated by（NH4）2SO4, ultrafiltrated by 100 KD molecular weight fiber membrane respectively. The supernatant solution,（NH4）2SO4 precipitation liqui%将鸡子豆粉碎后,采用蒸馏水冷浸提取其中的植物血凝素（PHA）,浸提后的上清液经（NH4）2SO4沉淀,100KD分子量的中空纤维超滤膜超滤,然后取PHA上清液、（NH4）2SO4沉淀液、超滤液和浓缩液测定血凝活性,血凝效价依次为28、27、29、27。
通过试验,笔者认为超滤法可作为PHA的初步纯化方法。
【期刊名称】《四川畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)008【总页数】2页(P24-25)【关键词】鸡子豆;植物血凝素;超滤;血凝活性【作者】陈元坤;廖明初;欧红萍;李超;吴学渊【作者单位】四川省新兽药工程技术研究中心,四川成都611130;重庆市长寿区凤城畜牧兽医站,重庆长寿401220;成都农业科技职业学院,四川成都611130;四川省新兽药工程技术研究中心,四川成都611130;四川省新兽药工程技术研究中心,四川成都611130【正文语种】中文【中图分类】S852.45植物血凝素（PHA）是一种非免疫来源，是对糖及其缀合物可逆专一识别的蛋白质分子，广泛分布于植物、动物和微生物中。
豆科植物的血凝素在成熟种子中占蛋白质总含量的10%左右。
PHA可刺激T淋巴细胞增殖分化产生大量效应T细胞和细胞毒T细胞；又可同时刺激B细胞转化为浆母细胞后增殖分化为浆细胞，具有免疫增强的作用。
植物凝集素(PHA)的提取及血凝效果研究
确立 了凝集 素 的血型专一 性 和它 们的糖结 合血 专
一
体 组成 ， 每个 单体 的分子量 为 ２ ～３ Ｄ， 一个 ５ ０Ｋ 有 结合糖 位 点 ＿ Ｊ 凝 集 素 不 仅 具 有 凝 集 诸 如血 ｌ 。 细胞 、 巴细胞 、 子细 胞等 作 用 ， 且 参与 了生 淋 精 而
占蛋 白质 总含 量 的 １ ％左右 ． 由 ２个 或 ４个 单 ０ 它
具 有 较 大 应 用 价 值 ． 油 麻 藤 种 子 中的 凝 集 素 如 （ Ｌ 即 是 一 种 人 Ａ 型 血 专 一 性 的凝 集 素 ＿ 。 Ｍｓ ） ４ 】 Ｐ 利马 豆凝集 素 ） Ａ 型血专 一 ， Ｌ 欧洲 百 Ｉ Ａ（ 对 （
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安徽 技术 师范学院学报， ０２ １ （ ）２ －２ ２ ０ ， ６ １ ：３ ５
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植物凝集素 （ Ｈ 的提取及血凝效果研 究 Ｐ Ａ）
１ ． 试剂 ： ８ ％Ｎａ Ｉ 液 （ １ ３ ０．５ Ｃ溶 生理盐 水 ）
生物 体 内细 胞癌变 、 受精 、 化 及分 子识 别等 生命 分
过程 极其 有 用的工具 ， 同时 作 为一种试 剂 ， 凝集 素
不仅 在ｌ 医学检 验 上 有 着 重要 地 位 ， 且 是抗 临床 雨 肿 瘤药物 （ 干扰 素 、 如 白细 胞 介 素一 ） 产 所需 ２等 生 的促 有丝 分 裂原 Ｌ ７， ３ １国外 近 来还 报道 某 些 凝集 － 素对爱 滋病 毒也 有 抑 制 作 用 ・ 。凝 集 素可 能具
植物血凝素
功能功用
植物血凝素(Phytohaemagglutinin)是一种有丝分裂原，能激活小淋巴细胞转化为淋巴母细胞，继而分裂增 殖，释放淋巴因子，并能提高巨噬细胞的吞噬功能。作为干扰素诱导剂可以刺激机体产生白介素-2和干扰素；还 可以刺激机体产生非特异性抗体。由于其较难提纯，且成本极高，所以一直以来仅在实验室中作为刺激淋巴细胞 增殖的试剂。
1．利用鸡的白细胞脾细胞鸡胚成纤维细胞以有机锗（Ce—123）新城疫弱毒株（NDV-F）植物血凝素（PHA） 聚肌胞（POLYI:C）为诱生剂，对外源性干扰素（IFN）诱生条件如诱生剂量诱生时间及培养条件进行了比较分析 和探讨，结果发现以Ce—123诱生IFN的能力为最强，其他依次为：PHA NDV-F POLYI:C；且鸡脾细胞和鸡白细胞 产生的IFN效价高于鸡胚成纤维细胞；并且最佳诱生剂量依次为：Ce—123为70微克/毫升；鸡NDV-F为128HAU/毫 升；POLYI:C为60微克/毫升；PHA为20毫克/毫升。该研究表明，植物血凝素在机体内刺激机体产生干扰素的能力 是聚肌胞的30倍，所以服用1mg植物血凝素相当于服用30mg的聚肌胞和直接服用300mg干扰素。
