病理组织学常用制备技术
病理学实验技术
病理学实验技术病理学实验技术是一门关注疾病诊断的学科，是疾病诊断的基础。
它涉及到多种实验技术，如组织学、免疫组织化学、分子生物学等。
这些技术都是通过研究组织和细胞的形态学、生物化学及分子遗传学特征，来揭示疾病的发生和发展。
一、组织学技术1. 组织标本的制备组织标本制备是病理学诊断的基础。
在组织标本制备的过程中，病理学家需要对组织进行取材、固定、脱水、包埋、切片、染色等多个步骤。
其中，固定至关重要，因为只有对组织进行固定，才能保持组织在形态、结构和染色上的稳定性。
2. 组织切片的制备组织切片制备是组织学技术中的另一个关键步骤。
在这个过程中，病理学家会将固定的组织样本切成薄片，使其可以在显微镜下进行观察。
需要注意的是，切片必须足够薄，通常在3-4 μm之间，以确保显微镜下的观察到位。
3. 组织染色技术组织染色技术是通过对组织进行染色来增加组织样本的对比度，以便观察细胞和组织之间的区别。
在组织染色技术中，常用的染色剂包括血液学染色剂，如H&E染色剂及Immunohistochemistry染色技术等。
其中，Immunohistochemistry染色技术可根据抗原-抗体之间的特异性来判断组织和细胞是否存在特定的蛋白质。
二、免疫组织化学技术免疫组织化学技术是利用单克隆或多克隆抗体专门识别和检测组织中存在的化学物质的技术。
这些物质包括细胞表面受体、cytokines、细胞分子、肿瘤抗原等。
该技术可对某种特定的抗原进行定量和定位，从而为诊断和治疗疾病提供帮助。
三、分子生物学技术分子生物学技术是一种应用分子生物学方法和技术来研究疾病发生和发展的学科。
该技术通过研究DNA、RNA和蛋白质的结构、功能和相互作用，来了解疾病的致病机制，并为疾病的诊断和治疗提供更好的方法。
在分子生物学技术中，PCR技术是一种常用的方法。
PCR技术能够通过对DNA进行放大，从而扩增少量DNA，使得对DNA的分析得以进行。
结论综上所述，病理学实验技术涉及到多种技术，包括组织学技术、免疫组织化学技术和分子生物学技术。
病理组织切片制作技术
病理组织切片制作技术病理组织切片制作技术病理组织切片常用的制作方法有三种。
即石蜡切片法，冰冻切片法和火棉胶切片法。
以石蜡切片法为代表，切片的基本制作过程是：组织取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→染片透明→封固。
以上基本过程是互相联系的，任何一环节出现问题，都将使整个切片制作归于失败。
因此应细致、耐心、认真负责，并事先做好计划安排。
一、取材采取病料，要刀剪锐利，剪切时不可挤压，扯拉病料，以防人为损伤。
切取的工具要清洁。
采取病料越新鲜越好，一般不超过死后24小时。
应选择病变部与可疑病变部切取，切取时要由表及里，有浅入深并包括周围正常组织一部分。
特殊病料应根据器官的结构特点切取。
管状，囊状和皮肤组织应注意垂直切取（横切）。
带有薄膜的组织，要防止切时薄膜分离和脱落。
切取组织块大小，以1.5×1.5×0.3厘米为宜，最厚不宜超过0.5厘米。
组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时辨认。
切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中，并做好标记。
二、固定固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组织相似的结构状态。
材料取下后，应迅速固定。
固定液数量应为病理组织块的5到20倍。
由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。
因此，可以放置冰箱内固定，使组织内酶失去作用，细菌也能停止滋生。
最常用的固定液是10%的福尔马林溶液：使用时，用40%的甲醛饱和水溶液10毫升，加水90毫升配成。
三、冲洗固定后的组织块，应将固定液洗去。
一般均用流水（自来水）冲洗12到24小时左右。
及时冲洗尚有停止固定的作用，防止固定过度，有利于制片染色。
冲洗时如不方便用流水冲洗，也可用较大容器盛装水浸洗，每隔相当时间换水一次。
整个浸洗时间比流水冲洗应稍长一些。
酒精固定的组织材料不需冲洗。
病理切片制备步骤
病理切片制备步骤全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：病理切片制备是病理学研究的重要步骤，通过对组织样本的切割、染色和观察，可以帮助医生准确诊断疾病。
下面我们来详细介绍病理切片制备的步骤。
一、组织采集和固定1. 组织采集：首先需要采集患者患病组织样本，可以是手术切除标本、活检标本或尸检标本。
2. 组织固定：将组织样本放入10%中性缓冲福尔马林或其他适当的固定液中，固定时间为6-48小时，确保组织细胞结构不变。
二、脱水和包埋1. 脱水：将固定的组织样本置于不同浓度的乙醇溶液中，逐渐去除水分。
2. 渗透：将脱水的组织样本放入蜡渗透剂中，使组织透明并与蜡充分渗透，以便进行切片。
3. 包埋：将渗透后的组织样本置于熔融的石蜡中，使组织固定在石蜡块中，以便进行切片。
三、切片和染色1. 切片：用旋转式切片机将石蜡包埋的组织块切割成厚度为3-5微米的切片。
