高中生物选修三：稀释涂布法与平板划线法的区别
笔记7微生物的培养技术与应用
笔记7.微生物的培养技术及应用1.微生物的基本培养技术（1）培养基的配制①概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
②类型：A.按物理状态分类培养基种类特点用途液体培养基不含凝固剂，呈液体状态工业生产固体培养基含凝固剂(如琼脂)，呈固体状态微生物的分离、鉴定，活菌计数，菌种保藏B.按化学成分分类C.按功能分类③成分成分含义作用来源碳源提供碳元素的物质构成生物体的细胞的物质和一些代谢产物，有些也是异养生物的能源物质无机碳源：CO 2、NaHCO 3等；有机碳源：糖类、牛肉膏(来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质)等氮源提供氮元素的物质合成蛋白质、核酸等物质无机氮源：N 2、NH 3、铵盐、硝酸盐等；有机氮源：蛋白胨等无机盐为微生物提供除碳、氮之外的各种重要元素，包括大量元素和微量元素为微生物提供无机营养，调节培养基的pH 等无机化合物：KH 2PO 4、K 2HPO 4、NaCl 等水生物体含量最高的无机化合物良好的溶剂，参与化学反应等培养基、代谢产物【特别提醒】除了上述主要营养物质外，还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。
例如，在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素；在培养霉菌时，一般需要将培养基调至酸性；在培养细菌时，一般需要将(2)无菌技术①目的：获得纯净培养物。
②关键：防止外来杂菌的入侵。
培养基种类特点用途天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)微生物的分类、鉴定种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入某些化学物质依据微生物对某些物质的特殊需求或抗性从众多微生物中分离所需的微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培养基中加入某种指示剂或化学药品产生特定的颜色或其他变化鉴别不同种类的微生物用伊红—亚甲蓝培养基鉴别大肠杆菌③区别：消毒与灭菌的比较比较项目条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药物消毒法操作空间、操作者的衣物和手等紫外线消毒法接种室、接种箱或超净工作台灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子高压蒸汽灭菌法培养基、容器等干热灭菌法玻璃器皿、金属用具等灼烧灭菌法接种工具等【特别提醒】选择无菌技术的原则：一要考虑无菌技术的效果，灭菌的效果比消毒要好；二要考虑操作对象的承受能力，活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用灭菌。
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11.哺乳动物早期胚胎培养液的主要成分有哪些？ 提示：无机盐、有机物、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等。
12.什么是胚胎移植？有何优点？ 提示：胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎或通过体外受精及其他方式得到 的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发 育为个体的技术。胚胎移植技术可以充分发挥优良母畜的繁殖潜力，还可以 在短期内获得大量目标个体。
6.理想的载体应具有哪些特征？常用的载体有哪些？ 提示：理想的载体应具有下列特征：①含有复制起点，能够独立自主复制并 稳定存在；②含有一种或多种限制酶的识别序列，方便外源基因插入载体中； ③具有筛选作用的标记基因，以便能够通过表型鉴别含有载体的细胞。常用 的载体有质粒，动、植物病毒及噬菌体。
7.获取目的基因有哪些常用的方法？NA。
3.什么是核酸分子杂交？什么是核酸探针？ 提示：核酸分子杂交是指两个不同来源核酸单链的核苷酸之间碱基互补配对 的过程。核酸探针是带有放射性或荧光标记的具有特定核苷酸序列的DNA或 RNA。
4.利用抗原—抗体杂交技术可以检测目的基因是否表达出相应的蛋白质，其大 致过程是什么？ 提示：以目的基因表达出的蛋白质为抗原，制备能与其特异性结合的并能被 放射性或荧光标记的抗体。如果能探测到目的蛋白，则说明目的基因在受体 细胞内成功表达。
2.什么是灭菌？尿素和葡萄糖能否使用高压蒸汽法进行灭菌？为什么？ 提示：灭菌是指采用强烈的物理、化学方法杀灭物体表面以及内部的一切微 生物的方法。尿素受热会分解，葡萄糖在115 ℃以上会焦化，因此不能使用高 压蒸汽法进行灭菌，通常采用过滤除菌。
3.分离纯化目标微生物的常用方法有哪些？测定微生物数量可用什么方法？ 提示：分离纯化目标微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法；测定微生物 数量常用稀释涂布平板法和显微镜计数法。
第1章 第2节 第1课时 微生物的基本培养技术 讲义【新教材】人教版(2019)高中生物选择性必修3
第2节微生物的培养技术及应用第1课时微生物的基本培养技术课标内容要求核心素养对接1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。
2．阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。
3．概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室进行微生物分离和纯化的常用方法。
1.科学思维：根据微生物的代谢类型分析培养基的组成。
2．科学探究：讨论并掌握无菌技术的实验操作方法；讨论并掌握微生物的纯培养的方法。
一、培养基的配制1．培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
2．培养基的种类3．培养基的营养组成各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质，此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。
