2酪酸梭状芽孢杆菌培养条件的研究
侧孢芽孢杆菌2002的培养特性及发酵条件优化
菌特性发现 Ｂ ２０ Ｌ ０ ２对 ７种痛原茵（ 金黄 色葡萄球菌、 大肠杆菌、 李斯特茵、 沙门氏茵、 小肠结肠耶 尔氏茵、 假单胞茵、
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｈ ｓ ｔｄ ｉ ｖ ｓｉａｅ ｔｅ ｘｒ ｃ ｌ ｌｒ ｎ ｙ ａ ｄ ｎ ｉ ｃ ｏ ｉＩ ｈ ｒ ｃｅ ｓ ｆ Ｂａ ｉ ｕ ｓｒ ｃ ：Ｔ ｉ ｓｕ ｙ ｎ ｅ ｔｇ ｔｄ ｈ ｅ ｔａ ｅｌ ａ ｅ ｚ ｍｅ ｎ ａ ｔｍｉｒ ｂ ａ ｃ ａａ ｔｒ ｏ ａ ｕ ｃｌ ｓ ｌ
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酪酸梭状芽孢杆菌
摘要酪酸梭状芽孢杆菌，存在于人和畜禽肠道内，分类归属于梭菌属，为革兰氏阳性厌氧杆菌，是一种益生菌。
酪酸梭状芽孢杆菌作为微生态制剂，本身能形成内生芽孢，具有耐高温、耐酸、耐胆盐、耐部分抗生素等特性，目前广泛应用于调理人体肠胃的整肠类药品，能大幅降低肠炎的发病率，对菌群失调引起的腹泻，抗生素相关的肠炎，便秘等均有良好疗效，且无任何毒副作用。
此外酪酸梭状芽孢杆菌作为兽药和饲料添加剂，比非芽孢类活菌制剂有显著的优势。
由于酪酸梭状芽孢杆菌制剂有以上的诸多优良特点，本论文采用酪酸梭状芽孢杆菌做为研究对象。
与此同时，随着环境保护要求的日趋严重，资源枯竭，节约资源迫在眉睫。
为了节约电能，节约成本，避免用离心的方法沉降微生物，寻找酪酸梭状芽孢杆菌絮凝的最佳物质，最佳浓度有着重要及实际意义。
本实验根据各种物质对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝机理不同，以寻找最适合的絮凝剂。
主要对比微生物自身沉降，三种不同的壳聚糖絮凝，生物絮凝制剂，硅藻土，沸石粉及碳酸钙对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝效果，采用梯度对比实验，进行单因素浓度分析，通过絮凝后对上清液中活菌体浓度的来比较絮凝的效果，以优化出合适的絮凝剂及其最适使用浓度。
经过一系列的实验表明，壳聚糖（DAC≥90%）在其浓度为0.1%时对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝效果最好，代替离心沉降微生物的方法，并达到节约能源节约时间，人力的目的。
关键词：酪酸梭状芽孢杆菌；微生物絮凝；最适浓度AbstractClostridium butyricum is a kind of probiotics. It is Attributed to Clostridium, a Gram-positive anaerobic bacillus. It can generate endogenous spore. Clostridium butyricum has strong ability to resist high temperatures, low pH and some antibiotics. Clostridium butyricum is widely used in human health as gastrointestinal medicine. It can significantly reduce the incidence of colitis caused by diarrhea, antibiotic-associated colitis, constipation, etc. So this paper adopts the butyric acid clostridium as research object.At the same time, as the requirement of environmental protection has become increasingly serious, resource depletion, save resources is imminent.In order to save power, save costs, avoid to use the method of centrifugal sedimentation microbes, looking for butyric acid clostridium flocculation of best material, the best concentration has important and practical significance.This experiment according to various substances of butyric acid clostridium flocculation mechanism is different, to find the most suitable flocculant. Microbial subsidence of main contrast, three different types of chitosan flocculation, biological flocculating agents, diatomite, zeolite powder and calcium carbonate of butyric acid clostridium flocculation effect, gradient