普通固体制剂2015版微生物限度方法适用性试验报告汇总

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2015版中国药典微生物限度记录

培养基的配制
使用容器
配制培养基使用的容器应该是玻璃器皿或搪瓷器皿等。禁用金属容器如：铁、铜、铝容器。
培养基制备方法
实验室指南
溶解培养基应当用水浴加热进行溶解。测定pH值矫正pH，配制培养基必须矫正pH,并进行验证。培养基灭菌后冷却至室温（ 25 ℃）进行 pH 测试。培养基pH范围不得超过规定的正负0.2。 <高压灭菌前的pH值应比最终pH值高0.2左右>
2015版药典微生物检查法修订内容——结果判断微生物计数法和控制菌检查法结果判断
不再规定复试，通过实验室调查、回顾、分析结果的准确性。
限度标准以指数方式表示：
10的一次方cfu：可接受的最大限度为20；
10 的二次方 cfu ，可接受的最大限度为 200 ；以此类推。
2015版药典通则非无菌产品微生物限度标准增订内容
4.微生物限度标准
5.控制菌检查：保留部分生化试验 6. 修订后，控制指标更合理，计数方法及标准合理、准确，反映真实污染情况
2015版药典微生物检查法修订内容——环境要求
目前我国药品微生物检测对环境的要求与国际标准分级不一致。国际要求：只要洁净环境分为 A 级、 B 级、 C 级、 D 级。 A （百级）、 B （千级）、 C （万级）、 D （十万级）。协调案要求：试验在经过设计的可避免外来微生物污染供试品的环境下进行。我国修订后药品微生物限度检查对检测环境的要求：无菌环境下符合微生物技术检验要求，单向流空气区域内进行。
（二）2015版药典微生物检查法修订内容——环境要求
1. 强调了“微生物实验的各项工作应在专属的区域进行，以降低交叉污染、假阳性结果和假阴性结果的风险”。 2.无菌检查修订前万级（C级）下局部百级（A）或隔离器修订后 B+A级或建议D级背景下隔离器 3.微生物限度检查修订前万级（C）下局部百级（A) 修订后不低于D级背景下的B级单向流空气区域内进行。

2015版中国药典微生物检验

• 注：方法选择原则：根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择。
培养基适用性检查
• 胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉 • 胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌 • 沙氏葡萄糖琼脂、玫瑰红钠琼脂、白色念珠菌、黑曲霉。
中国药典2015年版相关培养基变化无菌检查法通则1101chp2010chp2015硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基胰酪大豆胨液体培养基tsb营养肉汤培养基胰酪大豆胨琼脂培养基tsa营养琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基sdb改良马丁琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基sda培养基的适用性检查灵敏度检查无菌性检查中国药典2015年版相关培养基变化无菌检查法通则1101chp2010chp2015硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基胰酪大豆胨液体培养基tsb营养肉汤培养基胰酪大豆胨琼脂培养基tsa营养琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基sdb改良马丁琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基sda培养基的适用性检查灵敏度检查无菌性检查非无菌产品微生物限度检查
菌数报告规则
• 2、薄膜过滤法：计数方法同平皿计数法，每张滤膜上的菌落数应不超过100cfu。菌数报告规则以相当于 1g、1ml或10cm供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以﹤1报告菌数（每张滤膜过滤1g、1ml或10cm 供试品），或﹤1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。 • 3、MPN法：记录每一稀释级微生物生长的管数，从表3查对每1g或1ml供试品中需氧菌总数的最可能数。
培养条件
• 描述方式：按计数方法适用性试验确认计数方法进行供试品中需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数测定。 • 培养条件：胰酪大豆胨琼脂平板在30～ 35℃培养3-5天，沙氏葡萄糖琼脂平板在20 ～25℃培养5~7天；MPN法和供试品接种，所有试验管在30～35℃培养3～5天。

2015版微生物限度检查方法验证方案

验证文件扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司目录一、验证概述 (2)1.验证对象 (2)2.验证原因 (2)3.验证目的 (2)4.验证要求 (2)二、验证组织机构和职责 (3)1.职责 (3)2.组织机构 (4)三、验证风险评估及范围 (6)1.严重性（S） (6)2.可能性（O） (7)3.可检测性（D） (8)4.风险优先数量等级判定（RPN） (9)四、验证实施计划 (35)五、验证准备 (36)1.验证依据 (36)2.验证条件 (36)六、验证内容 ......................................... 错误!未定义书签。

