蛋白质的稳定性和稳定化
药剂学：生物技术药物制剂
美国政府技术顾问委员会(OAT) 的定义是：应 用生物或来自生物体的物质制造或改进一种商品的 技术，其中还包括改良有重要经济价值的植物与动 物和利用微生物改良环境的技术。该定义强调了生 物技术的商品属性。
传统生物技术发展阶段
➢古代，人们就会利用微生物发酵法来制醋、做酱、醇酒等，但古代人并不知 道微生物的存在，更不懂得什么是发酵，他们对微生物利用完全靠着多年来 摸索出来的经验。
第19章
生物技术药物制剂
生物技术将是未来经济发展的新动力 第一次技术革命 工业革命 解放人的双手 第二次技术革命 信息技术 扩展人的大脑 第三次技术革命 生物技术 改造生命本身
生物技术的定义
1982年，国际合作与发展组织的定义为：生物 技术是应用自然科学及工程学的原理，依靠微生物、 动物、植物体作为反应器将生物材料进行加工以提 供产品为社会服务的技术。
英国医学专家日前将转基因大肠杆菌 与一种抗癌药相结合，成功杀死了实验鼠 体内的癌细胞。科学家将转基因大肠杆菌 注射到实验鼠的肿瘤内，再给实验鼠注射 一种名叫6－MPDR的抗癌药。这种药无 法单独发挥作用，但是一种由转基因大肠 杆菌分泌的酶能将此药物“激活”，形成 一种有效的毒素，将其周围的癌细胞杀死， 而不伤害其它组织器官。
畜牧业中的应用
➢ 动物疫苗、生长激素等
➢ 例：从转基因羊的羊奶 中提取出治疗心脏病的 药物tPA
蛋白质与酶工程教学大纲
《蛋白质与酶工程》教学大纲课程名称：蛋白质与酶工程学分：2学时：32先修课程：生物化学适用专业：生物工程开课系部：生命科学学院一、课程性质、目的和培养目标课程性质：专业选修课课程目的：本课程是生物工程本科专业选修课，目的是让学生在学习了普通生化的基础上，进一步对蛋白质和酶工程进行深入系统的学习。
并对于酶在生产实践中的应用，也能有一些感性和理性的认识。
课程培养目标：采用多媒体课件和国内外最新的教学参考书、教案，灵活运用多种教学方法，因材施教，使学生在牢固掌握基础知识和基本概念的同时，得到科学研究、科学思维和科学方法的良好训练，为其他专业基础课和专业课的学习及日后的研究工作打下基础。
二、课程内容和建议学时分配第一章绪论2课时（一）教学基本要求掌握蛋白质工程和酶工程的定义，了解其发展史，以及应用前景。
（二）教学内容第一节蛋白质工程概论第二节蛋白质工程的应用第三节蛋白质工程展望第四节酶工程简介一酶工程二组成：酶的产生；酶的分离纯化；酶的固定化；生物反应器。
三分类：化学酶工程；生物酶工程。
第五节酶与酶工程的发展简史一酶学研究简史二酶工程研究简史（三）教学重点和难点重点：蛋白质与酶工程定义; 难点：酶工程的组成分类第二章蛋白质的结构与功能 2课时（一）教学基本要求掌握蛋白质的基本结构组成及功能（二）教学内容第一节蛋白质的基本结构与功能一蛋白质的组成二蛋白质的一级结构三蛋白质一级结构与功能的关系第二节蛋白质的空间结构与功能一蛋白质的二级结构二超二级结构和结构域三蛋白质的三级结构四蛋白质空间结构与功能的关系五蛋白质-蛋白质相互作用（三）教学重点和难点重点：蛋白质的空间结构；难点：蛋白质间的相互作用；第三章蛋白质的修饰和表达 4课时（一）教学基本要求掌握蛋白质的化学修饰途经，了解蛋白质改造的一些途经等。
（二）教学内容第一节蛋白质修饰的化学途径一功能基团的特异性修饰1 多位点取代2 单一的或限制性取代3 次级取代二基于蛋白质片段的嵌合修饰第二节蛋白质改造的分子生物学途径一编码基因的专一性位点和区域性定向突变1 编码基因的专一性位点突变2 区域性定向突变二基因融合和基因剪接三 tRNA介导定点搀入非天然氨基酸第三节重组蛋白质的表达一目标蛋白质在大肠杆菌中的表达1 表达载体的一般特点2 与外源基因有效表达的相关因素3 改善表达水平及溶解性的方法二目标蛋白质在酵母细胞中的表达三重组蛋白质在哺乳动物细胞中的表达1161 选择哺乳动物细胞表达体系的优点2 两个主要的哺乳动物细胞表达系统四噬菌体显示（三）教学重点和难点重点：蛋白质的修饰和表达；难点：蛋白质间的修饰；第四章蛋白质的分离纯化及酶的分离工程8课时（一）教学基本要求了解蛋白质和酶分离的一般过程、生物材料的处理方法，掌握酶的分析方法和分离纯化的方法、技术。
蛋白质的四级结构及其稳定性
蛋白质的四级结构及其稳定性蛋白质作为生命体中最基本的分子机器，扮演着细胞内许多关键功能的角色。
它们通过特定的三维空间结构实现其功能，而这个结构的稳定性则对蛋白质的功能和生物学活性产生重要影响。
蛋白质的三维结构可被分为四个层次，分别是一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。
本文将讨论这些结构及其与蛋白质稳定性的关系。
一级结构是指蛋白质的氨基酸序列。
氨基酸顺序的不同决定了蛋白质的种类和功能。
通过化学键连接氨基酸残基的方式，形成了多肽链。
这一级结构的稳定性对于维护蛋白质的整体结构和功能至关重要。