is used to contrast experiment, the concentration of single factor analysis, through after flocculation of live bacteria concentration in the supernatant fluid to compare the effect of flocculation, in order to optimize the suitable concentration of flocculating agent and its optimal use.After a series of experiments showed that chitosan (DAC 90% or higher) in the concentration of butyric acid was 0.1% of clostridium flocculation effect is best, instead of the microbial centrifugal sedimentation method, and achieve energy conservation to save time and manpower.Key words: Clostridium butyricum; Microbial flocculation; The optimal concentration目录序言 ................................................................................................................................................... - 1 -第1章实验材料 (4)1.1菌种来源 (4)1.2主要原材料 (4)1.3主要实验仪器 (5)1.4培养基 (5)第2章实验方法 (6)2.1培养方法 (6)2.2溶液的配制及浓度 (6)2.3检测方式 (6)2.3.1原始菌液，上清液中活菌数及芽孢数的检测方法 (6)2.3.2数据的处理 (7)2.4实验方法 (7)2.4.1壳聚糖(DAC≥90%)对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (7)2.4.2壳聚糖(DAC≥85%)对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (7)2.4.3水溶性壳聚糖对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (7)2.4.4生物絮凝剂对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (8)2.4.5硅藻土对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (8)2.4.6沸石粉对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (8)2.4.7碳酸钙对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (8)2.4.8离心对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝实验 (9)2.4.9絮凝剂的优化实验 (9)第3章结果与讨论 (10)3.1有机絮凝剂对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝效果 (10)3.1.1壳聚糖(DAC≥90%)对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (10)3.1.2壳聚糖(DAC≥85%)对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (11)3.1.3水溶性壳聚糖对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (12)3.1.4生物絮凝剂对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (13)3.1.5离心絮凝酪酸梭状芽孢杆菌 (14)3.1.6絮凝剂的优化—壳聚糖(DAC≥90%)对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (14)3.2无机絮凝剂对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝效果 (15)3.2.1硅藻土对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (15)3.2.2沸石粉对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (16)3.2.3碳酸钙对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (17)3.2.4絮凝剂的优化—硅藻土对酪酸梭状芽孢杆菌的絮凝 (18)第4章结论 (20)参考文献 (21)致谢 (22)序言1. 酪酸梭状芽孢杆菌简介酪酸梭状芽孢杆菌(Clostridium butyricum)，即丁酸梭状芽孢杆菌。
