微生物检测系列之沙门氏菌检验技巧及详解

下表列出部分实际操作视图供大家参考
样 BS
XLD
品
阴
性
样来自百度文库
品
1
阴 性 样 品 2
阳 性 样 品 1
阳 性 样 品 2
沙门显色（科玛嘉）
样 BS 品 甲 型 副 伤 寒 沙 门 氏 菌 鼠 伤 寒 沙 门 氏 菌
XLD
沙门显色（科玛嘉）
阴性样品在 HE 上的分离效果及 XLD 琼脂上各种菌落形态：
从以上的这些实例来看，要通过一种培养基来判定菌落的可疑程度是有难度的，需要几 种分离培养基结合起来才能有效的判别可疑菌落，在 BS 上无可疑菌落的样品，在 XLD 上 会出现可疑菌落，在 XLD 上无可疑菌落的，会在显色培养基上有可疑菌落。顺便提一下， 沙门氏菌显色培养基的分辨效果还是很好的。再进一步说，要通过分离这一步就要判定出阳 性和阴性样时不可能的，只能结合后续的生化特性进行判断（如奇异变形杆菌在 XLD 上的 形态是灰黑色的，具有很强的干扰性）。
微生物检测系列之沙门氏菌检测过程详解及注意事项
严烨
沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一，其病原沙门氏菌属肠道细 菌科，包括那些引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。它们除可感染人外，还 可感染很多动物包括哺乳类、鸟、爬行类、鱼、两栖类及昆虫。人畜感染后可呈无症状带菌 状态，也可表现为有临床症状的致死疾，它可能加重病态或死亡率，或者降低动物的繁殖生 产力。
（4）BS 琼脂：含有煌绿、亚硫酸铋能抑制大肠埃希氏菌、变形杆菌和革兰氏阳性菌的 生长，但对伤寒、副伤寒等沙门氏菌的生长无影响。伤寒杆菌及其他沙门氏菌能利用葡萄糖 将亚硫酸铋还原成硫酸铋，形成黑色菌落周围绕有黑色和棕色的环，对光观察可见有金属光 泽。该培养基制备过程不宜过分加热，以免降低其选择性，应在临用时配制，超过 48 h 不 宜使用。XLD 琼脂：培养基中含有去氧胆酸钠作指示剂，在该浓度下的去氧胆酸钠也同时 作为大肠埃希氏菌的抑制剂，而不影响沙门氏菌属和志贺氏菌属的生长。HE 琼脂：在保证 细菌所需营养的基础上，加入了一些抑制剂，如：胆盐、柠檬酸盐、去氧胆酸钠等，可抑制 某些肠道致病菌和革兰氏阳性菌的生长，但对革兰氏染色阴性的肠道致病菌则无抑制作用。 沙门氏菌显色培养基（SCA）：主要用于快速筛选、分离沙门氏菌，原理是利用沙门氏菌特 异性酶与显色基团的特有反应，使色原游离出来，沙门氏菌在培养基上呈紫色或紫红色。而 大肠埃希氏菌等其他肠杆菌呈蓝绿色。
3. 选择性分离划线 （1）这一步是整个沙门氏菌检测环节最重要的步骤，因为平板划线分离的效果决定了 可疑菌落的判定和选择。 （2）平板划线选择四分法，分离效果好，更容易出现单菌落。
（3）一般习惯选用的分离培养基为亚硫酸铋琼脂（BS）、木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂（XLD） 及沙门氏菌显色培养基。本人尤其对 XLD 有独特的爱好，因为感觉 XLD 上的菌落形态较 多，分的更为清楚。常见沙门氏菌在 BS 上的可疑菌落具有黑色金属光泽、棕褐色或灰色， 菌落周围培养基呈现黑色或棕色；在 XLD 上的可疑菌落呈粉红色，大部分沙门氏菌带有黑 色中心，少部分（如甲型副伤寒沙门氏菌）无黑色中心，有些菌株会呈现全黑色菌落（如鼠 伤寒沙门氏菌），极少数的为黄色菌落；沙门显色培养基（SCA）根据说明书进行判断，常 见的科玛嘉的选择性培养基可疑菌呈紫红色，其他菌呈蓝绿色（其他的如青岛海博的可疑菌 呈亮红色，广东环凯的可疑菌落呈红色，等等）。也可选择 HE 琼脂，它含有的硫代硫酸钠 和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使得可疑菌落中心可能呈黑色。无论选择哪种选择性 培养基，BS 是必须要选择的，再同其他一种或两种培养基结合起来判定可疑菌存在性。
所以将沙门氏菌检验规定为食品致病性菌种检验中的重要项目，它的检测过程一般包括 样品前增菌、选择性增菌、选择性平板分离划线、初步生化鉴定（确定可疑菌）、生化鉴定、 血清学鉴定及血清学分型（选做）共计 7 个步骤。整个步骤完全完成至少需要 7 天时间。下 面以样品检测示例对整个检测过程进行分析梳理。
国家方法标准：GB 4789.4-2016 1. 前增菌 （1）需要的试剂为缓冲蛋白胨水（BPW），蛋白胨提供碳源和氮源满足细菌生长的需求; 氯化钠可维持均衡的渗透压;磷酸二氢钾和磷酸氢二钠是缓冲剂。 （2）按样品来源分为普通样品、能力验证样品及盲样考核样品等。 （3）按样品形态分为固态样品、半固态样品及液态样品。 （4）能力验证样品及盲样考核等样品按照随样附带的作业指导书进行操作；普通样品 直接量取 25 g（mL）加入 225 mL BPW 中，混匀置于 36 ℃±1 ℃的恒温培养箱中培养 18 h。 注：样品不需要匀浆均质，直接秤取加入 BPW 中即可，对于固体大颗粒物质，需要捣 碎后称量；BPW 要按照配制说明提前分装灭菌备用。
上图是两种不同的样品在 BPW 中增菌的结果 2. 选择性增菌 （1）用到的试剂是亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）和四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB），选 择两种培养基同时操作的原因是是防止漏检：TTB 可以抑制除了多数的除了沙门以外的肠 道菌生长，但是同时也能抑制较少一些种类的沙门菌生长；而 SC 则是相比较 TBB 选择性要 低很多，可以防止 TTB 抑制的那些菌当中的沙门氏菌，但是 SC 里面划线出来的平板因为细 菌种类较多，比较难分离，在选择可疑菌时难度又较大。所以同时使用两种培养液，就具备 了两者的优点，SC 范围广，TTB 选择性强。 （2）TTB 和 SC 提前配制，分装灭菌、冷却备用；也可以购买商品化的培养管 （3）晃动混匀增菌液，从中吸取分别吸取 1 mL 分别加入到 TTB 和 SC 培养管中，混匀。 TTB 培养管置于 42±1 ℃培养箱培养 18-24 h，SC 培养管主语 36±1 ℃培养 18-24 h。 （4）SC 培养后，若菌生长，培养液会变红，但是变红不意味着沙门氏菌的存在，还需 要往下进行。
从选择性平板上作用就可以看出，选择性的目的是分辨出培养液中倒地有几种菌，无论 是灰色的、黑色的、粉色的、带黑色中心的还是不带黑色中心的，都是下一步初步生化鉴定 的对象菌，这样做的目的就是为了不遗漏任何可能。再强调一遍，有几种菌，就要做几种菌 的初步生化鉴定。