2. 染色：将切片放入不同的染色剂中，如血液学染色、组织学染色、免疫组化染色等，以便观察组织结构和细胞形态。
四、封片和观察1. 封片：将染色后的切片放入显微镜玻璃片上，加入透明封闭剂，覆盖玻璃片，制成玻璃切片。
2. 观察：用光学显微镜观察切片，根据细胞形态和染色结果判断组织结构的变化，帮助医生做出疾病诊断。
以上就是病理切片制备的详细步骤，每一步都需要仔细操作和精心处理，以确保获得准确的组织切片和可靠的诊断结果。
希望以上内容对您有所帮助，如果有任何疑问，请随时向专业医学工作者咨询。
【2000字】第二篇示例：病理切片制备是一项关键的医学实验技朧，用于观察疾病组织的形态结构和病变情况。
正确的切片制备步骤对于准确诊断和治疗具有至关重要的意义。
本文将详细介绍病理切片制备的步骤及注意事项。
1. 采集标本：需要从患者身上采集组织标本。
这通常由有经验的医生或技术人员完成，确保采集到的标本完整、无损伤，并配有详细的临床信息。
2. 杀灭固定组织：采集到组织标本后，需要立即将其置入适当的固定液中进行固定。
病理学研究中的组织学技术
病理学研究中的组织学技术病理学是医学中非常重要的一个学科，它是通过对组织、细胞等进行观察和分析来了解人体疾病的发生、发展和变化规律的学科。
而组织学技术则是在病理学研究中必不可少的一个工具，因为只有通过一系列的组织学技术，才能获得准确的组织样本并进行鉴定。
一、组织切片技术组织切片技术是指将组织标本制成一定厚度的切片，使其在显微镜下呈现出清晰、明确的形态，以便进行组织学检验和形态学分析。
组织切片技术分为冷冻切片和石蜡切片两种方法。
其主要区别是前者不需要预先处理组织标本，容易造成组织变性，而后者则需要将组织标本处理成特殊的固态物质以使其能够被切片。
制作组织切片需要借助于显微镜切片机。
首先将组织标本放置在内含有碳酸钙的冷冻剂中。
冷冻剂能够使组织标本迅速冷冻，使其保持形态不变。
然后将冷冻后的组织标本固定在显微镜切片机上，通过旋转一定的角度切割出一定厚度的组织切片。
二、组织固定技术组织固定技术是指将组织标本处置于特定的化学溶液中，以使其形态和细胞结构不发生改变，从而保护组织标本的完整性，为后续的组织学分析提供准确的数据。
目前常用的组织固定技术主要有福尔马林固定和Bouin's固定。
福尔马林固定是最常用的一种固定方法，它的作用是使组织标本中的细胞结构中的亲水性分子固定在其中，从而保持其原样。
福尔马林固定需要将组织标本置于10%~15%的福尔马林溶液中，通常需要处理数小时或过夜才能完成。
而Bouin's固定则是对特定组织标本适用的一种固定方法，用途较少。
三、组织染色技术组织染色技术是指通过将组织标本置于某些化学药物中，使其组织结构染上特定的颜色，以便于显微镜下的观察和分析。
目前常用的染色方法有血液学染色方法和组织化学染色方法。
血液学染色方法通常用于骨髓细胞和其他血液成分的检测。
组织化学染色方法则比较分散，根据不同的配合物和铁盐，组织化学染色的种类和质量也有所不同。
四、组织包埋技术组织包埋技术是将处理后的组织标本置于特定的材料中进行包裹，以便于组织切片和显微镜下的观察和分析。
医学病理学仪器分类
医学病理学仪器分类医学病理学是一门研究人体疾病的学科，它通过研究组织和细胞的形态学、结构及其功能变化，诊断疾病并提供必要的治疗建议。
在医学病理学的研究过程中，各种仪器设备发挥着重要的作用。
本文将介绍医学病理学常用的仪器分类。
第一类：显微镜类显微镜作为医学病理学中不可或缺的工具，用于观察和研究组织细胞的形态学变化。
根据使用类型和增倍倍数的不同，可以将显微镜主要分为以下几类：1. 光学显微镜：光学显微镜是最常见且广泛使用的显微镜，主要透过可见光照射样本进行观察。
根据用途和功能，光学显微镜又可以分为普通显微镜、荧光显微镜和共聚焦显微镜等。
2. 电子显微镜：电子显微镜使用电子束替代光束，能够提供更高的分辨率，从而观察到更细微的细胞结构。
电子显微镜分为透射电子显微镜（TEM）和扫描电子显微镜（SEM）两类，每种显微镜各有其特点和适用范围。
第二类：切片制备类病理学的研究通常需要对组织和细胞进行切片制备，以便进行显微观察。
切片制备类仪器主要包括：1. 切片机：切片机是一种用于制备组织切片的设备。
根据切片原理和操作方式的不同，可以将切片机分为旋转式切片机、滑动式切片机、冷冻切片机等。
这些切片机能够提供不同厚度和形状的切片，以满足不同病理学研究的需要。
2. 脱水机和浸渍机：脱水机和浸渍机用于将组织样本从水中逐步转化为蜡，并使其固定在切片上。
这些设备可以确保样本的稳定性和保持其原始形态。
第三类：染色技术类染色是医学病理学中常用的技术手段之一，通过染色可以使组织细胞的结构更清晰可见。
染色技术类仪器包括：1. 染色机：染色机用于在病理学实验过程中，对组织和细胞样本进行染色处理。
染色机能够控制染色剂的温度和时间，以确保染色质量和均匀性。
2. 脱色仪和脱水机：脱色仪和脱水机用于去除组织和细胞样本中多余的染色剂和水分，以准确显示样本的染色效果。
第四类：数字图像系统类随着科技的发展，数字图像系统在医学病理学中的应用越来越广泛。
病理组织制片总结
病理组织制片总结一、背景介绍病理组织制片是一项重要的临床辅助诊断技术，通过取得患者组织标本并对其进行加工处理，制备出显微镜下可观察的薄片，以供病理医师进行病变分析和诊断。
