皮肤病理石蜡切片

省二院：
厂地：上海懿洋仪器有限公司
伊红（曙红Y） EosinY
配制伊红，有许多种方法，根据各单位的情况，使用不同 种类的伊红。 市售的伊红有两种：一是水溶性伊红，二是醇溶性伊红， 在我们的实践中，水溶性伊红用低浓度的酒精来配制，只要配 制得当，其效果非常好。 伊红 1g 70-75%酒精 100ml 先将伊红用蒸馏水(少许)调成浆糊状，再加入酒精，边加 边搅拌，直到彻底溶解，此时试剂有些混浊，取少许冰醋酸， 加入到试剂中去，试剂逐渐转变为清亮，呈鲜红色，染出切片， 效果很好。
目的，否则不易染色！（石蜡不与染液结合）
脱苯（水）→蒸馏水
无水乙醇 95%乙醇 80%乙醇 2min 2min 数秒
70%乙醇
流水冲过
反 酒 精 梯 度
比较：
我们没有反酒精梯度脱水， 只用了95%乙醇进行脱苯1min。
功能：脱去组织上多余的苯，使组织梯度进水水，进而染色。 注意：如果组织进入95%乙醇中有云雾状现象，说明二甲苯没有脱彻底或乙醇
3-4h
①我们95%乙醇采用两步脱水， 以减小收缩力。
无水乙醇Ⅰ ≧1.5h 无水乙醇Ⅱ ≧1.5h
功能：
②无水乙醇的脱水时间不超过 2h，与此相比较，相差将近2倍。
脱去组织中的水分，以便石蜡浸入。
注意：①水和石蜡不相容，需脱水彻底，以便制备出好的切片。
②无水乙醇同样具有使组织收缩变硬的影响，故不能时间过 长。 议：无水乙醇脱水3-4h皮肤组织会不会变硬？
透明
二甲苯Ⅰ 20min
比较：
20min
透明时间都相同，但我们用 的是松节油进行组织透明。
二甲苯Ⅱ
功能:
二甲苯是酒精和石蜡的共同溶剂（媒剂）目 的是为石蜡的浸入作媒介。
注意：二甲苯也能使组织变硬，故时间不宜过
长。如果时间过长组织变硬，可以在香柏油中进 行软化。
议：松节油透明较慢，我们会不会透明不彻底？是否加长透明时间？
透明
二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅱ 2min 3min
比较：我们略去此步。
功能：提高组织片的折射率，增强组织片的质量。
注意：此步透明可以延长时间，提高组织片镜下的“新鲜”度。
封片
中性树胶
中性树胶的处理：新买来看的树胶较粘稠，我们 可以用二甲苯进行调和。
注意：封片树胶不能过稀，封片时树胶要均匀充满盖
玻片且树胶不及外溢为佳。要将组织全部覆盖，也不能有 气泡。最后，粘贴标签 。
切片机：LEICA（莱卡)RM 2255
单次切片的特点：组织片不易褶皱 切片的时间较长 粘片的组织较少
摊片
水浴温度37℃ 每个玻片黏贴两个组织片
比较：
水浴温度不稳32-45 ℃极 易造成组织片摊不开或张力过 大而裂开。由于我们是连续切 片，所 以玻片上的组织片大 于四个。
烤片
烤箱温度55℃ ≧1.5h
比较：
我们烤箱温度不稳，在82 ℃左 右烤≧1h。
功能：是组织切片能够与玻片粘在一
起，防止在染色过程中脱片。
注意：烤片过程中温度不能过高，
防止烫伤组织。
脱蜡
二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅱ ≧12min ≧ 12min
比较：
时间都在20min左右，基本相同。
功能：二甲苯溶解切片中的石蜡，以便染色。
注意：二甲苯脱蜡的时间不能太短，已达到脱蜡彻底的
过陈旧、不纯。
染色
比较：
苏木素 流水冲洗 酸酒精（分化） 流水冲洗 5-10min 数分钟 数秒 ≧2min 酸酒精具有脱色作用洗不彻底， 染色较淡。 氨水碱性，洗不彻底会影响伊红的亲 和力。
基本相同。
1%氨水（反蓝） 1min 流水冲洗 伊红 流水冲洗 充分 10s-1min 数分钟
注意：染色时间的长短和组织的酸碱度和染液配制的时间有关，所以要以显
功能：①保持原有组织形态，防止细菌腐蚀标本。
②AF液是固定和脱水过程中的过渡阶段， 缓冲组织的收缩。
注意：口腔组织与皮肤组织的区别，不一定完全符合
此种固定方法。
议: AF液相当于90%乙醇进行脱水，时间较短，简略了梯度酒精脱水的 完整性，是否造成组织收缩程度加大？
脱水
95%乙醇 1-1.5h
比较：
苏木素 Hematoxylin
分子式：C16H14O6 分子量：302.29 PH：5.0-7.2（黄-紫）
中国医药公司
（10g）
上海化学试剂采购供应站（进口分装）
石蜡的不同
口腔医院：
厂地：上海疑难病理会诊中心监制 上海华申康复器材厂 商标：衡永 熔点：56-58℃ 商标：睛晶牌 熔点：55-59℃
浸蜡
干燥箱温度65-70℃ ≧1.5h
比较：
我们的干燥箱温度不稳， 在72-84℃之间波动。
功能：
石蜡溶解二甲苯，已达到石蜡浸入整个组织的目的。
注意：干燥箱中的温度过高或不稳，使组织变脆或烫伤，造成切片困
难，不能制成理想的切片。
议：石蜡的厂家（物理性能）不同，是否影响浸蜡的时间和切 片？
包埋
比较：
皮肤病理石蜡切片技术
随笔总结
概述
（1）修材 （2）固定 （3）脱水 （4）透明 （5）浸蜡 （6）包埋 （7）切片 （8）摊片
（ 9 ）烤片 （10）脱蜡 （11）脱苯（水）→蒸馏水 （12）染色 （13）脱水 （14）透明 （15）封片
修材
一般修材不超过1.5× 1×0.2cm 但在实际工作 中，平均修材在1.0 ×0.5 ×0.2cm左右
微镜下观为准，不能一概而论。 议：苏木素的不同是否影响组织染色的效果？
脱水
70%乙醇 80%乙醇 95%乙醇 无水乙醇 数秒 数秒 数秒 10min 我们梯度酒精不健全， 在无水乙醇中2min。
比较：
功能：脱去组织中的水分并对染片进行分化。 注意：脱水过程中也是对伊红染色的分化，所以在梯度酒精
中不宜过长。
比较：
我们修材的大小一般要比 口腔医院修的组织块小。大概 有黄豆粒大小。
原因：
口腔医院包埋机提供的包埋框大小适宜，包埋时受组织大 小的影响较小，而我们手工包埋大的组织较困难。
注意：组织块的大小修材受实际病变程度的影响，不能墨守
常规，一概而论。
固定
中性10％福尔马林 1h
AF液 0.5－1h
比较：
增加了AF液，相对比我 们固定标本节约了约5个小时。
包埋机进行！ 手工包埋，温度不宜掌握！
注意：
①手工包埋时蜡的温度不宜过高，最好做到组织的温度与蜡的 温度相同。
②蜡块上下两端应当修平，但留余蜡，否则切片弯曲不直，或 无法连成带状，左右两端应不留余蜡，若余蜡过多时，是切片容易 褶皱。
切片
切3μm厚度 单次切片
比较：4-5μm厚度，连续切片
LEICA（莱卡)RM2235