地贫筛查的检测技术(精)
地中海贫血及新生儿筛查检测项目介绍
福建
湖南 四川 重庆
4.1
2.2 1.9 1.0
1.5
2.0 2.2 2.3
5.6
4.2 4.1 3.3
J Clin Pathol, 2004; Clin Genet, 2010; 中华医学遗传学杂志, 2012.
地中海贫血
基因类型
αα/αα
临床类型
正常人
症状
-α/αα或αTα/αα
--/αα、-α/αTα或 ααT/ααT或-α/-α --/-α或--/ααT --/--
把住“三关” --婚检、孕检和产检
地中海贫血
中国南方α和β地贫的人群携带率
地区 α地贫 广西 云南 17.6 9.8 携带率（%） β地贫 6.4 7.3 合计 24.0部）
12.7
8.5 4.2 3.5
2.7
2.5 5.1 2.9
15.4
11.0 9.3 6.4
地中海贫血及新生儿筛查检测项 目介绍
王冰冰 博士
广东凯普生物科技股份有限公司
地中海贫血检测技术介绍
地中海贫血
地中海贫血（ Thalassemia ），简称地贫，世界上发 病率最高、危害性最大的单基因遗传性疾病，主要分为 α-地贫和β-地贫。 我国以长江以南各省发病率高，多见于广东、广西、海 南、福建、云南、贵州、四川 等地区。
新生儿筛查检测项目
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症是最常见的一种遗传性酶缺乏 病,俗称蚕豆病。我国是本病的高发区之一，主要分布在长江以南各省， 以海南、广东、广西、云南、贵州、四川等省为高。G6PD缺乏症发病原 因是由于G6PD基因突变，导致该酶活性降低，红细胞不能抵抗氧化损伤 而遭受破坏，引起溶血性贫血。临床表现为慢性非球形细胞溶血性贫血、 蚕豆病、药物性溶血、新生儿黄疸及某些感染性溶血。
地中海贫血检测方法
地中海贫血检测的方法目前,用于地中海贫血检测的方法的代表性技术大体可分为以下两类:检测基因缺失突变的单管多重跨越断裂点PCR技术和多重连接探针扩增技术(MLPA);检测基因点突变的反向点杂交技术(RDB)、变性高效液相色谱技术(dHPLC)]和DNA序列分析技术等。
此外,最近发展的基于实时荧光PCR平台的新技术,如用于α地贫缺失拷贝数定量的实时荧光PCR直接检测技术、以及用于检测β地贫点突变的基于探针熔解曲线的基因分型技术(PMCA),可能是下一步更新换代的技术选择。
上述胛p PCR、RDB和MLPA等为地贫检测的主流技术。
1.Southern 印迹法优点：分析缺失型α-地中海贫血分子缺陷的可靠技术缺点：操作繁冗，不宜作为常规手段2.联合检测平均红细胞参数（MCV、MCH）+红细胞脆性检测+Hb（血红蛋白）电泳MCV：平均红细胞容积 MCH：平均红细胞血红蛋白量3.PCR-RDB法（PCR/寡核苷酸探针反向斑点杂交法）检测中国南方常见的17种β地贫突变：CD41～42(-TCCT)、IVS-2 nt654 C →T、-28 A→G、CD71～72（+A）、CD71～72（+T）、CD17 A→T、CD26 G→A、CD31（-C）、CD27～28（+C）、CD43 G→T、-32 C→A、-29 A→G、-30 T→C、CD14～15（+G）、CAP、Int及IVS-1 nt5 G→C4.α地中海贫血的基因诊断依据Gap-PCR原理采用单管四重PCR法（多重PCR技术）对其基因组DNA进行扩增，同时检测-α3.7、-α4.2、--SEA和正常对照4种等位基因型，采用1.2％琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物，通过片断大小判断患者的基因型。
5.采用PCR-RFLP方法检测非缺失型α地贫Hb Constant Spring(HbCS)。
地贫基因分型 检测技术
地贫基因分型检测技术今天咱们来聊一个很重要的事情，就是地贫基因分型检测技术。
也许这个名字听起来有点复杂，不过没关系，我会讲得很简单，让大家都能明白。
你们知道吗？有一种病叫地中海贫血，这是一种很特殊的病。
有些小朋友得了这个病，就会经常感觉没力气，脸色也不好看，像个没有生气的小木偶一样。
那怎么知道一个人有没有地贫，是哪种地贫呢？这就需要地贫基因分型检测技术啦。
就好比我们在一个神秘的城堡里找宝藏，这个宝藏就是地贫基因的秘密。
检测技术就像一把神奇的钥匙，能打开城堡的大门，让我们看到里面的情况。
我给大家讲个小故事吧。
有一个叫小美的小朋友，她总是比别的小朋友容易累。
她的爸爸妈妈很担心，就带她去医院。
医生怀疑小美可能有地贫，于是就用这个地贫基因分型检测技术来检查。
这个检测就像是给小美的身体里的小细胞们做了一个超级仔细的检查。
医生从她身体里取了一点点血，就那么一点点，就像我们不小心被针扎了一下流出来的那点血。