本文将对病理组织制片的步骤、注意事项以及常见问题进行总结。
二、病理组织制片步骤1. 标本采集与固定标本采集是制备病理组织制片的第一步，应该准确地选取代表性的病变部位进行采集。
常用的标本采集方式包括手术切除、穿刺采样和切片检查等。
采集后，应迅速进行固定处理，以防止组织成分的破坏和细胞学改变。
2. 组织处理与包埋组织处理包括去除标本中的血液、脂肪和黏液等非组织性成分，并进行组织切片的预处理。
常用的预处理方法包括脱水、清洁和透明化等。
之后，将组织标本置于蜡块中，进行包埋处理，以固定组织结构。
3. 组织切片与染色包埋完成后，使用病理切片机将蜡块切割成薄片，并将其放置在载玻片上。
然后，进行染色处理，常用的染色方式包括血液涂片染色和特殊染色等。
染色后，可以更清晰地观察组织的形态和病变特征。
4. 显微镜观察与诊断将制备好的组织切片放置在显微镜下观察，通过对组织形态、细胞结构和病变特征的分析，病理医师可以得出初步的诊断结论。
对于一些复杂的病变，可能还需要进行免疫组织化学染色、细胞学分析或分子生物学检测等进一步的检查。
三、病理组织制片注意事项1. 标本采集与保存标本采集应准确、全面，避免采集到非病变或代表性不足的组织。
采集后，应尽快放入合适的固定液中进行保存，避免组织变性和细胞改变。
2. 组织处理与包埋组织处理过程中，应注意充分去除标本中的血液、脂肪和黏液等非组织性成分，以避免对组织结构的干扰。
在包埋过程中，应确保组织蜡块的质地均匀，以避免制备出的组织切片质量不佳。
3. 组织切片与染色在进行组织切片时，应遵循操作规范，保证切片的厚度和质量。
染色时，应准确掌握染色剂的使用方法和浸泡时间，避免染色效果不理想。
4. 显微镜观察与诊断显微镜观察是病理组织制片的核心环节，病理医师应具备良好的观察技巧和分析能力。
病理学实验报告
实验名称：组织切片观察及病理诊断实验日期：2023年10月25日实验目的：1. 掌握组织切片的制作技术。
2. 学会使用显微镜观察组织切片。
3. 熟悉常见病理变化，提高病理诊断能力。
实验原理：组织切片是病理学诊断的重要手段之一，通过将组织切成薄片，在显微镜下观察，可以观察到组织细胞的结构和形态变化，从而对疾病进行诊断。
实验材料：1. 组织切片：正常组织切片、病变组织切片。
2. 显微镜：光学显微镜。
3. 显微镜附件：切片夹、切片盖、光源、载玻片、盖玻片等。
4. 染色剂：苏木精、伊红、碱性品红等。
实验步骤：1. 切片制备：- 将组织块固定在10%福尔马林溶液中24小时。
- 将组织块进行脱水、透明、浸蜡、包埋等处理。
- 将组织块切成5微米厚的切片。
- 将切片展平，用苏木精染色5分钟，然后用1%盐酸酒精分化，最后用伊红复染。
2. 显微镜观察：- 将染色后的切片放在载玻片上，用切片夹固定。
- 调整显微镜光源，使视野明亮。
- 依次观察正常组织和病变组织切片。
3. 病理诊断：- 观察组织细胞的形态、结构变化，如细胞核增大、核仁明显、细胞浆减少等。
- 分析病变组织的类型，如炎症、肿瘤、坏死等。
实验结果：1. 正常组织切片：- 观察到组织细胞形态规则，细胞核大小一致，细胞浆丰富，细胞间连接紧密。
- 组织结构清晰，层次分明。
2. 病变组织切片：- 观察到组织细胞形态异常，细胞核增大、核仁明显，细胞浆减少。
- 组织结构紊乱，层次不清。
讨论与分析：1. 通过本次实验，我们掌握了组织切片的制作技术，学会了使用显微镜观察组织切片。
2. 我们熟悉了常见病理变化，提高了病理诊断能力。
3. 在实验过程中，我们发现正常组织切片和病变组织切片在细胞形态、结构、组织结构等方面存在明显差异。
结论：1. 组织切片是病理学诊断的重要手段之一，通过观察组织切片可以判断疾病类型。
2. 熟练掌握组织切片制作技术和显微镜观察方法是病理学诊断的基础。
病理学中的组织学技术与病理诊断
病理学中的组织学技术与病理诊断病理学是研究疾病发生、发展以及其影响的科学。
而在病理学中，组织学技术是至关重要的工具，它通过对生物组织进行处理、染色和观察，为病理诊断提供了可靠的依据。
本文将探讨病理学中的组织学技术以及其在病理诊断中的应用。
一、组织学技术的基本原理组织学技术是指通过特定的处理步骤，将生物组织转变为适于显微镜观察的切片。
这些处理步骤主要包括固定、切片、染色和封片等。
首先，固定是将组织中的细胞和分子结构固定在初始状态，以保持其形态和组织结构。
其次，通过切片将固定后的组织切割成薄片，方便后续的染色和观察。
然后，染色是将组织切片进行染色处理，以凸显细胞和组织结构的特征。
最后，通过封片将染色好的组织切片覆盖并固定在玻片上，以便于显微镜观察。
二、组织学技术的常用方法1. 组织固定技术组织固定是组织学技术的基础步骤，常用的固定剂包括福尔马林、乙醛等。
福尔马林是一种常用的固定剂，它通过与细胞中的蛋白质反应，使其发生交联，保持组织的形态和结构。
乙醛则具有较快的固定速度和较好的保护细胞和分子结构的能力。
2. 组织切片技术组织切片是将固定后的组织切割成适当厚度的切片，以便于后续的染色和观察。
常用的组织切片方法包括石蜡包埋技术和冰冻切片技术。
石蜡包埋技术是将固定后的组织经过脱水、透明化和浸渍等处理步骤，最终嵌入到石蜡中，形成坚硬的组织块，再通过切片机将其切割成薄片。
而冰冻切片技术则是将固定后的组织直接冷冻，并通过冷冻切片机将其切割成薄片。
