蜡块的修切-常规石蜡切片制作

制作石蜡切片的常见问题及处理1(精)

制作石蜡切片的常见问题及处理石蜡切片是组织学和病理学的主要实验方法,也是临床中观察病理变化的重要手段,为教学、科研和临床诊断做出了卓越贡献。

实践发现,切片制作过程中常常由于多方面的原因遇到困难,甚至导致制片失败。

本文将对制作石蜡切片过程中的常见问题和处理方法作重点介绍。

1切片不成带[1]常见原因:①切片刀不够锋利。

②切片刀与蜡块的角度不当。

③蜡块四周留蜡边太少。

④石蜡硬度过大,黏度不够。

解决方法:①重新磨刀。

②调整切片刀的角度。

③可重新包埋或将蜡块四周熔化,再放入包埋框中补蜡,修理蜡块时组织块周围保留的石蜡以2mm左右为宜。

④蜡块过硬可适当加些蜂蜡,或更换熔点较低的石蜡重新包埋。

⑤将蜡块放入冰箱内延长冰冻时间,然后迅速切片。

2切片弯曲常见原因:①组织成分及形状不规则。

②蜡块上下或左右两边不平行。

③蜡块与切片刀刀口不平行。

④切片刀各处的锋利程度不一致。

解决方法:①修整组织块时,注意修切整齐,切成方形或矩形,尽量不要切成三角形[2]。

②将蜡块四边反复修平对称。

③调节蜡块夹持器,使其与切片刀平行。

④移动切片刀,更换刀口位置。

⑤使用负离子发生器直吹切片处可防切片卷曲[3]。

3切片上出现裂纹常见原因:①切片刀上有小缺口,或刀口不平整。

②刀口上粘附有细微纤维(如毛发、纸或布丝等物。

③组织过硬变脆(如凝血块、胶冻样物质、囊腺瘤、甲状腺、腺瘤等[4]。

④组织中可能含有较硬之物质,如固定液之结晶石灰质。

⑤裱片的水温太高。

⑥包埋时石蜡冻结太慢。

解决方法:①切片刀某处有缺口,可调换刀口部位或重新磨刀。

刀口上缺口过多且不平整,可先将刀锋垂直在磨刀石上轻轻磨数次,然后按常规磨刀。

②擦净刀口。

③适当减少脱水、透明、浸蜡时间。

④组织中硬性物质太多,则不宜用。

⑤裱片的水温以45℃左右为宜。

⑥包埋时待蜡块周围凝结一层,即放入冷水中。

4切片厚薄不均常见原因:①脱水、透明、浸蜡过度、时间过长、温度过高[4]。

②蜡块太大,过硬,转动时刀刃受震动。

裱片-常规石蜡切片制作

天津天士力集团研究院药理所文件编号：
1 裱片-常规石蜡切片制作
将漂浮于水面上的已展开没有皱折的切片捞于载玻片上的过程称为裱片或捞片。

现在市售的烘烤箱都与裱片器连在一起，裱片器上的水温在界定温度后，它可自动调节。

裱片时水温很为关键，一般在45-55℃，如果水温过高，超过石蜡的熔点，切片将会被熔化掉，如果水温过低，在30度以下，切片则裱不好，皱皱巴巴，不能完成展片任务。

切片放入水后，在合适的水温中它会自然展开，有个别没有展开的，用小镊子慢慢将其展开，镊子的用力要恰到好处，如果用力过大，切片会被搅破，如果用力不对，切片无法展开。

应特别注意。

当切片展开后，用载玻片（有人喜欢用蛋白甘油涂于载片上，但据我们二十几年对二十几万张活检切片的经验，没有蛋白甘油涂片也能行）插入水中，靠近展开的切片捞于载玻片上，捞片时应尽量保持裱片器中的水不晃动。

一张载玻片可以捞一张切片，也可以捞数张乃至十几张，这要看组织的大小和病理的需要，一般说大的组织捞一张切片就已足够，小的组织最好就要求多捞一些。

常规石蜡包埋组织切片（常规切片）的制备

常规石蜡包埋组织切片（常规切片）的制备常规石蜡包埋组织切片（常规切片）的制备㈠组织块依序进行：①水洗，②脱水，③透明，④浸蜡，⑤包埋和⑥切片。

㈡组织切片制备及其HE染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为易燃、有毒物，必须专人管理，2m以内不得有明火，局部环境应有良好的通风和消防设施。

㈢常规切片的手工操作（步骤次序和各步骤的持续时间）1．水洗：用流水冲洗已经固定的组织块30min。

2．脱水（常温下）（1）乙醇－甲醛（AF）液固定60~120min（2）80%乙醇60~120min（3）95%乙醇Ⅰ 60~120min（4）95%乙醇Ⅱ 60~120min（5）无水乙醇Ⅰ 60~120min（6）无水乙醇Ⅱ 60~120min（7）无水乙醇Ⅲ 60min［注意事项］①未经充分固定的组织不得进入脱水程序。