然后把血送到一个专门的地方去检查。
在那个检查的地方啊，有好多神奇的仪器。
这些仪器就像一个个小侦探，在血液里寻找地贫基因的线索。
它们可聪明啦，能把血液里那些和地贫有关的小秘密都找出来。
比如说，有的地贫基因就像一个调皮的小怪兽，会让身体里的红细胞不能好好工作。
检测技术就能发现这个小怪兽，然后告诉医生这个小怪兽是什么样子的，是很厉害的那种，还是稍微不那么厉害的。
如果没有这个检测技术呢，医生就像在黑暗里摸瞎，不知道小美到底怎么了。
但是有了这个技术，医生就能很清楚地知道小美是不是地贫，是哪一种地贫。
这样就能给小美制定专门的治疗方法啦。
还有一个小朋友叫小阳，他的哥哥有地贫。
小阳的爸爸妈妈很担心小阳也会有。
于是也带小阳去做了这个检测。
小阳一开始很害怕，他想会不会很疼啊。
可是当他知道只是扎一下手指取点血的时候，他就勇敢了。
结果出来后，小阳没有地贫，他的爸爸妈妈松了一口气，小阳也开心地笑了。
这个地贫基因分型检测技术就像一个守护小天使，守护着小朋友们的健康。
地贫的实验室检查究竟有哪些？
地贫的实验室检查究竟有哪些？地贫是一种常见的遗传性血液疾病，主要特征是红细胞内缺乏血红蛋白中的一种重要结构蛋白质——地中海贫血血红蛋白。
地贫的诊断和治疗离不开实验室检查，通过实验室检查可以明确地贫的类型、严重程度和并发症。
本文将详细介绍地贫的常见实验室检查方法。
一、血常规检查血常规检查是最基础的实验室检查方法之一，可以帮助医生了解患者的全血细胞计数和细胞形态学。
对于地贫患者来说，血常规检查最关注的指标是红细胞计数、红细胞压积和平均红细胞体积等。
1. 红细胞计数：地贫患者的红细胞计数通常会偏低，这是由于地中海贫血血红蛋白缺乏使得红细胞的生命力受损所致。
2. 红细胞压积：红细胞压积是血液中红细胞所占据的体积比例，一般情况下地贫患者的红细胞压积也会偏低。
3. 平均红细胞体积：平均红细胞体积反映了红细胞的大小情况，对于地贫患者来说，平均红细胞体积会有所增大。
二、血红蛋白电泳血红蛋白电泳是一种常用的地贫分类诊断方法，通过检测血液中的血红蛋白类型和比例来确定地贫的类型。
地贫主要分为α地贫和β地贫两种类型，而每种类型还有不同的亚型。
血红蛋白电泳可以明确地贫的类型，帮助医生制定合理的治疗方案。
三、骨髓穿刺检查骨髓穿刺检查是一种直观了解骨髓情况的方法，对于地贫患者来说也是必不可少的检查手段之一。
通过骨髓穿刺可以了解骨髓造血功能是否正常、红细胞生成受损的程度以及有无其他造血障碍的存在。
四、铁代谢相关指标检查地贫患者由于长期输血或红细胞寿命缩短，容易引起身体内铁的过多积聚或过严缺乏。
铁代谢相关指标检查包括血清铁、血清铁蛋白、转铁蛋白等指标。
通过这些指标可以了解患者体内铁代谢的情况，以便制定合理的铁剂使用与控制输血量。
五、溶血指标检查地贫患者由于红细胞形态不规则，容易导致红细胞的慢性破坏与溶血。
溶血指标检查包括血清胆红素、血清乳酸脱氢酶等指标。
这些指标的升高可以提示患者是否存在慢性溶血的情况，指导治疗与判断病情。
六、免疫系列相关指标检查地贫患者的免疫功能往往较差，易于发生感染。
地贫诊断标准参考指南
地贫诊断标准参考指南一、概述地中海贫血（简称地贫）是一种遗传性溶血性贫血，由于血红蛋白的珠蛋白β链发生了缺失或突变，导致红细胞结构异常，易于破裂，进而引发贫血。
地贫的诊断需综合考虑多个方面的检查结果，以得出准确诊断。
二、诊断方法1.血常规检测：通过血常规检测，观察红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白量（MCH）等指标，初步判断是否存在贫血及可能的贫血类型。
2.血红蛋白电泳：通过血红蛋白电泳，观察血红蛋白的组成，有助于地贫的初步筛查。
3.基因检测：基因检测是地贫诊断的金标准，通过检测β珠蛋白基因的突变位点，可以明确地贫的类型及严重程度。
4.家族史调查：了解患者的家族史，特别是地贫阳性家族史，有助于诊断地贫。
5.临床表现观察：地贫患者通常有面色苍白、黄疸、肝脾肿大等表现，根据临床表现可以辅助诊断。
6.铁代谢评估：由于地贫患者体内血红蛋白代谢异常，可能导致铁过载，因此进行铁代谢评估有助于了解病情。
7.骨髓检查：骨髓检查可以观察红细胞的生成情况，有助于地贫的诊断。
三、诊断标准判定1.若血常规检测、血红蛋白电泳及家族史调查结果均提示地贫可能，建议进行基因检测以明确诊断。
2.若基因检测发现β珠蛋白基因突变，结合临床表现及家族史，可以确诊为地贫。
3.若基因检测未发现β珠蛋白基因突变，但临床表现及实验室检查结果均支持地贫诊断，可以考虑其他类型地贫，如α地贫等。
4.对于临床表现不典型或实验室检查结果与地贫不符的情况，需综合考虑各项检查结果，进行全面评估，以得出准确的诊断。
