HLA-B27检测及其临床应用详解
HLA-B27检测操作程序
一、目的：保证流式细胞仪检测外周血淋巴细胞上HLA-B27表达量检验的工作质量，旨在保证HLA-B27检测的正确操作程序和控制检测结果的精确度。
二、修改程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。
三、适用范围：外周血中T淋巴细胞HLA-B27表达量检测。
四、溯源：Anti-HLA-B27 Kit(美国BD Biosciences公司；CAT:340183)。
五、实验原理：HLA-B27属于1型MHC基因。
基本上表达在机体所有有核细胞上，特别是淋巴细胞表面有丰富的含量。
使用荧光定量标准微球，校正HLA-B27实验条件后，测定样本中T淋巴细胞HLA-B27表达水平。
若HLA-B27表达水平大于标准微球设定MARK，则为阳性结果；若HLA-B27表达水平低于标准微球设定MARK，则为阴性结果。
六、主要试剂：Anti-HLA-B27 Kit(美国BD Biosciences公司；CAT:340183)，其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE2、HLA-B27 Calibration beads3、FACS Lysing Solution七、实验操作：抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。
1、标本采集：使用EDTA-K22、染色和固定细胞：（1）标本管编号A，取一只流式专用管A1。
（2） A1管加入Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE 30ul。
（3） A1管中再加入全血50Ul，混均。
（4）置室温，避光孵育15min。
（5）加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。
（6） 300g离心5min，弃上清液。
（7） PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。
（8） 1%多聚甲醛0.5mL。
3、上机检测；分析结果；打印实验报告。
八、参考值：HLA-B27:阴性九、临床意义：HLA-B27抗原表达与强直性脊椎炎发病具有高度的疾病相关性。
人白细胞抗原B27检测分析
论著·临床辅助检查CHINESE COMMUNITY DOCTORS中国社区医师2020年第36卷第10期人类白细胞抗原(HLA)是人类主要组织相容性复合体(MHC)的表达产物，在整个人体免疫系统中主要负责细胞之间的相互识别和诱导免疫反应，能调节人体的免疫应答功能。
人白细胞抗原B27(HLA-B27)属于1型组织相容性复合体，基本上表达在人类机体的所有有核细胞上，尤其是在淋巴细胞表面含量丰富。
HLA-B27属于HLA-B 的1类抗原，存在于所有有核细胞表面。
本文就HLA-B27检测结果进行探讨。
资料与方法收治进行HLA-B27检测的患者759例，男373例，女386例；年龄17～75岁。
标本采集：使用EDTA 抗凝剂的静脉血采血管，静脉血室温20～25℃静置保存，勿剧烈震荡。
试剂与仪器：①试剂：由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供。
②检测原理：参照试剂说明书。
③仪器：迈瑞BriCyte E6流式细胞仪，离心机。
统计学方法：采用SPSS 10.0软件包进行数据处理。
结果759例患者中阳性198例(26.09%)。
198例阳性患者中，男122例(61.61%)，女76例(38.38%)；年龄10～20岁31例(15.66%)，20～60岁156例(78.79%)，＞60岁11例(5.56%)。
20～60岁156例患者中男96例(61.54%)，女60例(38.46%)。
讨论HLA-B27抗原的表达与强直性脊柱炎(AS)有一定的相关性，特别是检测外周血淋巴细胞中的HLA-B27抗原表达有利于AS 等疾病的辅助诊断。
在AS 的诊断上虽然主要依靠临床表现和影像学检查，但是HLA-B27的实验室检测更有利于AS 的早期诊断。
人类白细胞相关抗原的检测在一些疾病的诊断和人体器官移植中具有重要的临床意义，在AS 患者亲属中发病率比一般人高30倍左右[1]。
在实验室检测中要做好HLA-B27抗原检测的质量控制，检测前必须保证试剂的有效性，做好从标本采集前患者的准备，采集标本后的保存及运输，检测过程的整个环节质量控制，才能保障HLA-B27抗原检测结果的真实可靠性。
HLA-B27抗原检测在强直性脊柱炎诊断中的意义
Ｄ ＯＩ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｉ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ ． ２ ０ １ ５ ． ０ ３ ． ０ ３ ６
Ｈ Ｌ Ａ － Ｂ ２ ７ 抗 原 的检 测 对 Ａ Ｓ患者 的 早 期诊 断和 鉴 别诊 断具 有 重 要 意 义 。
（ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ 厂Ｃｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ， ｔ ｈ ｅ Ｆｉ ｒ ｓ ｔ Ｐｅ ｏ ｐ ｌ ｅ ｓ Ｈｏ ｓ ｐｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ Ｆｏ ｓ ｈ ａ பைடு நூலகம் Ｃｉ ｔ ｙ， Ｆｏ ｓ ｈ ａ ｎ ， Ｇｕ ａ ｎ ｇｄ ｏ ｎ ｇ， ５ ２ ８ ０ ０ ０ ， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ） Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｈ ｕ ｍａ ｎ ｌ ｅ ｕ ｋ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ Ｂ２ ７ （ ＨＬＡ— Ｂ２ ７ ）ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ
国际检验 医学杂 志 ２ ０ １ ５年 ２月第 ３ ６卷第 ３期
Ｉ ｎ ｔ Ｊ Ｌ ａ ｂ Ｍｅ ｄ ， Ｆ ｅ ｂ ｒ ｕ ａ 型
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・
３ ７１ ・
・
论
著 ・
ＨＬＡ— Ｂ ２ ７抗原 检 测 在 强 直性 脊 柱炎 诊 断 中的意 义
林 蔚， 肖 平， 吴祖 常
文 献标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ： １ ６ ７ ３ － ４ １ ３ Ｏ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ３ － ０ ３ ７ １ 一 Ｏ ２
HLAB27检测及其临床应用详解
AS患病率 0.3% 1％ 很低
6～12％
AS患者B27阳性率 90～95% 80～100% 22% 57% 80～100%
8
HLA-B27检测方法及评价
➢ 抗原水平
微量细胞毒法 ELISA IMS-ELISA 流式细胞术法
➢ 基因水平
PCR-SSP
9
微量细胞毒法（microlymphocytotoxic test，MLCT）
4
血清阴性脊柱关节病共同特点
➢ 临床上有很多共同或重叠之处：
眼炎，尿道炎，前列腺炎， 口腔、肠道和生殖器溃疡 结节性红斑，银屑病样皮疹 坏死性脓皮病，血栓性静脉炎
➢ 基本病理变化以肌腱端周围和韧带附着于骨的部位为主(附着端炎)而
非滑膜，也可发生在眼、主动脉瓣、肺实质和皮肤，而不同于以滑膜 病变为主的类风湿性关节炎，而且无类风湿皮下结节。
5
HLA-B27相关疾病：强直性脊柱炎
Ankylosing Spondylitis，AS
➢ 患病率：0.3%，20-30岁，男女比例 10:1，有家族倾向； ➢ 主要侵犯：中轴关节（骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织）
可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直
➢ B27检测可作为有相关症状或高危人群AS早期的筛选方法！ ➢ AS不是RA的一种特殊类型！
12
流式细胞术法
➢ 利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体，与细胞表面的B27抗原结合，使
结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞 仪测得的通道值来反映，以其值的高低判断HLA-B27抗原表达百分比 ，从而判断HLA-B27是否阳性。
➢ 优点：全自动仪器检测，减少了人为因素的影响，重复性高，结果判
流式细胞术检测HLA_B27及其临床意义
stranded conformation polymorphism analysis in the pres ence of poly － ethylene glycol［J］． Clin Chem，1997，43： 30 233． ［5］Ren J，Ueland PM． Teperature and pH effects on single － strand confor － mation polymorphism analys is by capillary electrophoresis ［J］． Hum Mutat，1999，13（ 6） ： 458 － 463． ［6］16． Bernard P，Tang P，Liu S，et al． Dimerization of SOX9 is required for chondrogenesis，but not for sex determination［J］． Hum Mol Genet，2003，12： 1755 － 65． ［7］Foster JW，Dominguez － Steglich MA，Guioli S，et al． Campomelic dysplasia and autosomal sex reversal caused by mutations in an SRY － related gene［J］． Nature，1994，372 ： 525 － 30． ［8］Wagner T，Wirth J，Meyer J，et al． Autosomal sex reversal and cam-
HLA-B27
HLA-B27与流式细胞术一、检测HLA-B27的意义HLA抗原是人类主要组织相容性复合体（Major Histocompatibity Complex，MHC）的表达产物，在免疫系统中主要负责细胞之间的相互识别和诱导免疫反应，调节免疫应答的功能。
