平板划线法与稀释涂布平板法的区别
高中生物选修一-第一章无菌操作技术实践-第1章 第2节
第二节分离特定的微生物并测定其数量1．认识各种微生物形成的菌落特征。
2．学会利用涂布平板法分离、培养微生物，并测定其数量。
(重难点)3．掌握利用选择培养基分离特定微生物的方法。
(重点)1．分离原理在实验室中利用选择培养基可以筛选和分离出某种微生物，然后在高度稀释的条件下，在固体培养基上培养该微生物形成的单个菌落，即为纯培养物。
2．分离方法(1)平板分离法：包括涂布平板法和混合平板法。
能将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物体经过生长、繁殖均可形成单个菌落。
(2)选择培养分离：科学家针对某种微生物的特性，设计一个特定的环境，使之特别适合这种微生物的生长，而抑制其他微生物的生长。
这种通过选择培养进行微生物纯培养分离的技术，称为选择培养分离。
(3)根据菌落特征初步分离：①菌落的含义：是指单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。
②菌落特征：不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落一般都具有稳定的特征，如菌落的大小、形状、边缘特征、隆起程度、颜色等，这些可以成为对微生物进行分类、鉴定的重要依据。
[合作探讨]探讨1：在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌吗？提示：标准的单个菌落中只含有一种细菌。
探讨2：如果要分离厌氧菌，应在什么条件下培养？提示：在无氧条件下培养。
探讨3：在选择培养分离微生物的过程中，“选择培养”的培养基按物理性质划分属于什么培养基？为什么？提示：固体培养基。
便于选择、分离所需要的微生物。
[思维升华]1．涂布平板法与混合平板法的比较(1)原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性不同而制备培养基。
(2)方法：①在培养基中加入某种化学物质。
例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。
②改变培养基中的营养成分。
例如，缺乏氮源时可以分离固氮微生物；石油作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物；用含无机碳源的培养基分离自养型微生物。
第1章 发酵工程(考点串讲课件)高二生物单元复习(人教版2019选择性必修3)
发酵温度为18-30 ,酿酒酵母最适生长温度约为28
最适生长温度为30-35℃
重点难点
制作流程
清洗、消毒装置
清洗原材料
榨汁、装瓶
酒精发酵
果酒
果醋发酵
果醋
将发酵瓶、榨汁机等器具用洗洁精洗干净，并用体积分数为70%的酒精消毒，晾干备用
取新鲜葡萄，用清水冲洗1-2次，再去除枝梗和腐烂的籽粒，沥干
榨汁，将葡萄汁装入发酵瓶中，留约1/3的空间，盖好瓶盖
①将温度控制在18-30℃②每隔12h左右将瓶盖拧松一次，此后再拧紧瓶盖③发酵时间为10-12d④从发酵瓶口取样，随时对发酵情况进行检测
a.葡萄酒制作完成后，打开瓶盖，盖上一层纱布b.发酵温度为30-35℃c.发酵时间为7-8d
三、果酒和果醋的制作
（2）在灼烧接种环之后,要等其冷却再进行划线,以免温度过高杀死菌种
（3）除第一次划线外,每次划线都从上一次划线的末端开始,这样能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最后一次划线不能和第一次划的线相接触
（4）划线时用力大小要适当,防止用力过大将培养基划破
1.平板冷凝后,要将平板倒置,原因是防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；避免培养基水分过快挥发
知识梳理
一、发酵与传统发酵技术4.实例
知识梳理
项目
菌种
生物类群
代谢类型
菌种来源
腐乳制作
主要为毛霉
真核生物
异养需氧型
主要是空气中的毛霉孢子
泡菜制作
乳酸菌
原核生物
异养厌氧型
主要是附着在蔬菜
主要是附着在葡萄皮上的酵母菌
果醋制作
醋酸菌
原核生物
高中生物选修三：稀释涂布法与平板划线法的区别
高中生物选修三：稀释涂布法与平板划线法的区别
一、平板划线分离法
先倒制无菌琼脂培养基平板，待充分冷却凝固后，在无菌条件下，用接种环沾取少量待分离的含菌样品，在无菌琼脂平板表面进行有规则的划线。
划线的方式有连续划线、平行划线、扇形划线或其它形式的划线。
通过这样在平板上进行划线稀释，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来。
经培养后，可在平板表面形成分散的单个菌落。