二级结构是指多肽链中部分区域的局部折叠方式，常见的二级结构包括α-螺旋和β-折叠。
螺旋结构由多个氨基酸残基围绕中心轴旋转形成，而β-折叠则是由多个延伸的链之间的氢键相互连接而成。
二级结构的稳定性受到氨基酸残基间氢键的影响，氢键的形成和破坏直接决定了二级结构的稳定性。
三级结构是指蛋白质整体的立体构象。
这个结构是由具有相似序列的多肽链在空间中相对位置的排列所决定。
蛋白质的立体构象是通过水合效应、疏水效应和静电相互作用等力的平衡来维持的。
任何造成这些力的改变都有可能影响蛋白质的稳定性。
四级结构是指两个或多个多肽链相互结合形成的多肽复合物。
这种结构可以通过非共价键（如离子键、范德华力、氢键等）或共价键（如二硫键）来稳定。
多肽链间的相互作用对四级结构的形成和稳定性起着至关重要的作用。
蛋白质的四级结构和稳定性的关系非常密切，任何一个结构层次的改变都可能导致蛋白质失去功能或功能受损。
例如，突变可以改变蛋白质的氨基酸序列，从而破坏一级结构的稳定性；氢键的改变可以影响二级结构的稳定性；环境条件的变化可以导致三级结构的改变；而对于四级结构的改变会直接影响多肽复合物的稳定性。
总之，蛋白质的四级结构及其稳定性是保证蛋白质正常功能的重要因素。
在探索蛋白质的功能和生理活性时，我们必须深入理解这些结构，并探索各层次之间的相互关系。
只有这样，我们才能更好地理解蛋白质的生物学功能以及其在疾病和药物研发中的重要作用。
蛋白翻译后修饰的种类及作用
蛋白翻译后修饰的种类及作用蛋白翻译后修饰是指在蛋白质翻译完成之后，通过化学反应形成的一系列化学修饰，包括磷酸化、乙酰化、甲基化等。
这些修饰能够改变蛋白质的结构与功能，从而影响细胞代谢和信号传导、稳定蛋白质结构、形成蛋白复合体及转运等多个生物学过程。
一、磷酸化磷酸化是蛋白翻译后修饰中最为常见的一种方式，通过在蛋白质上加上一个磷酸根（PO4），改变蛋白质的电性、构象、酶活性、稳定性等多个方面。
磷酸可以在精氨酸、谷氨酸、丝氨酸和苏氨酸等多个氨基酸上发生磷酸化反应。
不同的磷酸酵素目标氨基酸不同，不同的磷酸化方式也会发生不同的效应，磷酸化对蛋白质的稳定性和功能具有微调作用。
二、乙酰化乙酰化是一种将乙酰基（COCH3）转移至蛋白质氨基酸上的修饰方式。
该修饰多发生在赖氨酸上，可以使相邻精氨酸和色氨酸的磷酸酶活性发生改变，还可以影响蛋白质复合体的形成，从而影响透过信号和蛋白质的细胞内运输等生物学过程。
三、甲基化在蛋白质修饰的方式中，甲基化是一种较少见的表观修饰形式，通常是通过加入顶甲基（CH3）将甲氨酸、精氨酸等还原型氨基酸上的α-氨基反应物完好加工，覆盖翻译后通过精细化的程序酶转作用而形成的反应。
甲基化参与胰岛素的受体、细胞生长等多个社会响应的调节过程。
四、硫醇化硫醇化是一种将氨基酸的硫原子和非氨基酸的硫还原作用之间发生反应，并形成二硫键的修饰方式。
该过程在蛋白构象稳定性和功能方面非常重要，除此之外，硫醇化还可以参与几乎所有的生物学过程中，其中包括氧化还原反应、复合体稳定化、细胞生长和代谢、DNA修复、信号转导等等。
五、糖基化糖基化是一种将糖分子与氨基酸残基之间结合的修饰方式。
糖基化通常发生在蛋白质的赖氨酸、α-胺基酸或酪氨酸上。
这种修饰可以影响蛋白质的稳定性和活性，还可以影响细胞生死和传递的信号、蛋白质的转运和复合体的形成等生物学过程。
六、肽链修饰蛋白翻译后肽链的修饰是指将其他季节性的氨基酸、功能元素（如模拟肽、小分子等）加入到肽链的指定位点上，从而改变蛋白质的性质与功能。
生物分子的结构与功能
生物分子的结构与功能生物分子是指在生命体系中起着至关重要的各种功能的分子。
这些分子通常具有非常复杂的化学结构和多种多样的功能。
其中，最重要的是生物大分子，如蛋白质、核酸、多糖和脂质等。
这些生物大分子的结构决定了它们的功能，而这些功能又决定了生命体系的运作和生命的存在。
在本文中，我们将深入探讨生物分子的结构与功能。
一、蛋白质蛋白质是生物分子中最重要的一种。
它们参与了细胞内的许多重要的生化反应，同时还承担了细胞结构和传递信息的任务。
蛋白质的结构包括四个不同的层次：原始结构、二级结构、三级结构和四级结构。
1.原始结构蛋白质的原始结构是由氨基酸链组成的。
氨基酸是生物大分子中最基本的单位，有20种不同的类型。
通过连接不同类型的氨基酸，可以组成各种各样的蛋白质。
氨基酸中的胺基和羧基之间通过肽键相互连接，并且每个氨基酸都有一个侧链。
不同侧链的氨基酸会影响蛋白质的不同结构和功能。
2.二级结构蛋白质二级结构是指蛋白质中的α螺旋和β折叠。
α螺旋是由氢键和α螺旋中的氨基酸侧链形成的。
β折叠则是由氢键和β链中的氨基酸侧链形成的。
这些结构能够保持蛋白质的稳定性。
3.三级结构蛋白质的三级结构是由蛋白质链上不同部分相对的方向构成的。
这种构象通常由氢键、离子键和氢键等非共价键连接，要达到其稳定状态，相对稳定的组织可以相互连接，组成具有生物活性的蛋白质分子。
4.四级结构蛋白质的四级结构是指多个蛋白质链之间的互相组装。