根据HLA抗原结构，功能与组织分布的不同，可分为三类：Ⅰ类分子为HLA-A、-B、-C系列抗原，广泛分布于各组织有核细胞表面，包括血小板和网织红细胞，成熟的红细胞一般不含HLA抗原；Ⅱ类分子为HLA-D/DR、-DP、-DQ系列抗原，主要在B细胞和抗原提呈细胞上表达，这两类抗原都与移植有关，其中Ⅱ类抗原更为重要；Ⅲ类分子为补体成分。
近年来研究HLA与疾病相关性的资料表明，某些疾病的发生率与一些特殊型别的HLA检出率有关，这些病大多是发病机理不明并伴有免疫功能异常和有遗传倾向性的疾病，因此，分析HLA抗原表达情况不仅有助于了解发病机理，对于疾病的诊断、预防和预后判断都有重要意义。
HLA-B27基因属于Ⅰ型MHC基因，基本上表达在机体中所有含核的细胞上，尤其是淋巴细胞的表面有丰富的含量。
早在二十多年前，人们就已发现HLA-B27抗原的表达与强直性脊椎炎有着高度相关性，超过90%的强直性脊椎炎患者其HLA-B27抗原表达为阳性，普通人群中仅5-10%的为阳性，而强直性脊椎炎由于其症状与许多疾病相似而难以确诊，因此HLA-B27的检测在病情的诊断中有着重要意义。
在脊椎性关节病这一类的疾病中除了强直性脊椎炎以外，还有许多其它的疾病与HLA-B27抗原的表达有着或多或少的相关性，比如说Reiter，s综和症，HLA-B27阳性率为70-90%；银屑病性关节炎，HLA-B27阳性率为50-60%；葡萄膜炎（眼色素层炎），HLA-B27阳性率为40-50%；溃疡性结肠炎伴有关节病，HLA-B27阳性率为5-10%等等，因此HLA-B27的检测在这些疾病的诊断中是一个非常有价值的指标。
HLA-B27的检测——流式细胞术
HLA-B27的检测——流式细胞术【申请单】请完成申请单所要求项目×××市人民医院检验申请单姓名性别年龄门诊住院号诊断或症状检验标本检验目的送检科室医师送检日期【方法选择】表4-1 HLA-B27检测方法方法ELISA PCR 流式细胞术本次检查选择√【检测方法】单克隆抗体和荧光素的开发使得流式细胞仪在各个领域得到空前的发展，多参数同时测定使得流式细胞术得以快速，灵敏，特异地检测某一特定细胞群中某一特异性抗原的表达。
用流式细胞仪来检测HLA-B27的表达，无须分离淋巴细胞，操作简单，自动化程度高；灵敏度可达100%，特异性达97.4%；结果稳定，样本之间，不同仪器之间，不同实验室之间可重复性高。
【实验步骤】1.样本的收集和准备用K3EDTA或heparin或ACD抗凝的真空采血管收集至少1ml的外周血，若不能及时染色，则最好选用ACD或Heparin，因此两种抗凝剂对保存细胞表面抗原之抗原性，为保证实验结果的可靠性，持久性较佳。
请尽量在采血后24h内进行染色，染色前将抗凝血室温放置，无须冷藏。
固定保存、冷藏保存的样本和发生溶血的样本都不应该使用。
2. 染色和固定①取流式试管，加入30ul试剂Anti-HLA-B27 FITC/CD3 PE到试管中；②用微量移液器小心地将50ul充分混匀的抗凝血加到试管的底部，确保WBC的浓度在3.5×103-9.4×103WBC/ul之间，轻轻混匀，室温避光静置15-20min；③取出试管，每管加入10倍稀释的1×Lysing Solution 2ml，轻轻混匀，避光室温静置10-12min（不要超过12min）。
待管内液体透亮，然后1200转/min，离心5min，弃上清液。
④轻轻混匀，重悬细胞，每管中加入2ml PBS，轻轻混匀，1200转/min，离心5min，弃去上清液。
⑤每管加入0.3ml PBS 混匀，4℃避光1h内上机检测；若不能及时上机，加入0.3ml 1%的多聚甲醛保存液，放4℃冰箱保存，24h内上机检测。
HLA-B27检测SOP
HLA-B27检测操作程序一、目的：保证流式细胞仪检测外周血淋巴细胞上HLA-B27表达量检验的工作量，旨在保证HLA-B27检测的正确操作程序和控制检测结果的精确度。
二、修改程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。
三、适用范围：外周血中T淋巴细胞HLA-B27表达量检测。
四、溯源：Anti-HLA-B27 kit(美国BD Biosciences 公司；CA T:340183)五、试验原理：HLA-B27属于1型MHC基因。
基本上表达在机体所有有核细胞上，特别是淋巴细胞表面有丰富的含量。
使用荧光定量标准微球，校正HLA-B27试验条件后，测定样本中T淋巴细胞HLA-B27表达水平。
若HLA-B27表达水平大于标准微球设定MARK,则为阳性结果；若HLA-B27表达水平低于标准微球设定的MARK，则为阴性结果。
六、主要试剂：Anti-HLA-B27 kit(美国BD Biosciences 公司；CA T:340183)其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE2、HLA-B27 Calibration beads3、FACS Lysing Solution七、试验操作：1、标本采集：使用EDTA-K2抗凝真空管，抽取静脉血2ml。
2、染色和固定细胞：(1)取一只流式专用管，标本管编号A(2)A管加入Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE 10ul(3)再加入全血18ul,混匀。
(4)置室温，避光孵育15min.。
(5)加入FACSLysing溶血液2.0ml,置室温，避光孵育10min。
(6)3000r离心10min，弃上清液。