②用于脱水的试剂容积应为组织块总体积的5～10 倍以上。

③自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水。

④脱水试剂应及时过滤、更换（500ml 乙醇可用于500个组织块脱水；加入硫酸铜的无水乙醇变蓝时，提示需要更换）。

⑤较大组织块的脱水时间长于较小者，应将两者分开进行脱水。

⑥组织置于无水乙醇内的时间不宜过长（以免硬化）。

⑦丙酮脱水性能强，会使组织块过缩、硬脆，不宜用以替代无水乙醇。

3．透明（1）二甲苯Ⅰ 20min（2）二甲苯Ⅱ 20min（3）二甲苯Ⅲ 20min［注意事项］①二甲苯的容积应为组织块总体积的5～10倍以上。

②组织块在二甲苯中透明的时间不宜过长（以防组织硬、脆），并依不同种类组织及其大小而异；组织呈现棕黄或暗红色透明即可。

③二甲苯应及时过滤、更换。

④组织经二甲苯适度处理后不显透明时，常提示该组织的固定或脱水不充分，应查找原因并妥善处理。

4．浸蜡（1）石蜡Ⅰ（45~50℃）60min（2）石蜡Ⅱ（56~58℃）60min（3）石蜡Ⅲ（56~58℃）60min［注意事项］①熔化石蜡必须有专人负责，必须在熔蜡箱内或水浴中（70 ℃）进行，不得用明火加温。

石蜡切片的主要制备程序

石蜡切片的主要制备程序
石蜡切片的主要制备程序可以概括为以下几个步骤：
1. 准备样品：选择需要切片的样品，如组织样本、细胞样品等，并采取相应的固定、处理和染色等预处理步骤，以保证样品的稳定性、可观察性和对比度。

2. 材料准备：准备好所需的石蜡、切片盒、切片刀、载玻片等材料，并进行清洁和消毒处理，以避免污染和交叉感染。

3. 石蜡浸透：将处理好的样品转移到石蜡中进行浸透。

首先将样品置于温度逐渐升高的浸透剂（如正己烷）中，以去除组织内水分和其他溶质，然后置于石蜡中进行浸透。

4. 切片制备：将石蜡浸透的样品固定于切片盒中，将石蜡块剪碎成适当大小，并放置在切片刀的刀脊上。

调整切片机参数（如温度、角度、速度等），并逐个切割出薄片。

5. 切片贴片：将切好的薄片浮于温水中或使用其他方法，如电离子器、热平台等，以使切片展平并附着于载玻片上。

6. 干燥固定：将切片连同载玻片一起进行干燥固定处理，以去除水分并保持切片的形态稳定。

7. 切片染色：根据实验需求，对切片进行适当的染色处理（如组织学染色、免疫组化染色等），以增强样品的可视化效果和区分感兴趣的结构。

8. 封片封装：将切片封装至封片盖玻片上，使用透明化导电胶或其他封片剂固定切片，并尽量排除气泡、保证封片质量。

9. 切片质控：对制备好的切片进行质量控制，使用显微镜观察和评估切片的清晰度、结构完整性、染色效果等。

最后，制备完成的石蜡切片可以用于显微镜观察、组织形态分析、病理学研究等应用。

需要注意的是，在整个制备过程中，应遵循标准实验操作规程、注意安全，以及依据实验要求进行相应的优化和调整。

石蜡切片的具体步骤与做法

石蜡切片的具体步骤与做法？石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。

石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，因此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（4um以下），能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。

缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。

制片时间太长。

石蜡切片的制作过程（一）材料与用具1．材料：鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。

2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。

（二）实验内容与步骤1．取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。

组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。

切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。

组织块取下后，先用先用0.85％的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。

由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。

如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。

材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。

不同的组织应选用适当的固定液。

固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。

不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。

2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。

组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。

AFA固定液则不需要水洗。

3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。

病理制片技术――组织石蜡切片

病理制片技术――组织石蜡切片组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片机制成切片的过程为石蜡切片法。

石蜡切片法现使用的切片机有平推式切片机、轮转式切片机两种。

一、平推式切片机石蜡切片法1．切片前的准备：清洗过的载物片(或免清洗的)，毛笔，铅笔，小竹片，水槽，雾化器，摊片器，切片刀，刀架。

2．切片制作步骤：刀架的粗削部放在头端，在切片机刀架部夹紧。

组织蜡块装在切片机蜡块固定器上夹紧。

右手握切片机刀头运动手柄，左手转动切片机蜡块运动旋钮。

先转动此钮，后平拉刀架运动手柄，进行粗削，直至组织切全。

停止，将刀架移到细削部，轻轻转动蜡块运动旋钮，后拉刀架手柄进行细削。

削至组织光滑发亮，右手拿毛笔扫净刀架及蜡块上的蜡屑，组织屑，放下毛笔，再用右手握住刀架运动手柄。

左手拿小竹片，用竹片头蘸一下水槽中的水。

左手中指搬动薄切钮，雾化器的喷头对准蜡块。

右手拉刀架运动手柄。

左手中的小竹片在蜡块空白处等待切片刀切起蜡片一端挑起粘住，随切片刀移动，完整的蜡片切出后，粘在竹片上，移入水槽中，捞片，放在摊片器上摊片5 min后，装在染色篮上，放入75℃烤箱烤片。

