实验六植物抗氧化酶活性的测定
玉米抗氧化实验报告
一、实验目的1. 探究玉米中的抗氧化成分及其活性。
2. 评估玉米提取物的抗氧化能力。
3. 分析玉米提取物的抗氧化机制。
二、实验材料与仪器材料：- 新鲜玉米（品种：黄玉米）- 无水乙醇- 超声波清洗器- 离心机- 721型分光光度计- 抗氧化活性测定试剂盒仪器：- 电子天平- 超声波处理仪- 恒温水浴锅- 移液器- 试管三、实验方法1. 玉米提取物的制备：- 将新鲜玉米去皮去须，洗净后切成小块。
- 使用无水乙醇对玉米进行超声波提取。
- 提取液经离心后得到玉米提取物。
2. 抗氧化活性测定：- 采用抗氧化活性测定试剂盒对玉米提取物进行活性测定。
- 依据试剂盒说明书进行操作，测定玉米提取物的抗氧化活性。
3. 抗氧化机制分析：- 通过自由基清除实验（DPPH自由基清除实验、超氧阴离子自由基清除实验等）和抗氧化酶活性测定（超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等）来分析玉米提取物的抗氧化机制。
四、实验结果1. 玉米提取物的制备：- 通过超声波提取法，成功制备了玉米提取物。
2. 抗氧化活性测定：- 玉米提取物的抗氧化活性测定结果显示，其DPPH自由基清除率可达70%以上，超氧阴离子自由基清除率可达60%以上。
3. 抗氧化机制分析：- DPPH自由基清除实验结果表明，玉米提取物对DPPH自由基具有较强的清除作用。
- 超氧阴离子自由基清除实验结果表明，玉米提取物对超氧阴离子自由基具有一定的清除作用。
- SOD、GSH-Px活性测定结果显示，玉米提取物能够提高细胞内SOD、GSH-Px活性，从而清除自由基，发挥抗氧化作用。
五、讨论1. 玉米中含有丰富的抗氧化成分，如多酚、黄酮类化合物等，这些成分具有清除自由基、抗氧化、抗炎等作用。
2. 通过超声波提取法，可以有效地提取玉米中的抗氧化成分，提高提取物的抗氧化活性。
3. 玉米提取物对DPPH自由基和超氧阴离子自由基具有较强的清除作用，表明其具有较强的抗氧化活性。
植物抗氧化酶的活性测定
植物抗氧化酶的活性测定1植物预处理将植物根和shoots（特指陆生植物所有地上的部分。
少数在地下生长；包括茎、叶、花、果、种子等等）分别在液氮中冷冻，用预冷的研钵和液氮使样本在不含1,4－二硫苏糖醇的QB bufer中形成均质[用于SOD、CAT和GST测定]。
对于GR检测，每克组织添加50mg聚乙烯基吡咯烷酮。
粗匀浆在4℃下15000 g离心15min，将上清液置于−20℃下冷冻。
2活性测定以牛血清白蛋白为标准，采用布拉德福德Bradford法（考马斯亮蓝法）测定蛋白浓度。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：该方法不适用于小分子碱性多肽的定量测定，如核糖核酸酶或溶菌酶。
去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。
如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定；2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。
如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。
通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线；3．将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同（最好用PBS）；4．按1：4用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去；5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。
染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。
注意，显色反应不得超过30min；6．根据标准曲线计算待测样本的浓度（缺点，线性拟合效果不好）。
注：考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。
待一两周左右，皮屑细胞自然衰老即可脱落。
2.1SOD（超氧歧化酶，具有抗氧化和抗衰老的作用，其作用机理主要是清除对机体有害的超氧阴离子自由基(O2-)）活性的测定参照Roth和Gilbert的方法。
抗氧化酶测定实验方法
植物组织中丙二醛（MDA）含量的测定一、原理植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛(MDA)是膜脂过氧化的最终分解产物，其含量可以反映植物遭受逆境伤害的程度。
MDA从膜上产生的位置释放出后，可以与蛋白质、核酸反应，从而丧失功能，还可使纤维素分子间的桥键松驰，或抑制蛋白质的合成。
因此，MDA的积累可能对膜和细胞造成一定的伤害。
丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3，5，5—三甲基恶唑-2，4。
二酮)，其最大吸收波长在532nm。
但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm，但532nm处也有吸收。
植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA—TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。