3. 组织染色技术组织染色是通过将组织切片进行染色处理，以增强对组织结构和细胞形态的观察。
常用的组织染色方法包括组织切片染色和免疫组织化学染色。
组织切片染色主要包括血液和组织学常规染色，如哈里斯血液染色和伊红染色等。
而免疫组织化学染色则是利用免疫反应性的抗体对组织中的特定蛋白质进行标记，以实现对相关抗原的检测。
4. 组织切片封片技术组织切片封片是将染色好的组织切片覆盖并固定在玻片上，以便于显微镜观察。
法医病理学组织切片制作
3．苏木素的配方①自然氧化（Ehrlieh）苏木素： 苏木精 2g 铵明矾 3g 无水酒精 100ml 甘油 100ml 蒸馏水 100ml 将上述药品配在一起后装入玻璃瓶中，瓶口罩上数层纱布以防灰尘落入染液，暴露于阳光中或空气中自然氧化（成熟过程），约6周—8周以上，染液配制越久其染色能力越强，可以一次大量配制以备用。
常用脱水剂：溶于水和透明剂的试剂，如酒精、丙酮、正丁醇等。（1）酒精步骤：70％ 80％ 90％ 95％ 100％Ⅰ 100％Ⅱ，一般数小时到12小时，更换一次酒精。 配低浓度酒精时，可用市售95％酒精配制。70％酒精：95％酒精70ml加蒸馏水25ml至95ml；80％酒精：95％酒精80ml加蒸馏水至95ml，依次类推。（2）丙酮 脱水作用与酒精相似，虽其脱水作用比酒精强，但可引起组织块的收缩较，价钱较贵，故不宜用于一般组织脱水，它即有脱水作用又有透明作用，用丙酮固定的材料要小，脱水1～8小时即可。
（三）蜡的种类：1．蜂蜡：是动物体内提取的蜡，颜色微黄故也称为黄蜡，溶点在54℃左右。特点是润滑带有粘性，冬天用量比夏天多。2．石蜡：是由矿物质中提取，质地较疏松，色白。根据蜡的溶点不同又可分为软蜡及硬蜡。 软蜡：50℃以下的石蜡。硬蜡：溶点在50℃以上的石蜡。两种蜡可以混合在一起使用。石蜡熔点有52℃～54℃，56℃～58℃，58℃～60℃，60℃～62℃。
七、切片工具：切片刀、磨刀机、切片机、水浴锅，干燥箱等；载薄片、手术刀、毛笔、弯镊子、托盘、大平皿（展片使用）、烤片盒、蛋白甘油等。（一）切片机种类：轮转式切片机、滑行式切片机（滑动式）、冰冻切片机、超薄切片机等（电镜用）。（二）构造：由四个基本部分组成：刀台、标本台、旋转轮、控制切片厚度的微动装置（标有 l～25或1～50的数字，每一数字代表一个微米）。根据需要调节厚度，一般采用5μm～7μm。蛋白甘油：用鸡蛋清（不要鸡蛋黄）用玻璃棒充分搅拌后用数层纱布过滤后加等量的甘油搅均匀加数颗麝香草酚。
病理组织处理技术
病理组织处理技术病理组织处理技术是病理学中非常重要的一环，它对于病理样本的质量及后续的实验分析具有至关重要的影响。
本文将介绍病理组织处理技术的基本步骤和常用方法，以及在其过程中可能遇到的问题和解决方案。
一、病理组织处理技术概述病理组织处理技术是指对于病理标本进行适当的处理，以便能够得到高质量的组织切片或细胞涂片，以供病理学家进行病变的形态学观察和诊断。
它包括以下几个步骤：标本获取、固定、脱水、清洗、包埋、切片、染色和封片。
下面将一一介绍这些步骤及其相关技术。
二、标本获取标本获取是病理组织处理技术的第一步，关键是确保获取到的标本具有代表性且完整，以便能够准确观察病变的特征。
标本的获取方式因病变类型而异，可以是活检、手术切除标本或尸检。
三、固定固定是为了保持组织的形态结构和细胞内的生物学特性，防止病理变化和细胞溶解。
一般常用的固定剂有福尔马林、乙醛和布洛芬。
福尔马林是最常用的固定剂，具有优异的保护组织结构和抑制细菌生长的作用。
四、脱水脱水是将固定后的组织逐渐置于无水状态，以便后续处理。
常用的脱水剂有乙醇和异丙醇，通常使用逐渐浓度递增的醇溶液进行脱水处理。
五、清洗清洗是将脱水后的组织从醇中清洗出来，以去除固定剂残留的毒性物质或颜色。
清洗通常使用清洁剂，如xylene和苯。
六、包埋包埋是将清洗干净的组织置于固定的位置，通常是在石蜡或树脂中，以保持其形态和结构。
这个步骤需要使用包埋机或手工进行操作。
包埋过程中需要注意样本的定位和方向，以确保切片后能够得到所需的组织结构。
七、切片切片是将包埋的组织切成适当的厚度，以供病理学家观察和分析。
切片通常使用石蜡切片机进行操作，切片的厚度一般为4-6微米。
切片后的组织需要进行染色才能够更清晰地显示细胞结构和病变的特征。
八、染色染色是为了增强组织或细胞的对比度，以便更清晰地观察和分析。
常用的染色方法有常规染色、免疫组织化学染色和原位杂交染色等。
常规染色包括血液学染色、组织学染色和细胞学染色等。
病理组织学标本制作技术
1.切片标本 2.铺片标本 3.涂片标本 4.磨片标本 5.分离标本 6.压片标本 7.正装标本 8.活体标本 9.血管注射标本
二、制作组织切片的方法与步骤
1.动物致死与取材 2.标本的固定 3.标本的切片 4.标本染色 5.标本封固
1.动物致死与取材
(1).击头法 (2).麻醉法 (3).空气栓塞法 (4).电击法 (5).食物中毒法 (6).取材
2. 染色原理
(1).化学作用 (2).物理作用 (3).溶液作用
3. 染色过程
(1).脱蜡与入水 (2).染色，脱水，透明，封固
七、几种特殊染色方法介绍
1.Mallory法 2.武兆发改良的Mallory法 3.神经细胞与神经纤维染色法
2.标本的固定
(1).固定的目的
(2).固定液
