膀胱癌

国内外研究现状：

尿路上皮癌是起源于尿路上皮的一种恶性肿瘤，主要包括膀胱癌、输尿管癌和肾盂癌，其中以膀胱癌发病率最高，其发生率为1.5-3%，同时在国内也是死亡率最高的泌尿系统肿瘤。尿路上皮癌是一种异质性疾病，其发病过程复杂多变。大多数肿瘤起初呈局限于尿路上皮和固有层的非肌层浸润性癌(T a、T1和原位癌)，20-30%的肿瘤侵及肌层(≥T2)。尽管对所谓的低分级非肌层浸润性肿瘤采取积极地手术治疗和化疗，患者的存活率也仅有50％。临床研究显示，非肌层浸润性膀胱癌五年内的复发率和恶化率取决于癌症的分期和分级，分别位于31-78%和<1%-45%。因此，如何对膀胱癌作出早期诊断和有效的预防膀胱肿瘤的复发已成为泌尿外科迫切解决的重要问题。

目前，尿路上皮癌的检测和监测缺少一种高效无创性的诊断工具。当前，临床诊断及监测最常用的检测方法是膀胱镜检查和尿细胞学检测。膀胱镜检查是一种侵入性检测方法，给病人带来极大的痛苦，可引起感染、损伤、尿道狭窄等并发症，而且对于肉眼不可见、上尿路的肿瘤无法诊断。膀胱镜检查通常与尿细胞学检测相结合，其敏感性在13-75%之间，特异性在85-100%之间。在几家医院(机构)多中心研究中，Grossman与其他专家发布的一项报告指出，利用尿细胞学检测膀胱癌的整体敏感性仅有16%。膀胱镜检查的有创性和尿细胞学检测的低效性要求我们探索一种新的检测手段，需要具有膀胱镜检查和尿路细胞学检查的双重优点：无创、简便、高敏感性、高特异性。

荧光原位杂交技术（FISH）是20世纪80年代末发展起来的一

种分子遗传学技术，用已知的的荧光标记的核酸为探针，按照碱基互补的配对原则，与待检标本中的未知的单链核苷酸特异性结合，形成杂交双链核酸，并通过荧光显微镜检测荧光信号得出结果。这项技术广泛应用于肿瘤生物学、细胞遗传学、。产前诊断、基因定位、基因扩增等领域。细胞内染色体含量的不平衡是引起肿瘤的根本原因，细胞遗传学表现为染色体数目或结构的异常，分子水平表现为DNA片段扩增、缺失、碱基改变等。

l、FISH技术的基本原理

从细胞遗传学角度来看，很多肿瘤细胞内染色体通常会发生畸变，包括数量异常和结构异常。染色体数量异常包括非整倍体和多倍体两种类型，染色体的结构异常包括缺失、断裂、重复、倒位、插入、环状、等臂染色体、微小体、双微体、染色体粉碎化以及双着丝粒或多着丝粒染色体等。1986年Pinkel等在放射性原位杂交的基础上创建了荧光原位杂交(Fluorescence in Situ Hybridization，FISH)技术，其原理是将荧光素标记的小DNA片段作为探针去和染色体或染色质上与之同源的靶序列进行杂交，杂交之后靶DNA也就被标记上了荧光物质，在荧光显微镜下能被激发出荧光，根据荧光信号鉴定每个细胞中的拷贝数，确定探针的位置，进而对染色体数目和结构异常进行分析，方法快捷简便。

2、FISH技术的应用背景

在FISH技术应用于膀胱移行细胞癌诊断以前，临床上主要采用传统的检查方法来对膀胱移行细胞癌进行早期诊断和复发监测，如膀

胱镜、病理组织活检、尿细胞学、输尿管镜或排泄性尿路造影术等。由于膀胱移行细胞癌患者复发率高，且复发后易发展为浸润性癌，所以术后密切随访显得格外重要，目前主要依靠膀胱镜和尿脱落细胞学来监测，当遇到可疑病变时必需进行病理组织活检才能做出明确诊断，这也是比较有效的传统检测手段。然而，一些经验丰富的膀胱肿瘤专家在研究中发现，这种以膀胱镜发现可疑病变再进行组织活检的方法，有37%会出现假阴性的结果，说明膀胱镜不能够对需要活检的部位进行准确定位，易造成漏诊，延误病情。因此，膀胱移行细胞癌的患者需要敏感性更强的无创检查方法，以更好的预测患者的复发和进展，也可减少膀胱镜检查的次数，减少患者的痛苦和并发症。

染色体畸变是恶性肿瘤的一个重要标志，在膀胱移行细胞癌中也会出现。能够显示特异性的DNA序列的FISH法，正逐渐被用来作为诊断恶性肿瘤的一种辅助方法。Halling等对FISH方法和尿脱落细胞学进行了对比研究，发现其阳性率为8l%，明显高于细胞学的58%；特异性为96%，与细胞学的特异性基本相等。因此，这种方法已经显示出对膀胱癌患者的无创性诊断具有高度的敏感性和特异性的优势，可望在膀胱移行细胞癌的诊断和术后监测中得到广泛的应用。

3、FISH技术的临床研究

(1)FISH技术与细胞学检查的比较近年来通过无创性检测尿脱落细胞的遗传学及分子变。化来诊断移行细胞癌的方法越来越成为人们研究的焦点。根据文献中报道的数据可以看出FISH技术在膀胱移行细胞癌的诊断中具有较高的敏感性和特异性，而且在各分期、级别中

的敏感性以及总敏感性均明显高于尿脱落细胞学，尤其在高级别(G3)肿瘤中的阳性率更高，大部分都能达到90%以上，原位癌则达到了100%，特异性与细胞学检测基本相等。

(2)FISH技术与其它无创检查方法的比较

在利用FISH技术检测膀胱癌之前．已有多项检测尿标本诊断膀胱癌的方法，如膀胱肿瘤抗原(Bladder Tumor Antigen．BTA)检测法、尿核基蛋白22(Nuclear Matrix Protein 22，NMP22)检测法、免疫．细胞检查法(ImmunoCyt)、纤维素和纤维蛋白降解产物(FB/FDP)检测法等，它们在膀胱癌的诊断中具有高度的敏感性，而且BTA和FDP检测法可以随着分级的增加而出现明显的敏感性增高的趋势，但上述方法的特异性并不理想，容易受到良性泌尿系统的病变如血尿、尿路感染、膀胱灌注治疗的影响而出现假阳性结果，特异性均不如尿细胞学。

综上所述，绝大多数学者的研究证明，FISH技术在膀胱移行细胞癌的检测中，敏感性明显高于尿脱落细胞学和膀胱镜检查，尤其在高级别肿瘤中的敏感性更高，特异性与尿脱落细胞学基本相等，且不受血尿、尿路感染及膀胱灌注治疗的影响，从而高于其它检测方法，因此，FISH技术在此领域有着非常广阔的应用前景。

可行性报告：

膀胱癌是多基因突变诱导发生的，细胞遗传学表现为结构畸变和染色体数目异常，分子水平表现为DNA片段缺失、扩增、碱基改变等。膀胱癌的遗传学研究主要在细胞遗传学、分子遗传学以及以原位