低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532、450nm处的吸光度值，所以在蔗糖、MDA与TBA显色反应中需一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为每克千重100—300ug·g-1，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3+的终浓度为0．5umol·L-1。
二、方法直线回归法MDA与TBA显色反应产物在450nm波长下的吸光度值为零。
不同浓度的蔗糖(0—25mmol·L-1)与TBA显色反应产物在450nm的吸光度值与532nm和600nm处的吸光度值之差成正相关，配制一系列浓度的蔗糖与TBA显色反应后，测定上述三个波长的吸光度值，求其直线方程，可求算糖分在532nm处的吸光度值。
UV-120型紫外可见分光光度计的直线方程为：Y532＝-0．00198十0．088D450 (44—1)D450、D532、D600分别代表450、532和600nm波长下的吸光度值。
研究生植物生理学实验教案
研究生植物生理学实验教案教师：***农学院生物技术系实验一 植物抗氧化酶活性的测定植物抗氧化酶包括超氧化物歧化酶（SOD ）、过氧化氢酶（CAT ）、过氧化物酶（POD ）等。
它们普遍存在于植物的各种组织中，可以通过催化植物体内的活性氧，防止发生氧化反应。
所以抗氧化酶活性与植物的代谢强度及逆境适应能力有密切关系，经常被用来衡量植物的抗性强弱和衰老程度。
一、超氧化物岐化酶活性测定超氧物歧化酶（SOD ）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基（•2O ）的酶，它催化下列反应：2反应产物H 2O 2可被过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。
因此SOD 有保护生物体免受活性氧伤害的能力。
已知此酶活力与植物抗逆性及衰老有密切关系，故成为植物逆境生理学的重要研究对象。
【原理】本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT ）在光下的还原作用来确定酶活性大小。
在有可氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生•2O ，•2O 可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲。
后者在560nm 处有最大吸收，而SOD 可清除•2O 从而抑制了甲的形成。
于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。
一个酶活性单位定义为将NBT 的还原抑制到对照一半（50％）时所需的酶量，据此可以计算出酶活性大小。
【仪器与用具】高速台式离心机；分光光度计；微量进样器；荧光灯（反应试管处光照强度为4000lx ）；试管数支；黑色硬纸套。
【试剂】1．50mmol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）。
2．提取介质50mmol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1％聚乙烯吡咯烷酮）。
3．130mmol/L 甲硫氨酸（Met ）溶液：称取1.939 9g Met 用磷酸缓冲液定容至100ml 。
4．750μmol/L 氮蓝四唑（NBT ）溶液：称取61.33mg NBT 用磷酸缓冲液定容至100ml ，现配先用，避光保存。
植物组织SOD活性测定
植物组织SOD 活性测定一、实验目的1、了解还原法测定抗氧化酶活性的原理与方法。
2、熟悉植物叶片ROS 清除机制。
二、实验原理植物在受到光、温度、干旱、盐、碱等胁迫时会产生活性氧和自由基，而活性氧和自由基会抑制植物生长、损伤细胞结构和功能、使膜脂过氧化、破坏生物大分子的结构功能等。
植物本身也会抵抗这种逆境，其自身的酶系统和非酶系统会产生相应的物质以清除活性氧和自由基，酶系统：超氧化物歧化酶（SOD ），超氧化物酶（POD ），过氧化氢酶（CAT ），抗坏血酸过氧化物酶（APX ）；非酶系统：维生素系列（Vce ），谷胱甘肽（GSH ）。
核黄素在照光条件下会将氧气还原为超氧阴离子自由基，超氧阴离子自由基与NBT 作用会产生蓝色的甲䐶，而SOD 会抑制超氧阴离子自由基与NBT 的反应。
三、材料未处理的小麦叶片；0℃处理小麦叶片3-5min 。
四、试验步骤1、酶液提取：称量小麦叶片（ck 、0℃）各0.5g ，预冷研钵，加2ml 预冷提取介质（磷酸缓冲液），冰态研匀浆，介质冲洗研钵2-3次，定容10ml 。
取5ml ，两管平衡（0.01g ），对角线放置，4℃离心10min ，取上清液（粗酶液）。
2、显色反应取4支专用试管，按下表加入试剂 1（As1） 2（As2） 3（照光） 4（不照光，调零）buffer1.51.51.51.5OH O H O O H O H O H OH O H O O POD CAT SOD222222222222−−→←+−−→−→→→•−−−→−•-met 0.3 0.3 0.3 0.3 NBT 0.3 0.3 0.3 0.3 EDTA-Na 2 0.3 0.3 0.3 0.3 20uml 核黄素 0.3 0.3 0.3 0.3 粗酶液 0.1 0.1 0 0 ddH 2O0.50.50.60.6混匀后4号罩黑布，其它各管在4000lux 光下反应20min （25-30℃）根据酶活调整反应时间，反应结束后遮黑布终止反应，4号作空白调零，560nm 测吸光值。
抗氧化酶测定实验方法