四、注意事项1.地贫诊断需由专业医生进行，患者切勿自行诊断或治疗。
2.地贫患者需定期进行血常规及血红蛋白电泳等检查，以便及时了解病情变化。
地中海贫血的鉴别诊断
地中海贫血的鉴别诊断
一、引言
地中海贫血是一种常见的遗传性血液疾病，主要发生在地中海沿岸地区。
由于
地中海贫血的临床症状与其他类型贫血相似，鉴别诊断成为临床工作中的重要任务。
本文将介绍地中海贫血的鉴别诊断方法。
二、地中海贫血的病因
地中海贫血主要由α地中海贫血和β地中海贫血两种类型构成，分别由α和β
球蛋白链基因的突变导致。
三、地中海贫血的临床表现
地中海贫血患者主要表现为贫血、溶血性贫血、肝脾肿大等症状，容易与其他
贫血类型混淆。
四、地中海贫血的鉴别诊断
1.实验室检查
–血常规：地中海贫血患者显示出不同程度的贫血和红细胞数量异常。
–血涂片：观察红细胞形态可与其他贫血类型区分。
–血红蛋白电泳：可明确地中海贫血类型。
2.遗传学检查
–基因检测：通过检测α和β球蛋白链基因突变可确定地中海贫血的类型。
五、地中海贫血的治疗
目前地中海贫血的治疗主要是对症治疗和干预治疗，包括输血、脾切除、造血
干细胞移植等方法。
同时，定期随访和遗传咨询也是重要的治疗手段。
六、结论
地中海贫血由于其独特的病因和临床表现，需要进行专门的鉴别诊断。
通过实
验室检查和遗传学检查的综合应用，可以明确诊断和选择合适的治疗方案，提高患者的生存率和生活质量。
对地中海贫血的研究和诊治工作仍需不断加强，以减少患者的痛苦和提高生活水平。
以上就是对地中海贫血的鉴别诊断的简要介绍，希望对您有所帮助。
地中海贫血及新生儿筛查检测项目介绍_培训课件共28页
地中海贫血
基因类型
αα/αα -α/αα或αTα/αα --/αα、-α/αTα或 ααT/ααT或-α/-α
临床类型
正常人 静止型
轻型 （标准型）
--/-α或--/ααT --/--
血红蛋白H病
Hb Bart’s胎儿水 肿综合征
症状
无症状 轻度贫血
溶血性贫血 胎儿水肿
- a3.7< - a4.2 <a2Ta1< - -
—
299N 299M S2168N S2168M
—
正常样本
1494M纯合子
1555M纯合子
良心品质 科学管理
血，如果不治疗，一般5岁左右死亡； ❖ 中间型地贫患儿需长期输血，长大基本丧失劳动力，生存质量明显下降。
地贫难治但可防！
把住“三关” --婚检、孕检和产检
地贫基因携带率不是防控 目标，减少了多少中重度 地贫的出生才是关键！
地中海贫血
中国南方α和β地贫的人群携带率
地区
广西 云南 海南 广东 贵州 江西（南部） 福建 湖南 四川 重庆
结果分析
--SEA/αα βN /βN
--SEA/-α4.2 βN/βN
αα/ ααQS βN /βN
--SEA / ααQS βN/βN
αα/αα β41-42/βN
孕前优生健康检查中地中海贫血筛查的技术方案
孕前优生健康检查中地中海贫血筛查的技术方案目的探讨孕前优生健康检查中新婚待育夫妇地中海贫血筛查在出生缺陷干预应用中的意义，为预防和减少地贫病患儿的出生提供依据。
方法双方均为潮汕平原地区户籍的孕前优生健康检查对象12 092例，所有样品均采用MCV法进行初筛，以静脉血平均红细胞体积（MCV≤80fL）作为诊断地贫的阳性参考指标。
再应用Gap-PCR和反向点杂交技术（RDB-PCR）对部分样品进行α地贫基因和β地贫基因定型。
结果在1679例（MCV≤80fL）血标本中检出7种α-地贫等位基因（染色体）942例，检出9种β-地贫等位基因（染色体）482例，计算上10 413例MCV阴性α-地贫基因推算数205例和10 413例MCV阴性-β地贫基因推算数46例，则潮汕平原地区人群α-基因携带率为9.49%（1147/12 092），β-基因携带率为4.37%（528/12 092）。
结论新婚夫妇地中海贫血系统筛查及基因诊断能及时发现各类地贫异常患者，对预防出生缺陷有着重要意义。
标签：地中海贫血；筛查；出生缺陷；计划生育地中海贫血（简称地贫）是由于α和（或）β珠蛋白基因发生了改变，使得血红蛋白中一种或几种珠蛋白肽链合成速率降低或缺如，导致珠蛋白链生成失衡为特征的遗传性溶血性血红蛋白病[1-2]。
常见有α地贫和β地贫两种类型。
广东省是该病的高发区。
为了解本地区户籍人口地中海贫血的基因类型和频率分布，为开展遗传咨询、产前诊断预防和减少地贫病患儿的出生提供依据。
我们对12 092例双方均为潮汕平原地区户籍的孕前优生健康检查对象进行地贫检查。
1 对象与方法1.1 研究对象广东省潮汕平原地区从2013年1月～2014年3月的新婚夫妇，共12092例（年龄20～34岁，夫妇双方均为最佳生育年龄），调查对象均为潮汕平原地区户籍人口。