2..PHA同时可刺激B细胞转化为浆母细胞然后增殖分化为浆细胞，浆细胞产生大量的非特异性抗体来中和病 毒。
谢谢观看
2．PHA对家禽的新城疫、传染性法氏囊病、传染性支气管炎、传染性喉气管炎、脑脊髓炎、流感等疾病的预 防及治疗效果。结果表明PHA对下列病毒感染的保护率分别为新城疫77。5%、传染性法氏囊病92。5%、传染性支 气管炎85%、传染性喉气管炎77。5%、脑脊髓炎90%、流感80%。
作用机理
1．PHA刺激T细胞增殖分化产生大量效应T细胞和细胞毒T细胞；效应T细胞分泌产生大量细胞因子（如干扰素 等）杀伤病毒；细胞毒T细胞可直接杀伤病毒。
植物凝集素的分离纯化及部分性质测定
第11周 2011-5-3/4植物凝集素的分离纯化及部分性质测定分离纯化工艺策略：主要是根据物质的结构和性质来选用各种纯化技术。
工艺次序的选择策略包括：1.应选择不同机理的分离单元组成一套工艺；2.应将含量多的杂质先分离出去；3.尽早采用高效分离手段；4.将最昂贵、最费时间的分离单元放在最后阶段。
也就是说，通常先运用非特异、低分辨的操作单元，如沉淀、超滤和吸附等，这一阶段主要目的是尽量缩小样本体积，提高目的物浓度，去除最主要的杂质（包括非蛋白质类杂质）；5.随后是高分辩率的操作单元，如具有选择性的离子交换色谱和亲和色谱，而将凝胶过滤色谱这类分离规模小、分离速度慢的操作单元放在最后，这样可以使分离效益大大提高。
色谱分离的次序。
一个合理组合的色谱次序能够克服某些方面的缺点，同时很少改变条件即可进行各步骤之间的过渡。
如：◇在离子交换色谱之后进行疏水作用色谱，不必经过缓冲液的交换，因为多数蛋白质在高离子强度下与疏水介质结合能力较强。
◇凝胶过滤色谱放在最后一步又可以直接过渡到适当的缓冲体系中以利产品成形保存。
总之，蛋白质的纯化大至步骤为：样品经初步提取筛除部分杂质后，选择不同的层析手段相互配合进一步提纯。
第一部分离子交换层析1. 原理：离子交换层析（Ion-exchange chromatography，IEC）是以离子交换剂为固定相，以特定的含离子的溶液为流动相，利用离子交换剂对各类化学物质或生物大分子因电荷差异而产生不同的结合力，从而将混合物中不同组分进行分离的层析技术。
Cation exchanger（阳离子交换）: 层析介质本身带负电荷,交换带正电荷物质Anion exchanger （阴离子交换）:层析介质本身带正电荷,交换带负电荷物质–当缓冲环境 pH > pI, 蛋白质带负电–当 pH < pI, 蛋白质带正电–当pH = pI, 蛋白质不带电–以阳离子交换树脂交换分离蛋白质的原理和方法为例: 将阳离子交换树脂（本身带负电荷）颗粒填充在层析管内，带正电荷的蛋白质(pH<pI)就被吸引，但由于各种蛋白质所带电荷的种类和数量不同，它们被吸引的程度也不同。
植物血凝素皮内试验
植物血凝素皮内试验植物血凝素皮内试验是一种用来检测植物血凝素对人体的过敏反应的方法。
本文将着重介绍植物血凝素的概念、应用、执行步骤、结果解读以及存在的问题和前景。
植物血凝素是一种存在于许多植物中的蛋白质，它具有促进血液凝固的作用。
当人体接触到这些植物血凝素时，可能会出现过敏反应。
因此，通过植物血凝素皮内试验可以评估一个人是否对某种植物血凝素过敏。
植物血凝素皮内试验主要用于评估花粉过敏症、食物过敏相似物反应以及相关的植物过敏反应。
执行植物血凝素皮内试验的步骤通常包括：1. 收集需要测试的植物血凝素；2. 给受试者进行皮内注射；3. 观察注射部位是否产生变红、肿胀或者瘙痒等反应。
根据反应的强度和时间来评估对植物血凝素的过敏程度。
当植物血凝素皮内试验显示正常反应时，这表明受试者对该种植物血凝素并无过敏反应。
然而，当植物血凝素皮内试验显示异常反应时，可能说明受试者对该植物血凝素过敏或者敏感。
需要注意的是，皮内试验仅仅是一种初步判断方法，可能存在误差。
因此，正式的诊断应该结合临床症状、过敏原检测以及其他相关检查结果综合分析。
目前，植物血凝素皮内试验在临床上的应用还不十分广泛。
一方面，植物血凝素的提取和制备工作较为繁琐，需要一定的实验条件和技术。
另一方面，植物血凝素皮内试验存在一定的操作难度，需要专业的人员执行。