抗氧化酶测定实验方法抗氧化酶是一类能够抵御细胞对氧自由基的毒性的酶。
抗氧化酶包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）等。
这些酶在细胞内能够将有害的氧自由基转化为无害的化合物，从而起到保护细胞免受氧自由基反应的毒性作用。
因此，测定抗氧化酶的活性能够反映细胞对氧自由基的抵御能力，对研究氧化应激、疾病发生机制等具有重要意义。
以下是一种常用的抗氧化酶测定方法的详细步骤：实验材料和试剂：1.组织样本或细胞培养物2.生理盐水（PBS）3. 超氧化物歧化酶(Abfrontier, LF-MA0011, 200U/mg, 冻干粉)4. 过氧化氢酶(Sigma, P2927, ≥2,000,000 units/mg protein, 溶于水)5. 谷胱甘肽过氧化物酶(Sigma, G5911, ≥300 units/mg protein,冻干粉)6. 过硫酸铵（Sigma, A9294）7.磷酸盐缓冲液(pH7.4，0.1M)8.丙酮9. 硫酸(Sigma, 1.84 M)10. 精氨酸(Sigma, A8094)11. 苯胂(Sigma, A8731)12. 硝基蓝色素(Sigma, N-5511)14. 高锰酸钾(Sigma, S2547)16. 硝基咪唑(NBT，Solarbio, S8190)17. EDTA二钠(Sigma, E6635)18. BSA(Sigma, A7906)19. 氯化三联氨(Sigma, A2251)20. Tris缓冲液(pH 8.0，0.1M)21. 高吉人(ABClonal, HRP-6002，5,000 IU/mg, 冻干粉)23.氯仿24.醋酸乙酯26.乙酸钠28. 脑磷脂(纯度≥98%，Shenggong, 1003J)30.SDS-试剂盒步骤：1.制备样本：将组织样本或细胞培养物均匀取样，使用PBS洗涤并平均分配到多个离心管中。
7 实验6 植物NR活性的测定(活体法)
福建农林大学-植物生理生化实验室/柯玉琴
《植物生理生化实验A》
硝酸还原酶是一种诱导酶，诱导物是NO3- ， 光照可促进硝酸盐的还原过程。
学 大 诱导酶：又称适应酶，指植物体内本来不含有， 林 农 但在特定外来物质的诱导下可以生成的酶。如硝 建 福 学 大 酸还原酶可为NO3-所诱导。 林 农 建 例如：水稻幼苗本无硝酸还原酶，但如果培 福 养在硝酸盐溶液中，水稻体内就会诱导生成硝酸
学 大 林 农 建 福
学 大 林 农 建 福
福建农林大学-植物生理生化实验室/柯玉琴
《植物生理生化实验A》
五、试剂配制：
1、0.2mol/L 硝酸钾 学 大 2、0.1mol/L 的磷酸缓冲液，pH=7.5 林 农 A 液：0.2mol/L NaH PO 2 4 建 福 学 B 液：0.2mol/L Na HPO 2 4 大 林 3、1%磺胺 农 建 福 4、0.02%萘基乙烯胺 5、亚硝酸钠标准液 6、30%三氯乙酸
福建农林大学-植物生理生化实验室/柯玉琴
《植物生理生化实验A》
白天和夜晚植物还原硝酸盐的速度是否 相同？为什么？
植物对硝酸盐的还原速度白天显著快于夜晚。这 学 大 是因为白天光合作用产生的还原力及丙糖能促进硝酸 林
农 建 盐的还原。 福
学 大 林 农 建 福
还有为什么测定硝酸还原酶的材料要 白天在强光下，大量光合产物运至细胞质中， 参与糖酵解反应，形成更多的NADH，加速硝酸盐的 进行一段光合作用后取样测定？ 还原。
学 大 叶片要用打孔器取样(或用剪刀剪成大小一致的小块)。 林 农 建 无机磷对NR活性有促进作用，因此常用磷酸缓冲液。 福 学 大 活体法酶促反应在暗条件下进行，以防止亚硝酸盐还原为氨。 林 农 亚硝酸的磺胺比色法比较灵敏，显色速度受温度和酸度等因 建 福 素的影响.因此标准液与样品的测定应在相同条件下进行，
抗氧化酶活性等测定方法
抗氧化酶活性等测定方法叶绿体得提取一、试剂配置1、PBS提取液:每L水依次加入MES(195、2×0、05=9、76g)、山梨糖醇(0、33×182、2=60、126g)、NaCl(0、010×58、5=0、585g)、MgCl(0、002×95=0、19g)、EDTA(292、25×0、002=0、5845g)、KH2PO4(200×0、0005=0、1g);使用时加入ASA-Na(198、1×0、002=0、3962g);2、悬浮液:将PBS提取液中得MES换为238、3×0、05=11、915g得HEPES(238、3×0、05=11、915g);3、80%Percol:80ml原液+20ml水;40%Percol:40ml原液+60ml 水;实际配制:PBS提取液2000ml(3个处理*2个品种*3个重复*20ml*3次=1080ml),悬浮液100ml(3个处理*2个品种*3个重复*1ml*3次=54ml);80%Percol 200ml; 40%Percol 200ml、(3个处理*2个品种*3个重复*3ml*3次=162ml)二、提取步骤1、10g鲜样加20ml提取PBS(50mM MES PH6、1,含0、33M 山梨糖醇,10mM NaCl,2mM MgCl2,2mM EDTA,0、 5 mMKH2PO4,2mM ASA-Na,ASA-Na使用前现配现加)2、快速研磨,使叶片碎成绿豆粒大小,4层纱布过滤,去除残渣(注意过滤时不可用力挤压,以免叶绿体膜破碎)3、滤液2000g 3min,小心倒出上清液,将离心管放入离心机后,使离心机得加速很快上升到预定值(水平转头,加速度调到9),约经30s后很快使其下降停止,整个离心持续大约2-3min左右完成;4、沉淀用1ml提取液漂洗表面悬浮物;5、用1ml悬浮液(50mM HEPES pH 7、6,含0、33 mM山梨糖醇,10mM NaCl,2mM MgCl2,2mM EDTA,0、5 mMKH2PO4,2mM ASA-Na,ASA-Na使用前现配现加)将沉淀悬浮,在分散叶绿体时宜用毛笔轻轻刷,或者用手握住离心管在冰块之间搅动,使叶绿体由于震动分散开来,不要用棉球吸滤,以防被膜压破。