2酪酸梭状芽孢杆菌培养条件的研究
0 个用量水平进行培养 ! 基础培养基中 其 它成 分 保持
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表’ 葡萄糖添加量对菌体浓度的影响
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检测方法 菌数测定用血球计数法 $菌体形态用芽孢染色法
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酪酸梭状芽孢杆菌发酵培养基的优化
酪酸梭状芽孢杆菌发酵培养基的优化戚薇;何玉慧;李安东;王海宽【期刊名称】《天津科技大学学报》【年(卷),期】2010(025)002【摘要】验证了高层半固体琼脂试管法比固体琼脂平板法更具有良好的厌氧性能,能准确地对酪酸梭状芽孢杆菌进行活菌计数.通过对发酵培养基中不同碳源、氮源、生长因子进行单因素研究,L9(33)正交实验进一步优化得到最佳培养基组成为(g/L):胰蛋白胨10,葡萄糖8,酵母膏4.用此培养基在37℃培养24 h,活菌数可达4.1×108mL-1.培养基中添加K2HPO45 g/L、MgSO4·7H2O 0.2 g/L、MnSO4·H2O 0.2 g/L、CaCO31 g/L培养32 h时,酪酸梭状芽孢杆菌芽孢转化率可达95%.【总页数】4页(P18-21)【作者】戚薇;何玉慧;李安东;王海宽【作者单位】工业微生物教育部重点实验室,天津科技大学生物工程学院,天津,300457;工业微生物教育部重点实验室,天津科技大学生物工程学院,天津,300457;工业微生物教育部重点实验室,天津科技大学生物工程学院,天津,300457;工业微生物教育部重点实验室,天津科技大学生物工程学院,天津,300457【正文语种】中文【中图分类】Q933【相关文献】1.酪酸梭状芽孢杆菌生理功能的研究进展 [J], 陈筱筱;赵娜;Manizha;Abdul Rahim;王方岩2.酪酸梭状芽孢杆菌低成本培养基的优化 [J], 戚薇;李安东;尹娅凤;肖瑞峰;宗志友;王海宽3.益生菌酪酸菌CB-7发酵培养基及培养条件的研究 [J], 陈秋红;孙梅;施大林;刘淮;胡凌虹;张维娜;匡群;谢骏;何义进4.酪酸梭状芽孢杆菌培养条件的研究 [J], 王刚5.酪酸梭状芽孢杆菌培养条件的研究 [J], 匡群;孙梅;施大林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酪酸菌
益生源新一代微生态制剂—酪酸菌的研究与开发前景随着我国畜牧业飞速发展和益生源微生态制剂在畜牧业中的推广应用，产生了一些问题，如畜禽粪便中产生的恶臭味对环境的污染、抗生素的不合理应用、养殖成本高等逐渐显现出来。
酪酸菌作为一种新型微生态制剂，具有的耐热耐酸及对多种抗生素有抗生的特点，被广泛的应用在临床上治疗多种肠疾病，特别是对目前饲料中普遍添加抗生素的情况下仍能发挥其效能有特别意义，是一种很有开发前景的微生态制剂。
1.酪酸菌的来源及特性酪酸菌(Clostridium butyricum)即丁酸菌，为梭状芽孢杆菌，厌氧，在自然界中存在于奶酪、天然酸奶、人与动物粪便、土壤中，革兰阳性，在老培养物中能变为阴性。
酪酸菌作为微生态制剂的研究，是1933年由日本千叶医科大学宫人近治首先发现并报道。
它能产生酪酸、乳酸等短链脂肪酸，能抑制大肠杆菌、葡萄球菌等多种肠道有害菌，在促进双歧杆菌等有益菌增殖等方面有明显效果。
还能降解多糖类物质，也可预防和治疗肠道内菌丛区系的紊乱，并能合成维生素B。
酪酸菌为梭状芽孢杆菌，菌体为直或微弯，孢子圆形或椭圆形，为内生芽孢，常使菌体中部膨大呈梭形。
对外界环境有较强的抵抗力。
经80oC、30min和90℃、lOmin 热处理后全部存活；加热90℃、20min后，95％存活；加热IO0~C、5min后30％存活。
耐热、耐酸，pH值为1．0-5．0时仍能存活；pH值为4．0-9．8时能适合其生长。
因此，酪酸菌能够抵抗饲料制粒过程中的高温、高热，与目前广泛应用的非芽孢类活菌制剂相比，更具广阔的市场前景。
2.酪酸菌作为微生态制剂的应用功能2．1 调节肠道微生态平衡，对肠道致病菌具有拮抗作用酪酸菌能促进肠道内有益菌群增殖和发育。
研究发现。
酪酸菌最显著的生物特性是能与双歧杆菌、乳酸菌、粪杆菌等肠道有益菌共生，并促进其发育。
酪酸菌在促进肠道有益菌群增殖的同时，还能防止病原菌及腐败菌在肠道内的异常增殖，纠正肠道菌群紊乱，减少肠毒素的发生。
丁酸梭菌抑菌实验
丁酸梭菌抑菌实验丁酸梭菌抑菌实验丁酸梭菌，⼜名酪酸梭菌，丁酸梭状芽孢杆菌，是⼀种专性厌氧的⾰兰⽒阳性芽孢杆菌。
丁酸梭菌代谢产物的突出特点就是丁酸、B族维⽣素以及叶酸含量⾼。
⼤量研究表明，丁酸梭菌具有极强的整肠作⽤，它能够通过抑制致病菌的⽣长繁殖从⽽调节肠道的微⽣态平衡，预防和治疗腹泻、肠炎等疾病。
1 实验材料共培养⽤液体培养基;LB培养基2 实验⽅法2.1 丁酸梭菌对霍乱沙门⽒菌的抑制作⽤①霍乱沙门⽒菌种⼦培养：取平板活化好的菌种转接到LB液体三⾓瓶中，装液量25 mL/100 mL，37℃，150 r/min培养12-24h，取培养菌液测活菌数和pH值。
②丁酸梭菌单独培养：取丁酸梭菌菌粉0.1 g接种到装量为25 mL/30mL的细菌培养瓶中，置于37℃静⽌恒温培养24 h左右。
(可按此⽐例扩⼤培养体积，最低⽐例为0.1 g：25 mL)③丁酸梭菌和霍乱沙门⽒菌混合培养：活化好的丁酸梭菌培养液5 mL接种到装液量为20 mL/30mL的细菌培养瓶中，再把培养好的霍乱沙门⽒菌菌液1 mL同时接⼊该共培养液中，37℃恒温静⽌培养。