七、验证异常情况处理 (54)八、验证结论 (55)九、再验证周期 (56)十、附件 (56)一、验证概述1.验证对象本次验证的对象为阿戈美拉汀片（25mg）微生物限度检查法。

2.验证原因对阿戈美拉汀片（25mg）微生物限度检查法进行适用性验证。

3.验证目的确认阿戈美拉汀片（25mg)微生物限度检查法的可靠性。

4.验证要求验证过程需严格按方案中规定的步骤进行。

对于验证过程中出现的所有偏差，应查明原因并得到有效处理后，验证方可进入下一步骤。

二、验证组织机构和职责1.职责1.1.质量受权人—验证文件的批准。

—组织验证工作的实施及各部门的协调，保证验证工作有序的进行。

1.2.质量管理部—现场监督保证整个操作过程按照验证计划进行。

—负责验证方案的审核，及操作过程中对验证文件修订的审核工作。

—验证文件的归档工作。

—按照验证方案要求对操作过程中的样品抽样检测。

—涉及到的仪器仪表的校验，以及一些相关的化验工作。

1.3.质量控制实验室—负责验证文件的起草工作。

—负责验证文件的审核工作。

—验证方案起草人员现场对操作过程进行指导。

—对验证实施过程中资料和数据进行汇总并完成验证报告。

—需要时与相关部门的协调工作。

1.4.供应部按照验证物资采购计划进行物资采购。

2.组织机构2.1验证领导小组2.2.验证实施小组三、验证风险评估及范围根据SOP6-00001《验证管理规程》对验证的相关要求，对检测过程中可能影响检测结果的因素进行风险分析。

2015版微生物计数培养基适用性验证报告.

非无菌产品微生物限度检查用培养基适用性验证文件编号：XXXX目录1.验证目的 (1)2.参照标准 (1)3.验证项目 (1)4.验证工作小组及职责 (1)5.试验材料 (2)6.试验过程 (3)7.验证周期 (4)8.附件 (4)1、验证目的：需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数用培养基应进行培养基的适应性检查，本次验证的目的是为了确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数的测定。

2、参照标准：《中国药典》2015年版四部3、验证项目：胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适用性验证4.验证小组及职责4.1 验证小组4.2 验证职责5.试验材料5.1验证所用培养基：5.2验证用菌株培养5.2. 仪器设备：5.2.1. XXXXX立式压力蒸汽灭菌器5.2.2.XXXX水平流净化工作台5.2.3.XXXXXX干燥箱5.2.4.XXXXX型霉菌培养箱 (20～25℃)5.2.5. XXXXX电热恒温培养箱(30～35℃)5.3. 稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液6.试验过程6.1菌液制备取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物，加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2〜8℃，可在24小时内使用。

6.2、适用性检查培养基适用性检查取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的菌悬液与黑曲霉的孢子悬液（均不大于100cfu），分别注入无菌平皿中，立即倾注适用性检查的胰酪大豆胨琼脂培养基，用于检查胰酪大豆胨琼脂培养基的需氧菌总数计数适用性。