因此，在临床实践中，往往会结合其他过敏测试方法来进行综合评估。
植物血凝素皮内试验的局限性也需要我们关注。
一方面，该试验只能检测特定的植物血凝素，无法对其他过敏原进行评估。
另一方面，植物血凝素皮内试验对于不同人群的敏感度可能存在差异，如儿童和老年人可能相对更加敏感。
因此，在实施该试验时，需要综合考虑受试者的个体差异。
尽管存在以上问题，植物血凝素皮内试验仍然具有广阔的应用前景。
首先，随着对植物过敏反应的研究不断深入，相关的植物血凝素也将越来越多地被发现和应用。
其次，植物血凝素皮内试验在评估过敏反应和过敏性疾病方面具有一定的准确度和实用性。
玉竹,黄精凝集素提取纯化
玉竹黄精凝集素的分离纯化凝集素介绍：凝集素是在自然界广泛存在的可以凝集细胞和使糖复合物或多糖复合物沉淀的非免疫来源的蛋白质或糖蛋白,在植物、动物和微生物体中发挥着多种重要的生物学功能。
凝集素已经被应用到细胞间的相互作用,配基和受体的识别,血型的鉴定,淋巴细胞的分布,健康和病理条件下的组织化学研究,肿瘤细胞的识别,细胞的黏附和定位,生物膜信号的传导,增强肌体免疫防御,生物大分子的运输和某种程度上的免疫识别过程。
单子叶甘露糖结合凝集素作为一类研究的比较多的凝集素已在多种植物中被发现,如郁金香、芦荟、风信子等。
而且单子叶甘露糖结合凝集素已经在不同领域引起了越来越多的关注,并且大部分是其抗病毒活性和抗虫特性的生物化学研究和开发。
尤其是近来在免疫缺陷病毒方面的研究,使得单子叶甘露糖结合凝集素的研究意义更加突出。
玉竹凝集素的提取纯化：实验原理：百合科植物玉竹( Polygonat um odorat um ( Mill. ) Druce) 的根状茎经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose 柱离子交换层析和Sephacryl S-200 凝胶过滤，即可得到玉竹凝集素的纯品。
实验材料：玉竹;丙烯酰胺(acrylamide) ;氯化铯(Caesium chloride);碘化钾;所用溶液均以双蒸水配制.取玉竹根状茎经高速组织捣碎机粉碎,经3 倍体积生理盐水(0. 9 %NaCl) 浸取、过滤、离心(4°C ,4500r/ min ,30min) 后,向上清液中加入30 %～80 %硫酸铵进行蛋白质分级沉淀,离心收集沉淀并用水充分透析除去硫酸铵得玉竹凝集素粗品。
所得凝集素粗品经pH 4. 6 ,0. 02mol/ L NaAc2HAc 缓冲液平衡透析后,用于CM-Sepharose (2. 6 ×28cm) 柱, 经相同缓冲溶液洗涤后,用0～1mol/ L NaCl 的NaAc-HAc 溶液进行离子线性梯度洗脱,经紫外和凝血活性检测后,收集活性部分,冷冻干燥。
植物血凝素PHA说明书
植物血凝素(PHA)植物血凝素(phytohaemagglutinin)(PHA)是一种有丝割裂原，要紧用于激活免疫细胞-淋巴细胞。
是一种干扰素诱导剂，不仅能够刺激机体产生白介素-2和干扰素；还能够刺激机体产生非特异性抗体；增强免疫细胞-浆细胞产生特异性抗体的质和量。
由于其较难提纯，且本钱极高，因此一直以来仅在实验室中作为刺激淋巴细胞增殖的试剂。
我公司共投资300万元，用4年的时刻通过量年实验终于试探出植物血凝素（PHA）的提取方式，利用国际最先进的超低温冷冻方式从红芸豆中提掏出纯度可达%的植物血凝素（PHA），填补了国内空白。
PHA的作用机理：1．PHA刺激T细胞增殖分化产生大量效应T细胞和细胞毒T细胞；效应T细胞分泌产生大量细胞因子（如白细胞介素、干扰素等）杀伤病毒；细胞毒T细胞可直接杀伤病毒。
2．PHA可刺激B细胞转化为浆母细胞然后增殖分化为浆细胞，浆细胞产生大量非特异性抗体来中和病毒。
同时能够刺激机体免疫细胞-浆细胞产生特异性抗体的质和量；提高机体的免疫力。
我公司研究植物血凝素（PHA）在动物疾病防治上的应用，要紧进行了以下实验：1．利用鸡白细胞、脾细胞、鸡胚成纤维细胞以有机锗Ce-132、新城疫弱毒株NDV-F、植物血凝素（PHA）、聚肌胞PolyI：C为诱生剂，对外源性干扰素IFN诱生条件如诱生剂量、诱生时刻及培育条件进行了比较分析和探讨，结果发觉以Ce-132诱生IFN的能力为最强，其他依次为PHA、NDV-Ｆ、PolyI：Ｃ；且鸡脾细胞和鸡白细胞产生的IFN效价高于鸡胚成纤维细胞；而且最正确诱生剂量依次为：Ce-132为70微克／毫升；鸡HDV-Ｆ为128HAU／毫升；PolyI：Ｃ为60微克／毫升；PHA为20微克／毫升。