抗氧化酶活性测定方法
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四瞠光化还原法）1、试剂得配制（1）0、05mol/L 磷酸缓冲液（PBS,pH7、8）:A 母液:0、2mol/L 磷酸氢二钠溶液：取 Na2HPO4- 12H2O（分子量 358、14）71.7g;B母液:0、2mol/L磷酸二氢钠溶液:取NaH^POQHO分子量156、01）31.2g。
分别用蒸馅水左容到1000ml。
0、05mol/L PBS（pH7、8）得配制:分别取 A 母液（Na2HPO4） 228,75ml,B 母液（NaH2PO4）21、 25ml,用蒸餾水左容至lOOOmL 1\ 1佟PVP（宗W毗.；「.丨参考文献:李合生主编:植物生理生化实验原理与技术、髙等教育出版社,2000:267〜268。
（2）130mmol/L甲硫氨酸溶液:取1、39典Met用磷酸缓冲液（pH7、8）定容至lOOmL网h 说定容到100ML我也不懂。
拜托（3）100 11 mol/L EDTA-Na：冷m（）3721g EDTA—Nw . 000ml；（4）100H M核黄素溶液:取0、0075g核黄素用:定容至100ml,避光保存，门汀汁.丨稀释10倍（5）750 i* mol/L気伽喙NBT）溶液霹取O.O6133g NBT川缓冲液定容至UJOml避光保存；酶液制备:収定沈叶Mi物叶川视禹耍从丿；门脉）（）巡J厲冷彳抑：.2ml磷內冲液在冰浴卜研磨成浆，加缓冲液使终体枳为10ml.取5ml于10000r/min I、•离心lOmin. hin 液即为SOD粗提液。
提取酶液时如何保存;如果没有测完得需要放在4匸得冰卷叽2、酶活性测定2.显色反应取试管（要求透明度好）5支,3支为样品测左管,1支为对照管，另外1支作为空白，按表39-1加入各溶液。
混匀后将空白管置暗处，其它各管于40001X H光灯下反应20min（要求各管受光情况一致, 反应室得温度高时时间可适当缩短，温度低时时间可适当延长）。
抗氧化酶活性等测定方法
叶绿体的提取一、试剂配置1、PBS提取液：每L水依次加入MES(195.2×0.05=9.76g)、山梨糖醇(0.33×182.2=60.126g)、NaCl （0.010×58.5=0.585g）、MgCl（0.002×95=0.19g）、EDTA（292.25×0.002=0.5845g）、KH2PO4（200×0.0005=0.1g）；使用时加入ASA-Na（198.1×0.002=0.3962g）;2、悬浮液：将PBS提取液中的MES换为238.3×0.05=11.915g的HEPES（238.3×0.05=11.915g）；3、80%Percol：80ml原液+20ml水；40%Percol：40ml原液+60ml水；实际配制：PBS提取液2000ml(3个处理*2个品种*3个重复*20ml*3次=1080ml),悬浮液100ml（3个处理*2个品种*3个重复*1ml*3次=54ml）;80%Percol 200ml; 40%Percol 200ml.（3个处理*2个品种*3个重复*3ml*3次=162ml）二、提取步骤1、10g鲜样加20ml提取PBS（50mM MES PH6.1，含0.33M山梨糖醇，10mM NaCl，2mM MgCl2，2mM EDTA，0.5 mMKH2PO4，2mM ASA-Na，ASA-Na使用前现配现加）2、快速研磨，使叶片碎成绿豆粒大小，4层纱布过滤，去除残渣（注意过滤时不可用力挤压，以免叶绿体膜破碎）3、滤液2000g 3min，小心倒出上清液，将离心管放入离心机后，使离心机的加速很快上升到预定值(水平转头，加速度调到9)，约经30s后很快使其下降停止，整个离心持续大约2-3min左右完成；4、沉淀用1ml提取液漂洗表面悬浮物；5、用1ml悬浮液（50mM HEPES pH 7.6，含0.33 mM山梨糖醇，10mM NaCl，2mM MgCl2，2mM EDTA，0.5 mMKH2PO4，2mM ASA-Na，ASA-Na使用前现配现加）将沉淀悬浮，在分散叶绿体时宜用毛笔轻轻刷，或者用手握住离心管在冰块之间搅动，使叶绿体由于震动分散开来，不要用棉球吸滤，以防被膜压破。
常见野生药用植物的抗氧化性活性测定
常见野生药用植物的抗氧化性活性测定姓名：刘焱班级：药剂12-2学号：201204121041学院：化学与制药工程学院大青叶和野生苦菊的抗氧化性活性测定1.刖言1.1实验目的1. 熟悉专业文献的检索方法。
2. 熟练设计天然药物的提取方法。
3. 掌握体外抗氧化活性实验筛选方法。
4. 了解药理活性与化学成分之间的关系。
1.2实验材料1.2.1大青叶中文别名：路边青、土地骨皮、山靛青、鸭公青二名法：Clerode ndrum cyrtophyllum Turcz.界：植物界门：被子植物门(Magnoliophyta) 纲：双子叶植物纲(Mag no liopsida)，又称木兰纲。
亚纲：菊亚纲(Asteridae) 目：唇形目(Lamiales) 科：马鞭草科(Verbenaceae)亚科：牡荆亚科(viticoideae briq) 族：大青族(Clerodendreae Briq.) 属：大青属(Clerodendrum Linn.) 亚属：大青组、垂序系种：大青分布：产中国华东、中南、西南(四川除外) 各省区。
朝鲜、越南和马来西亚也有分布。
大青叶，中药名。