2015版中国药典微生物限度检查法计数法修订解析

三、通用要求
5、计数方法（1）平皿法：包括倾注法和涂布法。该项下明确可
使用直径较大平皿，且培养基的用量应相应增加。（2）薄膜过滤法（3）最大可能数（Most-Probable-Number Method,
简称MPN）。MPN法用于微生物计数时精确度较差，仅在供试品需氧菌总数没有适宜计数方法时使用，不适用于霉菌计数。（4）方法选择原则：根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择。
一、修订背景
3、兼顾国情：（1）适用性试验增加供试品对照组（2）菌种采用CMCC （3）检验量、样品制备依照《中国药典》
2010年版，与ICH不同。主要工艺、剂型限制，例如贴剂检验量规定完全不同。
一、修订背景
4、依据以上原则修订后具有以下特点：（1）修订后的计数法明确了《中国药典》2010年
接种试验用菌株后， 30～35 ℃ 培养不超过72小时，与对照培
养基比较，试验菌应生长良好。（建议：培养基呈混浊的液体，或划线于相应的分离平板上，培养后呈现典型菌落）
备注：该培养基同时用于稀释液的制备和控制菌检查时，需要考虑同时满足计数和控制菌检查培养基适用性检查控制要求。
四、培养基适用性检查
一、修订背景
• 2、方法科学性和灵活性 • （1）准确度：方法适用性试验模拟样品污
染微生物后进行方法试验性验证。 • （2）精密度：结果判定以变化范围进行规
定，符合微生物计数规律。 • （3）培养体系：采用更适宜的培养体系。 • （4）偏差调查：微生物检验结果偏差调查
的引入。 • （5）与微生物指导原则、理念有机统一。
2015年版《中国药典》微生物限度检查法计数法修订解析
一、修订背景
• 1、国际化 • （1）美国、欧盟、日本制药产品占世界市场份额

微生物限度检查适用性试验

菌种
代数来源接种至
菌悬液制备
稀释度
枯草芽孢杆
菌
3
{CMCC(B)6
3501}
金黄色葡萄
球
菌3
{CMCC(B)2
6003}
铜绿假单胞
菌
3
{CMCC(B)1
0104}
胰酪大豆胨液用 ph7.0无菌氯化 10-4
体培养基
钠-蛋白胨缓冲液
30-35℃
制成每 1ml含菌
招远 18-24H
＜100cfu的菌悬
计数方法适用性试验：（1）
菌别
方法
冲洗量
枯草芽孢杆菌
平皿法
无
金黄色葡萄球菌
平皿法
铜绿假单胞菌
平皿法
白色念珠菌黑曲霉
平皿法
无
平皿法
计数方法适用性试验：（2）
阳性菌
枯草芽孢杆菌 TSA
培养时间 72h
菌液组菌数
69
71
金黄色葡 72h 76
70
萄球菌
TSA
铜绿假单 72h 74
80
胞菌
是þ
否□
校验有效期内
是þ
否□
校验有效期内
是þ
否□
适用性检查
þ符合要求 □不符合要求
沙氏葡萄糖琼脂培养基胰酪大豆胨液体培养基
161003 161011
þ符合要求
招远拓普生物工
程有限公司
þ符合要求
□不符合要求 □不符合要求
麦康凯液体培养基
161006
麦康凯琼脂培养基
161007
肠道菌增菌液体培养基
161101
þ符合要求 □不符合要求

中国药典2015版-微生物限度检查解析

菌种的传代、保藏与管理
控制程序
菌种来源
菌种的保管
菌种的复活
菌种确认
菌种的储存和领用
菌种的销毁及领用记录
菌种传代、保存、使用及销售记录
菌种名称：传代日期菌种来源菌种编号：传代支数菌种生长培养基培养温度时间保存温度保管人：发出日期发出方式日期：购买单位
《中国药典》2015年版-微生物限度标准修订解析
标准修订内容修订思路1 《中国药典》2010年版一、二、三部限度标准的相关内容合并。修订思路2 参考EP7.0，USP35，JP X V标准，修订中国药典的微生物限度标准。
标准修订内容
参考欧美日药典标准 <1>修订菌数标准表达方式：指数形式10ncfu，最大可接受限度值遵守2倍规则： 101cfu：可接受的最大菌数为 20； 102cfu：可接受的最大菌数为 200； 103cfu：可接受的最大菌数为 2000：依此类推。 <2>检查指标：需氧菌总数：TAMC（替代细菌数）----胰酪大豆胨琼脂培养基耐胆盐的格兰阴性菌（替代大肠菌群） <3>检查制剂分类：齿龈、皮肤制剂原辅料、中药提取物、中药饮片的控制呼吸道制剂耐胆盐格兰阴性菌的控制
增加新概念
• • • • • 1.MPN法使用范围：含菌量较低的供试品细菌总数测定 2.“分散均匀”：并非一定要溶解 3.偏差调查概念引入当检验结果出现超常或超标时需要进行偏差调查调查范围：人、机、料、法、环
控制菌检查法修订解析
本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法---新增内容