但单个菌落并不一定是由单个细胞形成的，需再重复划线1-2次，并结合显微镜检测个体形态特征，才可获得真正的纯培养物。
●用途：一般多用于从菌株的纯化
●优点：简便快速，可以观察菌落特征
●缺点：不能用于计数
二、稀释涂布平板法
该法是将已熔化并冷却至约50℃(减少冷凝水)的琼脂培养基，先倒入无菌培养皿中, 制成无菌平板。
待充分冷却凝固后，将一定量(约0.1 ml)的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用三角形无菌玻璃涂棒涂布，使菌液均匀分散在整个平板表面，倒置温箱培养后挑取单个菌落。
●用途：一般多用于筛选菌株
●优点：可以计数，可以观察菌落特征。
计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。
●缺点：操作相对麻烦。
人教版高中生物选修一提分教程 专题2 微生物的培养与应用 课题1 第2课时 含答案
第2课时实验操作及实验结果[学习目标] 1.学会培养基的制备方法。
2.掌握大肠杆菌的纯化方法。
3.了解菌种保藏所用的方法。
知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基知识梳理1.操作步骤2．倒平板(1)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手□01拔出棉塞。
(2)右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过□02火焰。
(3)左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立刻盖上□03皿盖。
(4)待平板冷却凝固后，将平板□04倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
典题分析题型一培养基的制备过程分析[例1]下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置解题分析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸，B 正确；待培养基冷却至50 ℃左右，开始倒平板，C正确；平板冷却凝固后倒置，D正确。
[答案] A知识拓展(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
(2)整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免周围环境中微生物的污染。
(3)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
(4)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
目的菌的分离 2
目的菌的分离
1.目的菌又叫目标菌，菌种
2.菌种分离的办法有稀释涂布平板法，平板划线法
3.原理：是让聚集在一起的细胞分散开来形成，由一个细胞形成的单菌落。
4.平板划线法只能用于菌种的分离，或是接种
5.稀释涂布平板法可以用菌种的分离，接种，计数
6.平板划线法的工具主要是酒精灯接种环
7.稀释涂布平板法，实际上是两步，第一部是稀释，第二部是涂布
8.稀释必须使用无菌水，而不是蒸馏水
9.涂布用到的工具是涂布棒
10.分离接种的全过程必须使用无菌技术
11.在平板划线时，每次都要将接种环灼烧灭菌，并且都要冷却
平板培养基制备流程
1.流程：计算称量溶化调PH 灭菌倒平板
2.平板培养基保存，微生物培养的过程中必须倒置
倒置的目的是减少水分蒸发，防止污染
3.微生物的培养需要恒温培养箱
4.菌种的保藏
临时保藏：固体斜面保藏（4℃）
长期保藏：甘油管藏（-20℃）
尿素分解菌的分离
1.选择培养基(p22)，
特殊，是由尿素作唯一氮源，
2.原理能够产生脲酶的细菌，能够在该选择培养基上生长繁殖
3.设计其他培养基证明该选择培养基具有选择作用
方法一牛肉膏蛋白胨培养基
方法二将尿素替换成硝酸铵。
细菌筛选实验报告
一、实验目的1. 熟悉细菌分离纯化的原理和方法。
2. 掌握平板划线法和稀释涂布平板法两种分离纯化细菌的方法。
3. 学会观察和识别不同类型的细菌菌落。
4. 提高无菌操作技能。
二、实验原理细菌分离纯化是微生物学实验中的重要技术，其目的是从混杂的微生物群体中分离出单个或少数几个纯培养的细菌。
常用的分离纯化方法有平板划线法和稀释涂布平板法。
平板划线法：将混合菌液涂布在琼脂平板上，用接种环划线，使菌液在平板上逐渐稀释，最终在划线末端获得单个菌落。
稀释涂布平板法：将混合菌液进行系列稀释，然后将不同稀释度的菌液涂布在琼脂平板上，经过培养，观察和计数菌落，计算出原菌液的含菌量。