该研究说明，植物血凝素（PHA）在机体内刺激机体产生干扰素的能力是聚肌胞的30倍，所产生的作用是直接服用干扰素的300倍，因此服用1mg植物血凝素（PHA）相当于服用30mg的聚肌胞和直接利用300mg干扰素。
植物血凝素的功能主治
植物血凝素
【性状】本品为类白色或微黄色粉末
【药理作用】植物血凝素是一种有丝分裂原，是从红芸豆中萃取出的植物血凝素。
主要用于激活免疫细胞淋巴细胞，是一种干扰素诱导剂，不仅可以刺激机体产生白介素和干扰素，还可以刺激机体产生非特异性抗体，疗效是一般抗病毒西药的30-50倍，是普通干扰素的15-28倍。
【适应症】本品为广谱抗病毒药，主要用于治疗鸡的新城疫，流行性感冒、传支、传喉，法氏囊、减蛋综合症、禽痘、病毒性呼吸道病等。
鸭：鸭瘟、鸭病毒性肝炎、花肝病、流行性感冒等。
另外对猪的猪瘟、猪丹毒、蓝耳病、圆环病毒病、细小病毒病、无名高热、传染性胃肠炎及免疫功能低下等病也有较好的疗效。
临床推荐方法：1、越早使用越好，在鸡病毒病传染流行期、易感日龄预防使用以及病毒并发病初期饮水治疗，效果明显。
定期饮水使用，可清除处于潜伏期的病毒病。
法氏囊的首免与新城疫的二免之间饮水一次，可使新城疫免疫更确切。
2、肉鸡一日龄饮水，能有效预防病毒病早期感染。
(1日龄有喷雾免疫者除外)。
3、全群发生病毒病后，全群使用注射或饮水(用前限水半小时，短时内饮净)。
4、适合禽流感、新城疫等病毒病的紧急预防，注射灭活疫苗时辅助饮水，可加速产生免疫。
5、临近养殖场鸡群开始暴发某种病毒性、烈性传染病时，可以使用小剂量预防。
【用法用量】混饮：1g本品兑水10-20kg，重症酌情加量，预防减半。
混饲：1g本品拌料5-10kg，重症酌情加量，预防减半，【规格】100g：≥35000mg
【包装】100g×10袋/桶，10kg/桶，25kg/桶。
植物凝集素（PHA）的提取及血凝效果研究
植物凝集素（PHA）的提取及血凝效果研究安徽技术师范学院,2002,16(1):23--25 journalofAnhuiTechnicalTeachersCollege植物凝集素(PHA)的提取及血凝效果研究于敏王志德董志芳(安徽大学生命科学院,安徽合肥230039)摘要:凝集素是一类具有糖专一性,可促使细胞凝集的蛋白质或糖蛋白,本文通过提取8种豆科植物种子中的凝集素.分别与人的四种血型红细胞悬液发生凝集反应(A 型,B型,O型,AB型),通过血凝反应的强弱程度来验证不同凝集素的血型专一性,并进一步测定其相对含量.关键词:植物凝集素;血凝;提取中图分类号:0.946.1文献标识码:A文章编号:1007—3302(2002)01—0023—03凝集素是一种非免疫源性的蛋白质或糖蛋白,在动物,植物及微生物(如细菌,病毒)中广泛存在,几乎见于各种生活的有机体,并不限于特殊的器官和组织.豆科植物的凝集素在成熟种子中占蛋白质总含量的10%左右.它由2个或4个单体组成,每个单体的分子量为25～30KD,有一个结合糖位点_lJ.凝集素不仅具有凝集诸如血细胞,淋巴细胞,精子细胞等作用,而且参与了生物体内的一些重要生理和药理过程,因此是研究生物体内细胞癌变,受精,分化及分子识别等生命过程极其有用的工具,同时作为一种试剂,凝集素不仅在l临床医学检验上有着重要地位,雨且是抗肿瘤药物(如干扰素,白细胞介素一2等)生产所需的促有丝分裂原L3-71,国外近来还报道某些凝集素对爱滋病毒也有抑制作用?.凝集素可能具有的多种生理生化作用.吸引了生物学科研工作者对其进行探讨.某些凝集素与ABO血型物质直接相关.少数凝集素具有血型专一性,即凝集素在凝集红细胞的反应中,其血凝反应与供血动物的种类和血型有密切关系.对这类自然界存在极少的血型专一性凝集素的性质,结构和功能的研究,不仅具有重要理论意义,雨且对l临床及法医学上血型鉴定收稿日期:2001—12—26具有较大应用价值.如油麻藤种子中的凝集素(MsL)即是一种人A型血专一性的凝集素_4】. PIA(利马豆凝集素)对A型血专一,L(欧洲百脉根凝集素)对.型血专一.Watkin和Morgan确立了凝集素的血型专一性和它们的糖结合血专一性的关系【.1材料和方法1.1材料1.11豆科(Leguminosae)植物之八种种子(I{暂于超市):赤豆.