例如，血红蛋白分子就是由四个蛋白质链和四个血红蛋白分子所组成的。
二、核酸核酸是另一种十分重要的生物大分子。
它们携带着遗传信息，负责了生命的传递和复制。
核酸包括DNA和 RNA 两种类型。
两者之间存在一些结构和功能上的差异。
DNADNA分子是由A、T、G和C四种不同的碱基序列组成的双链螺旋结构。
这些化学部分通过氢键连接在一起，从而将双链分子固定在一起。
DNA的平面结构不仅是双链螺旋，而且还是一种右旋，由于它满足了Watson-Crick基础对的完美配对，每一对质子键可以被强化和进一步稳定化。
蛋白质稳定性的分析和评估方法
蛋白质稳定性的分析和评估方法随着生物技术的飞速发展，蛋白质在药物研发、工业生产等领域中扮演着越来越重要的角色。
然而，蛋白质的稳定性对于其功能和应用都有着至关重要的影响，因此如何准确地评估蛋白质的稳定性就成为了研究人员关注的焦点之一。
1. 蛋白质的稳定性概述蛋白质的稳定性是指在特定条件下，蛋白质结构和功能的改变能力。
蛋白质的结构包括一级结构、二级结构、三级结构和四级结构，其中主要以三级结构的稳定性表现最为重要。
蛋白质的三级结构存在着多种稳定化相互作用，比如氢键、疏水力、静电作用等，它们通过对蛋白质分子的不同区域产生相应的影响，维持了蛋白质的空间构型。
2. 蛋白质稳定性的影响因素蛋白质的稳定性受到多种因素的影响，主要包括温度、pH值、有机溶剂、盐浓度、氧化还原状态等。
其中，温度是影响蛋白质稳定性的主要因素之一。
在高温下，蛋白质的热运动会变得更剧烈，导致分子间的相互作用逐渐减弱，形成的蛋白质结构也会变得不稳定。
pH值是另一个影响蛋白质稳定性的因素。
当pH值偏离蛋白质最适宜的pH值时，极端的低或高pH值都可以导致蛋白质的三级结构发生改变。
此外，有机溶剂、盐浓度等因素也都会对蛋白质的稳定性产生不同程度的影响。
3. 蛋白质稳定性的分析方法目前，用于评估蛋白质稳定性的方法主要包括基于热力学的方法、基于动力学的方法和基于结构的方法。
热力学方法基于蛋白质在不同时间和条件下的热力学特性来评估其稳定性，包括热解、热容量、热传导等。
这些参数可以反映蛋白质在不同条件下的稳定性特点，但是无法直接反映蛋白质的功能状态。
基于动力学的方法则主要考虑蛋白质在不同条件下的动力学特性，比如蛋白质速率常数、反应速率等。
这种方法主要适用于已知蛋白质结构和反应途径的情况下进行评估，但对于未知结构的蛋白质则无法很好地适用。
基于结构的方法则是比较常用的评估方法。
通过对蛋白质结构的理解和分析，推断出蛋白质在不同条件下的结构转换情况，从而评估其稳定性。
蛋白纯化原则和技术介绍
蛋白纯化原则和技术概览无论是蛋白研究还是应用，通常需要将蛋白利用不同的生物系统表达出来，然后进行分离和纯化。
研究实验室通常需要纯化微克或毫克级别的蛋白质，而工业上需要纯化数千克甚至数吨的蛋白质。
因此，蛋白纯化非常重要。
纯化过程中，主要需要考虑宿主污染、样品的可溶性、蛋白结构的完整性和生物活性。
蛋白的纯化可大致分为样品捕获、中度纯化阶段和精细纯化阶段3个阶段。
✓样品捕获：分离、浓缩和稳定化处理；✓中度纯化：去除核酸等其他细胞成分，可使用硫酸铵沉淀法；✓精细纯化：将靶蛋白与其他大小及理化性质接近的蛋白区分开来，常用方法包括凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。
蛋白纯化指导原则1. 明确目标，避免过度纯化或者纯化不够；表1. 对蛋白样本纯度要求的例子。
2、明确样本特性和主要的杂质，选择合适的纯化方法；可以通过检测蛋白稳定性窗口（如pH值、离子强度）和蛋白基础数据（如蛋白大小、等电点pl、疏水性、可溶性等）快速确定纯化技术组合。
3、能够快速检测蛋白的回收率、活性和杂质情况；4、尽量减少步骤，从而避免样本损失过多和活性降低过多；5、尽早除去蛋白酶等对样品有损害的杂质；6、尽量少使用添加剂，否则可能需要额外的步骤去除添加剂。
蛋白纯化方法由于样品和蛋白的性质各异，所含杂质也不尽相同，因此需要采用不同的蛋白纯化策略。
目前主要有六种蛋白纯化方法：凝胶过滤层析、离子交换层析、标签纯化、亲和层析、疏水作用层析、电泳等。
其他方法也可用于蛋白纯化，比如利用蛋白的热稳定性、蛋白酶解稳定性、溶解度等特性纯化蛋白。
1 凝胶过滤层析凝胶过滤层析是一种高效的蛋白分离纯化方法，根据分子大小的差异分离蛋白质混合物。
在蛋白溶液通过含有填充颗粒的凝胶过滤层析柱时，由于不同蛋白的分子大小不同，扩散进入特定大小孔径颗粒的能力也因此各不相同，大分子蛋白率先被洗脱出来，分子量越小，洗脱越晚，从而达到蛋白分离和纯化的目的。
一般来说，越细、越长的凝胶过滤层析柱的纯化效果越好。
第四章 蛋白质的稳定性和稳定化
蛋白质的稳定性: 蛋白质抵抗各种 因素的影响,保持其生物活力的能 力. 蛋白质的特定功能是由其特定的 空间结构决定的,要保持其生物活 理解蛋白质 力,必须保持其空间结构,稳定蛋白 稳定性的概念? 质空间结构的因素是什么?