1.2 研究方法1.2.1 MCV值测定以平均红细胞体积（MCV）为血液学表型初筛指标（采用日本Sysmex公司K4500型全自动血细胞分析仪进行检测）。
地贫的诊断技术
地贫的诊断技术
地贫是一种常见的血液疾病，其主要特征是血红蛋白水平低于正常范围。
地贫的诊断技术主要包括血液学检查和基因检测两种方法。
血液学检查是地贫诊断的主要方法之一。
通过血液学检查可以确定血红蛋白水平是否低于正常范围，以及红细胞形态、大小、数量等指标是否异常。
常用的血液学检查方法包括血常规、血红蛋白电泳、血红蛋白高效液相色谱等。
血常规是最常用的血液学检查方法之一，可以测定血液中的各种细胞数量和形态。
在地贫的诊断中，血常规可以检测红细胞数量、大小、形态等指标，从而确定是否存在地贫。
血红蛋白电泳是一种通过电泳分离血红蛋白种类的方法，可以确定血红蛋白是否异常。
血红蛋白高效液相色谱则是一种高效的血红蛋白分离方法，可以检测出各种血红蛋白异常。
基因检测是地贫诊断的另一种重要方法。
地贫是由基因突变引起的遗传性疾病，因此通过基因检测可以确定患者是否携带地贫基因。
目前常用的基因检测方法包括PCR扩增、DNA测序等。
PCR扩增是一种通过特定引物扩增目标基因片段的方法，可以检测出地贫基因是否存在。
DNA测序则是一种通过测序技术确定基因序列的方法，可以确定
地贫基因的具体突变类型。
总的来说，地贫的诊断技术主要包括血液学检查和基因检测两种方法。
血液学检查可以确定血红蛋白水平是否低于正常范围，以及红细胞形态、大小、数量等指标是否异常。
基因检测则可以确定患者是否携带
地贫基因。
在实际诊断中，医生通常会结合两种方法进行综合分析，
以确定地贫的确诊和类型。
地贫筛查技术规范
附件1：地中海贫血产前诊断技术规范地中海贫血(以下简称地贫)是一种由珠蛋白基因缺失或突变导致肽链合成障碍而引起的溶血性贫血，是我省发病率最高的人类单基因遗传病之一。
为规范我省地贫产前诊断技术的应用，特制定本技术规范。
一、地贫产前筛查（一）基本要求1开展地贫产前筛查技术服务的医疗保健机构（以下简称产前筛查机构）应符合《广东省开展产前筛查技术服务的基本条件》；2、地贫产前筛查机构应与具有产前诊断技术服务资质的医疗保健机构（以下简称产前诊断机构）建立工作联系，并纳入产前诊断质量控制体系。
产前诊断机构应对产前筛查机构进行技术指导和质量管理。
（二）技术规范。
1、地贫产前初筛。
在地贫高发地区，凡未做过地贫筛查的孕妇应建议其进行地贫筛查。
地贫的初步筛查应推广使用血液红细胞指数(MCV,MCH)等适宜技术。
对红细胞指数下降的，应书面建议进一步做地贫产前筛查，并按规定转诊。
不具备红细胞指数检查条件的医疗保健机构，应书面建议当事人到有条件的医疗保健机构进行该项目检查，或采用其他方法进行筛查。
2、地贫产前筛查。
对产前检查和血液红细胞指数初筛发现的地贫可疑孕妇，应采用血红蛋白（Hb）电泳技术或/和高效液相色谱(HPLC)技术作进一步筛查，对检测结果为HbA2降低或临界值的，则再作血清铁测定。
临床医生根据检测结果，进行地贫、异常Hb和缺铁性贫血的鉴别诊断，并提供地贫相关的产前咨询及必要的转诊服务。
3、产前筛查报告。
产前筛查报告包括实验室检测结果和遗传咨询指导意见两部分。
实验室检测结果应包括产前筛查所选用的试验名称、参考范围、测定结果。
遗传咨询指导应包括是否存在α-或β-地贫的可能性及相应的进一步检查建议等。
实验室检测结果应由经培训的专业技术人员或实验室主管复核后，才能签发。
产前筛查报告应当由副高以上职称的产前筛查技术培训合格的执业医师复核后，才能签发。
产前筛查报告由2名以上经培训的执业医师签发。
4、产前筛查后高风险对象的处理原则。
地中海贫血筛查技术规范
地中海贫血筛查技术规范第一篇：地中海贫血筛查技术规范地中海贫血筛查技术规范地贫产前初筛：凡未做过地贫筛查的孕妇应建议其进行地贫筛查。
地贫的初步筛查应推广使用血液红细胞指数(MCV,MCH)等适宜技术。
对红细胞指数下降的，应书面建议进一步做地贫产前筛查，并按规定转诊。
地贫产前筛查：对产前检查和血液红细胞指数初筛发现的地贫可疑孕妇，应采用血红蛋白（Hb）电泳技术作进一步筛查，对检测结果为HbA2降低或临界值的，则再作血清铁测定。
临床医生根据检测结果，进行地贫、异常Hb和缺铁性贫血的鉴别诊断，并提供地贫相关的产前咨询及必要的转诊服务。
产前筛查后高风险对象的处理原则：1.对产前筛查结果为高风险的孕妇，产前咨询医生应及时给予遗传咨询指导；是否实施产前诊断，应严格遵循知情选择原则。
2.医疗保健机构不得擅自为产前筛查结果为高风险的孕妇作终止妊娠的处理。
3.对产前筛查结果为高风险的孕妇应进行随访。
第二篇：地中海贫血筛查工作报告地中海贫血筛查工作报告海洋性贫血又称地中海贫血（Thalassemia），是一组遗传性溶血性贫血。