主治：热毒发斑、丹毒、咽喉肿痛、口舌生疮、疮痈肿毒等症。
近年来此药在临床上广泛应用，除可用治上述诸症外，又可用于痰热郁肺、咯痰黄稠;尤常用于流行性乙性脑炎，既可单味应用于预防，又可配合柴胡、银花、连翘、板蓝根、玄参、生地等，能清解气分、营分的热毒，可用治各种乙脑，而以偏热型较为合适。
中国各地市售的大青叶品种甚多，植物来源各异，又：爵床科植物马蓝。
十字花科植物菘蓝及大青。
蓼科植物蓼蓝。
豆科植物木蓝。
以上植物的叶，都做为大青叶使用，也均能作为制青黛的原料，除木蓝外，其根均作为板蓝根使用。
【化学成分】叶含靛甙(indican )，靛甙先水解为吲哚醇，再经空气氧化成靛蓝(inidgo).又含靛玉红(in dirubin ) •路边青叶含黄酮类•蓼蓝全草含黄色素及鞣质，根含蒽醌类•菘蓝叶含色氨酸(Trypto- phan)、靛红烷B (Isatan B,菘蓝甙B)、葡萄糖芸苔素(Glucobrassicin )、新葡萄糖芸苔素(Neoglucobrassicin )、葡萄糖芸苔素-1-磺酸盐(Glucobrassic in-1-sulfo nate)、靛蓝(In digot in )、腺甙(Ade nos ine )、色胺酮(Trypta nthrin ).尚含B -谷甾醇(B -Sitosterol )、丫-谷甾醇(丫-Sitosterol )、棕榈酸(Palmitic )、蔗糖(Sucrose )等.蓼蓝全草、草大青叶、马蓝叶均含靛甙(Indican ) •靛甙水解后生成吲哚(Indoxyl )，吲哚经氧化即生成靛蓝.从青黛中分离出靛玉红.1.2.2.野生苦菊别称：苦苣、苦菜、狗牙生菜英文名称：Ruccola salad拉丁名：Lactucaversicolor(Fisch.)Sch.Bip. 苦菊为菊科菊苣属，以嫩叶为食的栽培种，一二年生草本植物。
抗氧化酶活性等测定方法
抗氧化酶活性等测定方法一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定方法超氧化物歧化酶是一种重要的抗氧化酶，能够将超氧自由基（O2.-）转化为过氧化氢（H2O2），进而被谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）或过氧化物酶（CAT）降解。
测定SOD活性的方法有多种，其中最常用的方法包括：1.基于阻断亚硝酸胆红素还原的方法：该方法通过加氨基钠阻断细胞色素c还原作用，使亚硝酸胆红素还原成胆红素，从而测定SOD活性。
2.基于X射线辐照条件下还原亚硝酸胆红素的方法：这种方法利用X射线辐照生成O2.-，进而被SOD转化为H2O2、H2O2与亚硝酸胆红素反应生成亚硝酸盐，其紫红色可被光度计测定。
3.基于化学发光的方法：这种方法通过硝酸亚铁与亚硝酸盐反应生成亚铁络合物，发出化学发光信号。
该方法简单、灵敏度高，并可以自动化操作。
二、过氧化物酶（CAT）活性测定方法过氧化物酶是参与H2O2代谢的重要抗氧化酶。
常用的测定CAT活性的方法有：1.重铬酸钾（K2Cr2O7）比色法：该方法利用过氧化氢氧化重铬酸钾，从橙色转变为无色，通过比色计测定过量K2Cr2O7的消耗量计算CAT活性。
2.亚甲蓝法：这种方法利用过氧化氢氧化亚甲蓝生成显色产物，通过光度计测定产物的吸光度来评估CAT活性。
3.氨蓝法：这种方法是通过氨蓝还原过氧化氢产生的游离基离子，再与其他物质（如溴酚蓝）反应生成显色产物，通过比色计测定产物的吸光度来测定CAT活性。
三、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性测定方法谷胱甘肽过氧化物酶是参与氧化还原反应的重要酶。
目前常用的测定GSH-Px活性的方法有几种，包括：1.基于还原硒酸铁的方法：该方法利用GSH-Px催化还原硒酸铁成为亚硒酸铁，反应产物与硫代巴比妥酸钠反应生成巴比特酸，通过光度计测定巴比特酸的吸光度来评估GSH-Px活性。
2.比色法：这种方法通过巴比妥酸与反应产物反应生成巴比妥酸-丙二醛复合物，通过光度计测定复合物的吸光度来评估GSH-Px活性。
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法总结引言：一、化学法1.DPPH自由基清除法该方法利用DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苦基）自由基的特性，通过测定样品对DPPH自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。
该方法简便、快速，适用于各种样品的抗氧化活性测定。
但该方法无法反映样品在生理条件下的真实抗氧化活性。
2.ABTS自由基清除法该方法利用ABTS（2,2'-联氨基双(3-乙酸苯并咪唑-6-磺酸)）自由基的特性，通过测定样品对ABTS自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。
该方法操作简单、结果稳定，适用于各种样品的抗氧化活性测定。
但该方法在高浓度下可能存在偏差。
二、生物学法1.超氧化物歧化酶（SOD）活性测定法该方法通过测定样品对超氧自由基的抑制能力来评估其SOD活性。
该方法可以反映样品在生理条件下的真实抗氧化活性，适用于抗氧化物活性的研究。
但该方法操作复杂、耗时较长，且受到其他物质的干扰。
2.过氧化氢酶（CAT）活性测定法该方法通过测定样品对过氧化氢的分解能力来评估其CAT活性。
该方法操作简单、结果准确，适用于各种样品的抗氧化活性测定。
但该方法无法反映样品在生理条件下的真实抗氧化活性。
三、电化学法1.循环伏安法该方法通过测定样品在电极上的氧化还原行为，来评估其抗氧化活性。