三、实验材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、伊红美蓝培养基、麦康凯培养基等。
3. 实验器材：无菌操作台、接种环、涂布器、酒精灯、镊子、试管、试管架、显微镜等。
四、实验方法1. 平板划线法（1）将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上。
（2）用接种环在平板上划线，从一端开始，划到另一端，每次划线前用火焰灼烧接种环。
（3）重复划线，使菌液在平板上逐渐稀释。
（4）将平板倒置，放入恒温培养箱培养。
（5）观察菌落生长情况，记录菌落特征。
2. 稀释涂布平板法（1）将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上。
（2）将菌液进行系列稀释，如1:10、1:100、1:1000等。
（3）用涂布器将不同稀释度的菌液涂布在平板上。
（4）将平板倒置，放入恒温培养箱培养。
（5）观察菌落生长情况，记录菌落特征和菌落数。
五、实验结果与分析1. 平板划线法（1）金黄色葡萄球菌在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上生长出的菌落呈金黄色，表面光滑，边缘整齐。
（2）大肠杆菌在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上生长出的菌落呈红色，表面光滑，边缘整齐。
（3）枯草芽孢杆菌在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上生长出的菌落呈白色，表面粗糙，边缘不整齐。
微生物菌种操作方法汇总
常用的几种微生物接种方法接种细菌应用接种针（环）来沾取细菌标本，进行接种。
接种环与接种针为用白金丝或合金丝所制，亦可用电炉丝代替，因它能耐高热且散热快，便于接种前后通过火焰灭菌（整个接种环烧红即达到灭菌目的）。
在使用接种环时一般用右手持笔式较为方便，左手可持培养基进行配合，其接种程序可分为：灭菌接种环→稍冷→沾取细菌样品→进行接种（包括：启盖或塞、接种划线、加盖或塞）→进行接种环灭菌等五个程序。
不同培养基，接种方法也不同，分述如下：一、平板划线接种法（分离培养法）是将细菌分离培养的常用技术，其目的是将混有多种细菌的培养物，或标本中不同的细菌（病原菌与非病原菌）使其分散生长，形成单个菌落或分离出单一菌株，便于识别鉴定。
平板划线接种方法较多，其中以分段划线法与曲线划线法较为常用。
（一）分段划线法平板分段划线(左)及培养后菌落分布图本法多用于含菌量较多的标本。
方法是以接种环沾取少许样品先涂布于平板培养基表面一角作为第一段划线（划线时接种环与培养基表面呈45度角），然后将接种环置火焰上灭菌，俟冷（可接触平板试之，如不融化琼脂，即已冷却），于第二段处再作划线，且在开始划线时与第一段的划线相交接数次，以后划线不必再相接，待第二段划完时，再如上法灭菌，接种划线，依次划至最后一段，灭菌接种环。
这样每一段划线内的细菌数逐渐减少，即以获得单个菌落，划线接种完毕，盖好平皿盖，倒置（平板底部向上）于37℃温箱中培养。
（二）连续划线法：此法多用于接种材料中含菌数量不太多的样品或培养物。
方法是先将样品或培养物涂于平板表面的一角，然后用接种环自样品涂擦处开始，向左右两侧划开并逐渐向下移动，连续划成若干条分散的平等线。
二、斜面接种法此法主要用于移种纯菌，使其增殖后用于鉴定或保存菌种。
通常是从平板培养物上挑取某一单独菌落或者从一支已长好的斜面菌种，移种至斜面培养基上，接种步骤如下（以从已长好的斜面菌种转接为例）：（一）左手拿两支试管，一支为经灭菌的斜面，另一支为已长好的菌种。
纯培养方法
纯培养方法1、稀释倒平板特点：菌落分离较为均匀，进行微生物计数结果相对准确。
但操作相对麻烦，热敏感菌有时易被烫死，而严格好氧菌也可能因被固定在培养基中生长受到影响。
2、涂布平板法特点：操作相对简单，是较常使用的常规方法。
但有时会因涂布不均匀使某些部位的菌落不能分开，进行微生物计数时需对稀释和涂布过程的操作特别注意，否则不易得到准确的结果。
3、平板划线法特点：操作简单，多用于对已有纯培养的确认和再次分离。
应用：这三种方法可用于所有能在固体培养基表面形成菌落的微生物的纯培养分离。
并且，通过选用适当的选择平板及培养条件，可直接分离各种具有特定生理特征的微生物。
和厌氧罐或厌氧手套箱技术结合，这3种方法也可用于获得各种厌氧菌的纯培养。
4、稀释摇管法特点：稀释倒平板法的一种变通形式，但由于菌落形成在琼脂柱的中间，观察和挑取都相对困难。
应用：在缺乏专业的厌氧操作设备的情况下对严格厌氧菌进行分离和观察。
哪些方法可获得微生物的纯培养微生物培养法是在人为条件下繁殖微生物的方法。
根据微生物的种类以及对养料、温度、氧气、水分、酸碱度等环境条件的要求不同，并联系生产和实验上的具体要求，可有不同的培养方法。