其共同特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成。
导致血红蛋白的组成成分改变，本组疾病的临床症状轻重不一，大多表现为慢性进行性溶血性贫血。
地中海贫血大多婴儿时即发病，表现为贫血、虚弱、腹内结块。
发育迟滞等，重型多生长发育不良，常在成年前死亡。
轻型及中间型患者，一般可活至成年并能参加劳动，倘注意节劳及饮食起居，对地中海贫血类疾病的早期筛查有利于及时发现和尽早治疗，对于缓解患儿病情具有重要的意义，本院在2013年4月-2014年3月期间共筛查相关项目950例，现将筛查工作报道如下 1筛查对象筛查对象为县妇幼保健院在2013年4月-2014年3月期间进行地中海贫血项目筛查的婴幼儿共计750例。
2筛查方法地中海贫血是由于合成血红蛋白的珠蛋白肽链减少或缺失，从而导致这种含有异常血红蛋白的红细胞变形性降低，寿命缩短，可以提前被人体的肝脾等破坏，导致贫血甚至发育等异常。
地中海贫血基因检测实验步骤
地中海贫血基因检测实验步骤地中海贫血（Mediterranean anemia），又称为地中海型家族性小红细胞性贫血，是一种常染色体隐性遗传病。
该病是由珠蛋白基因缺陷引起的，导致血红蛋白结构异常，造成红细胞携氧能力减弱。
地中海贫血的基因检测通常涉及以下几个步骤：1. 样本采集：- 采集患者的血液样本或使用拭子采集口腔黏膜细胞。
2. DNA提取：- 从血液或细胞样本中提取DNA。
这通常涉及破坏细胞膜和核膜，然后使用化学试剂纯化DNA。
3. PCR扩增：- 利用聚合酶链反应（PCR）技术，特异性地扩增珠蛋白基因的特定片段。
这通常涉及设计针对基因突变热点区域的引物，并通过循环加热和退火步骤使目标DNA片段指数级增长。
4. 凝胶电泳：- 将PCR产物通过凝胶电泳进行分离，根据大小将不同长度的DNA片段分开。
这有助于识别是否存在特定的突变。
5. 基因测序：- 对PCR产物进行测序，以识别可能的基因突变。
测序可以揭示DNA序列中的碱基替换、插入或缺失，这些改变可能与地中海贫血的发生有关。
6. 突变分析：- 将测序结果与已知的突变数据库进行比对，以确定是否存在与地中海贫血相关的特定基因突变。
7. 数据解读：- 根据突变分析的结果，结合患者的临床症状和家族史，医生或遗传顾问将解释检测结果，并提供遗传咨询服务。
8. 报告编写：- 编写一份包含检测结果和相关解释的报告，供医疗专业人员和患者参考。
基因检测对于诊断地中海贫血非常重要，它不仅可以帮助确诊患有该病的个体，还可以为家族成员提供风险评估和遗传咨询。
随着科技的进步，新的检测技术（如芯片基因分型和下一代测序）正在使地中海贫血的基因检测变得更加快速和精确。
地中海贫血的检查方法
地中海贫血的检查方法
地中海贫血的检查方法包括以下几个方面：
1. 血液常规检查：测定血红蛋白（Hb）水平、红细胞（RBC）计数、红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白含量（MCH）等指标，通过这些指标可以初步判断是否存在地中海贫血的可能。
2. 血红蛋白电泳：血红蛋白电泳是诊断地中海贫血最重要的检查方法之一，能够明确地中海贫血的类型，包括α地中海贫血、β地中海贫血等。
3. DNA检测：通过检测患者的基因突变，如β基因突变、α基因突变等，可以确诊地中海贫血，还能够帮助判断地中海贫血的基因型。
4. 骨髓检查：如果血液检查结果存在异常，医生可能会建议进行骨髓检查，通过骨髓中的红细胞生成情况来判断贫血的原因和严重程度。
除了上述检查方法，医生还可以根据患者的临床表现、家族史、肝脾功能等综合考虑地中海贫血的可能性，并结合其他相关检查来做出最终的诊断。
请注意，以上内容仅供参考，具体的检查方法需由医生根据实际情况进行判断和指导。
地贫的筛查诊断和治疗参考幻灯片
●重型β地贫儿童，一般每月血红蛋白下降
40g/L，而提高 10g/L血红蛋白则每月每公斤
体重需红细胞 3ml，40g/L血红蛋白为 12ml。
每1单位红细胞有 120ml，相当于200ml全血
中红细胞。
31
4.重型β地贫的除铁治疗
4.1铁负荷过重导致多器官功能障碍
? 肝脏：肝纤维化、肝硬化 ? 心脏：心包炎、心率失常、传导阻滞、心衰 ? 垂体：生长发育及性成熟迟缓 ? 胰腺：糖尿病 ? 甲状腺：甲状腺功能低下 ? 甲状旁腺：甲状旁腺功能低下
15
5.全自动电泳仪用于Hb电泳及 HbA2和HbF测定
目前国内使用的主要有 ▲美国生产的Helena 电泳仪、扫描仪 和分析系统。 ▲法国生产的Sebia电泳仪、扫描仪和 分析系统。 ▲国产的金桑特电泳仪、扫描仪和分 析系统。
16
6.高效液相色谱仪用于地贫和 血红蛋白病的检测