3．注意事项(1)无冷台的病理科可以将包埋好的组织蜡块放到冰箱内，但如放置时间过久温度太低切片时蜡块会产生热涨，切片会厚，要多切几张，后面的片子就会薄一些。

(2)雾化器是去除静电的，但也有增加切片厚度的缺陷。

尤其雾气大时，使蜡块热涨，厚度增加更明显。

为了保证切片厚度，一定要控制好风力、雾力。

雾化器使用自来水，水位控制在30刻度。

(3)切片机使用前一定要检查各部位情况。

先检查固定器是否固定在你所要的厚度上。

切片机刀架角度与蜡块呈90。

从蜡块右上角进刀。

二、轮转式切片机石蜡切片法1．切片前的准备：清洗过的载玻片、毛笔、铅笔、盛有30％乙醇的小烧杯、牙科镊、展片槽、切片机、一次性刀片及刀架。

检查轮转式切片机切片厚度的钮是否固定于你所要切的厚度刻度上。

2．切片制作步骤：将放在－5℃冷台上的组织蜡块装在切片机固定器上夹紧，空白蜡多的一端在上。

怎样制作石蜡切片

怎样制作石蜡切片制作石蜡切片需要一系列的步骤和材料。

以下是一种常见的制作石蜡切片的方法：1.准备材料和设备：-石蜡块：石蜡是一种透明且易于切片的材料，可以在化学试剂供应商或实验室设备供应商处购买。

-刀片：使用一把锋利的微创刀片来切割石蜡。

确保刀片是干净的，滴一滴乙醇或其他清洁溶液在刀片上擦拭，然后用干净的纸巾擦干。

-切片盒：选择适合的切片盒来放置切割好的石蜡切片。

-石蜡模具：这是一个用于制作石蜡块的模具，可以在实验室设备供应商处购买。

2.制备石蜡块：-首先，将石蜡块加热至约60-70°C，直到完全融化。

-将石蜡块从加热器中取出，小心地倒入石蜡模具中。

-等待石蜡冷却和凝固。

你可以将石蜡模具放入冷却台上以加快冷却过程。

3.切割石蜡块：-将已冷却和凝固的石蜡块从模具中取出。

-使用清洁干燥的刀片将石蜡块切成适当的大小。

你可以根据实验需求来确定切割的尺寸。

4.制备石蜡切片：-准备一张玻璃载玻片。

-小心地将切割好的石蜡片放在玻璃载玻片上。

5.烘干石蜡切片：-将玻璃载玻片连同石蜡切片放入干燥炉。

-设置炉温为50-60°C，保持1个小时以消除任何残留的水分。

6.染色和封片：-如果需要，可以将石蜡切片进行染色以便更好地观察。

- 使用适当的染色剂，如伊红（Eosin）或伊红-兰红（Eosin-Methylene Blue）来染色石蜡切片。

-染色后，将石蜡切片放入一盒有封盖的容器中，以便保存和保护切片。

制作石蜡切片需要一定的实验室技巧和经验，同时注意安全，避免烫伤和刀片伤害。

在操作过程中，务必佩戴手套和护目镜，确保实验室处于通风良好的环境中进行操作。

石蜡切片制备及免疫组化操作步骤

石蜡切片制备基本步骤一、准备工作（一）（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）1.用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷2.将器皿在自来水下冲洗干净3.将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次,烘干备用。

（二）硫酸洗液的配制称取5g重铬酸钾粉末，置于250ml烧杯中，加10mL水使其溶解，然后慢慢加入100mL浓硫酸，溶液温度将达80℃，待其冷却后贮存于磨口玻璃瓶内。

（三）载玻片与盖玻片的处理1.将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入洗液中浸泡24小时2.流水冲洗至无色，再用蒸馏水冲洗3遍3.95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用。

二、准备工作（二）常用液体的配制（一）缓冲溶液：1．0.02M PBS(pH7.2-7.6)：1000ml蒸馏水中加氯化钠8.5g，磷酸氢二钠2.8g，磷酸二氢钠0.4g。

如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量。

2．0.01M枸椽酸盐缓冲液（pH6.0）：1000ml蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）3g，枸橼酸（C6H8O7·H2O）0.4g。

（二）固定剂：10%甲醛：福尔马林100ml加蒸馏水900ml（三）染色液1.Harris苏木精液A液：苏木精 1g无水酒精10mlB液：铵矾或钾矾20g蒸馏水 200ml氧化汞 0.5ml冰醋酸 8ml将矾溶于水，加热溶解（B液），稍冷后将苏木精酒精液（A液）混入B液，加热，稍冷却，加氧化汞，再继续加热1分钟，染液变为紫色，注意在加氧化汞时宜逐渐少量加入，防止染液溅出。

