专题1-1-非洲紫罗兰悬浮细胞系的制备20120216

合集下载

非洲紫罗兰原生质体的制备及不同组分培养基对细胞增殖的影响

非洲紫罗兰原生质体的制备及不同组分培养基对细胞增殖的影响陈鑫;李骏;余汝媛;张扬;赖育菠;陈志宽;罗俊明;陆幸妍【期刊名称】《广东药学院学报》【年(卷),期】2012(28)5【摘要】目的探讨非洲紫罗兰(Saintpaulia ionantha)原生质体的制备方法,并比较不同组分培养基对原生质体再生及增殖的影响.方法以非洲紫罗兰愈伤组织制备悬浮细胞,以细胞生长曲线确定最佳培养时间,并将纤维素酶(cellulase R-10)和果胶酶(pectinase Y-23)按2∶1(质量比)混合分别酶解悬浮细胞18、21、24 h,比较原生质体得率和细胞活力以确定最佳酶解时间.分别以愈伤组织提取物、根尖提取物及培养土浸出物配制培养基培养原生质体16 d,观察原生质体细胞壁再生并比较细胞增殖率.结果悬浮细胞培养8d细胞增殖率最大,细胞活力93.8％；4％(质量分数)纤维素酶和2％(质量分数)果胶酶混合酶解21 h原生质体得率达到峰值,细胞活力为75.2％,延长至24 h后得率与21 h相比,差异无统计学意义,但细胞活力降至69.5％.以不同组分培养基培养原生质体,最早于第6天在愈伤组织提取物培养基中观察到再生细胞壁及细胞分裂；第16天,愈伤组织和根尖提取物培养基细胞增殖率显著高于原生质体基础培养基和培养土浸出物培养基,并以愈伤组织为佳,而培养土浸出物无促进作用.结论以非洲紫罗兰愈伤组织悬浮细胞培养8d并以4％(质量分数)纤维素酶和2％(质量分数)果胶酶混合酶解21 h能获得较多高活力的原生质体；愈伤组织提取物培养基能有效促进原生质体再生及细胞增殖.%Objective To investigate the preparation of Saintpaulia ionantha protoplast and effect of different cultures on its regeneration and growth. Methods Suspendedcells of Saintpaulia ionantha were made by the loose callus and cultured to determine the optimal cultivating time by means of its growth curve. Protoplasts were prepared with cellulase and pectinase mixed at a ratio of 2 to 1 , incubating for 18, 21 and 24 h, respectively, to obtain the best enzymolysis time by comparing the protoplast yields. Basic mediums were added with callus extracts, roots extracts and soil lixivium, respectively, to nurture Saintpaulia ionantha's protoplasts for 16 days. Results The rate of cell growth reached the highest, and the cell activity was 93. 8 % when suspension cells were cultured for 8 days; the maximum yield of protoplast was in 21 h under enzymolysising mixed with 4 % cellulase and 2 % pectinase and its activity was 75. 2 %. Cell walls and cell divisions were observed at the 6th day in culture medium added with callus extracts. The cell growths in callus extracts medium and roots extracts medium were significantly higher than in basic medium and soil lixivium, of which the best was callus extracts. And soil extracts couldn't promote the protoplast cell growth. Conclusion Highly active protoplasts of Saintpaulia ionantha can be produced when the suspended cells gained by the loose callus were cultured for 8 days, and then were enzymolysed by 4% cellulase and 2% pectinase for 21 h. Callus extracts medium could promote protoplasts' regeneration and growth.【总页数】5页(P497-501)【作者】陈鑫;李骏;余汝媛;张扬;赖育菠;陈志宽;罗俊明;陆幸妍【作者单位】广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006;广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006;广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006;广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006;广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006;广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006;广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006;广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】S567【相关文献】1.菌龄与培养基组分对曲霉原生质体释放的影响 [J], 王建华;赵学慧2.不同培养基对非洲紫罗兰组培苗生长及生根的影响 [J], 岑忠用;苏江;谢彦军;邓晰朝;高丽霞3.不同培养基组分对5个蜡梅品系花粉萌发和花粉管生长的影响 [J], 沈植国;孙萌;丁鑫;程建明;陈迪新4.不同培养基组分对牛支原体生长的影响 [J], 严明帅;徐业芬;张冯禧;索朗斯珠;牛家强5.不同组分、不同纯度中药复方多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖影响 [J], 李赞阳;刘红;李炳奇;孙萍;谷新利因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

非洲紫罗兰叶片组培快繁种苗及栽培技术

非洲紫罗兰叶片组培快繁种苗及栽培技术汇报人：2023-12-08•非洲紫罗兰叶片组培快繁技术•非洲紫罗兰种苗的栽培技术•非洲紫罗兰叶片组培快繁技术的优化与改进•非洲紫罗兰叶片组培快繁种苗的繁殖与栽培实例•总结与展望01非洲紫罗兰叶片组培快繁技术叶片采集与处理01020304采集时间采集部位采集方法叶片处理消毒处理将消毒后的叶片切成1厘米×1厘米的小块，接种到MS或1/2MS培养基上。

接种培养基培养条件无菌接种与培养增殖培养与生根培养增殖培养在无菌条件下，将接种在培养基上的小块叶片转移到含有不同激素浓度的增殖培养基上，促使小块叶片增殖成更多的丛生芽。