豇豆,花菜豆,多花菜豆,白云豆,黑菜豆,白菜,黄豆.1.1.2新鲜人血(A,B,AB,O四种血型)采于合肥市血防站)11.3试剂:0.85%NaCI溶液(生理盐水)11.4仪器:高速组织捣碎机DS一1(上海标本模型厂);冷冻离心机(上海医用分析仪器厂);光学显微镜XSP一16A(中国江南仪器厂);生物显微镜BHS(日本OLYMPUS公司);7230分光光度计(上海分析仪器厂).1.2方法12.1PHA的提取分别取8种豆子各15g,用生理盐水洗净后加100ml生理盐水吸涨24hr 后,将吸涨的豆子放入组织捣碎机中捣碎5rain, 置4℃冰箱中过夜抽提.将抽提物用四层纱布过滤,滤液5000r/min冷冻离心20min,上清液置24安徽技术师范学院2002每烧杯中4℃保存备用.1.22血凝反应测试(1)2%红细胞悬液的制备:取四种血型的新鲜人血各1Oml,加抗凝剂(柠檬酸钠)1g.用085%的生理盐反复洗涤5次,每次20oOr/rain离心5min,去上清,按红细胞压积用生理盐水配成2%的红细胞悬液.(2)平板反应:用滴管吸取豆类PHA提取液和红细胞悬液各一滴滴于载玻片上,充分混匀,静置1O min,在低倍镜下观察血凝现象,并以085%的生理盐水作对照试验.12.3PHA相对含量测定(1)体积相同试管洗净烘干称重后加入PHA提取液5ml,并以0 85%的生理盐水作对照试验.(2)各管分别同时加入2%的红细胞悬液1ml,摇匀,静置,15min之内观察血凝情况.(3)在某种豆子血凝团最先完全沉淀的同时,取出各管的上液.使其在同一刻度.此时再取2ml于7230分光光度计在620nm时测定光密度值(O13).(4)取出各管的悬浮液后,试管内仅存细胞沉淀团,此时烘干称重.1.2.4凝集程度的判别与记录液体澄清透明血细胞全部凝集于管底或平板底,轻摇可见大的凝块.为高度凝集(卅);液体稍混浊,液体中有明显的凝集物.凝集块较小,为中度凝集(+);液体混浊,仔细观察可看到液体中有很小的凝集块,为轻度凝集(+);液体与对照组相似,血细胞分布较均匀,为不凝集(一).2结果与讨论2.1结果2.1.1血凝反应测试豆类PHA提取液和红细胞悬液各一滴滴于载玻片上,观察结果如表1.表l提取液与四种血型血细胞摄集反应情况注:"一"不凝集+轻度凝集"抖"中度凝集"卅斗高度凝集由表1可以看出除豇豆和红豆的提取液外.其余六种豆子的提取液均可以使四种血型都发生凝集反应,且均未表现出血型专一性.只是发生反应的程度有所不同,其中自云豆效果最强,其中的PHA含量最高.2.12PHA相对含量的测定表2PPIA与血细胞稀释液作用后上清液OD值殛血红细胞凝集沉淀鞫干I 由表2可以看出,在同一条件下,加白云豆提取豫的试管吸收值最小,而红细胞沉淀最多,再次证明,白云豆中PHA含量是最高的.由于四种血型红细胞表面糖链的差异,各种豆子PHA一级结构的细微差异致使四种血型与八种豆子PHA的血凝反应有较太差异.但单从某种血型对八种豆子PHA的血凝反应来看,其结果与表1基本符合.四种血型的红细胞沉淀干重与O.D值呈负相关性,即某种提取液与红细胞悬液反应后的O.16卷第1期于敏等植物凝集索(PHA)的提取及血凝效果研究25 D值大,刚红细胞沉淀干重刚小;反之,().D值小,则沉淀重大.基本上达到了预期效果,但由于各种PHA液中均含杂质,且杂质的量不同,各种PHA液透光能力有一定差异,对()D值测量有一定影响,致使有一些豆类的反差不强.22讨论凝集素能和含有其结合位点互补的糖基的任何细胞结台.由于所有细胞和许多亚细胞结构都能与之结合,细胞凝集是细胞表面的糖分子结合,在细胞表面形面许多相互产叉的"桥"的结果影响凝集反应的因素除了PHA自身性质和细胞表面结构外,外界条件如PH值,离子强度及温度等有较大的影响,本实验用0.85%NaCI配制细胞悬液和提取PHA,从而确保PHA的血凝活性.随着科技的发展,预计将来有更多种类的植物凝集素被发现和提纯.更多的能识别新的特异性糖基的植物凝集素的发现将会使植物凝集素的应用更为广泛.从而为生物学,医学基础研究和临床诊断治疗提供新的手段和新的技术.[参考文献][]王遇群豆类植物凝集索及其对根瘤菌的识别作用[J]植物学通报.2000.17(2):127—132[2]孙册主编凝集索[M]北京.科学出版杜.1984[3]扬远和植物凝集紊的主要生物学作用及应用[J].生物学杂志,1994,(2):I一3[4]曾仲奎油麻腺种子凝集索的纯化及性质研究[J]生物化学杂志.1996,12(3),336—340[5]丁亮豆科植物凝集索对血细胞的凝集反应研究[J].