对照组为向同样的共培养液体培养基中(装液量为20 mL/30 mL)接种霍乱沙门⽒菌菌液1 mL，37℃恒温静⽌培养。
分别在16和24 h 测pH值及沙门⽒菌活菌数。
④计数采⽤平板涂布法。
选择2～3个适宜梯度稀释液，吸取100 µL涂布平板，倒置于严格厌氧培养箱或严格厌氧培养袋中，37℃培养18～36 h后计数。
每个梯度做两个平⾏，每个平板的菌落数在30～300范围内有效。
2.2 丁酸梭菌对肠出⾎性⼤肠杆菌、魏⽒梭菌的抑制作⽤实验⽅法同上，魏⽒梭菌种⼦液为严格厌氧，应采⽤共培养液体培养基。
3 实验结果3.1 对霍乱沙门⽒菌的抑制结果丁酸梭菌对霍乱沙门⽒菌表现出⾮常强的抑制作⽤，24h活菌数从单独培养时2.0×108CFU·mL-1减少到1.2×103CFU·mL-1。
酪酸梭状芽孢杆菌生理功能的研究进展
酪酸梭状芽孢杆菌生理功能的研究进展[摘要]酪酸梭状芽孢杆菌是一种革兰氏阳性厌氧内生芽孢杆菌,作为微生态制剂,在临床已有应用。
近年研究发现,该菌对机体生理功能的影响,不仅局限在调整肠道菌群维持肠道微生态平衡方面,对增强机体免疫力、抗肿瘤等也有较突出的效应。
该文特此综述,为其更为广泛的被认知、应用与研究,提供帮助。
[关键词] 酪酸梭状芽孢杆菌;应用;生理功能酪酸梭状芽孢杆菌(Clostridium butyricum, C. butyricum)是一种革兰阳性厌氧内生芽孢杆菌,该菌有多种叫法如丁酸杆菌、丁酸梭菌、丁酸梭状芽孢杆菌、丁酸菌、酪酸梭菌、酪酸杆菌、酪酸菌。
在1980年,学术界才将其统一命名为酪酸梭状芽孢杆菌。
该综述就近年该菌在机体生理功能的研究进行总结展望。
一、维持肠道的微生态平衡酪酸梭状芽孢杆菌属于正常肠道菌群,能保存肠道本身的优势菌种,维持微生态的平衡。
研究证实酪酸梭状芽孢杆菌不仅通过分泌低聚糖酶,降解多糖为低聚糖,促进肠道内有益菌的增殖,还可通过竞争营养物质、争夺粘附位点抑制有害菌[1]。
目前,该菌已被作为微生态制剂,广泛应用于临床及畜牧业。
酪酸梭状芽孢杆菌在与其他有益菌混合培养时可促进其增殖并与之共生特别是双歧杆菌,乳酸菌,粪杆菌等[2]。
另外,Takahashi M初次证明了酪酸梭状芽孢杆菌可拮抗幽门螺杆菌,此外,该菌对肠出血性大肠杆菌、痢疾志贺菌、霍乱沙门菌、金黄色葡萄球菌、产气夹膜梭菌和霍乱弧菌都有明显的抑制作用[3],甚至可减少艰难梭菌产生毒素并抑制其芽孢萌发[4]。
临床上已将酪酸梭状芽孢杆菌应用于预防由艰难梭菌引起的伪膜性肠炎。
另外,酪酸梭状芽孢杆菌对某些病毒、真菌也有较好抑制作用,现已被应用于治疗病毒感染性腹泻以及辅助治疗由真菌直接引起的疾病如鹅口疮和肠道病毒引起的疾病如手足口病。
二、产生对机体有益营养物质2.1 丁酸酪酸梭状芽孢杆菌可产生多种短链脂肪酸,其中丁酸最为主要。
芽孢菌的培养及鉴定
芽孢菌的培养及鉴定芽孢菌是一类能够形成芽孢的细菌，芽孢是它们在不良环境下产生的一种特殊结构，具有很强的抗逆性。
芽孢菌在自然界中分布广泛，在农业、工业、医疗等领域都有着重要的应用价值。
因此，对芽孢菌的培养和鉴定具有重要的意义。
一、芽孢菌的培养（一）培养基的选择培养芽孢菌需要选择合适的培养基。
常用的培养基有营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）等。
这些培养基能够提供芽孢菌生长所需的营养物质，如碳源、氮源、无机盐和生长因子等。
（二）培养条件芽孢菌的培养条件包括温度、pH 值、氧气需求等。
大多数芽孢菌在 25-37℃的温度范围内生长良好，但也有一些特殊的芽孢菌需要更高或更低的温度。
芽孢菌对 pH 值的适应范围较广，一般在 50-90 之间。
有些芽孢菌是好氧菌，需要充足的氧气供应；而有些则是厌氧菌或兼性厌氧菌，对氧气的需求较低。
（三）接种与培养在进行芽孢菌培养时，首先要对样品进行适当的处理，如稀释、研磨等，以获得分散的细菌细胞。
然后，使用无菌操作技术将样品接种到培养基上。
可以采用平板划线法、涂布法或倾注法等接种方法。
接种后，将培养皿或培养瓶放入设定好条件的培养箱中进行培养。
培养过程中要定期观察，注意菌落的形态、颜色、大小等特征的变化。
一般来说，芽孢菌的菌落较大、表面干燥、不透明，边缘不规则。
二、芽孢菌的鉴定（一）形态学鉴定通过显微镜观察芽孢菌的细胞形态、大小、排列方式等特征，可以对其进行初步鉴定。
芽孢菌的细胞形态多样，有杆状、球状、螺旋状等。
芽孢通常呈圆形或椭圆形，位于细胞的一端或中央。
（二）生理生化鉴定生理生化鉴定是芽孢菌鉴定的重要方法之一。
可以通过检测芽孢菌对各种碳源、氮源的利用能力，对各种酶的活性，以及对抗生素的敏感性等生理生化特性来进行鉴定。
例如，可以进行糖发酵试验，检测芽孢菌是否能够发酵不同的糖类产生酸和气体；进行吲哚试验，检测芽孢菌是否能够产生吲哚；进行明胶液化试验，检测芽孢菌是否能够液化明胶等。
酪酸梭状芽孢杆菌培养条件的研究
的 环境 素掷啊 很 强的 抗性．冈 制 荆保 存期长 、 活
性 稳 定、 存在 述 题。 此 酪酸 梭 菌制剂 在 药 ｄ 和 饲料 添 加荆领域 具 较 高的 实用 价值 ［ ｆ酪酸 梭 菌制剂具 干 Ｉ ｜ １ ］ 『｝ 者多优 点， 此进行 述 酪 酸梭 培 莽条件的研 究 址啊必 要性 和实 际意义 的。 本实验根 据酪 酸梭状 芽孢 杆茼 的茼种 属性 以提
关键词 酪酸梭菌 中图分类号： ８ ６ 文献标识码 ： 文章编号 ： ０２ ２ １ （０ ２０ — ０８ ０ ￥ １ ３ Ａ １０ － ８ ３２ ０ ）５ ００ — ５