生根培养当丛生芽长到一定数量后，将它们转移到含有不同激素浓度的生根培养基上，促使丛生芽生根。

炼苗移栽当组培苗根系发达、生长健壮时，进行炼苗移栽，使组培苗适应自然环境。

02非洲紫罗兰种苗的栽培技术基质选择基质制备栽培基质的选择与制备播种与移植播种时间移植水肥管理与环境调控浇水施肥环境调控03非洲紫罗兰叶片组培快繁技术的优化与改进温度控制在组织培养过程中，温度对细胞的分裂和生长具有重要影响。

一般来说，适宜的温度范围为25℃-30℃。

通过控制温度，可以促进细胞分裂和生长，提高组培效率。

光照调节光照是影响植物组织培养的重要因素之一。

适量的光照可以促进细胞的分裂和分化，有助于组织培养的成功。

然而，不同种类的植物需要的光照强度和时间各不相同。

对于非洲紫罗兰，一般需要提供12-16小时的光照，强度为1000-2000勒克斯。

营养供应在组织培养过程中，营养供应也是非常重要的。

非洲紫罗兰需要适量的氮、磷、钾等营养元素来支持其生长。

可以通过调整培养基中的营养成分来优化非洲紫罗兰的组织培养条件。

培养条件的优化物理防治化学防治病虫害防治提高成活率在将试管苗移栽到土壤中时，需要注意提高成活率。

可以将试管苗在温室中放置一段时间，然后逐渐适应自然环境。

在移栽后，需要保持土壤湿润，并提供适量的光照和温度。

悬浮细胞培养流程

悬浮细胞培养流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!悬浮细胞培养流程悬浮细胞培养是一种将细胞悬浮在培养基液体中进行的细胞培养方法。

紫茉莉悬浮细胞培养体系的建立

紫茉莉悬浮细胞培养体系的建立摘要：为建立紫茉莉(Mirabilis jalapa L.)悬浮细胞培养体系，以紫茉莉无菌苗叶片诱导的愈伤组织为材料，筛选紫茉莉悬浮细胞的适宜培养体系。

结果表明，紫茉莉愈伤组织在MS + 2,4-D 1 mg L–1+ KT 0.5 mg L–1的液体培养基中悬浮继代培养3 ~ 4次，能得到稳定的悬浮细胞系。

培养基的pH 值为5.5 ~ 5.9，蔗糖浓度为30 g L–1更适合悬浮细胞的生长。

紫茉莉悬浮细胞的生长曲线大致呈S 型。

最佳继代培养时间是10 d，培养液的体积为40 mL 时，接种量为7.5 mL，可以较好地保持悬浮细胞系。

1 L培养液中可提取分泌蛋白(0.42 0.15) g。

这些有助于对悬浮细胞提取分泌蛋白的研究。

关键词：紫茉莉；悬浮细胞；悬浮培养；分泌蛋白1 材料和方法1.1材料供试紫茉莉(Mirabilis jalapa L.)种子采自沈阳农业大学植物园。

按照白玉等的方法诱导培养紫茉莉愈伤组织。

取紫茉莉种子若干，冲洗剥皮后，用75% 乙醇浸泡8 min，0.1% 升汞消毒10 min，无菌水冲洗 4 次、浸泡1 h，剥掉内层种皮，接种于MS + NAA 0.1 mg L–1培养基中，在25℃，光照强度为12.5 ~ 25 mol m–2s–1的条件下培养，获得无菌苗。

将无菌苗叶片切成约0.5 cm x 0.5 cm 的小块，接种于MS + 2,4-D 1 mg L–1+ NAA 1 mg L–1+ KT1.5 mg L–1培养基上，在25℃，光照强度为12.5 ~25 mol m–2s–1条件下培养。

以上试验培养基的蔗糖浓度均为30 g L–1，琼脂为7 g L–1，pH 调至5.8。

非洲紫罗兰快繁与培养方法

。
培养中的问题
培养基选择不当
非洲紫罗兰的培养需要特定的培养基和环境条件，如果选择不当，会影响其生长和开花。
环境条件不适宜
非洲紫罗兰需要适宜的光照、温度和湿度条件，如果这些条件不适宜，会影响其生长和开花。
病虫害防治困难
非洲紫罗兰在培养过程中容易受到病虫害的侵袭，防根据气候和盆土湿度，定期浇水，保持盆土湿润。在夏季和干旱季节应增加浇水次数。
施肥
使用氮磷钾复合肥或有机肥，有利于植株生长和开花。在生长期间，每两周施一次稀薄肥水。
病虫害防治
病害防治
非洲紫罗兰常见的病害有炭疽病、灰霉病等，可定期喷洒杀菌剂进行预防和治疗。
虫害防治
非洲紫罗兰常见的虫害有蚜虫、红蜘蛛等，可定期喷洒杀虫剂进行防治。
03
产业化前景
通过研究非洲紫罗兰的快繁与培养方法，可以为其产业化生产提供技
术支持，从而带来经济效益。
研究方向
快繁技术研究
针对非洲紫罗兰的种子少、繁殖困难等问题，开展快繁技术研究，包括组织培养、细胞培养等，以提高其繁殖效率和品质。
病虫害防治
针对非洲紫罗兰生长过程中可能出现的病虫害问题，开展防治技术研究，保障其健
解决策略
选择适宜的培养基
针对非洲紫罗兰的不同品种和生长阶段，选择适宜的培养基和环境条件，以提高其生长和开花效果。
优化环境条件
为非洲紫罗兰提供适宜的光照、温度和湿度条件，以保证其正常生长和开花。
病虫害防治措施
定期检查非洲紫罗兰的生长情况，及时发现并防治病虫害，确保植株健康生长。
06
前景展望与研究方向
04
非洲紫罗兰的应用与价值
观赏价值
室内装饰
非洲紫罗兰具有美丽的花朵和独特的形态，适合作为室内装饰植物。