(7)PBS洗涤细胞两次，3000r离心10min,弃上清液。
(8)PBS或鞘液200ul。
3、上机检测：分析结果：打印试验报告。
八、参考值：HLA-B27：阴性九、临床意义：HLA-B27抗原表达与强直性脊柱炎发病具有高度的疾病相关性。
HLA—B27检测在强直性脊柱炎中的临床应用
变 化对 其 发 病 机 理 、 察 疗 效 均 具 有 重 要 的价 值 。 观
乳 腺 癌 组 乳 腺 良性 疾 病 组 健 康 对 照 组 ３ ９ ． ４ １ ． △３ （ ４ ０ ’ ５ ． 士１ ． Ａ３ （ ６ ０ ８ ０ ３ －２ ２ ２ ８． ） ７ ４ ５２ ３８ ．） ６ ２ ． 士 ５ １ ３ ５． ） ５ １３ ． ３ （ ０ ０ ４ １． ± ３ １ ５ １． ） ０ ２３ ． （ ２Ｏ １ ． 士 ３ ９３ （ ２ Ｏ １２ ． ４５ ．） ８ ４ ３ ０ （２ ０ ． 士 ． １ ． ）
３ 讨 论
白细 胞 介 素一 （ 一） 单 核一 噬 细 胞 、 皮 细 胞 产 生 的 细 ６Ｉ ６ 是 Ｌ 巨 内 胞 因 子 ， 有 激 活 诱 导 Ｔ、 具 Ｂ细 胞 、 强 ＮＫ 细 胞 杀 伤 靶 细 胞 促 增 进 吞 噬 等 功 能 。本 文 表 明 ， 腺 癌 患 者 血 清 Ｉ－ 乳 Ｌ ６显 著 高 于 正 常 人 组 水 平 （ ＜ Ｏ ０ ） 与 其 他 报 道 相 似口 ］ Ｐ ．５， 。 。其 升 高 机 理 可 能 是 体 内 巨噬 细 胞 在 吞 噬 或 饱 饮 抗 原 物 质 时 本 身 产 生 的 一 些 细 胞 因 子 ， 中 Ｉ－ 其 Ｌ ６和 ＴＮＦｄ又 作 用 于 血 管 内皮 细胞 ， 正 常情 － 在 况 下 ， 以起 到抗 感 染 作 用 而 在 病 理 情 况 下 可 导 致 病 理 性 损 伤 可
断 中的 应 用 ［ ． 验 医 学 与 临 床 ，０ ０ ７ １ ） １ ８ — ０ ９ 刀 检 ２ １ ， （ １ ：０ ８１８ ． ［ ３ 王 晓 春 ， 运 江 ． ＭＡＭ ６ 刘 ｈ ｍＲＮＡ 和 Ｃ ９ｍＲＮＡ 联合 检 测 乳 腺 癌 Ｋ１
HLA-B27高分辨基因分型的临床
HLA-B27与JRA致病机制的研究 与 致病机制的研究
以各种感染性微生物作为外来抗原（HLA-B27分子与其结构 有相似性），激活免疫细胞，通过损伤或分泌细胞因子触 发异常的免疫反应，引起自身组织的损害和变性。 特别是细菌、病毒的特殊成分作为超抗原，其结构与人类 MHC抗原有同源性，不需抗原呈递细胞加工处理，即可直接 与T细胞受体直接结合（HLA-B27充当细胞表面受体），激 活T细胞。
HLA I类分子是在内质网成熟的，新合成的HLA Iα进入内质网腔 与钙连蛋白结合，使I类分子在内质网中维持部分折叠，继而与新 合成的β2-微球蛋白组装成完整的I类分子，此时B27分子才能被认 为是成熟的，转运至细胞表面。研究发现，HLA-B27折叠速度较其他 HLA分子（非HLA-B27分子）慢。导致内质网腔中出现大量的折叠不 良或部分折叠的HLA-B27重链部分，通常情况下，非折叠的重链在内 质网腔内能够被清除，但由于一些相关物质的缺乏或无效，所致非折 叠的重链堆积，形成了非折叠蛋白反应。有资料报道，AS的发生可能 与这些HLA-B27分子的未折叠有关。
Your company slogan
强直性脊柱炎（AS） 强直性脊柱炎（AS）
1973年Brewerton和schiosstein发现 强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis AS）与HLA-B27抗原有 非常强的相关,这是目前唯一有临床 价值的血型相关抗原,这在迄今已知 的HLA与疾病的关联中是最强和最典 型的。
Your company slogan
其它疾病
【Genetic markers linked to rheumatoid arthritis are also strongly associated with articular manifestations in ulcerative colitis patients】 【Flt3一ITD mutations can generate leukaemia specific neoepitopes： potential role for immunotherapeutic approaches】 【Ankylosing spondylitis is linked to Klebsiella—the evidence】 等三篇文献报道：HLA-B27抗原与白塞氏病也 等三篇文献报道： 有一定的相关性。
HLA-B27检测及其临床应用
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HLA-B27相关疾病：强直性脊柱炎
Ankylosing Spondylitis，AS
患病率：0.3%，20-30岁，男女比例 10:1，有家族倾向； 主要侵犯：中轴关节（骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织）
可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直
B27检测可作为有相关症状或高危人群AS早期的筛选方法！ AS不是RA的一种特殊类型！
与B27抗体结合，形成Ag-Ab复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及