酪陵 梭状 芽抱杆 菌 （ ｌｓ ｉｉ ｂ ｔｒ ｕ 为厌 ｃ ｔｄｕ ｕｙｉ ｍ） ｏ ｒ ｍ ｃ 氧 内 井抱 菌 。 实验 证叫 、 用酪 酸 梭 曲制 造 的微 生态
维普资讯
科学试验与研究
酚 酸牧 劳 孢籽 苗 烙 希 秀 件 的帝 究
王 刚 天津 轻工业 学院
摘要 通过对酪酸棱 菌培养过程中的各种影响因素的研 究，最终确定最佳 的培 养条件。
在 此 条件下 ，酪 酸 菌茵体得 率和 芽孢 率 均可 达到较 高水平 。 中试 也取得 相 同的结果 。
表 １ 碳源选择 实验
凿种 ：本实 验室 保 减的 酪酸 梭状 芽孢 杆 菌
ＣＢ５
： 材：光 学 显微镜 ．厌 氧罐 ．温度 、器 梯 度蚺 养仪 ｉ 蚺 养 箱等 温 二 试剂 ｆ 、 ｉ 紫染 液 、 炭酸 复红 ＾
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侣鹳研究
ＩＥ ＩＩ－ｌ Ｉ Ｈ ＝Ｉ） ！ Ｓ Ａ ！ Ｎ Ｉ￣ ！ － Ｃ ． Ｚ＇
表 ６ 无机盐 及微 量元素配 比试验结果 ％
试验 以胰蚩 自胨 、酵 母 浸 膏粉 和 牛 肉浸膏 为 复合氨
酪酸梭状芽孢杆菌培养条件的研究
垦墅兰；鳖墼垫鉴茎垫堑堕堡鲞鱼堡竺堕垄ｊ．耋萋圈＿Ｉ＿■Ｋ一２５型血球计数板，上海医乐医用光学仪器厂。
１．５培养方法液体深层静置培养：２５０ｍｌ三角瓶装液量２００ｍ１．于３７℃恒温培养箱中静置培养。
１．６检测方法菌数测定用血球计数法、菌体形态用芽孢染色法［４］染色后于显微镜下观察。
２结果与分析２＿１培养基成分试验２．１．１碳、氮源配比试验调节碳、氮源种类和添加量，为菌体生长提供足够的营养．从而使菌体浓度达到最大。
２．１．１．１不同碳源对菌体浓度的影响分别以１．Ｏ％葡萄糖．３．Ｏ％蔗糖，３．０％乳糖．３．Ｏ％可溶性淀粉为碳源．代替基础培养基中Ｏ．５％的葡萄糖．基础培养基中其它成分不变．对酪酸菌进行液体深层静置培养。
培养２４ｈ．结果见表１。
试验结果表明以葡萄糖为碳源培养效果最好。
表ｌ、不同碳源对茵体浓度的影响壁塑（堑２塑塑塑！：！壁堕！：！塾塑！：Ｑ里鳖垡鎏塑！：１２４ｈ菌体浓度（个／ｍ１）３．８×ｌ０８２．０×ｌ０８２．０×１０８１．５×１０８２．１．１．２葡萄糖添加量对菌体浓度的影响以葡萄糖为碳源，分别用０．３％、０．５％、１．０％、１．５％４个用量水平进行培养．基础培养基中其它成分保持不变。
培养２４ｈ结果见表２。
表２葡萄糖添加量对茵体浓度的影响萱萱塑（丝２Ｑ：ｉＱ：ｉ！：Ｑ！：ｉ２４ｈ菌体浓度（个／ＩＩｌｌ）２．３×１０８３．８×１０８４．３×１０８４．３×１０８试验结果表明．葡萄糖添加量１．０％．１．５％时菌体浓度最大．但从节约成本角度考虑．葡萄糖添加量１．０％为最佳。
２．１．１．３不同类型蛋白胨对菌体浓度的影响分别以１．０％的酪蛋白胨、胰蛋白胨、牛肉蛋白胨、大豆蛋白胨代替基础培养基中１．Ｏ％的牛肉蛋白胨．其它成分不变。
培养２４ｈ，结果见表３。
由试验可知１．Ｏ％胰蛋白胨的培养效果最好。
表３不同类型蛋白胨对茵体浓度的影响堡鱼堕耋型堕堡皂堕堕堡皂整盔里堡皂鉴±堕堡鱼鉴２４ｈ菌体浓度（个，ｍ１）４．２×１０８４．８×１０８３．２×１０８３．８×１０８２．１．１．４氮源配比对菌体浓度的影响鉴于酪酸菌的生长需求．本试验以胰蛋白胨、酵母膏、牛肉浸膏为复合氮源，代替基础培养基中的牛肉蛋白胨、酵母膏．并进行不同添加量配比试验．培养２４ｈ．结果见表４。
酪酸梭状芽胞杆菌研究进展
小鼠缺乏ＴＬＲ途径中必需的下游组分，因此也就阻止了
损伤，发挥了抗炎作用。ＴＬＲ信号系统。他们发现，这样的小鼠肠道受到了严重的损
２００５年８月，ＭＥＩＥＲ ＲＥＭＹ和ＳＴＥＵＥＲＷＡＬＤ ＭＩ－
害。这种损害并不是急性炎症的后果，也不是由于共生菌无
ＣＨＡＥＬ著文指出，很多研究表明，不仅口服一种或多种益生
的促炎症反应。蓝色椭圆中包括的抗生素、治疗性疫苗、益生菌是治ＴＬＲ信号系统所需要的那些配体和由此而产生的ＴＬＲ信号
树状突墨兰篡薯竺：耋訾愁曩兰篆翟篓ａ。ｎ翻ｔｉｇ甘ｅｎ古ｐ细ｒｅ曲ｓｅｎ田ｔｉｎ：ｇ 疗肠性炎症的常用方法。肠道菌群产生各种抗原，派伊尔淋巴集结
。（Ｐ。ｅｙｅ。ｒ：兰？：。望警绒专絮矍竺至墅竺萼彗兰竺梦原并将其转移给
该文简要综述酪酸梭菌在预防和治疗肠炎及肠癌方面的
【收稿日期］２００６—０１—１０ 【作者简介】李雄彪（１９５２一）男，理学博士，教授，从事生物技术和微生
态学研究
万方数据
研究进展。 １酪酸梭菌在防治腹泻、肠炎等疾病中的作用
酪酸梭菌能够调节肠道的微生态平衡，预防和治疗腹泻、 肠炎等疾病的认识已经被广泛接受。由于酪酸梭菌在肠道， 主要在结肠中发挥作用，因此对于它们和肠道黏膜的相互作 用，以及肠道黏膜被损伤后它们对其进行修复的作用就成为 了研究的重点。 １．１ 酪酸梭茵防治腹泻、肠炎及其与肠道黏膜相互作用的 实验研究 陈穗等人在１９８９年就对慢性腹泻患者的肠道微 生物菌群失调进行了调查Ｅ”］。熊德鑫等人近年发现．酪酸梭 菌对氨苄青霉素钠引起的实验性腹泻小鼠有显著止泻作用， 给药２ ｄ的止泻率达８７．０％，３ ｄ就全部排便正常，而对照组 却全部死亡［１“。程留芳等在人体临床研究中发现，酪酸梭菌 治疗急慢性腹泻有效率高达９９％，而且起效快，疗程短［１４，１５］。 任义先等则发现酪酸茵能有效治疗婴幼儿病毒性肠炎Ｅ”］。 王德颖等对酪酸菌制剂治疗婴幼儿秋季腹泻进行了临床观 察［１“。酪酸菌制剂治疗急慢性腹泻的效果很好的一个重要 原因可能是酪酸梭菌对肠出血性大肠埃希杆菌、痢疾志贺菌、 霍乱沙门菌等有显著的抑制作用，而对双歧杆菌却有促进生 长的作用Ｅ１８，１９］。