维持蛋白结构稳定的主要因素:
① 金属离子、底物、辅因子和其他相对低分 子质量配体的结合作用 ② 蛋白质-蛋白质和蛋白质-脂的作用 ③ 盐桥和氢键 ④ 二硫键 ⑤ 对氧化修饰敏感的氨基酸含量较低 ⑥ 氨基酸残基的坚实装配 ⑦ 疏水相互作用(思考题)
熔化温度Tm;蛋白质伸展一半时的
变性剂浓度 蛋白质自由能; 最大稳定性温度(Ts); 在特定温度下蛋白质功能活性维持 时间.
思考
熔化温度Tm和蛋白质伸展50%
时的变性剂浓度是预测酶稳定性 的最有用参数;
Tm: 蛋白质受热伸展过渡中点时的
温度; 变性剂浓度: 蛋白质加变性剂伸展 过程中使蛋白质伸展一半时所需要 的变性剂浓度;
思考
三． 极端pH: 活性中心氨基酸必需基团电离. pH的变化可以引起蛋白质的伸展,这个过程原 则上是可逆的,但这些变化常能导致不可逆的 聚合或酶的自溶,引起不可逆失活. 四． 氧化作用: 各种氧化剂能氧化带芳香族侧链的氨基酸以及 蛋氨酸、半胱氨酸和胱氨酸残基。分子氧、 H2O2和氧自由基是常见的蛋白质氧化剂。 五． 表面活性剂和去污剂 表面活性剂在很低浓度下能使蛋白质发生强烈 的相互作用,导致蛋白质不可逆变性.其中阴离 子去污剂的作用比阳离子和非离子去污剂强烈.
疏水性标尺
疏水性氨基酸越多越稳定?
疏水性与蛋白质稳定性的关系小结
疏水性大小与稳定性没有必然的联系 非极性氨基酸在蛋白质球体内的规则的排 列是稳定性的原因之一 增加疏水作用是稳定蛋白质的实用方法:降 低蛋白质表面的疏水性,增加蛋白质内部的 疏水性
蛋白稳定性2
化学因素
• 与水混溶的有机溶剂： 一元醇和其他溶剂，因疏水作用常引起稳定性降低。 二元醇，取决于其疏水性大小。 三碳或多碳的多元醇，有增加天然态稳定性的作用。 • 表面活性剂：低浓度下，因与蛋白质有强的相互作 用，引起变性。离子型比非离子型变性作用更强。 • 螯合剂：像EDTA, 1.10-二氮杂啡能结合配基或金属 离子，使含有金属离子的蛋白质失活。
失活机理
• 天然态在一定程度上仅是热力学稳定，低 自由能使其倾向于不稳定，环境的微小变 化也会引起负自由能变化。自由能仅决定 平衡时的天然态和可逆变性态的比例，不 能说明达到平衡的速度。 • 达到平衡时的速度是由变性和复性的自由 活化能决定。变性活化能不同于天然态和 活化态的自由能；复性活化能不同于活化 态和变性态的自由能。
1.加入必需金属离子，底物，抑制剂，辅酶等 添加剂 2.改变酶表面附近水活性（蛋白质的优先水化） 添加剂 3.引入二硫键加固活性构型 蛋白质工程 4.减少疏水表面基团 蛋白质工程 5.增加内部疏水作用 蛋白质工程 6.氨基酸残基紧密装配 蛋白质工程
稳定化策略和方法
策 略 方 法
• 抑制次级‘不可逆’反应
1.降低对氧化作用敏感的氨基酸 2.低温和适中的pH 3.抑制稳定化策略和方法
• 稳定酶的筛选：不同生物来源的同功酶具有不同 的稳定性，通过筛选可得稳定性好的酶。高温菌， 极端、特殊环境微生物产生的蛋白质产品。 • 添加剂 1.天然态的稳定化：根据非共价相互作用：底物， 产物，抑制剂，别构效应物其他低分子量配基。 金属离子和离子型物质（低浓度）；蛋白质，聚 合物 。
蛋白质折叠与稳定化技术及其应用
蛋白质折叠与稳定化技术及其应用医药领域。
蛋白质是人体中最为重要的分子之一，其作用非常广泛。
它们可以是酶、激素、抗体、结构蛋白等，参与到人体的代谢、生长、发育、免疫等多个生命过程中。
因此，蛋白质折叠和稳定化技术是当前很受关注的研究方向之一，因为它可以在药学领域中发挥重要的作用。
一、蛋白质折叠技术蛋白质在人体内进行生存和功能的实现，通常需要在特定的条件下折叠成特定的结构。
这种特定的结构通常是蛋白质功能的保证，但是一旦蛋白质的折叠不正确或有误，就会引发一系列问题，包括导致蛋白质失去功能、细胞内部积聚形成蛋白纤维和斑块等等。
因此，研究和控制蛋白质折叠是非常重要的一个研究方向。
在蛋白质折叠和功能方面，进展很方面。
例如，科学家可以通过深入了解蛋白质结构和分析折叠通路，以及发展晶体学等技术，精确地尝试预测和控制蛋白质折叠。
但是，这种方法仍然面临着许多挑战，包括尚未解决的折叠难题等。
二、蛋白质稳定化技术除了蛋白质折叠技术外，蛋白质稳定化技术也是当前研究最为热门的方向之一。
原因在于，蛋白质稳定性的提高可以增加蛋白质的药物性能，包括增强蛋白质的活性、延长药物的半衰期和稳定药物的制剂等方面。