二、无菌技术1．获得纯净的微生物培养物的关键：防止杂菌污染。
2．消毒和灭菌(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。
(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。
三、微生物的纯培养1．纯培养：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。
由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。
2．微生物纯培养的步骤：微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。
3．酵母菌的纯培养(1)菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。
(2)获得单菌落的方法：平板划线法和稀释涂布平板法。
判断对错(正确的打“√”，错误的打“×”)1．液体培养基含有水，而固体培养基不含水。
(×)提示：液体培养基和固体培养基都含有水，它们的区别为是否含有凝固剂。
2．获得纯净微生物培养物的关键是防止杂菌污染。
稀释培养和稀释平板测数法
稀释培养和稀释平板测数法稀释培养测数法一、实验目的通过对好气性自生固氮菌的计数，了解稀释培养计数（MPN）的原理和方法。
二、实验原理最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。
其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。
本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。
见附表23-1）的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因不能使用平板计数时才采用。
MPN计数是将待测样品作一系列稀释，一直稀释到将少量（如lm1）的稀释液接种到新鲜培养基中没有或极少出现生长繁殖。
根据没有生长的最低稀释度与出现生长的最高稀释度，采用“最大或然数”理论，可以计算出样品单位体积中细菌数的近似值。
具体地说，菌液经多次10倍稀释后，一定量菌液中细菌可以极少或无菌，然后每个稀释度取3—5次重复接种于适宜的液体培养基中。
培养后，将有菌液生长的最后3个稀释度（即临界级数）中出现细菌生长的管数作为数量指标，由最大或然数表（见附录九）上查出近似值，再乘以数量指标第一位数的稀释倍数，即为原菌液中的含菌数。
如某一细菌在稀释法中的生长情况如下；稀释度 lO-3 10-4 10-5 lO-6 10-7 10-8重复数 5 5 5 5 5 5出现生长的管数 5 5 5 4 1 0根据以上结果，在接种lO-3—10-5稀释液的试管中5个重复都有生长，在接种lO-6稀释液的试管中有4个重复生长，在接种10-7稀释液的试管中只有1个生长，而接种10-8稀释液的试管全无生长。
由此可得出其数量指标为“541”，查最大或然数表得近似值17，然后乘以第一位数的稀释倍数（10-5的稀释倍数为100 000）。
平板划线法与稀释涂布平板法的区别
平板划线法与稀释涂布平板法的区别
一、平板划线分离法
由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
用途：一般多用于从菌种的纯化；
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；
缺点：不能计数；
二、稀释涂布平板法：
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。
计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，
故又称活菌计数。
一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。
用途：一般多用于筛选菌株。
一般用于平板培养基的回收率计数。
优点：可以计数，可以观察菌落特征。
缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。
如果菌液密度大的话，长不出单菌落。
平板划线法与稀释涂布平板法的区别
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平板划线法与稀释涂布平板法地区别
一、平板划线分离法
由接种环以菌操作沾取少许待分离地材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式地连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数地增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜地话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落.
用途：一般多用于从菌种地纯化；
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；
缺点：不能计数；
二、稀释涂布平板法：
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成地单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计地计数方法，即一个菌落代表一个单细胞.计数时，首先将待测样品制成均匀地系列稀释液，尽量使样品中地微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量地稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中地培养基内.经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中地含菌数.此法所计算地菌数是培养基上长出来地菌落数，故又称活菌计数.一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源地污染程度地检验.
用途：一般多用于筛选菌株.一般用于平板培养基地回收率计数.