国际地贫协会和美国化学学会推荐使 用，直接测出HbA2和HbF值，6分钟左 右出一个结果，变异系数小，准确可 信，操作方便，结果判断简单，既可 单个做也可成批大量做，一次可放100 个样品。已知血红蛋白病大多可有特 别波型，易诊断。
17
7.血细胞分析
平均细胞体积（ MCV）----79 平均红细胞血红蛋白浓度（ MCH） ----27pg
18
8.基因分析
缺失型α地贫 ▲提取 DNA ▲PCR扩增 ▲PCR产物电泳分离非缺型α地贫
β地贫和非缺失型α地贫 ▲提取 DNA ▲PCR扩增 ▲杂交 ▲洗膜 ▲显色
19
结果分析：
HbA 2高于正常（1岁以），MCV ， MCH 低于正常为β地贫，Hb正常为携带 者，低于正常为轻型。
14
地中海贫血筛查技术规范
地中海贫血筛查技术规范一、主要设备要求1.血细胞分析仪：具有性能优良的血细胞分析仪，参加省级临检中心室间质评成绩合格；2.血红蛋白分析仪：有凝胶蛋白电泳或高效液相色谱仪。
二、人员要求：仪器操作者要具有相应资质的检验人员：开单、结果解释人员为具有相应资质的临床医生。
三、工作流程1.受筛人员由医生开单，做血液细胞学检查，MCV＜82f1 或MCH＜27pg者为初筛阳性。
2.医生给初筛阳性人员开单，做血红蛋白电泳分析。
3.医生向受筛查人员解释筛查结果的临床意义。
4.出现不明确的结果时，由医生建议受筛人员到上级单位筛查或做基因诊断。
四、技术规范：1.仪器日常运行正常，维护保养到位，耗材要与仪器配套。
2.特别提示：做血液细胞学分析，采用静脉采血时，血液与抗凝剂混合后，要静待10分钟以后分析；末梢采血分析时，血液与稀释液混合后，要待5分钟以后再检测；做血红蛋白电泳分析操作前，要把标本中的血浆充分洗脱。
结果解释时，MCH受影响因素较少，比MCV更可靠。
3.其他操作要严格按照相应的SOP进行。
五、结果解释：根据MCV、MCH和血红蛋白分析等血液学表型指标检测结果，可以大致得到下列5组不同的筛查结果，这5组代表性异常状况的分类，也是指导临床上正确报告诊断结果的基础，现逐一解释如下：第1组：MCH、HbA2和HbF均正常：正常。
但静止型地中海贫血或α—珠蛋白基因三联体者此三项检查也正常。
第2组：MCH＜27Pg、HbA2＞3.5%和HbF＜5.0%：β—地中海贫血的基因携带者。
MCH显著降低（19~23Pg）和HbA2水平升高（4.0%~10.0%）是绝大多数β—地中海贫血基因携带者的特征。
虽然约有30%β—地中海贫血基因携带者的HbF轻度升高，而HbA2指标则是β—地中海贫血基因携带者表型的特征性指标，一般HbA2＜10.0%。
如HbA2＞10.0%，考虑为Hb Lepore；若HbA2＞15%,则为HbE的可能性比较大。
地中海贫血的诊断方法
地中海贫血的诊断方法B-地中海贫血的筛查和诊断主要依赖实验室检查，方法主要有：1 血常规检测地中海贫血的重要特征之一是小细胞低色素性贫血，如MCV≤80 fl，MCH≤25．0 Pg，则可疑为地中海贫血患者或基因携带者，可同时测定血清铁和铁蛋白，以排除缺铁性贫血。
2 红细胞渗透脆性试验(一管法)其原理是地中海贫血红细胞膜表面粗糙、凹陷、折叠和浆膜扩展，膜与内容物之比增大，对渗透溶解的抗性增加，在0．32％(或0．36％)NaC1中溶解度降低(脆性降低)。
一管法可用于地中海贫血群体筛查。
3 血红蛋白(Hb)电泳Hb电泳是检测地中海贫血、异常血红蛋白最常用的方法，可观察到HbE、HbH 等异常血红蛋白区带，同时可定量检测HbF、HbA2的含量并区分常见类型的地中海贫血。
有研究显示MCV、Hb电泳和红细胞脆性实验三者联合检测的灵敏度可达100％，阴性预告值达100％，联合特异度可达100％，阳性预告值达100％DS。
4 高效液相色谱技术(HPLC)原理：采用微柱法离子交换层析和梯度洗脱技术，全自动分析仪可分离血红蛋白的变异体与亚型，容易发现重型和轻型B地中海贫血。
在操作上，HPLC采用的是全血标本，不需要制备Hb液，只要将全血标本直接放在仪器上，通过电脑操作便能实现HbA、HbA2、HbF等定量检测。
优点：所需样本量少，自动化程度高，操作简单，快速，能消除人为误差，结果准确。
HPLC也可用于胎儿脐带血的产前诊断，可诊断出重型B地中海贫血，但不能区分正常胎儿和杂合子胎儿。
近年来，地中海贫血高发地区也采用此法进行携带者检测。
5 基因诊断近年来，随着分子生物学研究领域的不断发展，从最初的B珠蛋白基因簇限制性酶切多态性检测至目前的聚合酶链反应(PCR)技术结合其他分子生物学方法，B地中海贫血的诊断已逐步改进和完善。
基因诊断方法有下列几种：5．1 限制性片段长度多态性连锁分析(RFLP连锁分析) 原理：DNA限制性内切酶可识别并切割DNA上特定的核苷酸序列，得到一定长度的DNA片段，而碱基的突变可导致酶切位点的丢失或形成，从而改变酶切片段的大小。