中国细胞生物学第七届学术大会论文选集,1999lI.[6]Isab[eKinneyTcrriradeMirardas∞tos,et.ActivationofT&Bceilsbyacrudeextractofartoc~rpusin.- tegrifoliaismediatedbyaleetindistinctfromjaea[inJImm—noMetlho,1991.140197[7]江红.孙册.轼体动物凝集紊[J】生命的化学,1996,16(5):2B一31[8]FavcroJna1EurJlrranttno[,1993.23:179一l85 AbstrationofPhytohemagglutininandStudyofitsHemagglutininEffectYUMin,WANGZhi-de,DCINGZhi.一fang(SchoolofLiireScience,AnhuiUIrniversity,He{ei230039)Abstract:Phytohemagglufinin(PHA)isakindofproteinorglycoproteinItisabletoagglutini nthe erythrocytesofhumanbloodgroupAbstractPHAfromeightkindsofbeansandhavethemrea ctwiththeerythrocytesoffourhumanbloodgroup(A,.B,AB.O).Thispaperistoillustratebloodgroups pecialPHA anddetermineitscontentaceordingtohemegglutinativeleve1KeyWords:Phytohemagglutinin(PHA);Hemagglutination;Abstration。
【高中生物】高中生物知识点：植物色素的提取
【高中生物】高中生物知识点：植物色素的提取植物色素的提取：1、胡萝卜素、叶绿素、叶黄素、番茄红素和辣椒红素都是脂溶性植物色素，一般不溶于水，易溶于酒精、乙醚和氯仿等有机溶剂。
故常用有机溶剂萃取胡萝卜素。
2、胡萝卜素的提取：(1)胡萝卜素的性质：胡萝卜素是橘黄色结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂。
(2)胡萝卜素的提取来源提取天然胡萝卜素的方法主要有：一是从植物中提取；二是从大面积养殖的岩藻中荻得；三是利用微生物的发酵生产。
(3)萃取剂：最适宜作胡萝卜素萃取剂的是石油醚。
(4)实验流程胡萝卜→粉碎→干燥→萃取（石油醚）→过滤_→浓缩→胡萝卜素→鉴定（纸层析法）。
知识点拨：1、注意事项：（1）萃取前往往要将胡萝卜烘干、粉碎，并且原料颗粒越小越好，这样做的目的：让原料与萃取剂充分接触，提高萃取效率。
（2）萃取过程中采用水浴加热的原因：有机溶剂用明火直接加热易爆炸。
（3）在提取的胡萝卜素粗品鉴定中，点样斑点用吹风机吹干时，温度不宜过高，否则斑点会变成黄色。
2、萃取剂常用石油醚。
石油醚经常被用作提取植物有效成分的萃取剂的原因是具有较高的沸点、萃取效率高、毒性很小。
3、胡萝卜素的特性：（1）一分子的β-胡萝卜素在人或动物的小肠、肝脏等器官内被氧化分解成维生素A，用于治疗夜盲症、干皮症等。
（2）胡萝卜素可以划分为α、β、γ三类，其划分的主要依据是：根据分子式中碳碳双键的数目。
胡萝卜素是脂溶性的。
用油炒胡萝卜时，应多加些油，便于人体吸收。
（3）胡萝卜素的颜色和主要吸收的光谱分别是：橙黄色和蓝紫光。
（4）胡萝卜素的作用：胡萝卜素可以用来治疗缺乏维生素A而引起的各种疾病；胡萝卜素可用作食品色素；天然胡萝卜素还具有使癌变细胞恢复成正常细胞的作用。
4、乙醇和丙酮为水溶性溶剂。
相关高中生物知识点：实验：绿叶中色素的提取和分离绿叶中色素的提取和分离：1．原理(1)各种色素能溶解在有机溶剂（无水乙醇等）中形成溶液，使色素从生物组织中脱离出来。
用植物血凝素(Phytohemagglutinin,PHA)制成的抗癌药[发明专利]
![用植物血凝素(Phytohemagglutinin,PHA)制成的抗癌药[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d18a30117c1cfad6185fa74f.png)
专利名称：用植物血凝素(Phytohemagglutinin,PHA)制成的抗癌药