优点：可以计数，可以观察菌落特征.
缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延.如果菌液密度大地话，长不出单菌落.
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生物学案：第一章第一节微生物的分离和培养第二课时
第二课时无菌操作和接种技术及微生物的分离、培养与数量测定一、无菌操作和接种技术1．接种通常把在______条件下将微生物接入________的操作过程叫做接种。
由于接种方法的不同,采用的接种工具也有区别，如用________进行固体培养基划线接种；用________穿刺接种；用__________涂抹平板等。
2．无菌操作__________是微生物接种技术的关键。
通常在酒精灯________进行接种操作,其原因是：酒精灯火焰附近的________使微生物不能存活。
预习交流1．根据接种工具的区别,分析有哪些接种技术。
2．接种过程中在接种环从菌种管中抽出时，应该注意什么问题？3．无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？二、微生物的分离、培养与数量测定1．分离微生物的依据分离微生物时,根据微生物对________、______、______等要求的不同，通过只提供目的微生物生长的必需条件，或加入__________使____________不能生长，从而达到选择分离微生物的目的。
2．菌落单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，可以形成肉眼可见的、有____________的______________,称为菌落.当______培养基表面众多菌落连成一片时，便成为______.当多种微生物混杂在一起时，根据它们在平板上形成的菌落的________可初步将所需的微生物与其他微生物区分开，并在此基础上获得所需微生物的________.3．分离微生物的常用方法______分离法能将单个微生物______和固定在______培养基表面或里面，每个孤立的活微生物经过______、______均可形成便于移植的菌落。
最常用的分离、培养微生物的固体培养基是________________平板。
平板分离法有多种，如__________和____________就是常用的两种________的方法。
四大类微生物菌落形态的比较和识别
四大类微生物菌落形态的比较和识别一、实验目的和内容目的：1 熟悉四大类微生物菌落的主要特征2 掌握识别四大类微生物菌落形态的依据和要点，并应用于识别未知菌落内容：1 观察已知的四大类微生物菌落特征2 辨认未知的四大类微生物菌落特征实验原理掌握识别四大类微生物菌落形态的要点对于从事菌种的筛选、杂菌的识别和菌种鉴定等项工作都有重要意义。
菌落是由某一微生物的少数细胞或孢子在固体培养基表面繁殖后所形成的子细胞群体，因此，菌落形态在一定程度上是个体细胞形态和结构在宏观上的反映。
由于每一大类微生物都有其独特的细胞形态，因而其菌落形态特征也各异。
在四大类微生物的菌落中，细菌和酵母菌的形态较接近，放线菌和霉菌形态较相似。
菌和酵母菌的异同细菌和多数酵母菌都是单细胞微生物。
菌落中各细胞间都充满毛细管水、养料和某些代谢产物，因此，细菌和酵母菌的菌落形态具有尖似的特征，如湿润、较光滑、较透明、易挑起、菌落正反面及边缘、中央部位的颜色一致，且菌落质地较均匀等。
它们之间的区别如下：细菌：由于细胞小，故形成的菌落也较小，较薄、较透明且有“细腻”感。
不同的细菌会产生不同的色素，因此常会出现五颜六色的菌落。
此外，有些细菌具有特殊的细胞结构，因此，在菌落形态上也有所反映，如无鞭毛不能运动的细菌其菌落外形较圆而凸起；有鞭毛能运动的细菌其菌落往往大而扁平，周缘不整齐，而运动能力特强的细菌则出现更大、更扁平的菌落，其边缘从不规则、缺刻状直至出现迁居性的菌落，例如变形杆菌属和菌种。
具有荚膜的细菌其菌落更粘稠、光滑、透明。
荚膜较厚的细菌其菌落甚至呈透明的水珠状。
有芽孢的细菌常因其折光率和其他原因而使菌落呈粗糙、不透明、多皱褶等特征。
细菌还常因分解含氮有机物而产生臭味，这也有助于菌落的识别。
酵母菌：由于细胞较大（直径约比细菌大10倍）且不能运动，故其菌落一般比细菌大、厚而且透明度较差。
酵母菌产生色素较为单一，通常呈矿蜡色，少数为橙红色，个别是黑色。
(复习指导)选择性必修3第10单元第34课 微生物的培养技术及应用含解析
第34课微生物的培养技术及应用课程标准要求学业质量水平3.1.1阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提3.1.2阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术3.1.3举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物3.1.4概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法3.1.5概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法3.2.2阐明发酵工程利用现代工程技术及微生物的特定功能，工业化生产人类所需产品3.2.3举例说明发酵工程在医药、食品及其他工农业生产上有重要的应用价值1.基于科学事实，形成培养基的概念，理解培养基的种类、成分及配制配方，并能进行选择培养基配方的设计。