1).单纯固定液：有乙醇，甲醛，升汞，冰醋酸，
苦味酸，重铬酸钾，锇酸，丙酮等
①.乙醇 ②.甲醛 ③.冰醋酸 ④.锇酸
2).常用混合固定液： ①.zenker氏液 ②. helly氏液 ③. orth氏液 ④.regaud氏液 ⑤. susa氏液 ⑥. bouin氏液 ⑦. carnoy氏液 ⑧.酒精----福尔马林 ⑨.乙醚----酒精 ⑩.眼球固定液
三、脱水与透明
1.脱水：常用的脱水剂有酒精，丙酮，二氧陆园 及正丁醇。
(1).酒精
(2).丙酮2ຫໍສະໝຸດ 透明：(1).二甲苯 (2).甲苯 (3).香柏油 (4).氯仿
四、包埋
1.石蜡包埋法 2.火棉胶包埋法 3.碳蜡包埋法
五、切片
六、染色：苏木精—伊红染色（HE）
1. HE染色常用色素
(1).苏木精 (2).伊红
17 病理学常用技术的原理及应用
免疫组织化学(免疫组化)和免疫细胞化学是利用抗原抗体的特异性结合反应来检测和定位组织或细胞中的某种化学物质的一种技术，由免疫学和传统的组织化学相结合而形成。免疫组化染色技术不仅有较高的敏感性和特异性，同时具有将形态学改变与功能、代谢变化结合起来，直接在组织切片、细胞涂片或培养细胞爬片上原位确定某些蛋白质或多肽类物质的存在的特点，并可精确到亚细胞结构水平，结合电子计算机图像分析技术或激光扫描共聚焦显微技术等，可对被检测物质进行定量分析。
电镜技术在生命科学领域可用于胚胎及组织发生学方面的观察和研究，如通过电镜可以了解肿瘤间质新生血管芽的发生和形态特点(图17—2、图17—3)；在临床上可用于多种疾病亚细胞结构病变的观察和诊断，特别是肾小球疾病及肌病的诊断；疑难肿瘤的组织来源和细胞属性判定。如一些去分化、低分化或多向分化肿瘤的诊断和鉴别诊断。随着电镜技术的，不断发展以及与其他方法的综合使用，还出现了免疫电镜技术、电镜细胞化学技术、电镜图像分析技术及全息显微技术等。但电镜技术也有其局限性，如设备昂贵、样本制作较复杂；样本取材少。观察范围有限，有时还可能会遗漏信息：当用于辅助肿瘤的病理诊断时，只能判定肿瘤的组织或细胞的来源，不能确定肿瘤的良恶性。
(三)细胞病理学观察
通过采集病变处的细胞，涂片染色后进行观察、诊断。细胞的来源可以是运用各种采集器在口腔、食管、鼻咽部、女性生殖道等病变部位直接采集的脱落细胞，也可以是自然分泌物(如痰、乳腺溢液、前列腺液)、体液(胸腹腔积液、心包积液和脑积液)及排泄物(如尿)中的细胞，以及通过内镜采集的细胞或用细针直接穿刺病变部位(如乳腺、甲状腺、前列腺、淋巴结、胰腺、肝、肾等)，即细针穿刺(fine neecUe aspiI-ation，FNlA)所吸取的细胞。细胞学检查除了用于病人外，还用于肿瘤的普查。该方法设备简单，操作简便，病人痛苦少易于接受，但最后确定是否为恶性病变尚需进一步经活检证实。此外，细胞学检查还可用于对激素水平的测定(如阴道脱落细胞涂片)及为细胞培养和DNA提取’等提供标本。
病理学中的组织学与细胞学检查技术
病理学中的组织学与细胞学检查技术在现代医学领域中，病理学扮演了不可或缺的角色。
病理学通过对体液、组织和细胞进行检测和分析，帮助医生做出诊断并制定治疗方案。
在病理学中，组织学与细胞学作为两项重要的检查技术，为医生提供了宝贵的信息。
本文将详细介绍病理学中的组织学与细胞学检查技术的原理、应用和发展。
一、组织学检查技术组织学检查技术是通过对组织标本进行特殊处理后，使用显微镜对组织结构进行观察与分析的方法。
这项技术的发展，为病理诊断提供了可靠的依据。
1. 组织标本制备组织标本制备是组织学检查技术中的第一步。
临床医生通常从病人体内取得组织标本，例如手术切片、活检切片等。
为了保证组织标本的完整性和可观性，医生通常会在标本取得后立即放入适当的固定剂中，如福尔马林等，以防止组织的自溶和腐败。
2. 组织切片制作在组织切片制作过程中，医生需要将固定的组织标本进行切片。
首先，医生将固定的组织标本浸泡在酒精中，以去除组织中的水分。
然后，医生将组织标本嵌入蜡块中，使其更易于切割。
接下来，医生使用显微刀将蜡块切成薄片，通常厚度约为3-5微米。
最后，医生将切片放置在载玻片上，用盖玻片封闭。
3. 组织染色组织染色是组织学检查技术中的重要步骤。
组织染色可以使不同类型的组织和细胞以不同的颜色显示出来，有助于医生观察和分析组织结构。
最常用的染色方法之一是病理组织学常用的利用组织亲和性试剂的着色技术，如血红蛋白、胶原蛋白和核蛋白的特异染色。
4. 显微镜观察经过染色处理的组织切片被送到实验室，放置在显微镜下进行观察。
医生通过增大显微镜的放大倍数以及调节其他参数，能够更清晰地观察组织的细节结构。
医生可以根据细胞形态、排列方式和颜色来判断组织是否正常。
在观察过程中，医生通常会记录所见情况，并拍摄照片作为病历的重要依据。
二、细胞学检查技术细胞学检查技术是通过对细胞进行采样，然后进行染色和观察，以研究细胞形态和结构，检测细胞异常的一门技术。
1. 细胞采样细胞采样是细胞学检查技术中的关键步骤之一。
常规组织病理技术ppt课件
缺点： ●经酒精固定的标本对核的染色不良，也不利于 染色体的固定。 ●要证明细胞含的脂肪和类脂质时，不能用酒精 固定。 ●如要证明组织内的色素时，不宜以酒精作为固 定剂。 ●不适用于固定大块组织。 ● 酒精价格较贵。