专利类型：发明专利
发明人：帅建华
申请号：CN02100670.9
申请日：20020220
公开号：CN1439425A
公开日：
20030903
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种用植物血凝素(Phytohemagglutinin，PHA)制成的抗癌药，植物血凝素是一种人类T 淋巴细胞促有丝分裂素，在体外可以非特异性活化人T淋巴细胞。
本发明使用一定剂量的植物血凝素纯化型(Phytohemagglutinin－P，PHA－P)，治疗已经出现淋巴结转移的恶性肿瘤。
将该药在局部直接注射于患者肿大的锁骨上淋巴结内，数月内该部位多次注射给药后，肿大的淋巴结消失，除用药部位短期出现红肿，疼痛外，未见其他显著的毒副反应。
申请人：帅建华
地址：300171 天津市河东区津塘公路57号林盛里1-2-201
国籍：CN
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植物血凝素与金属离子锰(Ⅱ)的配位作用
植物血凝素与金属离子锰(Ⅱ)的配位作用
马贵斌;杨频
【期刊名称】《化学研究与应用》
【年(卷),期】1992(000)001
【摘要】植物血凝素简称PHA是从菜豆中提取的一种凝集素,能激活T淋巴细胞使其增殖,含有红血球凝集素（H-PHA）和白血球凝集素（L-PHA）,某些凝集素分子中含有金属离子,如Mn<sup>2+</sup>、Ca<sup>2+</sup>等,这些凝集素与糖结合的活力和生物活性均依赖于金属离子的存在,这表明金属离子对凝集素的活性有影响.PHA与金属离子的作用研究还未见报道,本
【总页数】4页(P57-60)
【作者】马贵斌;杨频
【作者单位】山西大学化学系、分子所;山西大学化学系、分子所太原 030006;太原 030006
【正文语种】中文
【中图分类】O6
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新疆白芸豆中凝集素的提取及纯化工艺
新疆白芸豆中凝集素的提取及纯化工艺
新疆白芸豆中凝集素的提取及纯化工艺
高泽磊，田童童，张建
【摘要】摘要：为了研究新疆白芸豆中凝集素的提取及纯化工艺，以凝集素特异性活力为评价指标，通过单因素及响应面分析法对新疆白芸豆中的凝集素进行研究。
结果表明，新疆白芸豆中凝集素提取的最佳工艺参数为料液比1 g ∶10 mL、pH值7.5、提取时间20 h、提取液为磷酸盐缓冲溶液(PB)，在该条件下模型预测凝集素特异性活力为1 209.04 HU/mg，实际试验值为1 193.62 HU/mg。
利用二乙氨乙基(DEAE)A-50阴离子交换层析和Sephadex G-75 凝胶层析进行纯化，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析，确定目标凝集素的分子量为30～40 ku。
【期刊名称】江苏农业科学
【年(卷),期】2017(045)006
【总页数】6
【关键词】白芸豆；凝集素；响应面分析；纯化
凝集素(lectin)是一类至少有1个非催化结构域、能非共价地可逆结合专一性单糖或寡糖的非免疫源性、非酶本质的糖结合蛋白，目前在动物、植物、微生物和病毒中均有发现[1-3]。
关于凝集素的免疫作用、抗营养作用(致毒作用)、使细胞表面成分再分布、修饰细胞膜酶的活力、阻断卵受精、对脂肪细胞具有类似胰岛素的活性等也逐渐被研究和证实[4-5]。
目前对于凝集素的研究主要集中于植物凝集素，由于凝集素对于单糖或糖复合物特异性结合的能力，使其在如信号转导、免疫反应、植物防御等诸多信号过程中均具有重要作用。
同时，凝集素具有细胞凝集、抗病毒、抗真菌及诱导细胞凋亡或自噬等多种能力，因此。
冻融法提取植物血凝素的研究
冻融法提取植物血凝素的研究
刘艳艳;秦光;李继昌;金希文
【期刊名称】《黑龙江医药》
【年(卷),期】2011(024)003
【摘要】目的:采用不同缓冲液,确定冻融法提取植物血凝素的可行性.方法:在生理盐水、PBS、Tris、冰醋酸的不同缓冲液中,以吸收值、提取率和血凝效价为指标,比较传统浸提法与冻融法的差异.结果:表明采用PBS缓冲液的冻融法提取效果最佳(P ＜0.05),提取物的蛋白含量为312.33 mg/g,提取率为7.25%,血凝效价为7.结论:认为冻融法提取PHA法可行,并以PBS缓冲液最好.