细胞杀伤作用，通过染色法观察，死细胞的细胞膜通透性改变，染料 能够进入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据死细胞占全
部细胞的百分比，可以判断受试者淋巴细胞表面是否存在HLA-B27抗
原及其与抗体的反应强度。
优点：不需特殊仪器设备，易于操作，一般的实验室都可开展。
基因片段，以琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增产物，若出现目的条带则
表示HLA-B27为阳性。
优点：基因水平的检测
直接对HLA-B27原基因进行扩增分型，灵敏度高，特异性强。
缺点：耗时长，需要跑电泳，需要特定的实验仪器及严格的实验条件
，在临床上普遍开展此项检查有一定的难处。
Olerup O．Tissue Antigens，1994,43(4):253-256
断准确，为目前较为理想的方法，国外已将FCM法检测HLA-B27作为AS 诊断的常规检测方法。
淬灭。
Levering WH，et al. J]．Cytometry B Clin Cytom，2003,54(1):28-38．
16
PCR-SSP
通过设计基因序列特异的引物SSP，特异性的扩增出标本中的HLA-B27
HLA B27
HLA-B27与流式细胞术一、检测HLA-B27的意义HLA抗原是人类主要组织相容性复合体（Major Histocompatibity Complex，MHC）的表达产物，在免疫系统中主要负责细胞之间的相互识别和诱导免疫反应，调节免疫应答的功能。
根据HLA抗原结构，功能与组织分布的不同，可分为三类：Ⅰ类分子为HLA-A、-B、-C系列抗原，广泛分布于各组织有核细胞表面，包括血小板和网织红细胞，成熟的红细胞一般不含HLA抗原；Ⅱ类分子为HLA-D/DR、-DP、-DQ系列抗原，主要在B细胞和抗原提呈细胞上表达，这两类抗原都与移植有关，其中Ⅱ类抗原更为重要；Ⅲ类分子为补体成分。
近年来研究HLA与疾病相关性的资料表明，某些疾病的发生率与一些特殊型别的HLA检出率有关，这些病大多是发病机理不明并伴有免疫功能异常和有遗传倾向性的疾病，因此，分析HLA抗原表达情况不仅有助于了解发病机理，对于疾病的诊断、预防和预后判断都有重要意义。
HLA-B27基因属于Ⅰ型MHC基因，基本上表达在机体中所有含核的细胞上，尤其是淋巴细胞的表面有丰富的含量。
早在二十多年前，人们就已发现HLA-B27抗原的表达与强直性脊椎炎有着高度相关性，超过90%的强直性脊椎炎患者其HLA-B27抗原表达为阳性，普通人群中仅5-10%的为阳性，而强直性脊椎炎由于其症状与许多疾病相似而难以确诊，因此HLA-B27的检测在病情的诊断中有着重要意义。
在脊椎性关节病这一类的疾病中除了强直性脊椎炎以外，还有许多其它的疾病与HLA-B27抗原的表达有着或多或少的相关性，比如说Reiter，s综和症，HLA-B27阳性率为70-90%；银屑病性关节炎，HLA-B27阳性率为50-60%；葡萄膜炎（眼色素层炎），HLA-B27阳性率为40-50%；溃疡性结肠炎伴有关节病，HLA-B27阳性率为5-10%等等，因此HLA-B27的检测在这些疾病的诊断中是一个非常有价值的指标。
HLA-B27检测及临床意义PPT
补体依赖性淋巴细胞毒
• 缺少高纯度的单价抗血清 • 人工计数淋巴细胞数量，易误诊和漏诊 • 可疑结果，难判断结果，常需复查 • 血标本要求高，实验条件的影响 • 成本低
流式细胞术
流式细胞术
BD FACSAria™ II Flow Cytometer
流式细胞术
• 荧光标记的单克隆抗体，特异性高 • 操作简便，灵敏度和准确性高 • 成本较高 • 抗体发生交叉反应 • 样本要求较高
病人DNA
荧光信号
寡核苷酸探针
芯片基质
Spot →
基因技术
准确性高：基因型检测 特异性好：有效区分B7和B27，避免假阳性和假阴 性 操作灵活：样本可冻存后集中测试，无需当天处理 反应时间较长
Thanks
HLA-B27检测方法
补体依赖性微量淋巴细胞毒试验 流式细胞术（FCM法） ELISA法 PCR-SSP/SSO方法 Real-time PCR 方法 基因芯片技术
补体依赖性微量淋巴细胞毒
抗体与 淋巴细胞 表面的 膜抗原特 异性结 合后，免 疫球蛋 白的 补 体 结合位点暴露，该I C 与补体结合而使其活化，形成攻膜复合体在 细胞 膜上穿孔，导致靶细胞的溶解死亡。在细胞被穿孔但尚未裂解 前加入 染料，可使染料进入细胞内，使细胞着色。
HLA-B27检测及临床意义
临床 表现
病因 学
AS
流行 病学
血清 学
AS
AS发病率
年轻男士多见 男:女比例约为（2—3）:1
种族差异，白种人患病率1%，黑人最低
中国人HLA —B27阳性率约6—8%，中国 人群患病率0.3%，在患者家系中为4%， 南方较北方高
血清学 病因学
RF阴性
HLA-B27 阳性
HLAB27测定
5)洗、离心、上机测样（备注：测B27一定要至少洗一遍方可上机检测）
报告结果
报告阴阳性
操作性能
精密度批内五次重复CV<2％
参考值
阳性：HLA-B27阳性而HLA-B7阴性细胞的平均荧光强度在5.0以上，阳性率>90%。
临床意义