全冷后呈深紫色，将烧杯口用纱布盖好，隔夜过滤，在过滤液内每96 ml中加4 ml冰醋酸，放置1周后成熟，即可用于染色，保存期1~2个月。

此染液在加醋酸后，对核染色特具选择性，故很适于脱落细胞的核染色。

石蜡切片制作流程

石蜡切片制作流程石蜡切片制作流程表一. 取材1，样品要求：长，宽各1cm左右，厚不超过5mm2，固定液：10%福尔马林固定液或4%多聚甲醛：组织块=20:1为宜3，固定时间：依大小而定，一般3-5h即可，如24h或更长，应密封瓶口，封前换液4, 修块二.脱水1，水洗：将固定组织块放入广口瓶，瓶口用纱布包好，置流水下水洗，水洗时间依固定时间而定，一般12h以上，固定时间越长水洗时间越长。

2，脱水1）75%酒精1h2) 80%酒精1h3）95%酒精Ⅰ1h4) 95%酒精Ⅱ1h5) 100%酒精Ⅰ1h6) 100%酒精Ⅱ1h组织块在进入下一阶段梯度酒精前要用吸水纸吸干水，尤其在95%酒精（Ⅱ）中进入100%酒精（Ⅰ）中，切记防止带入水分，所有过程要在瓶口加盖，防止水分进入。

三．透明1)酒精（100%）：二甲苯=1：1 10min2)二甲苯Ⅰ透明10min3二甲苯Ⅱ10min四．浸蜡1）二甲苯：石蜡=1：1 30min 温箱56—58℃2）石蜡Ⅰ1h 温箱56—58℃3) 石蜡Ⅱ1h 温箱56—58℃4) 石蜡Ⅲ1h 温箱56—58℃温度保持在56—58℃，温度太高会烧坏组织块，太低石蜡会凝固。

五．包埋首先在金属框架上涂抹凡士林，以保证石蜡到入后不会外溢。

将包埋用石蜡及浸蜡组织块放在有石棉网的电炉上保温。

在框架中先倒入少许包埋用石蜡，再用镊子将组织块迅速移入框架，再倒入石蜡，待完全凝固后取出待用。

六．切片和烘片（烘片温度38℃）七．附贴（45℃）；烤片（一）附贴（45℃）附贴液的配制：新鲜蛋白20ml,麝香草酚少许，用玻璃棒混匀，再加入甘油20ml,继续混匀。

若有多聚懒氨酸处理的切片则直接用之。

（二）烤片：温箱内的温度应保持在40-45℃之间，烤片时间至少1小时。

八．H．E染色（一）脱蜡1 二甲苯Ⅰ（脱蜡） 10min2 二甲苯Ⅱ（脱蜡） 10min3 100%酒精Ⅰ（脱二甲苯） 10min4 100%酒精Ⅱ（脱二甲苯） 10min5 95%酒精Ⅰ（脱二甲苯） 5 min6 95%酒精Ⅱ（脱二甲苯） 5 min7 80%酒精（脱二甲苯） 5 min8 自来水或蒸馏水洗（去酒精）5 min （二）染色1 苏木素染液 6 min2 冲洗清水（兰化）15 min3 酸水分化视情况而定 10-20S4 冲洗淡蓝色即可 20 min5 伊红染液视情况而定6 min （三）脱水，透明13 80%酒精颜色淡化14 95%酒精Ⅰ 5min15 95%酒精Ⅱ 5 min16 100%酒精Ⅰ 5min17 100%酒精Ⅱ 10min18 二甲苯Ⅰ（透明） 5min19 二甲苯Ⅱ（透明） 10 min 九．封片：用中性树胶将切片标本封固。

石蜡切片制作超详细步骤

石蜡切片制作超详细步骤1．取材颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织（或其他组织）。

切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。

取下所需要的肝组织，切成一小块2－3mm厚。

注意事项：（1）取材动作要迅速，不宜拖太久，以免组织细胞的成分、结构等发生变化。

（2）切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。

2．固定将切好的肝组织用生理盐水洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定30－50min。

注意事项：（1）一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。

（2）有些混合固定液的成分之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前混合，如果混合太早，固定时就没有作用了。

（3）固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应更换1-2次新液。

（4）材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外贴上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免混淆。

标签上注明固定液、材料来源、日期等。

标签上的文字，用黑色铅笔写。

3.洗涤材料经固定后,流水冲洗，数小时或过夜。

4.脱水材料依次经70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水，各30min，再放入95%、100%各2次，每次20min。

注意事项：（1）脱水必须在有盖的玻璃瓶中进行，防止吸收空气中的水分。

（2）在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。

（3）在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。

（4）在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。

（5）如需过夜，应停留在70%酒精中。

（6）脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象5．透明纯酒精、二甲苯等量混合液15min，二甲苯Ⅰ15min、Ⅱ15min （至透明为止）。