可分好气培养法和厌气培养法两类。
中海生物技术的培养基一是好气微生物培养法，常用：①摇床培养法，即将微生物接种于盛有液体培养基的三角瓶后，放在恒温培养室中的摇床上作有节奏的振荡，使空气不断进入培养液中，促其良好生长②浅盘培养法，又称表面培养法，在盘内放一浅层培养基，使微生物能够充分接触空气，而有利于生长繁殖，但此法所需空间大，并且容易污染杂菌③深层培养法，适用于好气微生物的大规模发酵培养，在大容积的液体培养基中，通入无菌空气，并不断搅拌，可使微生物充分接触空气，迅速繁殖并积累代谢产物。
二是厌气微生物培养法，实验室常用化学还原剂或抽气机吸除培养基中的分子氧，也有用静止状态的深层培养法。
在生产中常用密封式发酵罐或不通风的固体发酵法。
微生物的基本培养技术(第2课时)高二生物课件(人教版2019选择必修3)
将菌液进行一系
★稀释涂布平板法★
列梯度稀释，然
后将不同稀释度
的菌液分别涂布
到琼脂固体培养
基的表，进行培
养。在稀释度足
够高的菌液里，
聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从
而能在培养基表面形成单个菌落。
a.梯度稀释菌液：
注意：移液管需要经 过灭菌；试管口和移 液管离火焰1～2cm处。
b.涂布平板操作： 2.取少量 菌液滴加 到培养基 表面
3.如图为微生物的实验室培养和纯化醋酸菌 的部分操作步骤，请回答下列问题：
（1）①是制备培养基时__倒__平__板___的操作，该 操作需待培养基冷却至___5_0_℃_____左右时，在 __酒__精__灯__火__焰______附近附近进行． （2）该实验中纯化醋酸菌的接种方法是 平_板__划__线__法_；在完成步骤④的操作中，在每次划 线之前都要_灼__烧__接__种__环，使得每一次划线时接 种环上的菌种直接来源于_上__次__划__线__的__末__端___。
4.将已冷却的接种 环伸入菌液中，沾 取一环菌液 冷却的目的是避免接种 环温度太高而杀死菌种
5.将试管口通过火 焰，并塞上棉塞。
6.左手将皿盖打开一条 缝隙，右手将沾有菌种 的接种环迅速伸入平板 内，划三到五条平行线
7.灼烧接种环，待其冷 却后，从第一区域划线 的末端开始往第二区域 内划线。重复以上操作。
在酒精灯火焰附近倒平板。 思考1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么 办法来估计培养基的温度？ 可用手触摸盛有培养基的 锥形瓶，感觉锥形瓶的温 度下降到刚刚不烫手时， 就可以进行倒平板了。
①在火焰旁，右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；
思考2.为什么需要使锥 形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶 口的微生物污染培养基。
平板划线法与稀释涂布平板法的区别
平板划线法与稀释涂布平板法的区别
一、平板划线分离法
由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
用途：一般多用于从菌种的纯化；
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；
缺点：不能计数；
二、稀释涂布平板法：
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。
计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，
故又称活菌计数。
一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。
用途：一般多用于筛选菌株。
一般用于平板培养基的回收率计数。
优点：可以计数，可以观察菌落特征。
缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。
如果菌液密度大的话，长不出单菌落。
平板划线法与稀释涂布平板法的区别
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平板划线法与稀释涂布平板法地区别
一、平板划线分离法
由接种环以菌操作沾取少许待分离地材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式地连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数地增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜地话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落.