酪酸梭菌
• ４．３丁酸菌微生态制剂的发酵生产工艺 丁酸菌微生态制剂生产工艺是在国内最近 几年才进行研究，目前发酵培养液活菌可 以达到１．９×１０９ｃｆｕ／ｍＬ，芽 孢转化率达到９５％。生产成本较为低廉， 生产工艺基本流程如下
• 生产工艺基本流程如下
• 培养基原料－ 溶解一
灭菌保护
剂ｌｔＤＨ入菌种
一活化
一
• 2 、酪酸梭状芽孢杆菌的生产过程
• 3 、 产品的分离纯化
• 4、生产注意事项
• 五 产品介绍
• 一、酪酸梭菌相关产品 • 二、酪酸梭菌相关专利
• 六·酪酸梭菌的其他研究
• 一、酪酸梭菌基因的研究 • 二、酪酸梭菌质粒的研究 • 三、酪酸梭菌家政蛋白质的研究 • 四、酪酸梭菌的鉴定和新菌株的分离识别 • 五、酪酸梭菌应用于化工生产的研究 • 六、酪酸梭菌神经毒素的研究
简介
• 酪酸梭菌又称：酪酸 梭状芽孢杆菌，酪酸 杆菌，酪酸菌，丁酸 梭状芽孢杆菌，丁酸 梭菌，丁酸杆菌，丁 酸菌。拉丁文： Clostridium butyricum
酪酸梭菌的发现与发展
• 酪酸梭菌是1933 年由日本千叶医科大学宫 入近治博士首先发现并报告的, 因此又名宫 入菌。本菌存在于土壤、动物和人体的肠 道中。我国青岛东海药业有限公司创研的 酪酸梭菌CGMCC0313.1活菌制剂（阿泰宁、 常立宁、宝乐安、助宝康等），于2004年 获得国家食品和药品监督管理局新药证书。 2005年3月，青岛东海药业公司通过了国家 食品药品监督管理局的GMP认证，商业化 生产酪酸梭菌胶囊、片剂和散剂，医患双 方对其都有较好的评价。
酪酸梭菌
组员：龚洪凯 魏晓峰 阮醒龙 曹恩荣
目录
• 一 简介
• 1·酪酸梭状芽孢杆菌的别名
酪酸梭菌
生物学特性及分类
• １形态特征丁酸菌是一种直或弯曲的革兰 氏阳性厌氧内生芽孢杆菌，后期培养物可 变为革兰氏阴性杆菌，菌体灰白色，呈煎 蛋样，中间隆起旧１，卵圆，单个或成对， 短链，偶见长丝状菌体，周生鞭毛，具有 运动性。菌体中常有圆形或卵圆形的巨大 芽孢，无孢子外壁和附属丝，形成芽孢后 一端膨大呈鼓锤状，或中部膨大呈梭状或 纺锤状。
、酪酸梭菌相关产品
酪酸梭菌的其他研究
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简介
• 酪酸梭菌又称：酪酸 梭状芽孢杆菌，酪酸 杆菌，酪酸菌，丁酸 梭状芽孢杆菌，丁酸 梭菌，丁酸杆菌，丁 酸菌。拉丁文： Clostridium butyricum
酪酸梭菌的发现与发展 • 酪酸梭菌是1933 年由日本千叶医科大学宫 入近治博士首先发现并报告的, 因此又名宫 入菌。本菌存在于土壤、动物和人体的肠 道中。我国青岛东海药业有限公司创研的 酪酸梭菌CGMCC0313.1活菌制剂（阿泰宁、 常立宁、宝乐安、助宝康等），于2004年 获得国家食品和药品监督管理局新药证书。 2005年3月，青岛东海药业公司通过了国家 食品药品监督管理局的GMP认证，商业化 生产酪酸梭菌胶囊、片剂和散剂，医患双 方对其都有较好的评价。
生产工艺
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1、酪酸梭状芽孢杆菌的培养 2 、酪酸梭状芽孢杆菌的生产过程 3 、 产品的分离纯化 4、生产注意事项
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五Leabharlann 产品介绍一、酪酸梭菌相关产品 二、酪酸梭菌相关专利
六· 酪酸梭菌的其他研究
一、酪酸梭菌基因的研究 二、酪酸梭菌质粒的研究 三、酪酸梭菌家政蛋白质的研究 四、酪酸梭菌的鉴定和新菌株的分离识别 五、酪酸梭菌应用于化工生产的研究 六、酪酸梭菌神经毒素的研究
酪酸梭状芽孢杆菌培养条件的研究 (1)
酪睦棱状萄：他丰ｌ陌（ｃＩｏｓ”ｉｄｊｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）为版 氯内牛芽他阿，寅验川纠、川酪胺梭茼制造的微，ｌ态 脚删１』Ｉ Ｊ前流ｆ，的舞种ｂｄ类产，编＃ｊ比较，其作用效 粜啦并Ｉ Ｌ能’ｊ抗，ｌ二豢眦仉使Ｊｎ。
…扪“泛ｍ川峋怍芽他娄活衙制削普遍存任保存 期蛳、活性小稳定的缺点．给寅阳；脚刖带来许多【丰Ｉ 船、这个ｎｄ燧化动物川微，ｌ·奁制剂卜＾尤向明显。ｆ｜ｌ ｊ： 动物川微小志制剖的纠、允址通过饲料添加途径，胍 ｒ１：此过稚·ｆ，币Ｉｌ』避免的要经历某些『盘温ｒ盘湿的生产、 运输发｛＿ｌｌｆ喂耶亿ＩＩ：芽抱类活茼制剂在这种情况下． ｊ｝活‘Ｐｆ：会凡蛳降低．进巾严艰影响使用效果。而酪酸 棱前制剂ｔ｜ｌ｝】Ｉ衙址以芽抱阡；式存征的．埘各种恶劣 的环境Ｉｑ豢都｛ｊ舣灶的抗１陀，ｌ目ｌ斫制剂保仔期长、活 ｔ１：稳宅，币仃ｎ．１：述川题。嘲此酪酸棱菌制剖拒以药 和饲料添加剂领赋Ｊ｝ｆＩ较一岛的变川价值。
仉械艟并降低（Ｐ＜Ｏ ｏＪ）：断奶ｎｄ时降低Ｉ＿指肠
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万方数据
ｎ科学试验与研究
７组的培养结果较好。 ５）碳氮综合试验：结台以卜两个试验结果，进
行不同碳氮比Ｆ菌体得率和芽孢，ｐ成率的试验。结 果见表５。
１）碳源选择 以箭萄精、蔗糖、乳精、可溶性淀粉为碳源，进 ｆｊ培莽．结果见表ｌ， 实验结果表明．以葡萄糖为碳源培莽效果较好。
表１ 碳源选择实验
。
Байду номын сангаас 万方数据
啊啊研奔Ｉ：｜三｜兰｜）Ｊ千１三ｓｌＨＲｃ：卜Ｉ Ｎ：．ｓ，２０：１
响科学试验与研究