该方法操作简单、结果准确，适用于各种样品的抗氧化活性测定。
但该方法需要特殊的电化学设备，且对于非水溶性样品不适用。
2.差示脉冲伏安法该方法通过测定样品在电极上的差示脉冲伏安曲线，来评估其抗氧化活性。
该方法操作简单、结果准确，适用于各种样品的抗氧化活性测定。
但该方法需要特殊的电化学设备。
结论：目前，抗氧化物活性测定方法多种多样，各有优缺点。
选择合适的测定方法应根据具体实验目的、样品性质、设备条件等综合考虑。
为了准确评估样品的抗氧化活性，可采用多种方法进行综合分析。
未来，随着科技的不断发展，抗氧化物活性测定方法将会更加精确、快速、简便，为抗氧化物活性的研究提供更多便利和准确的手段。
实验过氧化物酶活性的测
按照实验要求配制过氧化物酶试剂和磷酸盐缓冲液。
配制试剂
将比色皿、滴定管等仪器在实验前放置在冰箱中冷却。
预冷仪器
实验准备
实验操作流程
采集待测样本，如植物组织或细胞提取物。
样本准备
将样本与过氧化物酶试剂混合，在适宜的温度和pH条件下反应一段时间，记录反应过程中的吸光度变化。
酶活性测定
记录每个样本的吸光度变化，并计算过氧化物酶活性。
研究过氧化物酶活性有助于了解植物的抗病机制和筛选抗病品种
实验原理
02
实验材料
实验仪器
分光光度计：用于检测样品中的吸光度，从而计算过氧化物酶的活性。
磁力搅拌器：保持反应液的均匀混合。
酶标仪：可以同时检测多个样品，提高实验效率。
低温冰箱和超净工作台：储存和处理实验样品。
实验试剂
过氧化物酶标准品：用于制作标准曲线。
xx年xx月xx日
实验过氧化物酶活性的测
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目录
实验简介实验材料实验步骤实验结果实验总结
01
实验简介
探究不同植物中过氧化物酶的活性差异
验证过氧化物酶活性与植物抗病性的关系
实验目的
1
实验背景
2
3
过氧化物酶是一种广泛存在于植物中的氧化还原酶
过氧化物酶在植物体内具有抗氧化、清除自由基的作用，有助于提高植物的抗病能力
数据记录
根据实验数据计算过氧化物酶活性的平均值、标准差等统计指标，并绘制相应的图表。
数据分析
03
结果展示
将实验结果以图表的形式展示，如柱状图、饼图等，以便更好地观察和分析实验结果。
数据记录与分析
01
数据记录表格
植物生理指标检测方法
植物组织中可溶性糖含量的测定在作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。
它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。
由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。
Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。
但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。
此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620 nm ，故在此波长下进行比色。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物鲜样或干样。
（二）试剂1. 80 ％乙醇。
2. 葡萄糖标准溶液（100 μg/mL ）：准确称取100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至100 mL ，使用时再稀释10 倍（100 μg/mL ）。
燕麦抗氧化实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景随着生活水平的提高，人们对健康饮食的关注度逐渐增加。
燕麦作为一种营养丰富的谷物，含有多种对人体有益的成分，如膳食纤维、蛋白质、维生素和矿物质等。
其中，燕麦中的抗氧化物质被认为具有降低自由基、延缓衰老、预防心血管疾病等作用。
本研究旨在通过实验验证燕麦的抗氧化活性，为燕麦的健康价值提供科学依据。
二、实验目的1. 探讨燕麦提取物的抗氧化活性。
2. 比较不同浓度燕麦提取物的抗氧化效果。
3. 分析燕麦提取物的抗氧化机理。
三、实验材料与仪器材料：- 燕麦（市售）- 无水乙醇- FeSO4·7H2O- 硫酸亚铁- 碘化钾- 三氯乙酸- 氢氧化钠- 甲醇- 蒸馏水- 抗氧化活性评价试剂盒仪器：- 电子天平- 恒温水浴锅- 离心机- 紫外分光光度计- 移液器- 试管四、实验方法1. 燕麦提取物的制备：- 将燕麦研磨成粉末，用无水乙醇提取，离心后取上清液即为燕麦提取物。
2. 抗氧化活性测定：- 采用DPPH自由基清除法测定燕麦提取物的抗氧化活性。
- 将不同浓度的燕麦提取物与DPPH溶液混合，在517nm波长下测定吸光度。
3. 数据处理：- 采用Excel软件对实验数据进行统计分析，计算IC50值。
五、实验结果与分析1. 燕麦提取物的制备：- 燕麦提取物呈棕色，具有一定的稳定性。
2. 抗氧化活性测定：- 不同浓度的燕麦提取物对DPPH自由基的清除率随着浓度的增加而增加，且呈线性关系。
- 燕麦提取物的IC50值为5.2mg/mL，表明其具有较强的抗氧化活性。
3. 抗氧化机理分析：- 燕麦提取物可能通过以下途径发挥抗氧化作用：- 与自由基反应，清除自由基。
- 提高抗氧化酶活性，如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等。
- 增强抗氧化物质如维生素C、维生素E等的含量。
六、结论1. 燕麦提取物具有较强的抗氧化活性，其IC50值为5.2mg/mL。