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80%-95%的酒精作为固定剂为好 高浓度酒精组织硬化显著,放置过久组织 收缩明显且质脆,不但影响制片, 组织形态也 不好。 很少单独使用
甲醛氧化 --- 蚁酸与血红蛋白结合—福尔马林色素 避免长时间固定， 固定后流水冲洗
●尿酸结晶可被溶解。
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甲醛固定液的配制:
（1）10% formalin
市售甲醛（浓度为37~40%） 1份
水
9份
(2)中性甲醛 以PH7.2-7.4PBS为溶液配制的甲醛固定液
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优点： ● 如要证明尿酸结晶和保存糖类，则须用 100%酒精固定。 ●在已用别种固定液后，可用70%酒精较 久的保存组织。 ● 酒精既有固定作用，又有脱水作用。
染色
常规染色 染色的目的：增加组织在显微镜下的分辨率
HE染色 主要用以显示各种组织、细胞的一般形
态结构以及疾病过程中病变的发生、发展及修 复的过程。
常规染色 特殊染色
79
（一）染色原理
1、细胞核染色原理：核酸阴离子+苏木素阳离子→蓝色
2、细胞浆染色原理：蛋白质阳离子+伊红阴离子→伊红色
PH值低于蛋白质等电点
传统病理学技术
常规组织病理技术
（formalin固定 石蜡切片 HE）
现代新技术
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免疫组化
HE
乳腺导管
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免疫荧光
HE
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结肠癌 EB病毒原位分子杂交
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可吸收医疗器械植入后组织病理学样本制备与评价方法
可吸收医疗器械植入后组织病理学样本制备与评价方法吸收性医疗器械是一种在体内被生物组织吸收和降解的器械，常见的有可吸收缝线、可吸收支架、可吸收填充物等。
在植入后，对其附近组织的病理学样本的制备与评价可以为了解其生物学行为提供重要依据。
一、组织病理学样本制备方法：1.正常组织解剖法：适用于病理学检查的组织部位在植入材料附近的情况。
通过手术解剖或尸体解剖，将组织样本与植入材料分离。
2.切片刮取法：适用于植入材料附近组织与材料结合紧密的情况。
将切片刮取至载玻片上，进行病理学检查。
3.组织固定法：对于一些可吸收材料可以留在体内一段时间后自行降解的情况。
先将植入材料与周围组织固定，然后取出进行病理学检查。
4.活体切片法：适用于手术过程中或术后立即取材的情况。
在手术中切取组织，快速固定并进行切片，即可进行病理学检查。
二、组织病理学样本评价方法：1.组织学观察：通过显微镜观察组织切片的形态学结构，如细胞形态、细胞排列、细胞内和细胞间物质等，来评价植入材料附近组织的正常或异常变化。
2.组织化学染色：通过染色方法对切片进行染色，如伊红、速酮染色等，以便观察细胞及组织结构的变化，如核分裂、纤维组织生成等。
3.免疫组织化学染色：通过特异性抗原-抗体反应，对组织切片中的一些分子进行染色检测，例如免疫球蛋白、细胞因子等，以评估免疫反应和炎症反应。
4. 分子生物学方法：通过PCR、Western blot等方法检测组织切片中的基因和蛋白质表达水平，在细胞和分子水平上了解植入材料对组织的影响。
5.组织病理学评分：根据组织切片的特异性和定量指标，如炎症程度、纤维化程度、细胞增生程度等，给予不同分数进行评分，以定量评价组织的变化程度。
综上所述，可吸收性医疗器械植入后组织病理学样本的制备与评价方法包括正常组织解剖法、切片刮取法、组织固定法和活体切片法。
样本的评价方法主要包括组织学观察、组织化学染色、免疫组织化学染色、分子生物学方法和组织病理学评分。
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一、组织的固定（一）固定的概念应用各种方法使病理标本尽量保持其离体前状态的过程称为固定（fixation）。
病理标本（样本）离体后，由于微环境的变化将发生自溶和（或）腐败，使其结构破坏。
固定的目的和机制是：①使蛋白质凝固，终止或减少分解酶的作用，防止自溶，保存组织、细胞的离体前结构状态，包括保存组织或细胞的抗原性，使抗原不失活，不发生弥散。
②保存组织、细胞内的蛋白质、脂肪、糖原、某些维生素及病理性蓄积物，维持病变的特异性特征。
③使上述物质转为不溶解状态，防止和尽量减少制片过程中人为的溶解和丢失。
④起助染作用。
固定方法有：①物理学方法，如低温冷冻，干冰（dry ice，即固态无水碳酸）冰冻真空脱水，石蜡渗入法。
②化学方法，采用各种化学溶液作固定液，使组织细胞进入固定状态。
这是国内最常用的方法。
固定应在标本离体后尽快进行，小标本可在取材后直接放入固定液内，大标本应在手术结束前或结束后迅速放入固定液内。
固定液与标本的比例不得少于标本体积得5倍。
有特殊要求者应事先选定相应得固定液，如欲查糖原，应选择无水乙醇作固定液等。