非洲紫罗兰组织培养_耿明清

2012年第47卷第4期生物学通报49培养基编号基本培养基类型6-BA （mg ／L ）KT （mg ／L ）NAA （mg ／L ）2，4-D （mg ／L ）芽萌动状况萌动时间（周）①MS 10.1萌动且量多3②MS 0.50.1萌动且量适中3③MS 0.10.1不萌动3④MS 0.20.1先生根后生芽3⑤MS0.50.10.1萌动且愈伤组织疏松3表1非洲紫罗兰叶片初代愈伤组织培养基的筛选非洲紫罗兰（Saintpaulia ionantha Wendl ）是苦苣苔科（Gesneriaceae ）的多年生草本，是一种室内观赏植物。

它株型紧凑，颜色五彩缤纷，叶绿色或暗红色，且厚实，室内栽培容易（不需强光，只需少许散射光即可正常生长及开花），花期长（一年四季能开花）、花色多（白、粉红、紫、青、双色），还有美丽的多纹平铺肉状叶，只要注意环境调节及水肥管理，可以常年花开不谢，有“室内花卉皇后”的美誉，居室内摆放有画龙点睛之效果，在国际盆花市场中极为流行。

非洲紫罗兰自90年代引入我国花卉市场以来，深受欢迎，并在许多大城市开始流行，深受花卉爱好者欢迎。

1材料与方法1.1材料取当年生发育健壮、长势旺盛的非洲紫罗兰整个叶片，在超净工作台内灭菌后，切取5mm ×5mm 大小接种启动诱导培养基上培养。

1.2方法诱导培养基:①MS +6-BA1.0mg/L +NAA0.1mg/L ；②MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L ；③MS +6-BA 0.1mg/L +NAA 0.1mg/L ；④MS +KT 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L ；⑤MS+6-BA 0.5mg/L ＋NAA 0.1mg/L+2，4-D0.1mg/L 。