蛋白质稳定化技术包括多个方面。
例如，通过改变蛋白质表面的氨基酸组成，可以增强蛋白质结构的稳定性。
此外，通过添加辅助蛋白和小分子化合物，也可以提高蛋白质的稳定性。
例如，针对某些天然蛋白质结构不稳定的问题，可以使用多发酵、变异技术等方法来改变蛋白质的序列和结构，从而提高其稳定性。
三、应用于医药领域中的蛋白质折叠与稳定化技术蛋白质折叠与稳定化技术可应用于许多不同的医药领域。
例如，对于肿瘤特异性调控和分析等方面的研究，蛋白质折叠和稳定化技术可以增强肿瘤细胞识别并抑制其生长。
此外，蛋白质折叠和稳定化技术对于新药发现、递送和成熟以及药物治疗中药物代谢、毒性和免疫学等方面也具有重要作用。
总而言之，通过蛋白质折叠和稳定化技术，科学家可以更好地掌握蛋白质的各方面特性，从而在药学领域中发挥重要的作用。
甘油对蛋白的稳定作用
甘油对蛋白的稳定作用一、引言蛋白质是生物体中重要的基础组成部分，其结构和功能对生物体的正常运作具有重要影响。
然而，蛋白质在一定的环境条件下很容易发生失活或变性，从而失去其正常的结构和功能。
因此，研究蛋白质的稳定性及其保护方法是非常重要的。
甘油作为一种常用的保护剂，被广泛应用于蛋白质的稳定化研究中。
本文将探讨甘油对蛋白质的稳定作用及其机制。
二、甘油的物理性质及应用甘油，化学名称为丙三醇，是一种无色、无味、粘稠的液体。
其具有良好的溶解性和湿润性，能够与水形成氢键和范德华力，具有较强的保湿性能。
甘油广泛应用于医药、食品、化妆品等领域，具有保湿、润滑、稳定等作用。
三、甘油对蛋白质的稳定作用1. 保湿作用甘油具有较强的保湿性能，可以吸附周围环境中的水分，形成保湿层，防止蛋白质失去水分而发生变性。
同时，甘油还能够与蛋白质表面形成氢键和范德华力，增加蛋白质的稳定性。
2. 防止蛋白质的凝聚和聚集甘油能够减少蛋白质分子间的相互作用力，阻止蛋白质的凝聚和聚集，从而保持蛋白质的原始结构和功能。
研究表明，加入适量的甘油可以显著降低蛋白质的聚集速率和凝聚程度。
3. 调节蛋白质的溶解度甘油可以增加蛋白质在溶液中的溶解度，使蛋白质更容易与水相互作用，提高蛋白质的溶解性，防止蛋白质在溶液中的沉淀和析出。
四、甘油对蛋白质的稳定机制1. 氢键和范德华力的作用甘油能够与蛋白质分子表面的氨基酸残基形成氢键和范德华力，增加蛋白质的稳定性。
氢键和范德华力是蛋白质分子内部和外部稳定性的重要因素，能够维持蛋白质的原始结构和功能。
2. 保水性能甘油具有良好的保湿性能，可以吸附周围环境中的水分，形成保湿层，防止蛋白质失去水分而发生变性。
保水性能是甘油对蛋白质稳定作用的重要机制之一。
3. 减少蛋白质的凝聚和聚集甘油能够减少蛋白质分子间的相互作用力，阻止蛋白质的凝聚和聚集。
蛋白质的凝聚和聚集是蛋白质失活和变性的重要原因之一，通过减少蛋白质分子之间的相互作用力，甘油能够提高蛋白质的稳定性。
第四章蛋白质的稳定性
精选ppt
10
1、必须发生单分子构象变化，导致蛋白质可逆变性。这 个过程使包埋的疏水性氨基酸残基暴露于水溶剂。
2、这种三级结构改变了的蛋白质分子彼此缔合，以最大 限度地减少疏水氨基酸残基的不利的裸露。
精选ppt
1
2、蛋白质-蛋白质和蛋白质-脂的作用
在体内，蛋白质常与脂类或多糖相互作用，形成复合物， 从而显著增加蛋白质稳定性。
当蛋白质形成复合物时，脂分子或蛋白质分子稳 定到疏水簇上，因而防止疏水簇与溶剂的接触， 屏蔽了蛋白质表面的疏水区域，从而显著增加蛋 白质稳定性
精选ppt
2
3、盐桥和氢键
蛋白质中盐桥的数目较少，但对蛋白质稳定性贡 献很显著。嗜热脱氢酶亚基间区域有盐桥协作系 统，这是嗜温脱氢酶没有的。因此嗜热酶的催化 活力的变性温度和最适温度都比嗜温酶高出约 20℃。
图4-6 碱催化的β-消除反应破坏二硫键，产生新的分子内交联键（赖氨丙氨 酸）。
精选ppt
12
肽键水解也容易在强酸条件下或中等pH和高温相结合的条 件下发生。
在极端条件下（6 mol/L HCI，24h, 110℃）蛋白质可完全 水解成氨基酸。
在强酸、中性和碱性pH下容易发生天冬酰胺和谷氨酰胺的 脱氨作用，结果在蛋白质的疏水性内部引进入负电荷，导 致酶失活。
第四章 蛋白质的稳定性和稳定化
第一节 蛋白质的稳定性
一、蛋白质的稳定性指的是蛋白质抵抗各种因素的影 响，保持其生物活力的能力。
二、蛋白质稳定性的分子原因
1、金属离子、底物、辅因子和其它低分子量配体的结 合作用。