固定得时间应适当，微小标本（如胃粘膜等）2～4h即可，大标本应置放12～24h，但亦不要过久，以免影响抗原性，造成免疫组化操作中得困难。
（二）常用固定液及其配制固定液分单纯固定液和混合固定液。
1.甲醛（formaldehyde）是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。
易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37％～40％得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）。
用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4％。
10％福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。
对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。
经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。
2.乙醇无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。
固定用一般是80%~95%浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水，因此核的着色不良。
3.中性甲醛液（混合固定液）甲醛（浓）120ml，加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）4g，磷酸氢二纳（Na2HPO4）13g。
此液固定效果比单纯10％福尔马林要好。
4.AF液（混合固定液）95％乙醇90ml，甲醛(浓)10ml。
也有配方是95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml，冰醋酸5ml。
此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水。
以上4种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为10％福尔马林，乙醇应尽量不用。
二、常规石蜡切片操作（一）组织洗涤经过固定的组织一般都要洗涤（washing），其目的是清除组织内外残留的固定剂，以免影响脱水等后续过程；防止有些固定剂在组织中发生沉淀或结晶而影响观察。
洗涤时最好是从容器的底部入水，再从容器上面缓慢流出，这样2h即可，若为陈旧标本则需24h。
（二）组织脱水1.概念为保证石蜡有可能进入组织内部，采用适当方法，将已固定和水洗过的组织中的水分彻底驱除的过程称为脱水（dehydration）。
脱水剂必须是与水在任何比例均能混合的液体。
最常用的脱水剂为乙醇，其它尚有正丁醇和二氧已环以及丙酮等。
2.浓度与时间脱水用的乙醇浓度一般从70％~75％开始，然后依次80％→95％→100％，即由低浓度逐步到高浓度。
脱水的时间与组织大小、厚薄有很大关系、组织厚大，脱水时间要长些；而小薄的组织脱水时间相对的可以短些。
组织脱水时间在低浓度乙醇中可以长些（如70％~80％），而在高浓度乙醇中要短些，这是因为高浓度的乙醇渗透力不强，延长脱水时间无益，相反高浓度乙易使组织收缩、变脆，致使以后切片和观察困难。
（三）组织透明采用既能与脱水剂（如乙醇）混合，并使之被提去（dealcoholisation），又能作为石蜡溶媒的诱导剂，使石蜡真正渗入组织中的过程称为媒介（intermediary）。
由于常用的透明剂（如二甲苯）作用之后，其折射指数与组织蛋白折射指数接近，组织显示出半透明状态，因此，通常又称此过程为透明（clearing）。
但并非所有媒介过程均使组织透明。
常用的透明剂为二甲苯，它易使组织收缩、变脆，故透明时间不宜长，一般1..5~2h，二节（即换2次，下同），最好是肉眼观察，见组织呈棕黄*色或暗红色透明状（象琥珀样）即可。
（四）组织浸蜡组织经媒介（透明）处理后，置入熔化的石蜡内浸渍，使石蜡分子浸透入组织中的过程称浸蜡或石蜡渗透（infiltrating）。
渗透的过程也可用火棉胶代替石蜡，称为浸胶。
但其透明过程应作相应更动。
浸蜡一般分2~3节，总共4~24h，浸蜡时间过短，蜡没有完全渗入组织中，组织过软，切片困难；浸蜡时间过长，造成组织硬脆，切片也困难。
（五）组织包埋把浸蜡的组织包在蜡里成块，使之有一定的硬度和韧度，便于在切片机上夹持切片，称之为包埋（embedding）。
1.注意事项（1）包埋框要比组织块大，这样保证包成的蜡块组织四周都有蜡边。
（2）胃、肠、胆囊等组织，应将能看到组织学各个层面的一面作为切面。
其它组织应将切面朝下。
（3）包埋蜡冬季用低熔点（56~58℃），夏秋季用高熔点蜡（60~62℃）。
（4）包埋蜡最好是经多次熔化、沉淀过的蜡，这样的蜡干净、致密，利于切片。
2.脱水机脱水、透明、浸蜡时间⑪70％乙醇1h。
⑫80％乙醇1h。
⑬95％乙醇Ⅰ1h。
⑭95％乙醇Ⅱ1h。
⑮95％乙醇Ⅲ1h。
⑯100％乙醇Ⅰ1h。
⑰100％乙醇Ⅱ1h。
⑱二甲苯Ⅰ30min。
⑲二甲苯Ⅱ1h。
⑳浸蜡Ⅰ1h。