【总页数】3页(P357-359)
【作者】刘艳艳;秦光;李继昌;金希文
【作者单位】东北农业大学动物医学学院,黑龙江,哈尔滨,150030;东北农业大学动物医学学院,黑龙江,哈尔滨,150030;东北农业大学动物医学学院,黑龙江,哈尔
滨,150030;东北农业大学动物医学学院,黑龙江,哈尔滨,150030
【正文语种】中文
【中图分类】R853.7;R282.71
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植物血凝素也称为植物凝集素（PHA），可自制也可购自商品。
自制的方法常用生理盐水提取法。
（A）干品制备法（1）选广东鸡子豆10g，用蒸馏水冲洗，置培养皿内用75%酒精一次性浸洗，倒掉酒精留间隙置37℃。
恒温箱内24-48小时；（2）在无菌条件下研碎鸡子豆，加生理盐水30ml，摇匀后放入4℃冰箱24小时，第二天再加生理盐水70ml，再置4℃冰箱内24小时。
每8-12小时摇荡一次。
（也可一次性加100ml生理盐水）；（3）无菌条件下移入10-50ml离心管内，3000-4000rpm30分钟。
在无菌箱内把上清液分装于10ml小瓶，置冰箱冷冻层备用；（4）效价：外周血染色体制备每100ml培养基加PHA约2ml。
注：若整个过程未在无菌条件下进行，分装时用G5玻砂漏斗除菌即可。
（B）鲜品制备法：（1）选择完整无破皮鲜菜豆20g，用75%酒精浸泡10分钟；（2）在净化工作中用无菌盐水或蒸馏水漂洗二次，然后置无菌乳钵中捣成糊状，用100ml无菌盐水浸泡封口；（3）移入4℃冰箱中置24小时，中间摇动数次，次日3000rpm30分钟，在无菌情况下分装上清液于10ml小瓶内，置冰箱冷冻层备用。
（4）效价：正式使用前先用一定量作效价测定，按效价使用。
青豌豆的提取：取青豌豆100克，加含0.15M氯化钠的0.01M pH7.0磷酸缓冲液200ml浸泡过夜，经膨胀后用组织捣碎机捣碎，倒入布袋中压榨出水提液，在沉渣中再力0入磷酸缓冲液100ml搅拌，浸泡1时，压榨出水提液，合并水提液，量出总体积。
加0.01％叠氮钠防腐。
2．蛋白质沉淀：边搅边加入固体硫酸铵达80％饱和（每升溶液加硫酸铵561克）冷藏过夜。
吸取上清液，沉淀再用二层滤纸抽气过滤至干，即得粗制青豌豆素蛋白沉淀物硫酸铵糊。
置冰箱保存。
3．亲和层析分离(1)装柱：取直径为1.0 cm，长度为25 cm的层析柱，按（实验十五）操作，自顶部缓缓加入稀薄的Sephadex G25悬液，待凝胶上升至距顶柱约3-5 cm即可，用1M NaCl溶液平衡10分钟。
（2）加样并收集：称硫酸铵糊0.3克溶于 3 ml IM氯化钠中，离心3000rPm10分钟，取上层悬液上柱，用1M NaCl洗脱收集每管 3.5 ml，在280 nrn紫外光上比色检测，直至吸光值下降到接近零为止。
此洗脱峰为不与葡萄糖亲和的杂蛋白峰。
改用含0.2M葡萄糖的1M NaCl进行洗脱。
收集每管 3.5 ml，也在280nrn处检测、直至吸光值下降至接近零为止。
此洗脱峰为青豌豆素峰，再用1M NaCl洗脱，再生柱，约需10分钟。
4．青豌豆素生物活性测定。
取新鲜兔血l ml于抗凝管中，离心去除血浆，血球用生理盐水洗涤离心1000rpm／5min三次，直至洗液无血色为止，加生理盐水稀释20倍制成兔红细胞悬液，置冰箱中备用。
取点滴板一块在三孔中分别滴入对照生理盐水、280 nrn吸收峰的吸光值相同的杂蛋白和青豌豆蛋白各2滴（用生理盐水将二种蛋白质稀释到吸光值相同），再分别滴入兔红细胞悬液1滴。
置37℃保温10分钟，取出后分别用玻棒在孔中轻轻搅动，比较三者红细胞的凝集情况。
再将杂蛋白和青豌豆素溶液进一步用生理盐水稀释成1：5、l：25、l：125、1：625……再用上述方法检查比较它们对兔红细胞的凝集作用，求出它们最大生物活性的稀释倍数。
兔红细胞的凝集作用也可用显微镜下进行观察、比较。
注意事项：不同蛋白质凝集活性的比较需在以相同280 nrn 吸光值的蛋白质量作对比，故必需稀释
PHA的提取，称取200g鸡子豆，粉碎，加入1000ml蒸馏水于4度冰箱中放置，
吸胀24h.再加入200ml蒸馏水搅拌均匀，在组织捣碎匀浆机内12000r/min匀浆2次，每次5min 置4度冰箱抽提24h，然后用纱布过滤，弃掉虑渣，滤液经4800r/min离心20分钟，收集上清。
将上清分成3份，一份4度保存，直接用于活性测定，一份加入(NH4)2SO4至40%饱和度，充分搅拌，置4度冰箱过夜，将过夜后的抽提液4800r/min离心20分钟，收集沉淀，在上清内加入(NH4)2SO4至40%饱和度，收集沉淀，合并两次沉淀，用适量蒸馏水溶解后作活性测定，一份用截留分子量为100KD的中空纤维超滤膜进行超滤，收集超滤液和浓缩液作活性测定
传统方法提取：将红芸豆粉碎，过60目筛，得细粉。
将红芸豆脱脂，按1：8（w/v）体积比加入石油醚，4度脱脂2次，每次4 h ，温室下将石油醚挥发除去，得脱脂芸豆粉，备用。
称取5g脱脂云粉，与0.9%生理盐水按1：8（w/v）混合4度放置48h，3层纱布过滤，过滤用离心机3000r/min离心20min，收集上清液。