蛋白质翻译后修饰对细胞功能的影响
蛋白质翻译后修饰对细胞功能的影响蛋白质是生命的重要组成部分，它们参与了生命的各种过程。
但是，蛋白质本身并不是完整的分子，它们需要被修饰以发挥其功能。
蛋白质翻译后修饰对细胞功能的影响是一个重要的课题，本文将探讨这个话题。
什么是蛋白质翻译后修饰？蛋白质翻译后修饰指的是翻译后对蛋白质分子的化学修饰。
这些化学修饰不会改变蛋白质的序列，但是会影响蛋白质的结构、功能和相互作用。
蛋白质的翻译过程发生在核糖体中，当蛋白质链合成完成后，它并不是终点。
实际上，大多数蛋白质需要进一步修饰，才能发挥其功能。
常见的蛋白质翻译后修饰包括磷酸化、糖基化、乙酰化、甲基化、泛素化等。
这些修饰通常发生在蛋白质的特定位置上，并且需要特定的酶系统参与。
磷酸化是最常见的蛋白质翻译后修饰之一，它通过加入磷酸基团（PO4）来改变蛋白质的结构和功能。
磷酸化可以引起蛋白质的构象变化，使其与其他蛋白质、配体或DNA结合；磷酸化还可以影响蛋白质的酶活性、稳定性和降解。
糖基化是将糖基团（如葡萄糖、甘露糖等）连接到蛋白质分子上的一种修饰。
糖基化可以影响蛋白质的结构、稳定性和相互作用，同时还可以影响细胞信号传导和细胞间相互作用。
乙酰化是将乙酰基团（CH3CO）连接到蛋白质分子上的一种修饰。
乙酰化可以增强蛋白质的稳定性，并且影响蛋白质与其他蛋白质、基因组DNA的相互作用。
甲基化是将甲基基团（CH3）连接到蛋白质分子上的一种修饰。
甲基化可以调控基因表达、蛋白质相互作用和信号传导，从而影响细胞分化、增殖和分裂等生命过程。
泛素化是将泛素蛋白（一种小蛋白质）连接到蛋白质分子上的一种修饰。
泛素化可以导致蛋白质的降解、细胞凋亡和信号传导的调节。
蛋白质翻译后修饰对细胞功能的影响蛋白质翻译后修饰对细胞功能有着重要的影响。
这些修饰可以改变蛋白质的结构、稳定性、活性和相互作用，从而影响细胞的生命过程。
下面，本文将就几个方面进行探讨。
细胞信号传导细胞内外信号的传导是生命过程中的核心环节，而蛋白质翻译后修饰在其中发挥着重要的作用。
蛋白聚合物的结构与功能
蛋白聚合物的结构与功能蛋白质是构成生命体的重要基础物质之一，其中蛋白聚合物是一类非常特殊的蛋白质结构，它们在细胞内发挥着重要的作用。
本文将介绍蛋白聚合物的结构与功能。
一、蛋白聚合物的定义蛋白质是由氨基酸组成的大分子化合物，它们通过肽键连接在一起。
在细胞内，许多蛋白质都形成了复杂的三维结构，这种结构由一系列非共价键（如氢键、疏水相互作用、离子键等）互相作用来稳定。
但有一些蛋白质不是由单个的分子构成的，而是由多个蛋白分子以某种方式组合而成的，这就是蛋白聚合物。
二、蛋白聚合物的分类蛋白聚合物的分类方式很多，这里我们按照它们的组成方式进行分类。
1.同源聚合物：由相同的蛋白单元组成，这种结构在细胞内非常稳定。
2.异源聚合物：由不同的蛋白单元组成，形态多样。
3.半聚合物：由单个蛋白分子以不同方式组合而成，通常会进行水解。
三、蛋白聚合物的结构蛋白聚合物需要以某种方式固定住蛋白质分子，而不是随机地飘动。
一般来说，这种结构就是由肽键以及非共价键组成的。
共价键连接蛋白质的不同部分，非共价键则是蛋白质的稳定化作用。
这些非共价键可以将蛋白质稳定在某种特定的构象中，形成一定的空间空间构型，使蛋白质在细胞内得以正确地发挥生物学功能。
四、蛋白聚合物的功能1.代谢作用：蛋白聚合物主要负责酶的催化活性，例如酶复合体。
2.结构功能：蛋白聚合物能够形成大的结构体的十分稳定的结构，成为一些大分子的组成部分。
3.传递信号：蛋白聚合物能够参与到信号传递的过程中，例如受体和配体的非共价键相互作用。
4.抗体作用：抗体分子也是一种蛋白聚合物，可以识别并结合到非自己分子体内的部分，完成对病原体等的防御作用。
结论综上所述，蛋白聚合物具有对生命活动中一系列重要功能的重要性。
研究蛋白聚合物的结构和功能对理解生命体总体的机理是非常重要的。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
A
B
C
A.用多功能试剂交联；B.共价或非共价连于载体上 C.包埋到载体的紧密孔中
二、非共价修饰
反相胶束 添加剂
蛋白质间非共价相连，形成的多聚体或者
聚合体的活力和稳定性常比单体高
反胶束是由两性化合物在占优势的有机相中形 成的。它不仅可以保护酶，还能提高酶活力， 改变酶的专一性。