石蜡切片的制作及免疫组织化学标准化操作流程

石蜡切片的制作标准化操作流程1.取材固定1)取材必须新鲜，组织离体后迅速割取组织块，并随即投入固定剂福尔马林中。

切取材料时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。

2)固定完毕，用水冲掉残留的固定剂，以免固定剂形成沉淀，影响以后组织块的染色。

2.脱水脱水步骤应从低到高以一定的浓度梯度来进行，一般从30％乙醇开始，经过50％、70％、80％、95％、100％至完全脱水，各级乙醇中放置45min到1h，如果中间须停顿，应使材料停留在70％乙醇中，因为低浓度乙醇易使组织变软、解体，高浓度乙醇有脆化组织作用，放置时间不能过长，另外，脱水必须在有盖瓶中进行，以防止高浓度乙醇吸收空气中水分导致浓度降低而使脱水不彻底。

需要保存的材料可脱水至70%乙醇时停留其中，如需长期保存，可加入等量的甘油。

3.二甲苯透明组织块用非石蜡溶剂脱水后必须经过透明。

透明剂能同时与脱水剂和石蜡混合，它取代了脱水剂后，石蜡便能顺利地渗入组织。

将组织块先放入纯乙醇与二甲苯的等体积混合液，再进入纯二甲苯，。

透明时间一般各级停留时间在30min至2h，在纯二甲苯中应更换2次，总时间则以不超过3h为宜。

4.透蜡和包埋包埋用的石蜡，熔点在60℃左右。

透蜡须在恒温箱中进行，恒温箱的温度调节至高于石蜡熔点3度，使经过透明的组织块依次用石蜡与二甲苯的等量混合液、纯石蜡处理。

纯石蜡应处理2-3次，透蜡的时间依材料性质而定，一般每次需15-30min。

透明的关键是控制温度的恒定，切忌忽高忽低，温度过低石蜡凝固无法渗透，温度过高使组织收缩发脆。

包埋是使浸透蜡的组织块包裹在石蜡中。

具体做法是；先准备好纸盒，将熔蜡倒入盒内，迅速用预温的镊子夹取组织块平放在纸盒底部，切面朝下，再轻轻提起纸盒，平放在冷水中，待表面石蜡凝固后立即将纸盒按入水中，使其迅速冷却凝固，30min后取出。

5.切片方法是：右手转动转轮，左手持毛笔在刀口稍下端接住切好的片子，并托住切下的蜡带，待蜡带形成一定长度后，右手停止转动，持另一枝毛笔轻轻将蜡带挑起，平放于衬有黑纸的纸盒内，注意切片速度不宜太快，摇动转轮用力应均匀，防止切片机震动厉害引起切片厚薄不均匀，还应注意转动的方向，以防标本台后移而切不到片子。

石蜡切片的制作过程

石蜡切片的制作过程（一）花药切片制片法1．取材2．固定：FAA液中固定24h，并保存在其中。

3．脱水：经70％乙醇、85%乙醇，每级3~4h，含1%伊红的95％乙醇中3~4h（可以过夜），无水乙醇2次，每次1~2h。

4．透明、加蜡：5级氯仿透明，每级3~4h，纯氯仿2次，每次2h，加碎蜡，然后置36℃温箱中1~2d5．浸渗、包埋：50%、70%蜡各3h，再经纯蜡A、纯蜡B、纯蜡C三杯，每杯1h，包埋。

6．修蜡块、切片：粘蜡块时组织块直立于台木上，并用单面刀片切除先端石蜡，浸水软化后放在切片机上坐横切片，切片厚12μm。

7．展片、粘片、烘片：蜡片先镜检，每张载玻片上放2个蜡片，展片后将材料平放在摊片盘上，放置36℃温箱中烘干。

8．脱蜡、透明：二甲苯脱蜡、透明各1次。

9．染色（番红-固绿双重染色）：在已脱蜡的材料上滴注无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、30%乙醇、蒸馏水各4~5s，苯胺番红染色5~10min，用蒸馏水洗去浮色。

10．脱水、透明：各级乙醇脱水（30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇），苯胺固绿复染30~40s，再经95%乙醇，无水乙醇，1/2无水乙醇+1/2二甲苯、二甲苯2次，各约4~5s，最后置二甲苯缸中。

11．封片、烘片：加拿大树胶封片。

封片后将材料平放在摊片盘上，放置36℃左右的温箱内烤数天即可烤干。

最后，将干燥好的切片上的浮色擦净，并在玻片的左端粘上标签，注明组织切片的名称、染色方法、固定方法、年月日。

制片日程（二）花芽纵切片制片法1．取材2．固定：FAA液中固定24h，并保存在其中。

3．整染：经70％乙醇、50%乙醇各2~4h，转入爱氏苏木精稀释液（爱氏苏木精原液1份，加入50%乙醇及乙醇各半的混合液1份）中整染2~3d。

4．水洗、反蓝：蒸馏水浸洗，勤换水至无浮色渗出，再转入自来水中，换1~2次水，至样品由紫色变深蓝色为止，共需时约1d。

石蜡切片的步骤实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 熟悉石蜡切片的制作流程。

2. 掌握石蜡切片的基本操作步骤。

3. 了解石蜡切片在组织学、病理学等领域的应用。

二、实验器材与试剂1. 实验器材：- 组织切片机- 石蜡切片机- 脱水机- 摊片机- 载玻片- 烤片机- 石蜡- 二甲苯- 无水乙醇- 4%多聚甲醛- 70%、85%、95%、100%乙醇- 75%、85%、90%、95%酒精- 0.1mol/L盐酸- 苏木精- 伊红- 柠檬酸缓冲液- HE染色试剂三、实验步骤1. 取材与固定- 将新鲜组织固定于4%多聚甲醛24小时以上。

