地贫筛查的检测技术(精)

4.基因分析
静止型α基因携带者只有基因分 析才能诊断（ 缺失型的α α/ α-4.2 ,αα/α-3.7 ,非缺失型的HbCs、HbQs 、HbWs）
基因分析的注意事项
基因分析的全过程都很重要，其中的一步出错 都会导致结果的错误。可从下述几方面注意： 1.血标本的采集、运送和储存全过程不出问题。 2.血样处理、DNA/RNA制备、扩增、电泳/杂交不出 问题。 3.结果判断要联系血常规和电泳结果。还要注意医 生开单的项目的准确性。
3.血红蛋白分析
HbA2量：轻型β地贫和静止型β基因携带者>4%。 HbF量:中间型和重型β地明显增高。 异常波型：各种异常血红蛋。 HPLC不能做HbH和HbBart’s定量，不能以脐血诊断α 地贫。 （所有的β地贫和中间型α地贫（血红蛋白H病）可 明确诊断，静止型α基因携带者、轻型α地贫不能 诊断）
1.地中海贫血分类：主要有α地 贫和β地贫两大类。 2.地中海贫血的分级：均分为重 型、中间型、轻型和静止型基 因携带者四级。
α地贫：以缺失α基因数 或突变α基因数分等级
重型α地贫：又叫 HbBart’s水肿综合征， 4个α基因都缺失了 (--SEA /--SEA) ，在孕 后期或出生后即死亡。
中间型α地贫：缺失3个 α基因(α -/--SEA)或缺 2个α基因另有一个α基 因突变(α αT/--SEA) ， 又叫HbH病，电泳大多可 见HbH区带。Hb大多在 60-100g/L左右。
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轻型α地贫：缺失2个 α基因(α α/--SEA) (α-/ α-)或2个α基 因突变(α αT /α αT ) 或缺1个α基因另有一个 α基因突变(α-/ α-) ， 又叫α地贫1。轻度贫血 或不贫血。
3.1高效液相色谱法
Elevated HbA2 -Thalassemia carriers
2.9%
5.6%
3.2血红蛋白电泳法
电泳法是比较普及的方法，我国内地 绝大数单位用电泳法诊断地贫，优于HPLC 的是可用于做新生儿脐血HbBart’s定量， 诊断α地贫，HbBart’s达1%-2%为 静止型 α 地贫基因携带者 ，HbBart’s达5%-15% 为轻型α 地贫 ，HbBart’s达25%为HbH病 。
背景信息
▲广西地贫基因携带率高达25%以上。 ▲新生儿缺陷率高，死亡率高，约有1/2是地贫。 ▲重视不够，措施不得力。 ▲从事地贫防治人员少，投入少。 ▲开展基因诊断的医院也少，开展地贫产前诊断的 医院更少。 ▲各级医院地贫相关设备落后。 ▲地贫防治工作特别。 ▲市民地贫知识匮乏。
认识地中海贫血
Source of the Curve
电泳法3 电泳法2 电泳法1 高效液相
1 - Specificity
Diagonal segments are produced by ties.
四种血红蛋白分析设备对比
按上述ROC确定的诊断β地贫杂合 子HbA2截断值判断238样本中173例健 康成人误诊例数和65例β地贫杂合子漏 诊例数分别为HPLC为0和1例，Sebia为 各1例，Sang Te为2和4例，醋酸纤维膜 法为32和4例。
地贫筛查的检测技术
解放军第三0三医院血液科
张新华
背景信息
地中海贫血是广西新生儿出生 缺陷的首位重要遗传病！ 地中海贫血是广西婚前检查医 务人员首位要关注的疾病！
背景信息
健康夫妇生下的胎儿中唐氏 综合症的出生率约为1/750，而重 型和中间型地贫（包括α和 β地 贫）胎儿的出生率超过10‰ ，相 差十多倍。但实际上地贫的受重 视的程度远不如唐氏综合症。
地贫的病理基础
α地贫：α珠蛋白基因缺失或缺陷使α珠 蛋白链的合成受到部分或完全抑制，造成α链 的合成减少，过剩的β链聚合成四聚体，在红 细胞内沉积，使红细胞变形性降低，不易通过 微循环及脾窦与脾索间的基膜而造成红细胞的 过度破坏。 β地贫：β珠蛋白基因突变导致β珠蛋白链 合成受到部分或完全抑制，过剩的α链聚合成 不稳定的四聚体，在红细胞内沉积，造成无效 造血和红细胞的过度破坏。
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静止型α地贫：缺失1个 α基因(αα/α-) 或1 个α基因突变(αα/ααT ) 又叫α地贫2，不会贫血。
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β地贫：以临床贫血程度分级
重型β地贫：Hb在60g/L以下。纯合子地贫或 双重杂合子地贫。 中间型β地贫：Hb60-100g/L之间。双重杂合 子或杂合子地贫。 轻型β地贫：贫血但在100g/L以上，杂合子 地贫。 静止型β地贫：不贫血，杂合子地贫。
电泳法
多种方法优缺点的比较
1.检验结果的准确性 2.检验操作技术的难度 3.设备的投入与产出比 4.设备的实用性
ROC Curve
11.0 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 10.0 -.1 -.0 .1 .2 .3 .4 .5 .6 .7 .8 .9 1.0
1.正常新生儿 2.胎儿水肿综合征 3.α地中海贫血1(脐血) 4.HbCS-HbH病型 5.重型β地中海贫血复合HbE 6.轻型β地中海贫血 7.异常HbK杂合子 8.异常HbJ杂合子
9.轻型β地中海贫血 10.异常HbD杂合子 11.异常HbG杂合子 12.轻型β地中海贫血复合HbE 13.正常成人 14.正常成人 15.HbH病
地中海贫血的检测技术
必须掌握的几项地贫相关指标
平均红细胞体积 血红蛋白电泳 血红蛋白A2 α地贫基因 β地贫基因 ＞79fl 未见异常区带 <3.5%或<4% 未检出 未检出
地贫相关的临床检测技术
1.红细胞脆性试验 2.血细胞分析 3.血红蛋白分析 4.地贫基因检测 第1-3项为筛查项目
1.红细胞脆性试验
红细胞脆性试验在基层单位可 用，但在有血细胞分析仪的单位就 不应该单用于地贫筛查，此项检测 误漏诊率高，且英美地贫筛查指南 中均没有此项目。
2.血细胞分析
平均红细胞体ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ（MCV） <79fl为地贫表型阳性，β地贫和中 间型、轻型α地贫和部分静止型α 地贫基因携带者均为阳性，但有部 分静止型α地贫基因携带者是正常 的。