道．鹰用ｓＥｗ产生的较低免疫激活水平导致仆猜机 体盘㈠质０Ｃ再！极址并提＾（Ｐ（Ｏ ０ｌｊ，片使机体瞳 Ｊ＾Ｊ术搬｛ｌ】！符提，：Ｊ＿５ ｆＰ＜０．Ｏ Ｊ），ｓＥｗ计箔胴体组成的 影响机制’ｊｊ｝降低机体免疫激活水乎街切＃１茭。 ２．５疾璃挖￥４：ｓＥｗ起源Ｊ：埘堆ｒｊ『Ｊ抗’｝素治疗的 桀哆病＋莓忡厦细曲性病原的睡Ａ传播进行阻断．Ⅲ 此ｓＥｗ址消除｛嚣场病原作、净化帑场的干丁救打法。需 野ｆｉ＿ｉ除ｊＩｌｉ豫体的种类决定ｓＥｗ的具体断奶时Ｍ。”， 以ｌｉＩｉ际小Ｍ的阿；分痫腺体的典体Ｈ龄为：小ｒ １０ Ｈ 龄·Ｉ『以淌除猜帅炎支原体、多杀性巴氏杆茼和猜繁 殖呼Ⅱ蜃综舟癌：小Ｊ‘１２｜ｆ龄叮以消除帑霍乱沙ｆ Ｊ氏 陌：小ｒ １４ Ｉ｛龄ｕｎＨ消除猪剐哺血朴凿：小Ｆ ２１｝』
酪酸梭状芽孢杆菌发酵培养基的优化
关键词 ：酪酸梭状芽孢杆菌 ；高层半固体琼脂 ；饲料添加剂 ；培养基优化
中图分类号 ：Ｑ ３ ９３ 文献标志码 ：Ａ 文章编号 ：１７ ．５０ ２ １） ２０ １－４ ６ ２６ ｌ （０ ０ ０ ．０ ８０
Ｏｐ ｉ ｚ ｔｏ ｆ ｅ ｍｅ ｔ ｔ ｎ Ｍ ｅ ｉ ｍ ｏ ｏ ｔｉ ｉ ｍ ｕ ｙ ｉ ｕ ｔｍｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｒ ｎ ａ ｉ ｄ ｕ ｆ ｒＣｌ ｓｒｄ ｕ ｂ ｔｒｃ ｍ Ｆ ｏ
第２ ５卷
第 ２期
天津科技大学学报
Ｊ ｕｎ ｌ ｆ ｉｎｉ ｎｖ ｒｉ ｆ ｃｅ ｃ ＆ Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｏ ｒ ａ ａ ｊ Ｕ ｉｅｓ ｙｏ ｉｎ ｅ ｏＴ ｎ ｔ Ｓ ｅｈ ｏｏ ｙ
Ｖ １ ５ ＮＯ ２ ｂ． ２ ． Ａｐ ． ０ ０ ｒ２ １
２ １ 年 ４月 ００
Ｍｇ Ｏ ‘ ０ ０２ｅＬ． Ｓ ４ ０ ０２ｇ ｎ ａ Ｏ ／ ｅｍｅｉｍ． ｈ ｉ ｅｔ ｐ ｒ ｒ ｎ ｔ ｒａｈ ｄ９ ％ Ｓ ４ Ｈ２ ． ｄ Ｍｎ Ｏ ‘ ． ／ ａｄＣ Ｃ ３ｌｇ ｉ ｔ ｄｕ ｔｅｈｇ ｓ ｓｏｅｆ ｍｉｇｒ ｅ ｅｃ ｅ ５ ７ Ｈ２ Ｌ Ｌ ｎｈ ｈ ｏ ａ
Ｔａｊ ｉｅｓｙｏ ｃ ｎｅ＆Ｔ ｃｎ ｌｇ ，Ｔａｊ ０ ４ ７ ｈｎ ） ｉ ｉ Ｕｎ ｒｉ ｆ ｉ ｃ ｎｎ ｖ ｔ Ｓｔ ｓ ｒ ｃ ：Ｔ ｅ ｈ ｇ ａ ｅ ｅ — ｏｉ ｇ ｒｔ ｂ ｔ ｏ ａ ｅ ｎ ｓｕ ｉｄ ｆｒｔ ｗｈ ｃ ｈ ｗｓｔ ａ ｓｍｏ ｅ ａ ａ ｒ ｂ ｃ ａ ｄ ｈ ｉ ｈ ｌｙ ｒｓ ｍｉ ｌ ａ ａ ｕ ｅｍｅ ｈ ｄ ｈ ｓｂ ｅ ｔ ｄ ｅ ｓｌ ｓ ｄ ｉ ｙ， ｉｈ ｓ ｏ ｈ ｔｉ ｉ ｔ ｒ ｎ ｅ ｏ ｉ ｎ
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67’ 676= 676( 678 678
’&-&-&+
不同类型蛋白胨对菌体浓度的影响
够的营养 ! 从而使菌体浓度达到最大 "
分别以 -&(" 的酪蛋白 胨 $ 胰蛋 白胨 $ 牛 肉蛋 白 胨 $ 大豆蛋白胨代替基础培养基中 -&(" 的 牛 肉蛋 白 胨 ! 其它成分不变 ! 培养 ’02 !结果见表 +" 由试验可知
’&-&-&-
不同碳源对菌体浓度的影响
蛋白胨 -&(" $ 酵母膏 (&$6 $ 牛肉浸膏 (&+""
以葡萄糖为碳源 ! 分别用 (&+" $(&$" $-&(" $-&$"
表0
组别 胰蛋白胨 %" & 酵母膏 %" & 牛肉浸膏 %" &
氮源配比对菌体浓度的影响
’ -&( (&$ ( +&4#-(4 + -&( -&( ( +&$#-(4 0 (&$ (&$ (&+ 0&4#-(4 $ -&( (&$ (&+ $&$#-(4 . -&( -&( (&+ $&’#-(4
鉴于酪酸菌的生长需求 ! 本试验以胰蛋白胨 $ 酵 母膏 $ 牛肉 浸 膏为 复 合氮 源 ! 代 替 基 础 培 养 基 中 的 牛 肉蛋白胨 $ 酵母膏 ! 并进行不同添加量配比试验 ! 培养
’&-&-&见表 0" 由试验可知第 $ 组氮源配比最佳 # 胰
生 物 技 术
( 饲料工业)* !""" 年第 !# 卷第 !$ 期
!!!
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 酪酸梭状芽孢杆菌培养条件的研究
匡 群 孙 梅 施大林
!!!
革兰氏阳性厌氧内生芽胞杆菌 # 芽孢巨大 $生成芽孢
./0
后或 一端 膨 大成 鼓 锤状 $ 或 中 部 膨 胀 成 纺 锤 状 或 梭 状 # 其对人畜无毒 %可抑制肠道有害菌 $ 促进有益菌生 长%能 减 少 肠 内 氨 &胺 含 量 !这 两 种 物 质 会 损 害 肝 功 能 "% 产生多种维生素 $如维生素 1 等 % 产生多种酶类 $ 提高饲料利用率 $促进动物生长 # 作为微生态制剂功
! 9<9 9<B
材料与方法 菌种
=>?@A$ 江苏省微生物研究所保藏 #
试剂 葡萄糖 & 蔗糖 & 乳糖 & 可溶性淀粉 & 胰蛋白胨 & 酵母 膏 &牛肉浸膏 &CD@"&!C56"B>E6&FB5GEH&?I>E6&?J>EH&
CD5@EK&@D@EK$ 孔雀绿染液 $ 蕃红染液 # 以 上试 剂 均
0 个用量水平进行培养 ! 基础培养基中 其 它成 分 保持
不变 " 培养 ’02 结果见表 ’ "
表’ 葡萄糖添加量对菌体浓度的影响
(&+ ’&+#-(4 (&$ +&4#-(4 -&( 0&+#-(4 -&$ 0&+#-(4
-&.