2015版中国药典微生物限度

第五页，共58页。
1.1 总则：
• 如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂，应确认其有效性及对微生物无毒性。
• 供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。
第六页，共58页。
1.2计数方法：
• 平皿法
菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用；若保存在2～ 8℃，可在24小时内使用。稳定的黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
第十一页，共58页。
1.3.2计数培养基适用性检查【10版】
细菌计数
金黄色葡萄球菌营养琼脂培养基
铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌
霉菌及酵母菌白色念珠菌
第二十六页，共58页。
1.5结果判断
• 需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数（包括真菌菌落数）；
• 霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的总菌落数（包括细菌菌落数）。
• 若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素（如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰红钠琼脂培养基）进行霉菌和酵母菌总数测定。
计数
黑曲霉
玫瑰红钠琼脂培养基
30～35 ℃ 不超过3天
20～25 ℃ 不超过5天
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿；接种量50~100cfu ；同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
结果判定：
若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70 %，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一
• 薄膜过滤法 • 最可能数法（Most-Probable-Number Method，简

《中国药典》2015年版微生物测定修订情况

常州药检
一、微生物计数法
分别接种不大于100cfu的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，每一试验菌株平行制备2个平皿，30～35℃培养不超过3天。同时，用相应的对照培养基代替被检培养基进行上述试验。分别接种不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，每一试验菌株平行制备 2个平皿，30～35℃培养不超过5天。同时，用相应的对照培养基代替被检培养基进行上述试验。
常州药检
一、微生物计数法计数培养基适用性检查
菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉，不得超过5代。
常州药检
一、微生物计数法
常州药检
一、微生物计数法
常州药检
一、微生物计数法
取其新鲜培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9无菌氯化钠溶液制成适宜浓度菌悬液。黑曲霉制备时在缓冲液或氯化钠溶液中加入0.05%（v/v）聚山梨酯80。菌液在室温下2小时内使用，2～8℃时可在24h内使用，黑曲霉孢子悬液可2～8℃保存，在验证过的贮存期内使用。
MPN法
常州药检
一、微生物计数法
平皿法：包括倾注法和涂布法。每株菌每种培养基至少制备2个平皿，以算术平均值计算。使用涂布法应采用适宜的方法使培养基表面干燥，且每个平皿接种的供试液不少于0.1ml。
常州药检
一、微生物计数法
薄膜过滤法：一般取相当于1g（ml、10cm2）的供试品，（若供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌情减量）加至适量稀释液中，混匀，过滤。用适量冲洗液冲洗。每株菌每种培养基至少制备一张滤膜。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。
常州药检

2015年版中国药典微生物限度检查方法验证

人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查方法验证方案起草部门：QC组签名：日期：审核部门：QC组签名：日期：部门：质量部签名：日期：批准质量负责人签名：日期：质量部颁发本文件根据需要应分发于以下部门：01 质量部下表用于记录修订/变更主要内容及历史。

文件编号修订原因修订日期TS-VP-4201-00 按GMP（2010年修订版）要求新制定2015.10.22目录1. 概述2. 验证目的和范围3. 组织及职责4. 验证进度计划表5. 验证所需要的仪器设备及相关文件的确认6. 验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认7.验证项目和验证方法7.1试验菌株7.2需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备7.3需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法7.4需氧菌总数检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法7.5控制菌检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法8.偏差与漏项控制9.验证报告会审1. 概述我公司生产品种人工牛黄甲硝唑胶囊，产品微生物限度检查项目为需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、以及大肠埃希菌检查和沙门菌检查。

参照《中国药典》2015版四部附录1105：微生物计数法，以及1106：控制菌检查法的规定，本公司对该产品的微生物限度检查方法予以验证。

通过验证以确认所采用的微生物限度检查方法适用。

人工牛黄甲硝唑胶囊处方中含有甲硝唑、人工牛黄以及常用辅料成分，文献资料介绍甲硝唑对细菌有抑菌特性，对霉菌和酵母菌无抑菌活性。

甲硝唑在水中微溶，可以通过离心沉淀-薄膜过滤法去除其对微生物生长的影响。

本验证方案通过试验菌株的回收率测试，首先确认常规倾注平皿法是否适用于本品的微生物限度检查；如常规倾注平皿法不适用，则进一步验证可去除供试品抑菌物质的离心沉淀-薄膜过滤法是否适用于本品的微生物限度检查。