HLA复合体位于第6号染色体的短臂上，该区DNA片段长度约3000-4000KB，占人体整个基因的1/3000，HLA-B27是HLA-I类基因中B位点上的一个等位基因，与多种疾病具有相关性，尤其是强直性脊柱炎。HLA-B27基因属于І型MHC基因，所有有核细胞上均有表达，尤其是淋巴细胞表面含量丰富，人们发现HLA-B27抗原表达与强直性脊柱炎有高度的相关性，超过90%的强直性脊柱炎患者HLA-B27抗原表达阳性，而正常人群中仅5-10%的认为阳性。由于强直性脊柱炎症状与许多疾病相类似，临床上难以确诊，因此HLA-B27检测在疾病的诊断中具有重要意义，HLA-B27的检测是该疾病诊断和鉴别诊断中的一个重要指标。
4：清洗液液体5L室温
5：荧光微球液体10ML2-8℃
质控品BEKAMANCOULTER产品，未开瓶的试剂于2-8℃保存，可在有效期内保持稳定，稀释的试剂于2-8℃可稳定2周；每天校准一次：遇特殊情况随时进行校准。
仪器
BeckmanCoulterEPICSXL的试管中加入20 ul单克隆抗体和同型对照(IgG2a-FITC／IgG1-PE)
方案（Protocol）
1.选参数
点击
点击
键入文件名，点击Save
2.画图
结果
1.positive (+)
X-Mean=17.1
样本hla-b27荧光测定值
样本hla-b27荧光测定值
HLA-B27是人类白细胞抗原系统中的一种特定蛋白质，它与一些自身免疫性疾病如银屑病关节炎、强直性脊柱炎等密切相关。
荧光测定值是指通过荧光法对HLA-B27进行检测的结果。
首先，HLA-B27荧光测定值通常以荧光素单位（fluorescence units，FU）来表示。
这个值是通过实验室检测得出的，用于判断一个人体内的HLA-B27蛋白质的含量或者活性水平。
正常情况下，HLA-B27的荧光测定值应该在一定的范围内，而异常高或异常低的值可能与一些疾病或症状相关。
其次，荧光测定值的具体意义需要结合临床情况来进行解读。
例如，对于强直性脊柱炎（AS）患者来说，HLA-B27阳性可以作为诊断的辅助依据之一，但并非AS的唯一诊断标准。
因此，单纯依靠荧光测定值来做出诊断是不够的，还需要结合临床症状、其他实验室检测结果等综合判断。
此外，HLA-B27荧光测定值在不同实验室和不同检测方法下可能会有所不同，因此在进行结果解读时需要参考具体的参考范围和标准。
另外，一些药物或疾病状态也可能影响HLA-B27的荧光测定
值，因此在解读结果时需要考虑这些影响因素。
总的来说，HLA-B27荧光测定值是一个重要的实验室指标，可以作为一些自身免疫性疾病的辅助诊断依据，但需要结合临床情况和其他检测结果来进行综合判断。
希望以上信息能够全面回答你的问题。
HLA-B27检测应用于强直性脊柱炎的诊断价值分析
HLA-B27检测应用于强直性脊柱炎的诊断价值分析摘要目的：探讨HLA-B27检测对强直性脊柱炎的诊断价值。
方法：58例患者作为试验组，另选择58例健康人士作为对照组，对比分析两组HLA-B27阳性率试结果：HLA-B27阳性率实验组为91.37%，对照组为6.90%，两组比较差异有显著性（X279.472，P＜0.01）。
结论：HLA-B27检测用于强直性脊柱炎的诊断，可提供重要的参考指标，从而进一步提高确诊率。
关键词HLA-B27 强直性脊柱炎诊断价值AbstractObjective:To explore the diagnostic evaluation of HLA-B27 detection for ankylosing spondylitis.Methods:58 cases of patients with ankylosing spondylitis were as experimental group,other 58 cases of healthy peoples were chosen as control group.The positive rate of HLA-B27 was compared,then.Results:The positive rate of HLA-B in experimental group was 91.37%,in control group was 6.90%,it showed significant differences（X279.472,P＜0.01）.Conclusion:HLA-B27 detection used for ankylosing spondylitis,can provide important guidance index and enhance the diagnostic rate further.KeywordsCut surgery of thyroid gland;Tumor of thyroid gland;Clinical meaning强直性脊柱炎是临床常见疾病，其不仅可导致患者形成驼背，而且还可能导致多种心血管疾病和神经系统疾病，给患者带来很大痛苦。
HLA-B27详细解读
HLA-B27详细解读HLA-B27是什么？简单地说，HLA-B27可以指的是HLA-B27基因，也可以指的是HLA-B27分子。
HLA-B27基因是存在于人体细胞的细胞核里面的遗传物质DNA的一部分。
HLA基因是人体固有的部分，HLA可以分成HLA-A、HLA-B、HLA-C等。
HLA-B有更多如HLA-B7、HLA-B8、HLA-B13、HLA-B18，当然也包括有HLA-B27。
HLA-B27就像人的血型一样，A型血的人不会下次查变成B型血，HLA-B27也不是痛的厉害时是阳性，缓解后变阴性。
它是一旦查出是阳性的，就说明这个人的基因具有这种特征，就不可能再转变成阴性了。
HLA-B27并不是人人都有的基因。
HLA-B27基因通过转录、翻译，最后生成HLA-B27分子出现在细胞膜表面。