- 将组织从固定液中取出，在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整。

- 将修切好的组织和对应的标签放入脱水盒内。

2. 脱水- 将脱水盒放入吊篮里，于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。

- 脱水过程：75%酒精1小时，85%酒精1小时，90%酒精1小时，95%酒精1小时，无水乙醇I 30分钟，无水乙醇II 30分钟，醇苯5-10分钟，二甲苯I 5-10分钟，二甲苯II 5-10分钟，蜡I 1小时，蜡II 1小时，蜡III 1小时。

3. 包埋- 将浸好蜡的组织放入包埋机内进行包埋。

- 先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出，按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。

- 于-20℃冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。

4. 切片- 将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4微米。

- 切片漂浮于摊片机40℃温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃烤箱内烤片。

- 待水烤干蜡烤化后取出，常温保存备用。

5. 脱蜡至水- 依次将切片放入二甲苯30分钟，二甲苯30分钟，无水乙醇10分钟，无水乙醇10分钟，95%酒精5分钟，90%酒精5分钟，80%酒精5分钟。

- 苏木精染色：将切片放入苏木精染液中染色5-10分钟。

- 水洗：将切片放入清水中清洗。

- 伊红染色：将切片放入伊红染液中染色1-2分钟。

石蜡切片的制作及染色

石蜡切片的制作步骤（1）修块：剖检时摘取的睾丸和附睾组织样品在2.5%戊二醛-多聚甲醛混合固定液中固定24~48h后，用清水或低浓度的酒精将组织上的固定液清洗掉，用刀片将其修成3~5mm 厚，置于包埋框中。

（2）脱水、透明：将含有组织块的包埋框经梯度浓度逐升的酒精溶液（50%酒精→70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精）中进行脱水1h，然后顺次转入无水乙醇I、无水乙醇II和酒精二甲苯混合液中放置30min，再次分别置入二甲苯I和二甲苯II中进行透明5-10min左右。

（3）浸蜡、包埋：组织块充分透明后，将包埋框依次经过3中不同熔点的石蜡液（56~58℃石蜡I→56~58℃石蜡II→58~60℃石蜡III）中浸蜡1h，然后将组织块从包埋框中取出，放入自制的长方形纸盒中，灌入58~60℃石蜡，待其自然冷却后，修成适当大小的蜡块后准备切片。

（4）切片、展片：将涂有粘片剂的载玻片摆放在展片台上，磨面朝上，滴上适量清水；将蜡块置于切片机上切成4um厚的连续切片，将其放在清水上，高温将蜡膜展平，常温保存，以备染色。

HE染色步骤（1）石蜡切片依次入二甲苯I和二甲苯II中脱蜡10min；再经酒精二甲苯混合液及梯度浓度递减的酒精溶液（无水乙醇→95%酒精→90%酒精→80%酒精→70%酒精→50%酒精）至蒸馏水中；（2）Ehrlich苏木精染色10～15 min，蒸馏水洗；（3）0.5%盐酸酒精分色（5～10 s），以镜检为准；（4）自来水冲洗蓝化后，依次转入70%和80%酒精中；（5）伊红染色10~15s；（6）依次经95%酒精、无水乙醇I、无水乙醇II、酒精二甲苯混合液、二甲苯I、二甲苯II进行脱水；（7）中性树胶封片。