地贫筛查的检测技术(精)
电泳法
多种方法优缺点的比较
1.检验结果的准确性 2.检验操作技术的难度 3.设备的投入与产出比 4.设备的实用性
ROC Curve
11.0 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 10.0 -.1 -.0 .1 .2 .3 .4 .5 .6 .7 .8 .9 1.0
3.1高效液相色谱法
Elevated HbA2 -Thalassemia carriers
2.9%
5.6%
3.2血红蛋白电泳法
电泳法是比较普及的方法，我国内地 绝大数单位用电泳法诊断地贫，优于HPLC 的是可用于做新生儿脐血HbBart’s定量， 诊断α地贫，HbBart’s达1%-2%为 静止型 α 地贫基因携带者 ，HbBart’s达5%-15% 为轻型α 地贫 ，HbBart’s达25%为HbH病 。
1.正常新生儿 2.胎儿水肿综合征 3.α地中海贫血1(脐血) 4.HbCS-HbH病型 5.重型β地中海贫血复合HbE 6.轻型β地中海贫血 7.异常HbK杂合子 8.异常HbJ杂合子
9.轻型β地中海贫血 10.异常HbD杂合子 11.异常HbG杂合子 12.轻型β地中海贫血复合HbE 13.正常成人 14.正常成人 15.HbH病
地贫的病理基础
α地贫：α珠蛋白基因缺失或缺陷使α珠 蛋白链的合成受到部分或完全抑制，造成α链 的合成减少，过剩的β链聚合成四聚体，在红 细胞内沉积，使红细胞变形性降低，不易通过 微循环及脾窦与脾索间的基膜而造成红细胞的 过度破坏。 β地贫：β珠蛋白基因突变导致β珠蛋白链 合成受到部分或完全抑制，过剩的α链聚合成 不稳定的四聚体，在红细胞内沉积，造成无效 造血和红细胞的过度破坏。
地贫筛查的检测技术
地贫基因筛查流程
有关“地贫基因”的筛查流程
有关“地贫基因”的筛查流程如下：
1.初步筛查：通常通过血常规检查进行初步筛查，观察红细胞指标以及血红蛋白电泳等
指标，对于异常者进行下一步的地贫基因检测。
2.基因检测：在孕前或孕早期，通过基因检测技术明确α、β珠蛋白基因的异常位点，
为产前诊断做准备。
基因检测包括肽链检测和基因分析。
3.产前诊断：对于有高危因素的孕妇，例如夫妇双方为地贫基因携带者，或者在有地贫
高发的地区，进行产前诊断。
对孕11-14周孕妇取绒毛组织约2-5g，孕15-22周孕妇经羊膜穿刺抽取羊水15-20ml，24-30周孕妇抽取胎儿脐带血0.5-1.5ml，通过基因检测明确胎儿有无α或β珠蛋白基因的缺失或突变以及类型。
4.遗传咨询：根据产前诊断结果，对夫妇进行遗传咨询，预测胎儿成为中型或重型地贫
患者的机会，并告知下一代的遗传风险。
5.终止妊娠：对于重型地贫胎儿，医生可能会建议终止妊娠。
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电泳法
多种方法优缺点的比较
1.检验结果的准确性 2.检验操作技术的难度 3.设备的投入与产出比 4.设备的实用性
ROC Curve
11.0 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 10.0 -.1 -.0 .1 .2 .3 .4 .5 .6 .7 .8 .9 1.0
3.1高效液相色谱法
Elevated HbA2 -Thalassemia carriers
2.9%
5.6%
3.2血红蛋白电泳法
电泳法是比较普及的方法，我国内地 绝大数单位用电泳法诊断地贫，优于HPLC 的是可用于做新生儿脐血HbBart’s定量， 诊断α地贫，Bart’s达5%-15% 为轻型α 地贫 ，HbBart’s达25%为HbH病 。
3.血红蛋白分析
HbA2量：轻型β地贫和静止型β基因携带者>4%。 HbF量:中间型和重型β地明显增高。 异常波型：各种异常血红蛋。 HPLC不能做HbH和HbBart’s定量，不能以脐血诊断α 地贫。 （所有的β地贫和中间型α地贫（血红蛋白H病）可 明确诊断，静止型α基因携带者、轻型α地贫不能 诊断）
1.红细胞脆性试验
红细胞脆性试验在基层单位可 用，但在有血细胞分析仪的单位就 不应该单用于地贫筛查，此项检测 误漏诊率高，且英美地贫筛查指南 中均没有此项目。
2.血细胞分析
平均红细胞体积（MCV） <79fl为地贫表型阳性，β地贫和中 间型、轻型α地贫和部分静止型α 地贫基因携带者均为阳性，但有部 分静止型α地贫基因携带者是正常 的。
Source of the Curve
电泳法3 电泳法2 电泳法1 高效液相
1 - Specificity
Diagonal segments are produced by ties.
