HLA-B27检测及其临床应用详解

优点：全自动仪器检测，减少了人为因素的影响，重复性高，结果判
断准确，为目前较为理想的方法，国外已将FCM法检测HLA-B27作为AS 诊断的常规检测方法。
缺点：仪器昂贵，目前只在较大医院应用，且荧光易淬灭。
疾病 强直性脊椎炎 HLA-B27阳性率(%) >90
银屑病性关节炎
Reiter’s综合症 反应性关节炎 沙门氏菌感染 志贺氏菌感染
55
37 29.7 20.7
耶尔森氏菌感染
淋病双球菌感染 正常人群
17.6
14.0 2～7
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血清阴性脊柱关节病（脊柱关节炎）
这是一组慢性炎症性风湿性疾病，具有特定的病理生理、临床、放射
数量或结构改变，影响MLCT的结果，易出现假阴性。
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ELISA
原理：应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中HLA-B27水平。用
纯化的B27抗体包被微孔板，依次加入HLA-B27抗原（待检标本）、生
物素化的抗HLA-B27抗体、HRP标记的亲和素，形成双抗体夹心反应， 经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成
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HLA-B27相关疾病：强直性脊柱炎
Ankylosing Spondylitis，AS
患病率：0.3%，20-30岁，男女比例 10:1，有家族倾向； 主要侵犯：中轴关节（骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织）
可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直
B27检测可作为有相关症状或高危人群AS早期的筛选方法！ AS不是RA的一种特殊类型！
强直性脊柱炎 地区分布 性别分布 种族差异大 男＞女 类风湿性关节炎 世界性 女＞男
年龄
家族史 类风湿因子
20-30
明显 （－）
30-50
不明显 （）
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HLA-B27与AS
HLA-B27阴性的AS
约5-10%的AS患者为HLA-B27阴性 AS患者的HLA-B27阳性率达90-95% 我国汉族人群HLA-B27阳性率2-7%（3千万-1亿），AS患病 率为0.3%（＞4百万），大部分HLA-B27阳性者并不发生AS。
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HLA-B27与AS
健康人群HLA-B27阳性率及AS患病率各地区、种族有显著的差异 HLA—B27与强直性脊柱炎的发病有很强的相关性
两种错误认识：HLA-B27阳性≠AS！
HLA-B27阳性不会转阴！ HLA-B27阳性率 中国人 欧洲白种人 南非黑人 美国黑人 印地安人 2-7% 4～13％ 1％ 2～4％ 9～50％ 6～12％ AS患病率 0.3% 1％ 很低 AS患者B27阳性率 90～95% 80～100% 22% 57% 80～100%
HLA-B27检测及其临床应用
徐美胜 2016年11月24日
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HLA-B27及其临床应用
HLA-B27疾病相关
血清阴性脊柱关节病类型及特点 强直性脊柱炎特点及其与B27关联机制
HLA-B27 检测方法
MLCT、ELISA、IMS-ELISA、FCM、PCR-SSP
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HLA-B27相关疾病
细胞杀伤作用，通过染色法观察，死细胞的细胞膜通透性改变，染料 能够进入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据死细胞占全
部细胞的百分比，可以判断受试者淋巴细胞表面是否存在HLA-B27抗
原及其与抗体的反应强度。
优点：不需特殊仪器设备，易于操作，一般的实验室都可开展。
缺点：标本存放不能超过8小时；感染可以使细胞膜表面的B27分子的
与革兰氏阴性杆菌有一定相关性：
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血清阴性脊柱关节病共同特点
临床上有很多共同或重叠之处：
眼炎，尿道炎，前列腺炎， 口腔、肠道和生殖器溃疡 结节性红斑，银屑病样皮疹 坏死性脓皮病，血栓性静脉炎
基本病理变化以肌腱端周围和韧带附着于骨的部位为主(附着端炎)而
非滑膜，也可发生在眼、主动脉瓣、肺实质和皮肤，而不同于以滑膜 病变为主的类风湿性关节炎，而且无类风湿皮下结节。
学和遗传特征，炎性腰背痛伴或不伴外周关节炎，加之一定特征的关
节外表现是这类疾病特有的症状和体征。这一类疾病包括：强直性脊 柱炎(ankylosing spondylitis，AS)，反应性关节炎(reactive arthritis，ReA)，
银屑病关节炎(psoriatic arthritis，PsA)，炎症性肠病性关节炎(arthropathy
蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的
HLA-B27呈正相关。
其结果与MLCT法符合率为99％，且不受感染因素的影响，重复性好。
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磁珠酶联免疫分析（IMS-ELISA）
磁珠分离与ELISA结合
B27单抗标记磁珠
HRP标记CD45单抗 通过磁场分离游离相
优点：
反应时间短（1小时完成） 对标本新鲜度要求不高 2～8℃静置4 d之内可用
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HLA-B27检测方法及评价
抗原水平
微量细胞毒法 ELISA IMS-ELISA 流式细胞术法
基因水平
PCR-SSP
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微量细胞毒法（microlymphocytotoxicHale Waihona Puke Baidutest，MLCT）
原理：如果受试者淋巴细胞表面表达有相应的HLA-B27抗原，就可以
与B27抗体结合，形成Ag-Ab复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及
杨雅琼等．现代检验医学杂志，2002,17(2):60-62
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流式细胞术法
利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体，与细胞表面的B27抗原结合，使
结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞
仪测得的通道值来反映，以其值的高低判断HLA-B27抗原表达百分比 ，从而判断HLA-B27是否阳性。
of inflammatory bowel disease，IBD)，未分化脊柱关节炎和幼年慢性关节 炎。几种脊柱关节炎病情逐渐进展，都可能发展成典型的强直性脊柱
炎
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血清阴性脊柱关节病共同特点

RF（一） 家族聚集现象
与HLA-B27不同程度相关
皆可影响脊柱，都有不同程度的骶髂关节炎，也可影响外周关节 ，下肢关节多于上肢关节，且呈不对称性。 强直性脊柱炎与肠道肺炎克雷白杆菌相关 Reiter综合征与沙眼衣原体、福氏痢疾杆菌相关 反应性关节炎与沙门杆菌、痢疾杆菌、耶尔森菌和HP相关