继代培养基：用①、②、④。

生根与生长培养基：⑥1/2MS+NAA0.05mg/L ；⑦1/2MS+IBA 0.2mg/L ；⑧1/2MS+IBA 0.05mg/L 。

悬浮细胞培养技术课件

悬浮细胞传代及细胞计数一、细胞传代实验目的：掌握悬浮细胞传代技术.进一步掌握细胞培养的操作技术.实验原理：培养细胞生长一定时间后,需别离再培养,否那么细胞因生存空间不够,细胞密度过大,致营养缺乏而引起细胞发老、停止生长甚至死匚.为了维持细胞的存活和生长,必须进行再培养,即将原培养瓶内细胞别离、稀释、接种到新培养瓶内继续扩大培养.实验用品：〔一〕仪器净化工作台、离心机、恒温水浴箱、冰箱〔4C、-20 C、-70 C〕、倒置相差显微镜、培养箱；〔二〕玻璃器皿吸管〔弯头、直头〕、培养瓶、废液缸、〔三〕塑料器皿吸头、枪头、胶塞、移液管、15ml离心管、离心管架〔四〕其他物品微量加样枪、计数板、记号笔、移液枪〔五〕试剂1640培养液、PBS操作步骤：1 .准备：翻开培养液,PBS取出离心管,拧开管盖,管盖倒放.从吸管筒中依次取出吸管,装上吸头,插入离心管备用.2 .从培养箱内取出细胞,放在显微镜下观察其生长状态、密度.3 .首先观察培养板孔中培养液量.用吸管分别吸出两个孔中的细胞连同培养液, 转入离心管中.再另取一只吸管吸取PBS放入培养板孔中,轻轻吹打孔壁,吸出转入离心管.4,离心,设置离心机1000转/分,4-5分钟.5,取出离心管,轻轻吸出上清,倒入废液缸.吸取培养液约7ML放入离心管, 轻轻吹打细胞,使之均匀悬浮.6,吸取1ML细胞悬液1ML转入EP管中,备计数用.7.其余的细胞分别放入六个孔中,每孔约1ML8,吸取培养液参加板孔中至1/3孔容量.9.镜下观察细胞是否分布均匀,放入培养箱培养.二、细胞计数及生长曲线测定培养细胞生长过程：潜伏期-指数增生期-停滞期潜伏期(latent phase)细胞接种后,先经过一个在培养液中呈悬浮状态的悬浮期.此时,细胞质回缩,胞体呈圆球形,然后细胞贴附于载体外表,称贴壁,悬浮期结束,细胞贴壁速度与细胞种类,培养基成分,载体的理化性质等密切相关.一般情况下,原代培养细胞贴壁速度慢,可达10-24小时或更多,而传代细胞系贴壁速度快,通常10-30分钟即可贴壁.细胞贴壁后还需经过一个潜伏阶段,才进入生长和增殖期,原代培养细胞潜伏期长,约24-96小时或更长,连续细胞系和月中瘤细胞潜伏期短,仅需6-24小时.(2)指数增生期(logarithmic growth phase)这是细胞增殖最旺盛的阶段,分裂相细胞增多.指数增生期细胞分裂相数量可作为判定细胞生长是否旺盛的一个重要标志.通常以细胞分裂相指数( Mitotic index, MI)表示,即细胞群中每1000个细胞中的分裂相数.一般细胞的分裂指数介于0.1%-0.5%,原代细胞分裂指数较低,而连续细胞和月中瘤细胞分裂相指数可高达3%-5%.指数增生期的细胞活力最好时期,是进行各种实验最正确时期, 也是冻存细胞的最好时机.在接种细胞数量适宜情况下,指数增生期持续3-5天后,随着细胞数量不断增多、生长空间减少,最后细胞相互接触集合成片.正常细胞相互接触后能抑制细胞运动,这种现象称接触抑制现象(contact inhibition).而恶性月中瘤细胞无接触抑制现象,能继续移动和增殖,导致细胞向三维空间扩展,使细胞发生堆积(piled up).细胞接触集合成片后,虽然发生接触抑制,但只要营养充分,细胞仍能进行增殖分裂,因此细胞数仍然在增多. 但是,当细胞密度进一步增大,培养液中营养成分减少,代谢产物增多时,细胞因营养枯竭和代谢产物的影响,导致细胞分裂停止,这种现象称密度抑制现象(Density Inhibition ).(3)停滞期(Stagnate phase)细胞数量到达饱和密度后,如不及时进行传代,细胞就会停止增殖,进入停止期. 此时细胞数持平,故也称平台期(Plateau phase ).停滞期细胞虽不增殖,但仍有代谢活动.如不进行别离传代,细胞会因培养液中营养耗尽、代谢产物积聚、pH下降等因素中毒,出现形态改变,贴壁细胞会脱落,严重的会发生死亡,因此,应及时传代.实验目的：1 .能独立的进行细胞技术,会绘制生长曲线,了解细胞生长的发育特性.2 .学习在科研中如何应用生长曲线实验原理：生长曲线的测定(计数法)是测定细胞绝对生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,为培养细胞生物学特性的根本参数之一. 一般细胞传代之后,经过长短不同的潜伏期,即进入大量分裂的指数生长期.在细胞到达饱和密度后, 停止生长,进入平顶期,然后退化衰亡.为了准确描述整个过程中的细胞数目的动态变化, 需连续对细胞进行计数,通常计数7天.为精确起见,一般每次计数三瓶细胞并取平均值. 典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期,成平台状的平顶期及退化衰亡四个局部.以存活细胞数对培养时间做图,即生长曲线.生长曲线常用于测定药物等外来因素对细胞生长的影响.一般在对数期的1/3-1/2处加药.细胞技术的时间和次数依实验目的而定.另外,测定生长曲线的常用方法还有MTTWo计数板原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时, 通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目.操作步骤：1 .将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板,放在镜下观察.2 .制备细胞悬液：细胞从培养板孔转移到离心管, 离心1000转4-5分钟,弃去上清,参加PBS至一定体积(1MD.3 .将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中.4 .计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的.然后按公式计算：细胞数加1二四大格细胞总数/4 X 104说明：公式中除以4,由于计数了4个大格的细胞数.公式中乘以104由于计数板中每一个大格的体积为：1.0mm (长)x 1.0mm (宽)x 0.1mm (高)=0.1mm3而1ml=1000mm3(注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团, 应按单个细胞计算,假设细胞团10%Z上,说明分散不好,需重新稀释制备细胞悬液)台盼兰染色操作步骤：1、制备细胞悬液,放入EP管中.2、以1: 1的比例参加0.4%台盼兰染7取,染色2 — 3分钟.3、吸取少许悬液涂于载玻片上,加上盖片.4、镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数,计算细胞活力.冻存与复苏一、哺乳动物细胞冷冻保存实验目的：(1)保存种子细胞,以便随时取用.这是保存细胞的最主要目的(2)减少细胞被微生物污染的危险性.(3)减少细胞之间交叉污染的危险性.(4)减少细胞因传代培养而引起的遗传变异和形态改变.(5)防止有限细胞系出现衰老或恶性转化.实验原理：细胞冻存及复苏的根本原那么是慢冻快融,实验证实这样可以最大限度的保存细胞活力.目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚碉作保护剂,这两种物质能提升细胞膜对水的通透性,加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外,减少细胞内冰晶的形成,从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤.复苏细胞应采用快速融化的方法,这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化,防止由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤.实验用品：〔一〕仪器净化工作台、离心机、恒温水浴箱、冰箱〔4C、-20 C、-70 C〕、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱.〔二〕玻璃器皿吸管〔弯头、直头〕、培养瓶、玻璃瓶〔250ml、100ml〕、废液缸；〔三〕塑料器皿吸头、枪头、胶塞、移液管〔10ml〕、15ml离心管、冻存管〔1〜2ml〕〔四〕其他物品微量加样枪、红血球计数板、记号笔、移液枪.〔五〕试剂1640培养液、DMSO〔分析纯〕K562细胞,慢性粒细胞白血病细胞系中的一种.操作步骤：1 .准备：翻开培养液,PBS取出离心管,拧开管盖,管盖倒放.从吸管筒中依次取出吸管,装上吸头,插入离心管备用.2 .配制冻存液：吸取9ML培养液放入离心管,用移液枪吸取1MLDMSO?液,逐滴缓慢参加离心管中.最好把离心管插在冰中.3 .从培养箱内取出细胞,放在显微镜下观察其生长状态、密度.4 .吸出1个孔中的细胞连同培养液,转入离心管中.再另取一只吸管吸取PBS放入培养板孔中,轻轻吹打孔壁,吸出转入离心管.5 .离心,设置离心机1000转4-5分钟.取出离心管,轻轻吸出上清,倒入废液缸.轻轻吸出余下的培养液,注意勿吸出细胞沉淀.6 .吸取1ML配制好的冻存液参加离心管,与细胞混匀后,转入冻存管.7 .标注：标明细胞种类、冻存日期,冻存人.8 .在4 c冰箱中放置30分钟；然后转入-20 C ,放置30分钟；然后再转入-80 C 放置16- 18小时(或过夜)；最后放入液氮中长期保存.有条件的地方, 可用冻存盒. 考前须知：(1)冻存过程需缓慢(2)冻存细胞必须处在对数生长期,活力大于90% ,无微生物污染.(3)细胞浓度限制在：1 X 107 — 5 X 107/ml.(4)使用适宜的细胞冷冻保护剂,以保护细胞在冷冻过程中免受冰晶破坏.目前,最常用的冷冻保护剂是DMSOf甲基亚碉),使用终浓度为5—10%.但是, 有些细胞系不能用DMSO为冷冻保护剂,如人白血病细胞系HL-60.由于,DMSC^ 诱导HL-60细胞分化.在这种情况下,可选用其它冷冻保护剂,如甘油(glycele ), 羟乙基淀粉等.(5) DMSO释时会释放大量热量.因此,DMSO^能直接加到细胞液中,必须事先配制.细胞复苏操作步骤：(一)准备工作1、37c水浴2、准备一个内装5-10 ml细胞完全培养液离心管.(二)复苏1、带手套,用银子将细胞冷冻管从液氮中取出,迅速放入37c水浴中,手持冻存管不断摇动.观察完全解冻后移入超净台.冷冻管在水浴中解冻时,液面不可超过冻存管盖面,否那么,易发生污染.2、翻开冻存管,迅速将细胞悬液吸到离心管中,轻轻混匀.3、1000rpm离心5 min ,弃去上清液.4、沉淀中参加适当培养基,37c常规培养,第二天观察生长情况.考前须知：1 .解冻操作过程动作要轻.由于冷冻保存过的细胞变得非常脆弱,不仅解冻速度要快,而且动作要轻.2 .解冻时务必注意平安,预防冷冻管爆裂.,要带手套,用银子将细胞冷冻管从液氮中取出,切不可直接用手,以免冻伤.。