(生命观念科学思维)2.基于事实和证据，运用归纳的方法概括出无菌技术的种类及常用方法与原理。
(科学思维科学探究)3.按照实验操作步骤，使用简单的实验器具进行配制培养酵母菌的培养基、平板划线、消毒和灭菌等的纯培养实验操作，如实记录实验数据，并分析得出结论，写出实验报告并与他人进行必要的交流。
(科学探究)4.能使用简单的实验器具，进行微生物的选择培养及稀释涂布平板法的操作，进行微生物的选择培养及分离与计数实验，如实记录实验数据，并分析得出结论。
(科学探究)5.理解发酵工程的含义，掌握发酵工程的一般流程，并论述生物工程与技术的原理及其与社会之间的关系。
(科学思维科学探究)6.客观分析与评价生物技术产品在生产和生活中的应用，以及所产生的效益和风险。
(科学思维社会责任)一、微生物的基本培养技术 1．培养基的配制(1)培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
(2)培养基的种类按物理性质划分⎩⎨⎧液体培养基↓添加凝固剂（如琼脂）固体培养基(3)培养基的组成成分①主要营养物质：水、碳源、氮源和无机盐。
②其他条件：pH 、特殊营养物质(如维生素)和O 2。
苏科版 高中生物学 活动单导学课程 选择性必修3 学生用书 答案
参考答案与提示 活动单导学课程·高中生物学选择性必修3 苏教版第一章 发酵工程第一节 发酵工程的培养基第1课时 发酵工程的培养基及其分类【活动方案】活动一：(1) 水、无机盐、碳源、氮源。
(2) A 中碳源是牛肉膏和蛋白胨，氮源是牛肉膏和蛋白胨；B 中碳源是葡萄糖，氮源是尿素。
碳源是构成微生物体的重要成分，也是微生物生命活动的能量来源。
氮源是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
(3) 让培养基凝固。
不能。
(4) 牛肉膏和蛋白胨能够提供碳源、氮源、维生素(生长因子)和无机盐。
活动二：(1)培养基的类型⎩⎪⎪⎪⎨⎪⎪⎪⎧按照成分的不同⎩⎪⎨⎪⎧天然培养基合成培养基半合成培养基按照物理性质的不同⎩⎪⎨⎪⎧液体培养基固体培养基半固体培养基按照用途的不同⎩⎪⎨⎪⎧基础培养基特殊培养基⎩⎪⎨⎪⎧选择培养基鉴别培养基加富培养基(2) A 是固体培养基，B 是液体培养基。
B 是选择能分解尿素的微生物的选择培养基。
(3) 液体培养基(或加富培养基)、合成培养基、鉴别培养基、选择培养基(或固体培养基)。
(4) 不是的，自养型微生物不需要添加碳源，它可利用空气中的CO 2；固氮微生物不需要添加氮源，它可利用空气中的N 2。
活动三：略【检测反馈】1. A2. C3. D4. B5. A6. D7. D8. ACD第2课时 发酵工程的培养基的配制【活动方案】活动一：(1) 计算→称量→溶化→调pH →过滤、分装、包扎→灭菌(→倒平板)。
细菌。
(2) 牛肉膏和蛋白胨都易吸潮。
(3) 牛肉膏比较黏稠，易粘在称量纸上。
防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。
(4) 是否添加凝固剂(常用琼脂)。
(5) 加热溶化时有水蒸发，需重新定容至一定体积。
(6) 灭菌前，如果灭菌后调pH可能会造成培养基被污染。
培养细菌时，pH调至中性或微碱性；培养霉菌时，pH调至酸性。
(7) 高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌法(或湿热灭菌法)。
(8) 培养放线菌常用高氏Ⅰ号培养基，属于合成培养基；培养酵母菌常用马铃薯葡萄糖琼脂培养基或麦芽汁培养基，属于天然培养基。
高中生物选择性必修三 第二单元 微生物的培养技术及应用((含答案))高二生物单元复习知识清单
第一章发酵工程第2节微生物的培养技术及应用一、微生物的基本培养技术1.研究和应用微生物的前提（即发酵工程的重要基础）：防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物。
（P9）2.在实验室培养微生物的要求：(1)为微生物提供合适的营养和环境条件(培养基）。
(2)要确保其他微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来（无菌技术）。
（P9）（一）培养基的配制1．培养基概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
（P9）2.培养基作用：用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
（P9）3．培养基的分类（按照物理性质分类）（P9）（1）液体培养基：不含凝固剂（如琼脂），呈液体状态。
用途：扩大培养获得大量菌种、常用于工业生产。
（2）固体培养基：含凝固剂（如琼脂），呈固体状态。
用途：分离、计数、鉴定等。
拓展了解：培养基的分类（按照化学成分分类）（1）天然培养基：含化学成分不明确的天然物质。
用途：工业生产。
（2）合成培养基：培养基成分明确。
用途：分类、鉴定。
培养基的分类（按照用途分类）（1）选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长。
用途：培养、分离出特定微生物。
（2）鉴别培养基：在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物。