要检测HLA-B27，既可以查HLA-B27分子，也可以查HLA-B27基因。
目前检查HLA-B27的方法主要是查HLA-B27分子，即查细胞膜表面是否有HLA-B27蛋白质分子。
虽然各家医院可能用的检测方法不同，有的是用微量淋巴细胞毒法，有的是用流式细胞术，这些方法检测的准确性都很高。
但是蛋白质是很奇怪的东西，蛋白质的稳定性受到的影响因素多，结构或环境变化可能影响到检测结果，所以极少数情况下，可能出现本来是HLA-B27阳性的，结果检测成阴性。
这种情况下，可以通过检测HLA-B27基因来确定。
因为基因的稳定性很高，比如考古界对古代的动物或人类尸体都能进行基因检测，保存那么久都能检测基因，足可见基因有多稳定了。
所以严格的基因检测得出的结果是最确定的了。
既然基因检测的方法这么准确，为什么不直接采用基因检测呢？要知道基因检测的程序是很多的，需要花很长时间，比如第一步，要提取DNA，单提取DNA就有很多步骤；第二步，进行基因扩增，然后进行电泳。
电泳要配胶，等待热的胶冷却变成固体也需要半小时左右。
胶变成固体后再跑电泳，又要10~20分钟。
HLA-B27检测在AS诊断中的临床应用
HLA-B27检测在AS诊断中的临床应用昝海波;王波【期刊名称】《实用医技杂志》【年(卷),期】2005(012)024【摘要】目的:评价HLA-B27检测在强直性脊柱炎(AS)诊断中的临床诊断价值.方法:对比分析28例HLA-B27阴性AS患者和56例病程相同的HLA-B27阳性AS 患者(1:2配对)的临床表现及实验室检查结果.结果:B27(-)组与B27(+)组最明显的差异是前者以女性多见(P<0.01),平均发病年龄偏晚(P<0.05);病情活动性指标的改变包括血沉和C-反应蛋白的升高在B27(-)组明显少于B27(+)组(P均<0.01).结论:B27(-)AS患者病情相对较轻,预后较好;女性患者病情较轻,发展较慢,预后较好.HLA-B27对AS有一定早期诊断价值,并与血沉、X线片联合检测可提高诊断正确率.【总页数】2页(P3605-3606)【作者】昝海波;王波【作者单位】运城市中心医院,山西,运城,044000;运城市中心医院,山西,运城,044000【正文语种】中文【中图分类】R681.5+1【相关文献】1.HLA-B27检测在强直性脊柱炎中的临床应用 [J], 蒋叙川;卢峰2.SSP-PCR方法检测HLA-B27基因在AS早期诊断中的临床应用 [J], 郭华;王涛;张海祥;赵院利;张小艳;刘杨;刘宗智;胡军3.IMS-ELISA检测HLA-B27在关节性疾病诊断中的临床应用 [J], 杨雅琼;刘长明;易锋;朱洪涛4.ROC曲线设置流式细胞术检测HLA-B27的临界值在强直性脊柱炎诊断和鉴别诊断中的应用 [J], 张静;董松武;孙峰5.HLA-B27检测在强直性脊柱炎诊断中的临床应用 [J], 王勤友;张世训;黄宗清;徐群;宋永红;吕红娟;聂向民因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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银屑病性关节炎
Reiter’s综合症 反应性关节炎 沙门氏菌感染 志贺氏菌感染
55
37 29.7 20.7
耶尔森氏菌感染
淋病双球菌感染 正常人群
17.6
14.0 2～7
3
血清阴性脊柱关节病（脊柱关节炎）
这是一组慢性炎症性风湿性疾病，具有特定的病理生理、临床、放射
学和遗传特征，炎性腰背痛伴或不伴外周关节炎，加之一定特征的关
节外表现是这类疾病特有的症状和体征。这一类疾病包括：强直性脊 柱炎(ankylosing spondylitis，AS)，反应性关节炎(reactive arthritis，ReA)，
银屑病关节炎(psoriatic arthritis，PsA)，炎症性肠病性关节炎(arthropathy
与革兰氏阴性杆菌有一定相关性：
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血清阴性脊柱关节病共同特点
临床上有很多共同或重叠之处：
眼炎，尿道炎，前列腺炎， 口腔、肠道和生殖器溃疡 结节性红斑，银屑病样皮疹 坏死性脓皮病，血栓性静脉炎
基本病理变化以肌腱端周围和韧带附着于骨的部位为主(附着端炎)而
非滑膜，也可发生在眼、主动脉瓣、肺实质和皮肤，而不同于以滑膜 病变为主的类风湿性关节炎，而且无类风湿皮下结节。
强直性脊柱炎 地区分布 性别分布 种族差异大 男＞女 类风湿性关节炎 世界性 女＞男
年龄
家族史 类风湿因子
20-30
明显 （－）
30-50
不明显 （）
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HLA-B27与AS
HLA-B27阴性的AS
约5-10%的AS患者为HLA-B27阴性 AS患者的HLA-B27阳性率达90-95% 我国汉族人群HLA-B27阳性率2-7%（3千万-1亿），AS患病 率为0.3%（＞4百万），大部分HLA-B27阳性者并不发生AS。
of inflammatory bowel disease，IBD)，未分化脊柱关节炎和幼年慢性关节 炎。几种脊柱关节炎病情逐渐进展，都可能发展成典型的强直性脊柱
炎
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血清阴性脊柱关节病共同特点
RF（一） 家族聚集现象
与HLA-B27不同程度相关