反相胶束示意图
固定化可通过下列效应影响酶的稳定性：
空间障碍：由于空间障碍可以防止蛋白水解
酶的作用，阻挡酶与化学失活剂的接触，同时
阻碍氧向酶的扩散可以保护对氧不稳定的酶
扩散机制: 使酶发生交联或包埋在载体紧
密的孔中可以使酶的构象更加坚牢，从而阻止
酶构象从折叠态向伸展态过渡。
一 酶固定到载体上后可产生空间障碍，结果其他大
质信息进行基因和蛋白质序列的改造， 通过定
点突变使得所表达的蛋白质产生相应的特征改
变。
组合设计（combinational design）
和数据驱动设计（data-driven design）
是另外两种最新的可以提高蛋白质稳定
性的蛋白质工程技术。
组合设计:
是通过一种策略使得在基因水平上产生 差异化，同时，通常需要大量的高通量筛选 来鉴别设计是否获得成功。组合设计方法的 目标在于通过在蛋白质随机位点引入随机突
进化目的的一种技术。
随着突变方法、突变体高通量筛选技术、基因结
构与功能研究的突破，特别是PCR 技术的进一步
成熟，DNA 改组技术(DNA shuffling)更加成熟，
使得DNA 改组成为蛋白质体外分子进化的主流技
术。
DNA 改组技术具有许多重要优点， 例如不需要
事先了解结构信息，也不需要了解蛋白质的功能
分子难于与酶作用，因此，固定到载体上的酶往
往能抵抗蛋白水解酶的降解作用，这也是防止蛋
白水解酶自溶的原因
二 底物、配体和氢离子浓度在载体附近和整体溶液 之间的分布不均一，造成载体周围的局部浓度与 整体浓度不同，也就是酶的微环境发生了变化
三 当酶包埋在多孔颗粒内，底物必须先扩散到颗
粒表面（外部质量传递），然后进入颗粒内部
六、变性剂：
1.脲和盐酸胍:机制尚不明确,可能是消除了维持三级结构的 疏水作用力或直接与蛋白质分子作用.
2.高浓度盐：高浓度盐既有稳定作用也有变性作用，这要
看盐的性质和浓度。
3.螯合：常常不可逆地失活需要金属辅因子的酶，但可稳
定不需要金属辅因子的酶； 4.有机溶剂：改变溶液的介电常数;增加疏水核的溶解度,降 低带电表面的溶解度;夺去酶分子表面的必需水而使酶 失活.
第四章 蛋白质的稳定性和稳定化
第一节: 蛋白质的稳定性 一. 蛋白质稳定性的分子原因
蛋白质的稳定性: 蛋白质抵抗各种 因素的影响,保持其生物活力的能 力。
维持蛋白质结构稳定的主要因素:
1.金属离子、底物、辅因子和其他相对 低分子质量配体的结合作用
金属离子由于结合到多肽链的不稳定 部分（特别是弯曲处），因而可以显著增 加蛋白质的稳定性。当酶与底物、辅因子 和其他低相对分子质量配体相互作用时， 也会看到蛋白质稳定性的增加。
（内部质量传递），酶才能与其作用，这些扩散
限制可明显使固定化酶“稳定化” 外扩散：底物必须从流动的水溶液传递到固定化
酶颗粒外表面 内扩散:底物进一步传递到固定化酶颗粒内部
四 将酶多点共价连接到载体表面，或用双功能 试剂交联酶，或将酶包埋在载体紧密的孔中， 可以使酶构象更加坚牢，从而阻止酶构象从折 叠态向伸展态过渡。
原因：
修饰有时会获得不同于天然蛋白质构象的
更稳定的构象； 修饰关键功能基团也会达到稳定化； 由化学修饰引入到蛋白质的新的功能基团 有可能形成附加氢键或盐键； 用非极性试剂修饰可加强蛋白质中疏水相 互作用； 蛋白质表面基团的亲水性； 交联酶晶体
酶的失活和再活化
对于可逆性酶，可以采取相应措施实现其 再活化 例如：用过量的碘离子使脲酶重新天然化， 该酶失活是由于重金属阳离子使巯基中毒 引起，再活化的机理是碘离子与结合的金 属离子形成碘结合物 对于不可逆变性酶，可用下述方法进行再活 化：用变性剂使固定化酶伸展成无规则盘 绕状态
pH的变化可以引起蛋白质的伸展,这个 过程原则上是可逆的,但这些变化常能导致 不可逆的聚合或酶的自溶,引起不可逆失活.
四、氧化作用:
各种氧化剂能氧化带芳香族侧链的氨基 酸以及蛋氨酸、半胱氨酸和胱氨酸残基，从 而使蛋白质变性。分子氧、H2O2和氧自由基 是常见的蛋白质氧化剂。
五、表面活性剂和去污剂
表面活性剂在很低浓度下能使蛋白质发 生强烈的相互作用,导致蛋白质不可逆变性. 其中阴离子去污剂的作用比阳离子和非离子 去污剂强烈.
七、重金属离子和巯基试剂:
与蛋白质的巯基、二硫键以及色氨酸、组 氨酸残基反应。
八、热:
热失活是工业上最经常遇到的酶失活的 原因.热失活分二步过程:伸展---不可逆失活.
