试验-脑脊液检验课件

血液分析仪也可进行脑脊液细胞计数和 白细胞分类，此法简单，快速，但标本 尤其是病理性，陈旧性标本中的组织， 细胞的碎片以及细胞变形等都可以影响 细胞分类和计数，故结果重复性，可靠 性有待进一步探讨。另外，蛋白质含量 高，尤其有凝块的脑脊液标本容易使仪 器堵孔，故不推荐使用
标本采集后应在1h内进行细胞计数，若 放置太久，细胞可能凝集成团或破坏， 影响计数结果。标本必须混匀方可充池， 否则影响计数结果 w 因穿刺损伤血管，引起血性脑脊液，白 细胞计数结果必须校正，以剔除因出血 而带来的白细胞。 w 细胞计数时应注意新型隐球菌直接白细胞计数时，也可用微量吸管吸取冰 乙酸后尽可能全部吹出，仅使吸管内壁粘附 少许冰乙酸，再吸取少量混匀的脑脊液于吸 管中，数分钟后吸管内红细胞溶解，然后再 充池计数。 w 细胞计数时，如发现较多红细胞有皱缩或肿 胀等异常现象，应如实报告，以协助临床医 生鉴别是陈旧性出血或新鲜出血。 w 血性脑脊液中的白细胞必须校正后才有价值 w 白细胞校正数=脑脊液白细胞未校正数—脑脊 液红细胞数×血液白细胞数/血液内红细胞数
白细胞计数
w 直接计数法（非血性清晰透明或微浑脑 脊液） w 除去红细胞：在小试管内加入冰乙酸 1~2滴，转动试管，使内壁粘附少许冰 乙酸后倾去，滴加混匀的脑脊液3~4滴， 混匀，放置数分钟，使红细胞破坏。 w 充池： w 计数： w 计算：
稀释计数法（浑浊脑脊液）
w 稀释破坏红细胞：根据标本内白细胞多少情 况，用白细胞稀释液对标本进行一定倍数的 稀释，混匀，放置数分钟，破坏红细胞。 w 充池：用微量吸管吸取混匀稀释后的脑脊液 充入1个计数池。 w 计数：静置2~3min后，低倍镜计数1个计数池 内的四角和中央大方格内的白细胞数。 w 计算：根据5个大方格内的白细胞总数和稀释 倍数，计算每升脑脊液的白细胞总数
稀释计数法（适用于浑浊的脑脊液）
w 稀释：如标本细胞过多，可根据标本内细胞 多少，用生理盐水或红细胞稀释液对标本进 行一定倍数稀释。 w 充池：用微量吸管吸取混匀后的稀释脑脊液 充入1个计数池。 w 计数：静置2~3后，低倍镜计数1个计数池内 四角和中央大方格共5个大方格内的细胞数。 w 计算：根据5个大方格内细胞总数及稀释倍数， 计算每升脑脊液的细胞总数。
白细胞分类计数
直接分类法 白细胞计数后，转换高倍镜，
根据细胞的形态和细胞核形态进行直接分类， 共计数100个白细胞（包括内皮细胞），分别 计数单（个）核细胞（包括淋巴细胞，单核 细胞，内皮细胞）和多（个）核细胞（粒细 胞系）的数量，结果以单核细胞百分比和多 核细胞百分比报告。如白细胞不足100个，可 直接写出单核细胞和多核细胞具体数，若白 细胞数不足30个，可不做直接计数而改用涂 片染色分类计数
脑脊液检验
实验一
脑脊液理学检查
w （目的） 掌握脑脊液理学检查的内容， 方法。 w （标本） 新鲜脑脊液。 w （操作） w 1．观察颜色 肉眼观察脑脊液颜色变化， 分别以无色，乳白色，红色，棕色，或 黑色，绿色等文字如实描述报告。
w 2．观察透明度 肉眼观察脑脊液透明度 变化。正常脑脊液清晰透明，病理情况 下可出现不同程度浑浊，可分别以“清 晰透明”。“微浑”，“浑浊”等如实 报告。3．观察凝块或薄膜 轻轻倾斜试 管，肉眼仔细观察有无凝块或薄膜。正 常脑脊液无凝块或薄膜，脑膜炎时可形 成凝块或薄膜，分别以“无凝块”， “有凝块”，“有薄膜”等如实报告。
方法学评价
脑脊液细胞计数和分类目前一般任用手 工显微镜法。白细胞直接分类法简单， 快速，但属粗略分类，其准确性差，且 细胞较小，初学者难把握，尤其是陈旧 性标本的细胞变形，分类更困难，误差 较大。涂片染色分类法分类详细，结果 准确可靠，尤其是可以发现异常细胞如 肿瘤细胞。该法被推荐使用，但其操作 较复杂，费时。
w 细胞涂片时，为了使细胞容易粘在玻片 上，可取沉淀的细胞悬液2滴，加血清1 滴，混匀后涂片。 w 涂片染色分类时，如见内皮细胞或异常 细胞，则另行描述报告，必要时用巴氏 或HE染色查找肿瘤细胞。 w 实验结束后，血细胞计数板用0.75％ （V/V）乙醇浸泡消毒60min，忌用酚浸 泡，以免损坏计数板。
（注意事项）
w 当标本颜色或透明度改变不明显时， 应在灯光下以白色或黑色为背景仔细观 察，同时观察有无凝块。 w 怀疑为结核性脑膜炎时，标本应在 2~4℃环境中静置12~24h再观察脑脊液 表面有无薄膜形成。 w 参考值 ：无色，清晰透明，放置后无凝 块或薄膜形成。
实验二 脑脊液显微镜检查
w （目的）掌握脑脊液显微镜检查的内容， 方法。 w （器材） 显微镜，改良牛鲍计数板， 微量吸管。刻度吸管，小试管。 w （试剂） 生理盐水或红细胞稀释液，冰 乙酸，白细胞稀释液，瑞氏染液或瑞— 吉染液。 w （标本）新鲜脑脊液。
w涂片染色分类法
若直接分类不易区别 细胞时，可将脑脊液以1000r/min离心5min， 取沉淀物，制成均匀薄片，置于室温或37℃ 恒温箱内尽快干燥，瑞氏或瑞—吉染色后， 油镜下进行分类计数，结果报告与血液白细 胞分类计数报告方式相同。若见激活型单核 细胞（比普通单核细胞大，胞质边缘趁、呈 花边状，胞质内有空泡），转化型淋巴细胞 （形态似异型淋巴细胞）及室管膜细胞（形 态似大淋巴细胞）应计入分类的百分比中
质量控制
白细胞计数直接法的试管或吸管中的冰 乙酸要尽量去尽，否则结果偏低。 w 若标本陈旧，细胞变形时，白细胞直接 分类法误差大，推荐用涂片染色分类法 分类计数。 w 涂片染色分类计数时，离心速度不能太 快，否则细胞形态受影响，有条件的单 位可用玻片离心沉淀法，细胞室沉淀法 等收集细胞。 w 涂片固定时间不能太长，更不能高温固 定，以免细胞皱缩。
w（操作）
w 细胞总数计数 w 直接计数法（适用于清晰透明或微浑脑 脊液） w 充池：微量吸管吸取混匀的脑脊液，充 入血细胞计数板的上下2个计数池。 w 计数：静置2~3min，低倍镜下计数2个 计数池内四角和中央大方格共10个大方 格内的细胞数。 w 计算：10个大方格内的细胞总数即为每 微升脑脊液细胞总数，再换算