用途：鉴别不同种类微生物。
4.怎样将液体培养基制成固体培养基？加入适量琼脂。
（P9）5.实验室中最常用的培养基之一：琼脂固体培养基。
（P9）6.微生物在琼脂固体培养基的表面或内部生长，可以形成菌落。
（P9）7.培养基的基本成分：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物的需求。
（P10）质，此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O28.碳源:（1）概念：提供碳元素的物质。
（2）分类:无机碳源，如CO2、CO32-、HCO3-等。
有机氮源，如葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等。
（3）适用范围（一般情况下）添加无机碳源培养基用来培养自养微生物；添加有机碳源培养基用来培养异养微生物。
如何选择细菌接种方法
如何选择细菌接种方法？细菌的接种方法有很多种，如划线法、涂布法、倾注法、斜面接种法、液体培养基接种法、螺旋接种法等，其方法和应用各有不同，下面进行解释以帮助实验人员选择操作。
划线法：此法主要用于菌种分纯，获得单菌落由接种环沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离。
缺点：不能用于菌落计数。
涂布法：此法主要用于菌落总数计数先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液接种在已凝固的琼脂平板上。
再用无菌L型玻璃棒将菌液在平板上涂抹均匀，将涂抹好的平板平放于桌上20~30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。
优点：可以计数，可以观察菌落特征。
缺点：接种前需梯度稀释，吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。
倾倒法：此法主要用于菌落总数的计数吸取1ml菌液加入平板中，倒入已融化并冷却至45~50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。
至长出菌落后即可计数。
优点：可以计数，较方便。
缺点：接种前需梯度稀释，不能观察菌落特征，不适用于严格好氧菌和热敏感菌。
斜面接种法：此法主要用于保存菌种，或观察细菌的某些生化特性和动力用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取用来移种的菌落。
伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线，或直接自下而上地蜿蜒划线。
接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，置于37℃培养。
液体培养基接种法：此法主要用于菌液比浊实验用灭菌接种环挑取菌落或标本，在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌均匀得散落在液体培养基中。
螺旋接种法：此法主要用于菌落总数计数Spiral plater 可以在无任何全部或中间稀释的情况下快速细菌接种。
2023年新教材高中生物微生物的基本培养技术讲义(无答案)新人教版选择性必修3
1.2.1 微生物的基本培养技术微生物：难以用___________观察的微小生物的统称。
包括以下类群：病毒（无细胞结构生物）：SARS 病毒、新冠病毒等____________病毒；T 2噬菌体等____________病毒。
细菌（原核生物）：蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等；放线菌：衣氏放线菌等。
真菌（真核生物）：酵母菌、毛霉等；原生生物：草履虫、变形虫等。
防止____________，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是酵工程的重要基础。
实验室培养微生物的条件：①要为人们需要的微生物提供合适的____________和____________条件；②要确保____________无法混入，并将____________分离出来。
一、培养基的配置 1.培养基的概念和类型（1）概念：人们按照微生物对____________的不同需求，配制出供其____________的营养基质，即培养基。
（2）培养基的作用：用以____________、____________、____________、____________微生物或____________其代谢物。
（3）培养基的类型2.培养基的配制（1）基本成分：水、碳源、氮源、无机盐。
①碳源：a.无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-→____________微生物；b.有机碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等→____________微生物。
②氮源：a.无机氮源：NH4＋、NO3-、NH3等。
b.有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、____________、氨基酸等。