检测方法 菌数测定用血球计数法 $菌体形态用芽孢染色法
/01
葡萄糖 %" & ’02 菌体浓度 % 个 5)* &
无锡 # 孙梅 & 施大林 $ 单位及通讯地址同第一作者 # 收稿日期 ’B::LO:BO:L
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
摘 要 为使酪酸梭状芽孢杆菌的菌体浓度和芽孢转化率都达到最大 $ 我们对其培养条件进行了 研究 # 结果表明 ’葡萄糖 9<:! &胰蛋白胨 9<:! & 酵母膏 :<L! & 牛肉浸膏 :<K!$ 适量合适的无机盐类 $ 接种 前活化菌种 $接种量 9:! $ 培养 KU8 可获最大菌体浓度和芽孢转化率 # 关键词 酪酸梭状芽孢杆菌 %芽孢形成率 % 菌体浓度 % 培养条件 中图分类号
培养时间是影响菌体浓度及芽孢转化率的重要 因素 $ 本试验取不同培养时间进行观察 # 结果见表 <$ 试验结果表明 # 培养时间过短 # 菌体浓度尚可 # 但芽孢 转化率和成熟率都过低 $ 但时间过长 # 芽孢转化率和 成 熟率 并 无明 显提 高 # 反而 出 现 菌 体 老 化 # 菌 数 下 降 的情况 $ 试验表明 2>A 为最佳培养时间 $
(&$ (&$ ( +&0#-(4
’02 菌体浓度 % 个 5)* &
’&-&-&$
培养基碳 $氮源配比确定
的菌体浓度 ! 现调整培养基中无机盐及微量元素配比 以提高芽孢转化率 " 主要考虑因素如下 #! 当有机氮 源充足时适量的添加无机氮源有利于菌体生长 ! 故添 加硫酸铵 ’" 添加 / 0$12)0$13)0可 促进 芽 孢形 成 /’1! 故 添加 /)456*$1276*$1376*’ # 由于酪 酸菌 在 生长 过 程中大量产酸 ! 使得 84 值降辐很大 ! 而 84 值过低不 利 于菌 体 形成 芽孢 /91! 所 以 添 加 碳 酸 氢 钠 和 碳 酸 钙 以 调节 84 " 试验结果见表 ’"
酪酸梭状芽孢杆菌 !!"#$%&’()*+ ,*%-&)!*+" 是一种 种恶 劣的 环 境因 素 的抗 性 $ 延 长 制 剂 保 存 期 $ 稳 定 活 性# 为了获得最高的酪酸菌菌体得率和芽孢转化率 $ 我们对培养基成分 $ 接种量 $ 培养时间 $ 菌种优化方法 进行 了研 究 $ 并 对 生 长 过 程 进 行 678 观 测 $ 得 出 了 生 长过程中菌体浓度 & 45 & 芽孢形成率等因素的变化规 律和相互关系 # 并在 9::; 发酵罐上进行了扩大培养 $ 效果良好 #
分 别 以 -&(" 葡 萄 糖 !+&(" 蔗 糖 !+&(" 乳 糖 !+&(" 可溶性淀粉为碳源 ! 代替基础培养基中 (&$" 的 葡萄 糖 ! 基 础 培养 基 中其 它 成分 不 变 ! 对 酪 酸 菌 进 行 液 体 深层静置培养 " 培养 ’02! 结果见表 -" 试验结果表明 以葡萄糖为碳源培养效果最好 "
.20 .30
效显著 $ 并能与抗生素配伍使用 # 目前广泛应用的非芽孢类活菌制剂 ! 如乳酸菌 " 普遍 存在 保 存期 短 $ 活性 不稳 定 的 缺 点 $ 给 实 际 应 用 带来很多困难 $ 这个问题在动物用微生态制剂上尤为 明显 # 由于动物用微生态制剂的补充是通过饲料添加 途径 $ 而在此过程中不可避免的要经历某些高温或特 殊 45 的生产 & 运输及 饲喂 环 节 # 而 非 芽孢 类 活菌 制 剂 在 这种 情 况下 $ 其活 性 会大 大 降 低 $ 进 而 严 重 影 响 使用 效 果 # 因 此本 试 验 的 目 的 就 是 要 在 获 得 酪 酸 菌 最大菌体得率的同时提高芽孢转化率 $ 以提高其对各
净化设备厂 %GQROS5>O6:R 恒温培养箱 $上海市跃进 医 疗 器 械 一 厂 %9BK?AO9 型 光 学 显 微 镜 $C)T#J %RAO
O 3U O
匡群等 ! 酪酸梭状芽孢杆菌培养条件的研究
生 物 技 术
!"#$ 型血球计数板 ! 上海医乐医用光学仪器厂 " %&$
培养方法 液体深层静置培养 #’$()* 三角瓶装 液 量 ’(()*! 于 +,! 恒温培养箱中静置培养 "
"#$% !! " !"&’"()*’!! " +(&,*’!! " -.)*’!! " -/)*’!! " "#&0*1!!" $#$*2!! " 菌体浓度 ! 个 34% " 芽孢转化率 !!"
5 67( 678 679 6769 6769 678 678 :71"86; <1
由试 验 可 知 无 机 盐 及 微 量 元 素 对 菌 体 浓 度 的 影 响不大 # 而对芽孢转化率有较大影响 $ 其中第 = 组无 机盐及微量元素配比最佳 $ "#0% 67(!%!"&’"()*’ 678! %
染色后于显微镜下观察 "
! ’&-
结果与分析 培养基成分试验 碳 $ 氮源配比试验 调节 碳 $ 氮 源 种 类 和 添 加 量 ! 为 菌 体 生 长 提 供 足
试验结果表明 ! 葡萄糖添加量 -&(" !-&$" 时 菌体 浓度最大 !但从节约成本角度考虑 !葡萄糖添加量 -&(" 为最佳 "
’&-&-
由上述试验可确定培养基碳 $ 氮源配比为葡萄糖
$%&" $ 胰 蛋 白 胨 $%&" $ 酵 母 膏 &%’" $ 牛 肉 浸 膏 &%(" "
并以此碳 $ 氮源配比替代原基础培养基中的碳 $ 氮源 ! 其 它 成 分 不 变 ! 培 养 )*+ 后 菌 体 浓 度 达 到 $ %’#$&, 个 5-. "