九、机械力：
振动、剪切、超声波、压力都可能引起 蛋白质的变性。这种变性理论上是可逆的，但 也可能伴随着其他反应而不可逆地失活.
十、冷冻和脱水：
优良、更加符合人类社会需要的新型蛋白质。
优点：提供了有目的改变酶性能的可能性，
不仅改变酶的结构，也可以改变其催化活力及专
一性和稳定性。
改变蛋白质稳定性的蛋白质工程方法
①DNA改组技术 ②定点突变技术
③组合设计
④理性设计
DNA改组技术的定义
DNA 改组( DNA shuffling ), 也称分子育种
关系，其缺点是需要配合快速、可靠的鉴别突变 体的方法。
定点突变技术(Site-directed mutagenesis)是在
已知蛋白质中取代、插入或删除特定的氨基酸
残基，从而改变蛋白质的结构和对应功能，又
被称为理性设计(rational design)。它可以作为
DNA 改组技术的有益补充， 是基于基因和蛋白
最新进展
可将变性的蛋白质分子孤立在反胶束
内，蛋白质在反相胶束内可重新折叠成天
然状态，而且没有与其他变性分子接触和
聚合，此胶束由表面活性剂稳定的水滴构
成，并悬浮于异丁烷中。
第四节 各种酶稳定化方法的比较
比较各种不同的酶稳定化方法是困难的，因 此制定的了一下一般的标准：
①稳定性至少要增加1~3个数量级 ②应对各种酶失活因素(物理，化学及生物学因素) ③稳定化不应减少酶活力或改变酶的专一性 ④稳定化方法适合各类蛋白质 ⑤稳定化方法应在体内，体外都适用 ⑥从经济角度看，方法应具有方法的潜力
蛋白质的聚合作用和沉淀的区别：
1.蛋白质的聚合作用可能是可逆的,并不一 定是不可逆的. 2.沉淀作用意味着蛋白质并未发生显著的 构象变化即从溶液中析出。因此，沉淀很 容易再溶于水溶液中，并恢复其全部天然 特性。
三、极端pH:
极端pH下引起蛋白质变性的重要因素 是：一旦远离了蛋白质的等电点的，那么 蛋白质分子内相同电荷间的静电斥力会导 致蛋白质伸展。从而使埋藏在蛋白质内部 非电离残基发生电离，导致失活。
6.氨基酸残基的坚实装配
溶液中的蛋白质似乎装配紧密，其紧密程 度类似于低相对分子质量化合物的晶体状 态，尽管如此，蛋白质结构中仍有空隙。
空隙中充满水分子，会导致蛋白质不稳定， 因此除去孔隙中的水分子，蛋白质结构变 得更坚实，稳定性也增加。
7.疏水相互作用
疏水性大小与稳定性没有必然的联系 非极性氨基酸在蛋白质球体内的规则的排 列是稳定性的原因之一 增加疏水作用是稳定蛋白质的实用方法:
氢键：是通过氢原子参与成键的特殊形式 的化学键。 当一个电负性较强的原子与氢键合后， 继续与另一个电负性较强的原子键合： 氢键能维持二级结构(如α-螺旋，β-片 层，β-转角等）。但是氢键对蛋白质稳定 性的重要性不应估计过高。
4.二硫键
二硫键：即S－S 键， 是2 个巯基被氧化而形 成的-S-S-形式的硫原子间的共价键。 链内二硫键和链间二硫键：
2蛋白质-蛋白质和蛋白质-脂的作用
由于蛋白质分子表面上既有疏水簇，也 有极性和带电基团。从热力学上看，疏水 簇与水的接触对蛋白质稳定性是不利的。
所以当蛋白质形成复合物时，脂分子或 蛋白质分子稳定到疏水簇上，因而防止疏 水簇与溶剂的接触，屏蔽了蛋白质表面的 疏水区域。
3.盐桥和氢键
盐桥：当一个氨基酸的氨基和与它空间相 邻的另一个氨基酸的羧基互相靠近时，形 成盐桥。 -COO.......H3N蛋白质中盐桥的数目较少，但对蛋白 质的稳定性作用很显著。
添加剂
专一性底物及配体; 非专一性中性盐和多羟基物质;
与失活剂竞争的物质或除掉破坏化学催化
剂的物质
添加剂不仅可以提高酶的热稳定性，还
可提高酶的抗蛋白水解，抗化学试剂，抗
PH变化，抗变性剂，抗稀释作用 例如：甘油，糖和聚乙二醇是多羟基化合 物，能形成很多氢键，并助于形成“溶剂 层”，增加表面张力和溶液黏度，这类添 加剂通过对蛋白质的有效脱水，降低蛋白 质水解作用而起稳定酶的作用
冷冻和脱水时，溶质被浓缩，引起酶微 环境中pH和离子强度的剧烈改变，减弱疏水 相互作用,并可能引起二硫交换和巯基的氧化。
十一、辐射作用:
辐射可产生自由基(.OH,H2O2,O2-.等)直
接或间接地作用于蛋白质分子.
第三节 蛋白质的稳定化
酶的稳定化方法
固定化 非共价修饰
化学修饰
④蛋白质工程
一 固定化
由于交联即蛋白质中形成二硫键，伸 展蛋白质的熵急剧降低，从而增加蛋白质 的稳定性。
与此类似，用双功能试剂实现分子内交 联，也能使蛋白质构象稳定化。
日常生活中的烫发和发型保持， 主要原理是操 纵毛发角蛋白二硫键的还原和再氧化， 即二硫键的 断开和重新键合。