皆可影响脊柱，都有不同程度的骶髂关节炎，也可影响外周关节 ，下肢关节多于上肢关节，且呈不对称性。 强直性脊柱炎与肠道肺炎克雷白杆菌相关 Reiter综合征与沙眼衣原体、福氏痢疾杆菌相关 反应性关节炎与沙门杆菌、痢疾杆菌、耶尔森菌和HP相关
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HLA-B27与AS
健康人群HLA-B27阳性率及AS患病率各地区、种族有显著的差异 HLA—B27与强直性脊柱炎的发病有很强的相关性
两种错误认识：HLA-B27阳性≠AS！
HLA-B27阳性不会转阴！ HLA-B27阳性率 中国人 欧洲白种人 南非黑人 美国黑人 印地安人 2-7% 4～13％ 1％ 2～4％ 9～50％ 6～12％ AS患病率 0.3% 1％ 很低 AS患者B27阳性率 90～95% 80～100% 22% 57% 80～100%
杨雅琼等．现代检验医学杂志，2002,17(2):60-62
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流式细胞术法
利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体，与细胞表面的B27抗原结合，使
结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞
仪测得的通道值来反映，以其值的高低判断HLA-B27抗原表达百分比 ，从而判断HLA-B27是否阳性。
优点：全自动仪器检测，减少了人为因素的影响，重复性高，结果判
断准确，为目前较为理想的方法，国外已将FCM法检测HLA-B27作为AS 诊断的常规检测方法。
缺点：仪器昂贵，目前只在较大医院应用，且荧光易淬灭。
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HLA-B27检测方法及评价
抗原水平
微量细胞毒法 ELISA IMS-ELISA 流式细胞术法
基因水平
PCR-SSP
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微量细胞毒法（microlymphocytotoxic test，MLCT）
原理：如果受试者淋巴细胞表面表达有相应的HLA-B27抗原，就可以
与B27抗体结合，形成Ag-Ab复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及
蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的
HLA-B27呈正相关。
其结果与MLCT法符合率为99％，且不受感染因素的影响，重复性好。
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磁珠酶联免疫分析（IMS-ELISA）
磁珠分离与ELISA结合
B27单抗标记磁珠
HRP标记CD45单抗 通过磁场分离游离相
优点：
反应时间短（1ห้องสมุดไป่ตู้时完成） 对标本新鲜度要求不高 2～8℃静置4 d之内可用
数量或结构改变，影响MLCT的结果，易出现假阴性。
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ELISA
原理：应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中HLA-B27水平。用
纯化的B27抗体包被微孔板，依次加入HLA-B27抗原（待检标本）、生
物素化的抗HLA-B27抗体、HRP标记的亲和素，形成双抗体夹心反应， 经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成
HLA-B27检测及其临床应用
徐美胜 2016年11月24日
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HLA-B27及其临床应用
HLA-B27疾病相关
血清阴性脊柱关节病类型及特点 强直性脊柱炎特点及其与B27关联机制
HLA-B27 检测方法
MLCT、ELISA、IMS-ELISA、FCM、PCR-SSP
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HLA-B27相关疾病
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HLA-B27相关疾病：强直性脊柱炎
Ankylosing Spondylitis，AS
患病率：0.3%，20-30岁，男女比例 10:1，有家族倾向； 主要侵犯：中轴关节（骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织）
可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直
B27检测可作为有相关症状或高危人群AS早期的筛选方法！ AS不是RA的一种特殊类型！
细胞杀伤作用，通过染色法观察，死细胞的细胞膜通透性改变，染料 能够进入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据死细胞占全
部细胞的百分比，可以判断受试者淋巴细胞表面是否存在HLA-B27抗
原及其与抗体的反应强度。
优点：不需特殊仪器设备，易于操作，一般的实验室都可开展。
缺点：标本存放不能超过8小时；感染可以使细胞膜表面的B27分子的