紫茉莉悬浮细胞培养体系的建立

能得到稳定的悬浮细胞系。培养基的ｐＨ值为５．５～５．９，蔗糖浓度为３０ｇＬ更适合悬浮细胞的生长。紫茉莉悬浮细胞的生长
曲线大致呈ｓ型。最佳继代培养时间是１０ｄ，培养液的体积为４０ｍＬ时，接种量为７．５ｍＬ，可以较好地保持悬浮细胞系。１Ｌ培养液中可提取分泌蛋白（０．４２士０．１５）ｇ。这些有助于对悬浮细胞提取分泌蛋白的研究。
ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｔａｂｌｅｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｅｌｌｓｙｓｔｅｍｃｏｕｌｄｂｅｏｂｔａｉｎｅｄａｆｔｅｒｃａｌｌｉｗｅｒｅｓｕｂｃｕｌｕｒｔｅｄ３— — ４ｔｉｍｅｓｏｎＭＳｍｅｄｉｕｍｗｉｔｈ２，４一Ｄ１ｍｇＬ『ａｎｄＫＴ０．５ｍｇＬ．ＴｈｅｏｐｔｉｍｕｍｐＨｗａｓ５．５— ５．９ｗｉｔｈ３０ｇＬ～ｓｕｃｒｏｓｅ．Ｔｈｅ
关键词：紫茉莉；悬浮细胞；悬浮培养；分泌蛋白
ｄｏｉ：１０．３９６９８．ｉｓｓｎ．１００５ — ３３９５．２０１３．０５．０１２
ＳｔｕｄｉｅｓｏｎＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆＳｕｓｐｅｎｓｉｏｎＣｅｌｌＳｙｓｔｅｍｆｏｒＭｉｒａｂｉｌｉｓｊａｌａｐａＬ．

非洲紫罗兰组培技术研究

９％ｗｈｎｔｅｓｒｕｓｒａｓｌｎｅｔｅ５３ｈｍｕｏｌｎｅｌｅｓｂｔｔ．０ｅｐｏｔｅｔｎｐａｔｄｉｏｔ：ｕｓｓｉａｄｐｒｔｕｓａｅｈｗｅｒｎｈｉｒ
Ｋｅｙｗｏｄ：ａｎｐｕｉｏａｈｅｄ；ｎｅｌａ；ｉｕｕｔｒｒｓｓｉｔａｌａｉｎｔａＷｎｆｌｄｒｅｆｔｓｅｃｌｅｅｓｕ
非洲紫罗兰（ａｎａｌｏａｔａｅｄ为苦苣Ｓｔｔｕａｉｎｈｗｎ１）ｐｉｎ苔科多年生草本花卉，株有毛，全叶基部簇生，圆形
ＮＡＡｗｒｐｌｄａｕｔｒｄｕ．ｈａｅｉｇｅｔｒｈｎ２％．ｎＭＳ０１．／－Ａ＋．￣．／Ａ＋．～．／ｅｅａｐｉｓｃｌｅｍｅｉｍｔｅｒｔｒａｅａ０ｅｕｓｔＩ＋．￣１ｍｇＬ６Ｂ００１０５ｍｇＬＮＡ０１１０ｍｓＬＧＡ０ｍｅｉｍ，ｔａｏｄｍｕｔｌａｉｎｅｅｔｎｒｗｈｏｒｕｓＧＡｒｍｏｅｄｆｉｕｒｗｈａｄｓｅｉｇｒｔ．ｉｄｕｏ／ｄｕｉｈｄｇｏｌｐｉｔｆｃｄｇｏｔｓｏｔ．ｉｃｏａｆｐｐｏｔｄｉｅｎｔｂｄｇｏｔｎｅｄｎａｅＷｔｍｅｉｍｆ１ｎｉｅｈ
维普资讯
天津农业科学
ＴｎｉｇｉｕｕａｃｎｅｉｊｎＡｒｈｒｌｉｃｓａｃＳｅ