用途：一般多用于从菌种地纯化；
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；
缺点：不能计数；
二、稀释涂布平板法：
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成地单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计地计数方法，即一个菌落代表一个单细胞.计数时，首先将待测样品制成均匀地系列稀释液，尽量使样品中地微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量地稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中地培养基内.经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中地含菌数.此法所计算地菌数是培养基上长出来地菌落数，故又称活菌计数.一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源地污染程度地检验.
用途：一般多用于筛选菌株.一般用于平板培养基地回收率计数.
优点：可以计数，可以观察菌落特征.
缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延.如果菌液密度大地话，长不出单菌落.
1 / 1。
生物学案：第一章第一节微生物的分离和培养第二课时
第二课时无菌操作和接种技术及微生物的分离、培养与数量测定一、无菌操作和接种技术1．接种通常把在______条件下将微生物接入________的操作过程叫做接种。
由于接种方法的不同,采用的接种工具也有区别，如用________进行固体培养基划线接种；用________穿刺接种；用__________涂抹平板等。
2．无菌操作__________是微生物接种技术的关键。
通常在酒精灯________进行接种操作,其原因是：酒精灯火焰附近的________使微生物不能存活。
预习交流1．根据接种工具的区别,分析有哪些接种技术。
2．接种过程中在接种环从菌种管中抽出时，应该注意什么问题？3．无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？二、微生物的分离、培养与数量测定1．分离微生物的依据分离微生物时,根据微生物对________、______、______等要求的不同，通过只提供目的微生物生长的必需条件，或加入__________使____________不能生长，从而达到选择分离微生物的目的。
2．菌落单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，可以形成肉眼可见的、有____________的______________,称为菌落.当______培养基表面众多菌落连成一片时，便成为______.当多种微生物混杂在一起时，根据它们在平板上形成的菌落的________可初步将所需的微生物与其他微生物区分开，并在此基础上获得所需微生物的________.3．分离微生物的常用方法______分离法能将单个微生物______和固定在______培养基表面或里面，每个孤立的活微生物经过______、______均可形成便于移植的菌落。
最常用的分离、培养微生物的固体培养基是________________平板。
平板分离法有多种，如__________和____________就是常用的两种________的方法。
第1章 发酵工程：第2节第2课时 微生物的选择培养和计数
第1章 发酵工程：第2节 微生物的培养技术及应用 第2课时 微生物的选择培养和计数[理清主干知识]一、选择培养基1．微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
2．选择培养基：在微生物学中，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
二、微生物的选择培养土壤取样―→培养观察三、微生物的数量测定1．稀释涂布平板法(1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(2)注意事项①一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。
②通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30～300、适于计数的平板。
③在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。
④统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。
这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
2．测定微生物数量的另一种常用方法：显微镜直接计数法。
四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1．原理绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。
利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
2．实验设计(1)土壤取样：铲去表层土，在距地表3～8 cm的土壤层取样。
(2)样品的稀释：测定土壤中细菌的数量，一般选用1×104、1×105和1×106倍稀释的稀释液进行平板培养。
(3)微生物的培养与观察：细菌一般在30～37 ℃的温度下培养1～2 d。
每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
[诊断自学效果]1．判断下列叙述的正误(1)选择培养基可以鉴定某种微生物的种类(×)(2)稀释涂布平板法既能分离细菌，也能对细菌进行计数(√)(3)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素(√)(4)筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一氮源(√)2．(2020·东营一模)某些土壤细菌可将尿素[CO(NH2)2]分解为CO2和NH3供植物吸收和利用，但分解产物CO2不能为该菌提供营养。