四种血红蛋白分析设备对比
按上述ROC确定的诊断β地贫杂合 子HbA2截断值判断238样本中173例健 康成人误诊例数和65例β地贫杂合子漏 诊例数分别为HPLC为0和1例，Sebia为 各1例，Sang Te为2和4例，醋酸纤维膜 法为32和4例。
T
T
T
静止型α地贫：缺失1个 α基因(αα/α-) 或1 个α基因突变(αα/ααT ) 又叫α地贫2，不会贫血。
T
β地贫：以临床贫血程度分级
重型β地贫：Hb在60g/L以下。纯合子地贫或 双重杂合子地贫。 中间型β地贫：Hb60-100g/L之间。双重杂合 子或杂合子地贫。 轻型β地贫：贫血但在100g/L以上，杂合子 地贫。 静止型β地贫：不贫血，杂合子地贫。
地贫筛查的检测技术
解放军第三0三医院血液科
张新华
背景信息
地中海贫血是广西新生儿出生 缺陷的首位重要遗传病！ 地中海贫血是广西婚前检查医 务人员首位要关注的疾病！
背景信息
健康夫妇生下的胎儿中唐氏 综合症的出生率约为1/750，而重 型和中间型地贫（包括α和 β地 贫）胎儿的出生率超过10‰ ，相 差十多倍。但实际上地贫的受重 视的程度远不如唐氏综合症。
4.基因分析
静止型α基因携带者只有基因分 析才能诊断（ 缺失型的α α/ α-4.2 ,αα/α-3.7 ,非缺失型的HbCs、HbQs 、HbWs）
基因分析的注意事项
基因分析的全过程都很重要，其中的一步出错 都会导致结果的错误。可从下述几方面注意： 1.血标本的采集、运送和储存全过程不出问题。 2.血样处理、DNA/RNA制备、扩增、电泳/杂交不出 问题。 3.结果判断要联系血常规和电泳结果。还要注意医 生开单的项目的准确性。
1.正常新生儿 2.胎儿水肿综合征 3.α地中海贫血1(脐血) 4.HbCS-HbH病型 5.重型β地中海贫血复合HbE 6.轻型β地中海贫血 7.异常HbK杂合子 8.异常HbJ杂合子
9.轻型β地中海贫血 10.异常HbD杂合子 11.异常HbG杂合子 12.轻型β地中海贫血复合HbE 13.正常成人 14.正常成人 15.HbH病
地中海贫血的检测技术
必须掌握的几项地贫相关指标
平均红细胞体积 血红蛋白电泳 血红蛋白A2 α地贫基因 β地贫基因 ＞79fl 未见异常区带 <3.5%或<4% 未检出 未检出
地贫相关的临床检测技术
1.红细胞脆性试验 2.血细胞分析 3.血红蛋白分析 4.地贫基因检测 第1-3项为筛查项目
背景信息
▲广西地贫基因携带率高达25%以上。 ▲新生儿缺陷率高，死亡率高，约有1/2是地贫。 ▲重视不够，措施不得力。 ▲从事地贫防治人员少，投入少。 ▲开展基因诊断的医院也少，开展地贫产前诊断的 医院更少。 ▲各级医院地贫相关设备落后。 ▲地贫防治工作特别。 ▲市民地贫知识匮乏。
认识地中海贫血
1.地中海贫血分类：主要有α地 贫和β地贫两大类。 2.地中海贫血的分级：均分为重 型、中间型、轻型和静止型基 因携带者四级。
α地贫：以缺失α基因数 或突变α基因数分等级
重型α地贫：又叫 HbBart’s水肿综合征， 4个α基因都缺失了 (--SEA /--SEA) ，在孕 后期或出生后即死亡。
地贫的病理基础
α地贫：α珠蛋白基因缺失或缺陷使α珠 蛋白链的合成受到部分或完全抑制，造成α链 的合成减少，过剩的β链聚合成四聚体，在红 细胞内沉积，使红细胞变形性降低，不易通过 微循环及脾窦与脾索间的基膜而造成红细胞的 过度破坏。 β地贫：β珠蛋白基因突变导致β珠蛋白链 合成受到部分或完全抑制，过剩的α链聚合成 不稳定的四聚体，在红细胞内沉积，造成无效 造血和红细胞的过度破坏。
中间型α地贫：缺失3个 α基因(α -/--SEA)或缺 2个α基因另有一个α基 因突变(α αT/--SEA) ， 又叫HbH病，电泳大多可 见HbH区带。Hb大多在 60-100g/L左右。
T
轻型α地贫：缺失2个 α基因(α α/--SEA) (α-/ α-)或2个α基 因突变(α αT /α αT ) 或缺1个α基因另有一个 α基因突变(α-/ α-) ， 又叫α地贫1。轻度贫血 或不贫血。