非洲紫罗兰叶片再生体系的建立

- tia tion m ultipl ica tion aቤተ መጻሕፍቲ ባይዱd growth of the
培养基, 附加激素 NAA (0. 1、0. 5、1. 0)、IBA (0. 1、0. 5、1. 0)、IAA (0. 1、0. 5、1. 0) , 并以 1 2M S 为对照, 共 10 个处理进行不定根分化培养。以上愈伤诱导、不定芽分化与增殖培养基中均附加 3. 0% 蔗糖, 生根培养基中均附加 2. 0% 蔗糖, 其它:
景[1 ]。笔者于 2001 年 4 月开始在前人[2～ 10 ]对非洲紫罗兰研究的基础上, 对引进的非洲紫罗兰品种, 利用叶片离体培养技术成功地再生植株, 建立了非洲紫罗兰的无性繁殖系, 为进一步利用生物技术实现非洲紫罗兰遗传转化, 改良非洲紫罗兰种质奠定了基础。
Ξ 收稿日期: 2005207227 修回日期: 2005208215 基金项目: 名优花卉组培快繁技术研究项目 (襄科技[ 2001 ]6 号)。作者简介: 何家涛 (1965—) , 男, 汉族, 湖北宜城市人, 副教授, 主要从事园艺与生物技术教学、研究与应用推广。 T el: 0710— 3909697, 13972232099, E2m ail: h t20008@ 163. com。
of exp lan t w ith callu s num ber of exp lan t inocu lated m u ltip licata 100; T he d ifferen tiation rate in the tab le is the average num ber of 50 days series cu ltivation w ith exp lan t.
62BA 0. 5+ NAA 0. 1

悬浮细胞培养的基本方法

悬浮细胞培养的基本方法
悬浮细胞培养是一种常用于细胞学研究的方法，它可以使细胞在悬浮液中自由生长繁殖，而不需要附着于培养基底上。

以下是悬浮细胞培养的基本方法：
1.选取适当的细胞：不同的细胞对悬浮培养的条件要求不同，因此应选择适合悬浮培养的细胞。

2.制备培养液：悬浮细胞培养需要特定的培养液，其中包含细胞所需的营养物质和生长因子。

常用的培养液包括DMEM、RPMI-1640等。

3.设置培养条件：温度、湿度、氧气浓度、培养液pH等条件都需要适当的调整，以适应细胞的生长。

4.稳定细胞生长：将细胞接种于培养瓶中，并保持培养液中的细胞浓度在适当范围内，避免过度密集或过度稀疏。

5.观察细胞生长状态：定期观察细胞的生长、分裂和存活率，及时添加新的培养液和适当的生长因子，确保细胞在良好的生长状态下进行悬浮培养。

以上就是悬浮细胞培养的基本方法，它可以为细胞生长提供极其自由舒适的环境，从而更好地进行生命科学的研究。

非洲紫罗兰原生质体制备条件优化

非洲紫罗兰原生质体制备条件优化郭爱华【摘要】以苗龄为15 d 的非洲紫罗兰(Saintpaulia ionantha Wendl)幼苗顶端2片完全伸展的叶片为材料,从酶浓度、酶配比、时间、温度、渗透压等方面设置试验,研究制备非洲紫罗兰原生质体的条件,最终得出1组制备其原生质体的良好条件,即酶组合为1.5%纤维素酶+0.5%果胶酶,酶解时间为3 h,酶液渗透压即甘露醇浓度为0.6 mol/ L,温度为25℃,在此条件下可分离出大量有活力的原生质体。

【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2015(000)010【总页数】3页(P230-232)【关键词】非洲紫罗兰;原生质体;制备;优化【作者】郭爱华【作者单位】吕梁学院生命科学系，山西吕梁 033000【正文语种】中文【中图分类】S681.203非洲紫罗兰（Saintpaulia ionanthaWendl），原产于东非热带地区，多年生草本植物，苦苣苔科非洲堇属，别名非洲堇。

其植株是适合室内盆栽的优良花卉，花色斑斓、玲珑小巧、四季开花。

20世纪80年代中国才从欧美地区引种试管苗。

目前，仅少数园艺公司拥有小批量生产技术，国内非洲紫罗兰在品种创新、生产规模化、基因多样性及稳定性等研究方面都受到较大制约。

随着经济飞速发展，人民生活水平和品味的提高，人们对居家环境的要求也显著增高，非洲紫罗兰作为兼具优良观赏功能与环境净化功能的花卉品种，备受消费者欢迎，市场前景广阔［1］。

原生质体是除去细胞壁的植物细胞，其细胞膜较薄，适用于生物工程，是创造新品种和进行基因遗传改良的理想材料，是在细胞水平上进行植物人工育种和栽培体系的有效方法，是提高产业化、规模化水平的有效途径［1－3］。