注意：含C、H、O、N的有机物是____________微生物的碳源、氮源、能源。
如____________等。
（2）特殊需求：某些微生物对______、特殊营养物质以及_______的需求。
特殊营养物质：____________、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。
（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加____________；②培养霉菌时，需要将培养基调至____________；③培养细菌时，需要将培养基调至____________或____________；④培养厌氧微生物时，需要提供____________的条件。
高三生物一轮复习《微生物的培养和应用》真题研悟
《微生物的培养和应用》真题研悟一、微生物是实验室培养【教材清单】1.各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
2.消毒是指是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物；灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
3.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。
倒平板要待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
4.微生物接种最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，其结果是在培养基上得到单个菌落。
【名师点读】平板划线法与稀释涂布平板法的比较：【真题精练】1.（2018·全国卷Ⅱ）在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。
回答下列问题：（1）在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具（填“可以”或“不可以”）放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
（2）牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是。
（3）密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能，在照射前，适量喷洒，可强化消毒效果。
（4）水厂供应的自来水通常是经过（填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”）消毒的。
（5）某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是。
1.（1）可以（2）在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少（3）破坏DNA结构（4）消毒液（5）氯气未将锅内冷空气排尽【解题指导】理清实验室和日常生产、生活中常用的消毒和灭菌方法是解答此题的关键。
【解析】（1）能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
（2）煮沸消毒法所用温度高且时间长，易破坏牛奶中的营养物质；巴氏消毒法使用的温度较低，高温瞬时消毒法的温度虽然高，但时间非常短，可杀死大部分微生物，但营养物质不会被破坏。
高中生物选择性必修三生物技术与工程知识点总结
高中生物选择性必修三生物技术与工程知识点总结一、发酵工程1.腐乳制作过程中，毛霉产生蛋白酶，可将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸。
2.泡菜制作过程中利用的微生物主要是乳酸菌，产生的白膜是由于酵母菌导致的。
3.果酒制作过程中，前期需要通气，后期密闭。
果酒与果醋的制作的区别主要是温度和果醋制作过程中需要通入氧气。
4.固体培养基和液体培养基的最主要的区别是固体培养基中加了琼脂。
5.选择培养基是指只允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
6.鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
7.分解尿素的细菌的分离原理：在培养基中以尿素为氮源，只有能合成脲酶的细菌才能生长，缺乏脲酶的细菌因缺乏氮源而不能生长繁殖。
8.土壤中的分解尿素的细菌是因为它们能合成脲酶，将尿素分解成 NH3和CO2，NH3提供N源，CO2不提供C源，只有自养型的生物以CO2作为C源，培养基碱性增强，pH 升高，以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，则pH 升高，说明该种细菌能分解尿素。
9.培养基一般包括哪些成分？水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
在培养乳酸杆菌时，需要添加维生素，培养霉菌时，一般将培养基调至酸性，培养细菌时需要将调至中性或弱碱性，但是乳酸菌的培养需要调制酸性10.平板划线法之前不需要对溶液进行稀释，平板划线法本身就是稀释的过程。
11.平板划线法和稀释涂布平板法都是微生物接种分离的方法。