染色结果：胞核呈蓝紫色，胞质呈粉红色。

石蜡切片制作流程表及相关注意事项

石蜡切片制作流程表及相关注意事项一、取财1．样品要求：长宽1cm左右，厚度不超过5mm。

2．固定液：10％福尔马林固定液︰组织块=20︰1为宜。

3．固定时间：依大小而定，一般3-5h即可，如果24h或更长，应密封瓶口，封前换液。

4．修理组织块：将切面修平。

5．每个组织块都应编号，并做好记录。

6．用纱布包好组织块，并包上小纸条，注明编号、组织块数量等信息。

注：（1）对于肺部组织，在取材后必须用玻璃注射器抽掉肺泡腔中的气体，否则会影响脱水，透明和浸蜡等效果。

抽气具体方法：A．将组织块置入空玻璃注射器内，塞上推助器。

B．.向注射器内吸入约1/2的自来水，就会发现肺组织漂浮在水面。

C．排掉注射器内的空气。

D．将注射器倒置(头部向上)，用左手拇指赌上注射器头部,用右手用力拉推肋器。

E．反复C、D两步骤，直到肺组织沉到注射器底部即可。

（2）对于气管、支气管等含钙量较高的组织，必须有脱水前用5％和硝酸溶液软化，直到可用大头针扎透为止（一般需一天一夜）。

二、脱水过程1．水洗：将固定组织块放入广口瓶，瓶口用纱布包好，置流水下洗水，水洗时间依固定时间而定，一般12h以上，固定时间越长水洗时间越长。

2．脱水（1）75％2h（2）80％酒精1h（3）95％酒精Ⅰ 1 h（4）95％酒精Ⅱ 1 h（5）95％酒精Ⅲ过一夜（6）100％酒精Ⅰ 1 h（7）100％酒精Ⅱ 1 h组织块在进入下一阶段梯度酒精前要用吸水纸吸干水，尤其从95％洒精（Ⅲ）进入100％酒精（Ⅰ）时，切记防止带入水分，所有过程要在瓶口加盖，防止水分子进入。

（其他注意项见下文）三、透明（1）酒精（100％）︰二甲苯=1︰1 过度20min（2）二甲苯Ⅰ透明15min（3）二甲苯Ⅱ透明15min四、浸蜡（1）二甲苯︰石蜡=1︰:1软蜡（熔点52℃～54℃） 1h 温箱56～58℃(2) 石蜡Ⅰ（熔点54℃～56℃） 1h 温箱56～58℃（3）石蜡Ⅱ软硬混合（熔点更高） 1h 温箱56～58℃浸蜡温度保持在56～58℃，温度太高会烧坏组织块，太低石蜡会凝固。

石蜡切片的制作程序

石蜡切片的制作程序1、病料的采集：采集病料要及时，以防组织变质发生自溶。

病理组织材料要采取病变典型突出的部分，最好选病变与健康组织的交界处，以识别和探讨病变的发生和发展。

组织块一般不宜过大，以3～5mm×3～5mm×10～15mm为宜。

过大过厚的组织块容易影响固定和浸蜡的质量，不易切出较好的切片。

采取病料时应保持器官组织的原来形状，用锋利的刀剪切取，切勿挤压，损伤或扭折，以免造成人为的损伤。

2、固定：固定的目的是使组织和细胞的较粗大的结构尽量保持正常状态，避免发生形态学结构变化，使细胞保持一定的硬度，以利于切片。

采取的病料组织块应及时投入固定液内进行固定，以防腐败。

并做好标记，便于识别。

固定液用量一般为组织块体积的10～20倍。

固定剂的种类很多，一般能凝固或沉淀蛋白质及脂肪等成分的药品都可以做固定剂。

如：酒精、甲醛、冰醋酸、苦味酸、升汞等等。

可以按照不同的目的来选择使用固定剂，常用的固定剂主要是福尔马林(formalin 37～40%的甲醛)，最适合固定的浓度为10%福尔马林(3.7%～4%甲醛)，固定和保存时所用的溶液是指福尔马林的百分比，而不是甲醛，例10%福尔马林溶液是10毫升的福尔马林加上90毫升的水配成。

所以10%的福尔马林，实际上仅含3.7～4%的甲醛。

福尔马林易被氧化为甲酸，故常带酸性，为得到中性福尔马林可加吡啶、碳酸钙或碳酸镁的方法使之中和。

例如在100毫升的25%福尔林中加5毫升的吡啶；可使它的pH 上升到7.0；10%的福尔马林可被过量的碳酸钙中和为pH6.4；如果用碳酸镁则为pH7.6。

冲淡的福尔马林(10%)更易氧化，为了保持它的中性，可于其中放入几小块大理石。

福尔马林必须为无色透明，若贮藏时间较长或存放在温度太低会变混浊，呈絮状物。

为防止该现象的发生可提前加少许甘油以阻滞其聚合，沉淀物则可加热溶解，如加热仍不能溶解，则可加等量热的0.8%碳酸钠或0.4%氢氧化钠(约60～70℃)溶液，在室温放置2～3天，沉淀物就会消失。

石蜡切片的制作过程

在六月期间我们学习了石蜡切片的制作，以下是制作的过程：一、切片前的准备：1、恒温水浴锅首先预热至35℃—40℃。

2、蜡块整修，将蜡块组织面的石蜡用刀修去，使组织全部暴露出切面并修平，以减少切片刀的磨损。

将组织块左右两侧的石蜡在不损伤组织及影响诊断的原则上，全部切除；否则切片容易皱褶。

组织块上下边缘的石蜡视组织情况修齐修平；石蜡不须留得过多，应尽量少留，以保持组织间距的最小限度。

这样切下的切片既呈带状，也不弯曲。

片距小，在贴片时就可相应多贴片，有利于检查诊断。

修切蜡块时只能一点一点地切掉蜡边，要是大片修切易使蜡块断裂露出组织；遇此情况应返入新蜡再次包埋。

3．载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象，应将载玻片浸入酸缸内12小时后流水冲洗，再烤干备用。