探讨非洲紫罗兰原生质体的制备，为进一步研究其基因表达及培育新品种奠定基础。

1.1 材料非洲紫罗兰（混色）种子购于北京鑫农丰农业技术研究所。

1.2 幼苗培养及试验方法1.2.1 幼苗培养将种子用0.1%氯化汞表面消毒后置于培养皿中水培15 d，剪取无菌苗顶端2片完全伸展的叶片，蒸馏水冲洗干净，用双面刀片将其切成1～2 mm 的小碎块。

悬浮细胞培养书籍

悬浮细胞培养书籍
摘要：
一、悬浮细胞培养概述
1.悬浮细胞培养的定义
2.悬浮细胞培养的重要性
3.悬浮细胞培养的应用领域
二、悬浮细胞培养的过程
1.细胞种类的选择
2.培养液的配制
3.细胞的接种
4.培养条件的控制
5.细胞的收集和处理
三、悬浮细胞培养的注意事项
1.无菌操作
2.营养物质的补充
3.细胞的密度控制
4.避免细胞的聚集
5.定期观察细胞形态
四、悬浮细胞培养的应用实例
1.细胞生长速率的测定
2.细胞毒性的检测
3.药物筛选和药效评价
4.细胞信号通路的研究
正文：
悬浮细胞培养是一种在液体培养基中进行的细胞培养方法，通过该方法可以研究细胞的生理、生化特性以及与环境的相互作用。

悬浮细胞培养在生物学、医学和药学等领域具有重要的应用价值。

在悬浮细胞培养的过程中，首先需要选择合适的细胞种类，这要根据实验目的和细胞来源进行综合考虑。

接下来是培养液的配制，培养液的成分需要根据细胞种类和生长需求进行优化。

然后进行细胞的接种，将细胞悬液加入到培养液中，使其分散生长。

在培养过程中，需要控制温度、光照、pH 值和营养物质的浓度等因素，以保证细胞生长环境的稳定。

最后，收集和处理细胞，对细胞进行检测和分析。

悬浮细胞培养过程中需要注意的无菌操作、营养物质的补充、细胞的密度控制、避免细胞的聚集以及定期观察细胞形态等方面，都是为了保证实验结果的准确性和可重复性。

悬浮细胞培养在实际应用中具有广泛的应用实例，如测定细胞生长速率、检测细胞毒性、进行药物筛选和药效评价，以及研究细胞信号通路等。

我国非洲紫罗兰组织培养研究进展

我国非洲紫罗兰组织培养研究进展摘要非洲紫罗兰为多年生常绿草本花卉，因其花色艳丽、叶型优美和花期长而具有极高的观赏价值和经济价值。

该文从外植体选择、不定芽诱导、成苗培养、生根培养等方面概述了我国非洲紫罗兰组织培养研究现状，并对非洲紫罗兰离体快繁技术的研究与开发利用进行了展望。

关键词非洲紫罗兰；组培快繁；再生体系；培养基；植物激素非洲紫罗兰（Saintpaulia ionantha）又名非洲堇、圣保罗花，为苦苣苔科多年生常绿宿根草本花卉。

因其花色艳丽，品种繁多，具有极高的观赏价值，有“室内花卉皇后”的美誉。

非洲紫罗兰在一般的人工栽培条件下，授粉率和结实率都极低，不易得到种子，且繁殖周期长，短期内难以生产大量种苗满足市场需求。

采用组培快繁技术进行非洲紫罗兰快速繁殖可以缩短繁育周期，获得大量成株，并保持其优良性状，是解决该矛盾的有效途径之一[1]。

笔者就国内非洲紫罗兰组织培养方面的研究进展进行综述，以为今后的研究提供借鉴。

1 外植体的选择外植体的种类是影响组织培养效果的主要因素之一，植物不同的器官和组织，其离体培养的效果大不相同[2]。

黄靖[3]分别以茎段和叶片作为外植体，比较发现茎段诱导率低于叶片；卢慧颖等[4]和戴祥生等[5]发现带叶柄的叶片诱导不定芽的几率高于不带叶柄的叶片。

同时，非洲紫罗兰叶片组培时具有极性反应，叶片朝上放置的诱导率明显高于叶面朝下放置[3-4]。

茎与叶相比较，非洲紫罗兰的幼嫩叶片为组培试验中最受青睐的外植体材料。

2 不定芽诱导2.1 直接诱导不定芽纪绍辉[6]在非洲紫罗兰组培快繁研究中直接将试管苗接种到添加有不同含量NAA和6-BA的MS培养基中，培养50 d后发现，MS+6-BA 0.1mg/L+NAA 0.1mg/L是最好的诱导芽及丛生苗的培养基配方。

曹秀敏等研究发现，叶片外植体随着培养基中6-BA/NAA的比值逐渐增大，诱导的芽数逐渐增多。

2.2 诱导愈伤组织再分化不定芽截至目前，在诱导非洲紫罗兰愈伤组织再分化不定芽方面做了大量研究。

专题4(定稿)-非洲紫罗兰花药培养及植株再生(1)

专题4 非洲紫罗兰花药培养及植株再生一、实验目的1.了解植物单倍体培养的原理、生物学意义和应用价值。

2.掌握花药培养的操作方法。

二、实验原理植物细胞具有潜在的再生性和全能性，能发育为完整植株，故应用组织培养技术对特定组织进行离体培养，可诱导产生单倍体。

植物的生殖细胞包括雄性生殖细胞和雌性生殖细胞。

由于花药内小孢子的数量比子房内卵细胞的数量多得多，一般采用花药作为单倍体细胞培养的对象，所以，植物单倍体细胞培养又称为花药培养。

花药是植物雄性生殖器官的一部分，由一层花药壁包裹，内部含有若干个花粉粒。

花粉是由花药内的小孢子经过减数分裂发育而成，是处于特定发育阶段的植物雄性生殖细胞。

花药内的染色体数目只有体细胞的一半，因此，通过花药培养而成的植株属于单倍体植株。

图1 成熟花药的结构花药培养是将处于一定发育阶段的花粉从花药中取出，接种到适宜的固体培养基中，在一定条件下进行培养，使之形成胚状体，再分化、发育成为单倍体植株或纯合二倍体植株的过程。