2. 燕麦提取物的抗氧化作用可能与清除自由基、提高抗氧化酶活性、增强抗氧化物质含量等因素有关。
植物组织中过氧化物酶活性的测定
实验四植物组织中过氧化物酶活性的测定一、实验目的：1、学习测定植物组织中过氧化物酶活性的方法。
二、实验原理：过氧化物酶（POD）广泛存在于植物体中，该酶催化H2O2氧化，以清除H2O2对细胞生物功能分子的破坏作用。
在有H2O2存在的条件下，过氧化物酶使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，可用分光光度计测定470nm处茶褐色物质的生成量以检测POD活性。
三、实验仪器及材料：1、仪器：研钵、剪刀、天平、量筒、试管、分光光度计、移液管、比色皿、离心机、秒表2、材料与试剂：苹果、经逆境处理的绿豆幼苗、反应混合液、20mmol/LKH2PO4四、实验步骤：1、POD的提取分别称取绿豆幼苗、苹果果肉各2g,分别加入预冷的10ml 20mmol/LKH2PO4，于研钵中研磨成匀浆，以4000r/min离心10min，收集上清液，待用。
2、POD活性的测定取分光光度计比色杯2只，在其中一只加入3ml反应混合液和1ml KH2PO4作为对照；另一只加入3ml反应混合液，1ml苹果上清液，立即开启秒表计时，测定470nm处OD值，每隔30s读数一次。
取1ml绿豆幼苗上清液重复上述操作。
五、实验结果：1、在酶液中加入3ml反应混合液后，苹果酶液立即呈茶褐色，而绿豆幼苗酶液的茶褐色深至黑褐色。
2、苹果酶液以及绿豆幼苗酶液在470nm处OD值如下：苹果酶液OD值与时间的关系曲线图以每分钟光密度（OD470nm）变化0.01为一个过氧化物酶活力单位，即：苹果POD活性=[ΔOD470/(0.01×wt)] ×D=[（0.28－0.249）/（0.01×3×2）] ×D=0.52D（此值忽略稀释倍数）其中w为样品鲜重，t为反应时间，D为稀释倍数绿豆幼苗酶液OD值与时间的关系曲线图绿豆幼苗POD活性=[ΔOD470/(0.01×wt)] ×D=[（0.940－1.56）/（0.01×3·2）] ×D =6.3 D（此值忽略与苹果酶液相同的稀释倍数）由于绿豆幼苗酶液浓度较大，测OD值前稀释了两倍，所以绿豆幼苗酶液POD 活性为12.67D六、结果分析：1、由苹果酶液OD值与时间的关系曲线图中，OD值与时间的关系基本呈线性关系，故任取变化较均匀的一段数据均可计算出POD活性。
第二章实验十一植物中过氧化物酶活性的测定
酶活力测定：
• 打开光度计，预热15分钟左右，并做好比色前的 准备工作。
• 在光径为1cm的比色杯内，依次加入2mL 0.1mol/L 的醋酸缓冲液和1ml 0.25%愈创木酚溶 液（以上溶液可预先放在25~30℃的水浴中）， 0.2 mL（根据反应情况调整）酶液（用加热煮沸 5 min 的酶液为对照），最后加入 0.1mL 0.75% 的过氧化氢溶液（开始计时）。
• 迅速颠倒混匀并立即把比色杯插入比色架，盖上 盖子，每隔 1 min 记录一次在470nm处的吸光度 值，共记录5次。
四、计算
以每分钟光密度变化（以每分钟 OD 470 nm变化 0.01 为 1 个 活力单位）表示酶活性大小
五、注意事项
酶提取需要在低温下进行； 测定酶活力时要保持待测酶液的酶活； 测定酶活力时时注意控制反应时间。
➢ 线粒体：超氧阴离子O·-2，是体内O·-2的主要来 源； O·-2在线粒体中再生成H2O2和·OH。
➢ 过氧化酶体：FAD将从脂肪酸等底物获得的电 子交给O2生成H2O2和羟自由基·OH。
➢ 胞浆需氧脱氢酶（如黄嘌呤氧化酶等）也可催 化生成O·-2。
➢ 细菌感染、组织缺氧等病理过程，环境、药物 等外源因素也可导致细胞产生活性氧类。
红棕色的物质可用分光光度计在 470nm处测定其消光值，即可求出该 酶的活性。
二、实验材料、主要仪器和试剂
酶提取缓冲液：20 mmol/L硼酸缓冲液 （pH 8.8），内含5mmol/L亚硫酸氢钠 （临用前加）
0.1 mol/L 醋酸缓冲液（pH 5.4） 0.25% 愈创木酚（溶于50%乙醇中）溶液
（临用前配） 0.75% 过氧化氢溶液（临用前配）
三、操作步骤
酶液提取：取植物样品0.5 g（表面水分 吸干），剪碎置于研钵中，加入5mL预冷 的酶提取液，研磨成匀浆（冰浴），转入 离心管，再用2mL提取液冲洗研钵，一并 转入10mL离心管，平衡后于10000转/ 分钟离心20分钟（低温）。将上清液倒 入刻度试管或量筒，定容至10mL，插入 冰浴待测。
实验六++植物抗氧化酶活性的测定
二、实验方法
1、提取：分别取0.5 g实验材料→加入少许石英砂和3 ml 提取液（50mmol/L PBS, pH5.8,内含0.１mmol/ LEDTA, 1%PVP） → 充分研磨 →转入离心管中→用2 ml提取液 洗研钵→ 5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 ml →用 于测定POD和PPO酶活性或分装后转至-20或-80℃保存。
分别取05g实验材料加入少许石英砂和3ml提取液50mmollpbsph58内含01mmolledta1pvp充分研磨转入离心管中用2ml提取液洗研钵5000rpm离心10min上清液定容至5ml用于测定pod和ppo酶活性或分装后转至20或80保存
实验六 植物抗氧化酶活性的测定
背景
“控制与被控制”理 论
2、POD测定：取POD反应混合液（10 mmol/L愈创木酚，
5 mmol/L H2O2,用PBS溶解）2.90 ml，25 ℃水浴5 min， 加入酶液100 l（空白调零用提取液取代），立即记时，
摇匀，读出反应30 s和3 min时的A470。用ε计算POD活性。 3、PPO测定：取PPO反应混合液（ 20 mmol/L邻苯二酚，