土壤稀释涂布平板法
实验概要分离、纯化及初步鉴定土壤中的拮抗植物病原菌的放线菌。
实验原理土壤是微生物的“天然培养基”，也是最丰富的菌种资源库，我们可以从中分离出众多放线菌，尤其是可以从耕作土壤中筛选出拮抗植物病原菌的放线菌。
以耕作有武运粳和苏沪香粳的土壤为样品，应用稀释涂布平板法分离各种微生物。
菌落计数后，通过菌落形态观察并挑取放线菌进行划线分离纯化，多次重复后得到单菌落。
在进行放线菌形态等初步鉴定后，将纯化的菌株接入斜面传代保藏。
最后，分离纯化的放线菌，初步鉴定其拮抗性。
拮抗植物病原菌的放线菌的分离纯化在农业增产、作物种植等方面都有着重要的意义。
主要试剂1. 培养基：高氏1号培养基、马铃薯葡萄糖培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基2. 其他试剂：银染液A液B液（细菌鞭毛染色） 40%KOH 5%α-萘酚（V.P.实验）主要设备培养皿试管锥型瓶接种环移液管震荡器电炉载玻片超净工作台恒温培养箱高压蒸汽灭菌锅显微镜等实验材料土样：苏沪香粳1，2组杨稻6号93113，4组武运粳5，6组实验步骤1.稀释涂布平板法(Spread Plate Method)稀释涂布平板法是一种将菌体按比例制备成若干个稀释度，再分别经涂棒涂布培养而进行微生物分离纯化的方法。
(1) 倒平板；(2) 制备土壤稀释溶液连续不断稀释，得到不同稀释度的土壤溶液；(3) 涂布分别吸取三种稀释度菌液，均匀涂于培养基表面；(4) 培养；(5) 划线分离，直到获得纯培养。
2. 平板菌落计数法平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。
计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。
这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。
此法常用于某些成品检定（如杀虫菌剂），生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。
(复习指导)选择性必修3第10单元第34课 微生物的培养技术及应用含解析
第34课微生物的培养技术及应用课程标准要求学业质量水平3.1.1阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提3.1.2阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术3.1.3举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物3.1.4概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法3.1.5概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法3.2.2阐明发酵工程利用现代工程技术及微生物的特定功能，工业化生产人类所需产品3.2.3举例说明发酵工程在医药、食品及其他工农业生产上有重要的应用价值1.基于科学事实，形成培养基的概念，理解培养基的种类、成分及配制配方，并能进行选择培养基配方的设计。
(生命观念科学思维)2.基于事实和证据，运用归纳的方法概括出无菌技术的种类及常用方法与原理。
(科学思维科学探究)3.按照实验操作步骤，使用简单的实验器具进行配制培养酵母菌的培养基、平板划线、消毒和灭菌等的纯培养实验操作，如实记录实验数据，并分析得出结论，写出实验报告并与他人进行必要的交流。
(科学探究)4.能使用简单的实验器具，进行微生物的选择培养及稀释涂布平板法的操作，进行微生物的选择培养及分离与计数实验，如实记录实验数据，并分析得出结论。
(科学探究)5.理解发酵工程的含义，掌握发酵工程的一般流程，并论述生物工程与技术的原理及其与社会之间的关系。
(科学思维科学探究)6.客观分析与评价生物技术产品在生产和生活中的应用，以及所产生的效益和风险。
(科学思维社会责任)一、微生物的基本培养技术 1．培养基的配制(1)培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
(2)培养基的种类按物理性质划分⎩⎨⎧液体培养基↓添加凝固剂（如琼脂）固体培养基(3)培养基的组成成分①主要营养物质：水、碳源、氮源和无机盐。
②其他条件：pH 、特殊营养物质(如维生素)和O 2。
细菌的分离与鉴定
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：
KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4`7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g ①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属 于哪类培养基？ 固体培养基 选择培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按 对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个 小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板, 除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格 (即80个小方格)的酵母菌数. (6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方 格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左 方线上的酵母细胞). (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计 算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.