⑴浸蜡Ⅱ1h⑵浸蜡Ⅲ2h以上。
3.手工组织脱水、透明、浸蜡时间⑪70%乙醇1.5h.⑫80%乙醇1.5h.⑬95%乙醇从上午下班前进入直到下午上班。
⑭100%乙醇Ⅰ30min⑮100%乙醇Ⅱ30min⑯二甲苯Ⅰ15min⑰二甲苯Ⅱ30~60min(肉眼观察透明即可)⑱浸蜡过液。
手工浸蜡只有一节，故在组织透明后将沾在组织上的二甲苯尽量多去掉（一般是将组织倒在铺有数层滤纸上，再一个个拣回，或将整个脱水篮用力甩几下），再浸蜡。
（六）组织切片1.切片过程把切片刀架上，固定紧，然后将蜡块在切片机固定器上夹紧。
先修块，左手转推进器，右手转轮盘，直到把组织全部切出，这时左手松掉推进器而持毛笔，右手旋围轮盘，蜡片切成后，右手用小镊子摄蜡片，左手用毛笔沿刀锋轻轻把蜡片分开，切面朝下把切片放入50℃水中,摊平后用镊子轻轻将连续蜡片分开,再用载玻片捞起,蜡片应捞在玻片的1/3处,蜡片厚度一般在3~5μm。
2.注意事项①切片前蜡块要冷冻，这样容易切片，特别在夏秋季一定要冷冻，但不能把刚包埋好的热蜡块冷冻，否则会造成蜡块裂痕，一夹就碎。
②写号码用优质碳素墨水或用一边毛砂处理的载玻片时用铅笔写号即可。
不需配制蛋白甘油。
③如遇难切的蜡片时，可用与蜡块切面差不多大小的薄纸潮湿后贴在蜡块上切片，然后将附有蜡片的一面朝上放入水中漂片。
④如遇易脱片组织（如血凝块、脑组织）时，可将载玻片上涂少许蛋白甘油后再捞片或用多聚赖氨酸处理过的玻片。
⑤总是切不出完整的蜡片，或皱缩或卷片，可能是刀不快。
⑥切出的蜡片总是皱缩，也可能是切片角度不对，慢慢调试，一旦有最佳磨刀角度和切片角度后不要随意改变。
⑦切片厚薄不匀或空片，可能是刀未固定紧或蜡块未夹紧，也可能是切片机有问题。
⑧烤片时间与温度有关，一般时间宁长勿短，否则会造成脱片。
62℃6h以上，90℃15min 以上。
⑨连续切片放入热水漂片时，不要捞取第一、二张蜡片，因为前2张蜡片厚、组织有空洞（镜下可见）。
⑩如遇硬脂酸石蜡处理的蜡块时，切的蜡片不能直接入热水漂片，否则蜡片会散碎而应先入冷水，然后再慢慢加热水。
为了不影响切片、特殊染色及免疫组化的效果，目前，不用硬脂酸石蜡来代替二甲苯、石蜡。
（七）HE染色1.原理HE染色也称苏木精-伊红染色，它是常规染色。
苏木精是一种天然染料，它本身并不能染色，在经氧化后变成苏木红才是真正的染料，苏木对细胞核的亲和力并不强，而在媒染剂的帮助下才能较好显示细胞核，此时细胞核呈红色，只有在碱性环境中，苏木才变成蓝色。
伊红Y是人工全盛染料，它可能是通过渗透或弥散作用完成染色的，因此和组织万分结合是不牢固的。
它对细胞质着色。
2.染色程序①脱蜡a.二甲苯Ⅰ5~10minb.二四苯Ⅱ5~10minc.100%乙醇1~2mind.95%乙醇1~2mine.自来水洗②染色a.苏木精浸染5minb.自来水洗c.1％盐酸乙醇分化数秒d.自来水洗e.蓝化（50℃左右温水）数分钟f.伊红浸染数秒g.自来水洗③脱水、透明、封片a.95％乙醇1minb.100%乙醇Ⅰ1minc.100%乙醇Ⅱ1mind.100%乙醇Ⅲ1mine.二甲苯-石碳酸液（3：1）1minf.二甲苯Ⅰ1ming.二甲苯Ⅱ1minh.滴中性树胶，盖盖玻片3.注意事项①二甲苯脱蜡时间冬季长些，夏季可短些，为防止脱蜡不净影响染色，脱蜡时间宁长勿短。
②盐酸乙相离分化时间灵活掌握，可以在切片蓝化后镜下观察。
③染色后的脱水透明也很重要，若脱水不完全，切会会模糊不清，脱水的乙醇要保持纯度，切片在进入脱水乙醇前尽量把水多去掉。
④若用Harris苏木精液时，染色前要先用一张纸把液体表面的结晶捞去，否则会污染切片。
⑤在脱水透明时，二甲苯一石碳酸的作用利于透明，此步故也可省去。
⑥HE染色虽是常规染色，但是要制出一张完美的HE切片并不是易事，如两种颜色的深浅对比、与染液的浓度、染液的新旧、染色时间有关，需每位操作者灵活运用。
4.染色液的配制①Gill改良苏木精液苏木精2g，无水乙醇250ml，硫酸铝17.6g，蒸馏水750ml，碘酸钠0.2g，冰醋酸20ml。
先将苏木精溶于无水乙醇，硫酸铝溶于蒸馏水，再将两液混合后加碘酸纳，最后加入冰醋酸。
此配方为半氧化苏木精液，碘酸纳为氧化剂，硫酸铝为媒染剂，此液不会产生沉淀并很少有氧化膜。
②沉淀酸化伊红丫乙醇液伊红丫20g，蒸馏水500ml，浓盐酸10ml。
将伊红与蒸馏水混合溶解后加入浓盐酸，搅拌，过夜。
过滤、滤液不要，用蒸馏水多次冲洗滤纸中的沉淀，然后将沉淀物连同滤纸一起入温箱中干燥，用95％乙醇1000ml配成饱和液。
使用前取饱和液1份，95％乙醇2~3份，配成染色液。
在用此液染色前最好将切片先在95％乙醇中过一下，以保护染色液。
③盐酸乙醇分化液\70％乙醇99ml加浓盐酸1ml。
三、快速石蜡切片操作（一）应用范围（1）替代冷冻切片，在没有条件制作冷冻切片的单位，用作术中诊断；（2）快速诊断：适用于门诊外地患者，1天可取报告。
（二）切片制作（1）将送检的各类组织按《规范》（一）编号登记、眼观、描述记录后，用大头针和羊皮纸包好，投入配制好的固定液烧杯内5~10min(固定液配制：95％乙醉85ml，甲醛10ml，冰醋酸5ml)；若组织较厚，可在预固定后修薄，重复固定；（2）无水乙醇、丙酮脱水3~5min；（3）浸蜡5min；（4）常规石蜡包埋，或封固于预制好的蜡块内；（5）常规HE加温染色。