三、实验材料非洲紫罗兰未开放的花蕾四、实验器材与试剂㈠实验器材超净台、眼科镊2把、9cm培养皿、枪状镊、载玻片、盖玻片、酒精灯、显微镜等。

㈡试剂1.培养基MS培养基（见专题2-1）分化培养基 MS + 1mg/L 6BA+ 0.1mg/L NAA）生根培养基 1 /2MS + 0.2mg/l BA2.乙醇：95%、85%、75%、70%3.0.1%升汞溶液（10%的次氯酸钠溶液）4.卡诺氏固定液5.1mol/LHCL6.改良苯酚品红染色液五、实验方法1.选材未开放的紫罗兰花蕾。

2.材料消毒在无菌条件下除去花萼和花瓣并取出花药，用75%酒精浸泡花药30秒，无菌水清洗3次后，再用0.1%的升汞溶液浸泡8min，然后用无菌水冲洗7~8次，去除残留升汞。

图2 从花蕾中取出花药3.花药接种和培养将消毒过的花药植于固体培养基上，置25℃、暗培养20d左右，花药膨大并长出愈伤组织，观察记录其形态特征。

《紫草细胞悬浮培养》课件

培养基优化
不断优化培养基成分和配比，降低培养成本，提高经济效益。
目前研究的不足与挑战
培养过程控制
目前紫草细胞悬浮培养过程控制仍存在一定的难度，需要进一步研究和优化。
次生代谢产物合成机制
紫草细胞次生代谢产物的合成机制仍不完全清楚，需要深入研究。
产业化应用
目前紫草细胞悬浮培养的产业化应用仍面临一些挑战，如大规模培养技术的开发、产物分离纯化等问题。
穿戴防护服
在进行实验操作时，应穿戴实验室提供的防护服、口罩、手套等个人防护用品。
避免直接接触细胞和培养液
在操作过程中，尽量减少手部直接接触细胞和培养液，以防意外感染。
消毒灭菌
实验结束后，对实验台面、仪器和器具进行彻底消毒灭菌，确保实验室安全。
定期检查实验室安全设施
确保实验室的安全设施完好、有效，及时排除安全隐患。
THANKS
离心机
用于细胞分离和洗涤。
摇床
提供适宜的旋转频率和振幅，使细胞在液体中保持悬浮状态。
显微镜
观察细胞生长和形态变化。
培养基
提供细胞所需的营养物质和生长因子。
紫草细胞悬浮培养的基本流程
细胞分离
从植物组织中分离出细胞。
细胞悬浮培养
将分离出的细胞置于培养基中进行悬浮培养。
细胞增殖
在适宜的条件下，细胞进行增殖分裂。
CHAPTER
实验操作注意事项
实验前准备
确保实验室环境清洁、无菌，准备好所需的所有设备和试剂。
细胞培养管理
定期检查细胞生长状况，及时调整培养条件，确保细胞生长良好。
实验操作规范
严格遵守实验操作规程，避免交叉污染和意外事故。
废弃物处理

《紫草细胞悬浮培养》课件

《紫草细胞悬浮培养》 PPT课件
探索紫草细胞悬浮培养的奥秘，揭示其在细胞研究中的庞大潜力。本课件将向您展示悬浮培养的定义、步骤、条件以及紫草细胞研究的应用。
研究背景和意义
1 了解紫草细胞
2 挖掘紫草细胞的潜力
探索紫草细胞的结构、功能以及潜在应用，为后续研究提供基础。
发现紫草细胞所具备的特殊性质和优势，为细胞研究领域带来新的突破。
利用悬浮培养技术研究紫草细胞的基因表达机制，为基因治疗提供重要参考。
细胞分裂研究
通过悬浮培养观察紫草细胞的分裂过程，深入了解细胞生物学的奥秘。
实验设计和结果分析
1 实验设定
2 结果展示
Hale Waihona Puke 详细描述紫草细胞悬浮培养的实验设计，包括不同条件下的对比分析。
呈现悬浮培养实验的结果数据，通过图表和图像清晰地展示研究成果。
悬浮培养的定义和原理
悬浮培养是一种在无固体基质支持下培养细胞的方法，通过提供适当的培养液来维持细胞的生长和繁殖。
紫草细胞的特点和优势
高生长速度
紫草细胞具有快速繁殖的特点，为细胞研究提供了高效的实验材料。
易于操作
紫草细胞生长适应性强，培养条件容易控制，使得实验操作简便。
多样化应用
紫草细胞可应用于多个研究领域，如药物筛选、基因表达等。
结论和展望
总结紫草细胞悬浮培养的研究成果和发现，展望未来在该领域的进一步发展和应用前景。
悬浮培养的步骤和条件
1
选择培养基
根据紫草细胞的需求选择适合的培养基配方，并加入必要的补充物质。
2
细胞接种
将紫草细胞接种进入含有培养基的培养皿中，确保细胞的生长环境良好。
3
培养条件控制