稀释涂布平板法可以用来计数。
12.纤维素分解菌的分离方法是在培养基中只含有纤维素作为唯一碳源的培养基。
13.观察透明圈的大小时，应该观察的是菌落与透明圈的直径的比值，来判断分解能力。
14.细菌计数板用来计数细菌，血细胞计数版计数较大的，比如说酵母菌、霉菌、真菌等。
【相异构想】平板划线法和稀释涂布平板法-李红云-高三案例3X
高三案例3：平板划线法和稀释涂布平板法撰稿人李红云【问题】平板划线法和稀释涂布平板法是常用的微生物接种方法，同时也用于微生物的分离和计数。
这两种方法存在一定的共性和差异性，学生比较容易混淆。
【原因】1、欠缺实验操作体验，或欠缺理智的实验操作习惯。
2、不善于建构知识框架。
【措施】亲自进行实验操作，并通过模拟实验和绘图理解相关实验原理。
绘图模拟操作（可以借用黑板和彩色粉笔，观察彩色粉笔笔迹的深浅，说明菌液的稀释程度），说明平板划线法和稀释涂布平板法的共性和差异性。
根据操作过程和模拟过程可知，平板划线操作中，只取一次菌种，但连续的划线，可以使菌种在培养基中逐步稀释，在划线的最后区域，能够得到单个细菌，培养后能得到单一菌落，因此，能达到接种细菌和纯化细菌的目的。
但是，因为培养出的菌落不都是单一菌落，因此，不能进行细菌计数。
根据操作过程和模拟过程可知，稀释涂布平板法实际包括稀释菌种和涂布两个环节。
只要取得适宜浓度的稀释菌液，就可以使菌种在培养基中完全分散成单个细菌，培养后得到的菌落全都是单一菌落，因此，不仅能达到接种细菌和纯化细菌的目的，因为培养出的菌落全都是单一菌落，也能进行细菌计数。
可见，稀释涂布平板法比平板划线法操作更复杂，功能也更完善。
可以简单比较为：【检测】1、新课标卷39.[生物—选修1：生物技术实践]（15分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。
某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。
回答问题：（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________和____________。
2、山东卷 34.（8分）（生物—生物技术实验）研究发现柚皮精油和乳酸菌素（小分子蛋白质）均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。
（2）筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或____________接种。
3、（宁夏卷）.【生物——选修1生物技术实践】（15分）（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。
平板划线法和稀释涂布平板法是微生...
14．平板划线法和稀释涂布平板法是微生物接种最常用的方法，有关二者的区别，正确的是（）
比较方面平板划线法稀释涂布平板法
①需在无菌下操作不需无菌操作
②培养皿要靠近酒精的培养皿不需要靠近酒精灯
③不可计算菌液中的活菌数可计算菌液中的活菌数
④需要接种环需要涂布器
A．②④B．③④C．①④D．②③
分析微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
解答解：①平板划线法和稀释涂布平板法都需要在无菌条件下进行，①错误；
②平板划线法和稀释涂布平板法都需要在酒精灯火焰旁进行操作，
②错误；
③平板划线法不可计算菌液中的活菌数，稀释涂布平板法可计算菌液中的活菌数，③正确；
④平板划线法需要用接种环进行操作，稀释涂布平板法需要用涂布器进行操作，④正确．
故选：B．
点评本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记几种微生物常用的两种方法，能对这两种方法进行比较，再结合所学的知识准确判断各选项．。
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高中生物选修三：稀释涂布法与平板划线法的区别
一、平板划线分离法
先倒制无菌琼脂培养基平板，待充分冷却凝固后，在无菌条件下，用接种环沾取少量待分离的含菌样品，在无菌琼脂平板表面进行有规则的划线。
划线的方式有连续划线、平行划线、扇形划线或其它形式的划线。
通过这样在平板上进行划线稀释，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来。
经培养后，可在平板表面形成分散的单个菌落。
但单个菌落并不一定是由单个细胞形成的，需再重复划线1-2次，并结合显微镜检测个体形态特征，才可获得真正的纯培养物。
●用途：一般多用于从菌株的纯化
●优点：简便快速，可以观察菌落特征
●缺点：不能用于计数
二、稀释涂布平板法
该法是将已熔化并冷却至约50℃(减少冷凝水)的琼脂培养基，先倒入无菌培养皿中, 制成无菌平板。
待充分冷却凝固后，将一定量(约0.1 ml)的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用三角形无菌玻璃涂棒涂布，使菌液均匀分散在整个平板表面，倒置温箱培养后挑取单个菌落。
●用途：一般多用于筛选菌株
●优点：可以计数，可以观察菌落特征。
计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。
●缺点：操作相对麻烦。