根据切片需要张数，每片涂上一层极薄的蛋白甘油，插于载片板（或载片架）上备用。

蛋白甘油的配制：取新鲜鸡蛋1份加甘油1份再加适量麝香草酚搅匀。

此法主要是防止脱片，实际上一张很清洁的载玻片不涂蛋白甘油也不会脱片。

4、将锋利的刀片装入切片刀夹钳内，调整角度和位置后随即紧固，检查切片刀的倾斜度是否正确，倾角过大、则切片上卷；倾角过小则切片皱起，以20°-30°为佳。

5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。

二、切片的步骤：1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内，调整到稍离开切片能够切到的位置上，注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平行。

2、再调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋紧刀架，固定好机头。

3、根据需要调整切片厚度。

4、摇动切片机手轮先进行修整切片，直到切出完整的最大组织切面后，再进行切制。

5、实践中可用右手转动切片机手轮，左手用毛笔托起蜡片，协调地进行切片操作。

6、切下的切片带，一端用镊子轻轻拉起，应尽可能将切片带拉直展开，用毛笔将切片带从刀口向上挑起，拉下切片带，然后轻拖铺于恒温水面上。

三、贴片：1、将单张或数张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起，铺于恒温水中，（光亮的一面朝下）立即用毛笔轻轻拉展以切片无皱褶为最好。

蜡块的修切-常规石蜡切片制作

天津天士力集团研究院药理所文件编号：
1 蜡块的修切-常规石蜡切片制作
不管是组织包埋机包埋的蜡块也好，还是传统法包埋的蜡块，切片前都需要很好的修
切，才能更适合于切片。

前者包埋的蜡块，包埋盒周边的石蜡，一定要去除掉，否则切片时，切片机上的持蜡器，将无法将其夹上，影响切片中间的部分，视组织的大小而确定是否需要修切，比如组织小米粒大小，这时应将周边多余的石蜡削去，按要求组织块周边的余蜡留有0.5CM 即可，削去余蜡后，对于细小的组织，一张玻片可以多裱上几个组织块，对于疾病的观察大有好处。

削去余蜡的另一个好处是延长切片刀的使用寿命，保证一把刀（一次性刀片）多切一些蜡块，因为余蜡的存在，在切片时，增加了刀口的磨擦，使刀口容易钝化。

传统包埋法的蜡块，如为原始的包埋框所包埋的蜡块，在分切蜡块时，应特别小心，以防损坏分切的蜡块，造成切片的困难或难以形成连续切片（组织周边余蜡存留太小或没有）。

目前大多数使用的是包埋盒，但包埋盒边上多余的石蜡也要修切去，否则妨碍蜡块上机切片。

石蜡切片具体过程及操作步骤精心整理

石蜡切片具体过程及操作步骤固定：组织块大小：1.5×1.5×0.2 CM固定液>4倍组织体积福尔马林固定市售为40%甲醛水溶液，应放入小量碳酸钠放置一段时间福尔马林固定液：40%甲醛溶液1份，水9份固定数小时后用水洗24小时优点：克服了乙醇固定的缺点脱水（组织块）70%乙醇片刻80%乙醇2-4小时95%乙醇2-4小时95%乙醇2-4小时100%乙醇2-4小时100%乙醇2-4小时注：为保证100%乙醇无水，可在容器中放入无水硫酸铜吸收水分，变蓝后更换。

最好能将100%乙醇中取出来的组织浸入香柏油后再经二甲苯后浸石蜡。

透明（组织块）100%乙醇：二甲苯（1：1）15分钟二甲苯15分钟二甲苯15分钟注意：时间太长变脆浸蜡（组织块）石蜡熔点52—56℃温箱：56℃二甲苯：石蜡（1：1）1-2小时石蜡1-2小时石蜡1-2小时包埋将熔化了的石蜡倾入包埋框内，随即迅速将组织块用加温了的镊子送置于框内，平置底面。

注意组织切面，放入冷水，冷固后将蜡块修齐，固定于木块上。

石蜡切片切片机：调整好。

刀：磨刀时一个方向，液体石蜡。

切下的片子，右手用弯镊子轻轻钳牢石蜡切片，左手用干燥毛笔将切片取下，放入盛温水（约30℃）的玻璃皿内，将切片摊于温水面上，光亮的切面向下，用弯镊子细心张开皱纹。

然后将水温加到40℃，使切片更平均地展开于水面上，再用弯镊子细心分开各蜡片，将涂过少许蛋白甘油的载玻片沉至切片下面，然后将切片从水面取出。

最后将切片置于56℃保温箱内烘干，需时2小时。

刀的倾角：20—30°冬天石蜡52-54℃，夏天56-58℃HE染色法石蜡切片Ⅰ二甲苯2-5分钟（冬季56℃温箱）Ⅱ二甲苯2-5分钟（冬季56℃温箱）100%乙醇1min95%乙醇1min80%乙醇1min70%乙醇1min先用自来水而后用蒸馏水洗0.5minHarris氏苏木紫液5min。

苏木紫为盐基性染料可染细胞核。