• 抑制非目的微生物生长
• 从混杂微生物中分离目的微生物
1、利用选择培养基进行直接分离
选择培养基 只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
选择培养基
可抑制细菌、放线 菌细胞壁主要成分 肽聚糖的合成
其细胞壁是由纤 维素、几丁质、 葡聚糖组成
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以 三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌 落数在50个左右为最好。
分离培养细菌的实验报告
一、实验目的1. 学习分离培养细菌的基本原理和方法。
2. 掌握平板划线法和稀释涂布平板法两种分离细菌的方法。
3. 熟悉显微镜的使用，观察细菌的形态。
二、实验原理细菌是一种微小的单细胞生物，具有高度的自我复制能力。
分离培养细菌是微生物学研究中的一项基本技术，通过分离培养，可以纯化细菌，便于对其生物学特性进行研究。
分离培养细菌的方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法。
平板划线法：将细菌涂布在琼脂平板上，用接种环划线，使细菌在琼脂上逐渐稀释，最终形成单个菌落。
稀释涂布平板法：将细菌进行系列稀释，取一定量的稀释液涂布在琼脂平板上，培养后观察菌落形成。
三、实验材料1. 细菌样品：土壤、水体、食品等。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、营养琼脂培养基等。
3. 实验器材：接种环、无菌操作台、酒精灯、镊子、培养皿、显微镜等。
四、实验步骤1. 分离培养细菌（1）取适量细菌样品，加入适量的无菌水，进行系列稀释。
（2）将稀释后的样品涂布在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上。
（3）将平板倒置，放入37℃恒温培养箱中培养。
2. 观察菌落形态（1）用接种环挑取单个菌落，进行平板划线。
（2）将平板倒置，放入37℃恒温培养箱中培养。
（3）观察菌落形态，记录菌落颜色、大小、形状等特征。
3. 镜检细菌形态（1）取适量菌落，加入适量的无菌水，制成悬液。
（2）取一滴悬液，滴在载玻片上，盖上盖玻片。
（3）用显微镜观察细菌的形态，记录细菌的大小、形状、排列等特征。
五、实验结果与分析1. 分离培养细菌在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，观察到多个菌落形成，颜色、大小、形状各异。
2. 观察菌落形态通过平板划线法，观察到单个菌落，菌落形态各异，部分为革兰氏阳性菌，部分为革兰氏阴性菌。
3. 镜检细菌形态在显微镜下观察到细菌的形态，部分为球状，部分为杆状，部分为螺旋状。
六、实验结论1. 成功分离培养出多种细菌。
2. 掌握了平板划线法和稀释涂布平板法两种分离细菌的方法。
3. 熟悉了显微镜的使用，观察到了细菌的形态。
2023年新教材高中生物微生物的基本培养技术讲义(无答案)新人教版选择性必修3
1.2.1 微生物的基本培养技术微生物：难以用___________观察的微小生物的统称。
包括以下类群：病毒（无细胞结构生物）：SARS 病毒、新冠病毒等____________病毒；T 2噬菌体等____________病毒。
细菌（原核生物）：蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等；放线菌：衣氏放线菌等。
真菌（真核生物）：酵母菌、毛霉等；原生生物：草履虫、变形虫等。
防止____________，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是酵工程的重要基础。
实验室培养微生物的条件：①要为人们需要的微生物提供合适的____________和____________条件；②要确保____________无法混入，并将____________分离出来。
一、培养基的配置 1.培养基的概念和类型（1）概念：人们按照微生物对____________的不同需求，配制出供其____________的营养基质，即培养基。
（2）培养基的作用：用以____________、____________、____________、____________微生物或____________其代谢物。
（3）培养基的类型2.培养基的配制（1）基本成分：水、碳源、氮源、无机盐。
①碳源：a.无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-→____________微生物；b.有机碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等→____________微生物。
②氮源：a.无机氮源：NH4＋、NO3-、NH3等。
b.有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、____________、氨基酸等。
注意：含C、H、O、N的有机物是____________微生物的碳源、氮源、能源。
如____________等。
（2）特殊需求：某些微生物对______、特殊营养物质以及_______的需求。
特殊营养物质：____________、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。
（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加____________；②培养霉菌时，需要将培养基调至____________；③培养细菌时，需要将培养基调至____________或____________；④培养厌氧微生物时，需要提供____________的条件。
平板划线法与稀释涂布平板法的区别
平板划线法与稀释涂布平板法的区别
平板划线法与稀释涂布平板法的区别
一、平板划线分离法
由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
用途：一般多用于从菌种的纯化；
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；
缺点：不能计数；
二、稀释涂布平板法：
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。
计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。
一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。
用途：一般多用于筛选菌株。
一般用于平板培养基的回收率计数。
优点：可以计数，可以观察菌落特征。
缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。
如果菌液密度大的话，长不出单菌落。
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平板划线法与稀释涂布平板法的区别
一、平板划线分离法
由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
用途：一般多用于从菌种的纯化；
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；
缺点：不能计数；
二、稀释涂布平板法：
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。
计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。
一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。
用途：一般多用于筛选菌株。
一般用于平板培养基的回收率计数。
优点：可以计数，可以观察菌落特征。
缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。
如果菌液密度大的话，长不出单菌落。