用PBS溶解）2.8 ml， 25 ℃水浴5 min，加入酶液0.2 ml （空白调零用提取液取代），立即记时，摇匀，读出反应 30 s和2 min时的A410。以每分钟A值变化0.01所需要的酶 液的量为一个活力单位（U），则：
4、计算
POD activities = A470 VT V 1 (mol.g-1FWmin-1)
0.7
A
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 00.0
400 420 440 460 480 500 520 540 560
植物生理实验过氧化物酶的活性
班级：11级生科2班组员：XX XXX题目：过氧化物酶活性的测定过氧化物酶（P O D）在植物体内普遍存在，是活性较高的一种酶，与植物代谢作用和抗逆性等都有一定关系。
其主要生理功能：1.参与活性氧代谢过程2.参与木质素和木栓质的合成3.参与生长素的降解【实验原理】在过氧化物酶（P O D）催化下，H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物。
此产物在470n m处有最大光吸收值，故可通过测470n m下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。
【材料、设备与试剂】1.材料：植物叶片或其它任何植物材料。
2.仪器设备：分光光度计；低速冷冻离心机（配套的离心管）；恒温水浴锅；微波炉；研钵；容量瓶；移液管；试管；洗耳球等。
3.试剂及配制：0.2 m o l·L－1磷酸缓冲液（p H6）反应液（100 m l 0.2 m o l·L－1磷酸缓冲液中加入0.5 m l愈创木酚、1m l30%H2O2，充分摇匀。
最好在使用前配制。
）【方法与步骤】1.酶液提取：称取植物叶片0.2g，剪碎置于已冷冻过的研钵中，加入少量石英砂，分两次加入总量为5m l p H6磷酸缓冲液，研磨成匀浆后，倒入离心管中，在4000 r/m i n 离心15 m i n，上清液即为粗酶提取液，倒入小试管低温下放置备用。
2.酶活性测定：吸取反应液3m l于试管中，加入酶提取液0.1m l，迅速摇匀后倒入光径1c m的比色杯中，以未加酶液之反应液为空白对照，在470n m波长处，测定O D值。
每隔1m i n记录1次吸光值，共记录5次。
3.结果计算：按下式计算酶的相对活性。
取相对稳定的每分钟吸光度变化值（ΔA 470），代入下式计算出过氧化物酶的活性，即用每m i n内O D变化0.01为1个过氧化物酶活力单位（U）表示。
酶活性（U·g-1·m i n-1）=（△A470×V t）/W×V s×0.01×t式中：ΔA470——反应时间内吸光度的变化值。
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植物抗氧化酶提取和测定参考文献
二、实验方法
1、提取：分别取0.5 g实验材料→加入少许石英砂和3 ml 提取液（50mmol/L PBS, pH5.8,内含0.１mmol/ LEDTA, 1%PVP） → 充分研磨 →转入离心管中→用2 ml提取液 洗研钵→ 5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 ml →用 于测定POD和PPO酶活性或分装后转至-20或-80℃保存。
W t
V2
PPO activities =
A410 V 1 (U.g-1FW)
0.01W t V 2
5、思考题 5.1 简述植物POD和PPO的生理
意义。 5.2在论述呼吸代谢多途径及其
生理意义。
抗氧化酶动力学曲线
Absorbance Absorbance
0.7
A
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 00.0
400 420 440 460 480 500 520 540 560
Wavelength
01.0
B
0.8
ห้องสมุดไป่ตู้
0.6
0.4
0.2
525nm 410nm
00.0 0
5 10 15 20 25 30 35
用PBS溶解）2.8 ml， 25 ℃水浴5 min，加入酶液0.2 ml （空白调零用提取液取代），立即记时，摇匀，读出反应 30 s和2 min时的A410。以每分钟A值变化0.01所需要的酶 液的量为一个活力单位（U），则：
4、计算
POD activities = A470 VT V 1 (mol.g-1FWmin-1)
实验六 植物抗氧化酶活性的测定
背景
“控制与被控制”理 论
▪ （AOX）
▪ （PPO）
POD、SOD、CAT
抗氧化酶与植物抗逆性关系
Journal of Experimental Botany, 2009，60（2）：377–390
H2O2
H2O2
POD activity (mol.g-1 FW .min-1)
2、POD测定：取POD反应混合液（10 mmol/L愈创木酚，
5 mmol/L H2O2,用PBS溶解）2.90 ml，25 ℃水浴5 min， 加入酶液100 l（空白调零用提取液取代），立即记时，
摇匀，读出反应30 s和3 min时的A470。用ε计算POD活性。 3、PPO测定：取PPO反应混合液（ 20 mmol/L邻苯二酚，
12
Soluble POD
10
CWB-POD
8
6
4
2
0
callus
suspension cells
POD activity of tobacco
李忠光，2009.10
一、实验原理
POD
▪ Peroxidase, POD
▪ （ROS,H2O2）
Polyphennol oxidase, PPO
PPO