本验证方案根据样品特性制定微生物限度检查方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。

普通固体制剂2015版微生物限度方法适用性

普通固体制剂2015版微生物限度方法适用性试验报告XX制药有限公司第 2 页共 10 页微生物限度方法适用性试验报告文件编号：XXXXXXX制药有限公司微生物限度方法适用性试验报告起草人_____________ 部门____________ 日期___________ 审核人_____________ 部门____________ 日期___________ 批准人_____________ 日期__________ _1、概述本公司主要产品之一，本产品已进行批量生产并已进行工艺验证,微生物检验相对稳定，由于《中华人民共和国药典》2015年版对微生物限度检查方法改变，其产品的微生物检验方法和培养基发生改变，可能影响检验结果的准确性。

为确保检测方法的准确性及适应性，测定方法的可靠性进行验证，根据样品特性制定检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。

2、验证依据：《中华人民共和国药典》2015版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法、1107非无菌药品微生物限度标准。

3、验证目的建立该产品的微生物限度检查方法，并对其有效性进行评价，确保试验方法的完整性，保证检验结果的可靠性。

4 、验证小组成员及职责5、主要验证用仪器仪表的校验结果：确认人：日期：6、验证用菌种及培养基7、试验菌悬液制备7.1 需氧菌总数计数方法适用性试验、霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验菌株培养接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌于胰酪大豆胨琼脂培养基上，于30-35℃培养3天；接种白色念珠菌、黑曲霉于胰酪大豆胨琼脂培养基上，于30-35℃培养5天，用于需氧菌总数计数方法适用性试验。

接种白色念珠菌、黑曲霉于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，于20-25℃培养5天，用于霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验。

取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加人3～5ml含0.05% (m l/m l)聚山梨酯8 0的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液将孢子洗脱。

2015版微生物计数培养基适用性验证报告.doc

非无菌产品微生物限度检查用培养基适用性验证文件编号： XXXX 起草人职位签名日期审核人职位签名日期批准人职位签名日期文件分发部门目录1. 目的⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 12. 参照准⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 13. 目⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 14. 工作小及⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 15. 材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 26. 程⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 37. 周期⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 48. 附件⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 41、验证目的：需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数用培养基应进行培养基的适应性检查，本次验证的目的是为了确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数的测定。

2、参照标准：《中国药典》 2015 年版四部3、验证项目：胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适用性验证4.验证小组及职责4.1 验证小组组长姓名职务/ 职称部门QA部部长质量部组员姓名职务/ 职称部门质量控制实验室主任质量部微生物化验员质量部微生物化验员质量部4.2 验证职责人员职责验证组长负责组织审核验证项目的验证方案、组织项目的具体验证实施、督促验证小组成员按照方案的要求做好验证记录、起草验证报告、整理验证档案；当漏项或偏差发生时，负责对其评估并报验证委员会批准；组织相关的培训。

验证组员质量控制实验室主任：负责制定确认方案及报告的起草微生物化验员：负责确认过程的相关检测，确保检验结论正确可靠5.试验材料5.1 验证所用培养基：名称胰酪大豆胨琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基胰酪大豆胨琼脂对照培养基沙氏葡萄糖琼脂对照培养基5.2 验证用菌株培养验证菌株代次金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003铜绿假单胞菌 CMCC（B）10104枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501白色念珠菌CMCC（F）98001黑曲霉CMCC（F）980035.2.仪器设备：来源批号培养基培养温度培养时间胰酪大豆胨琼脂培养基30— 35℃18— 24 小时胰酪大豆胨琼脂培养基30— 35℃18— 24 小时胰酪大豆胨琼脂培养基30— 35℃18— 24 小时沙氏葡萄糖琼脂培养基20— 25℃2—3 天沙氏葡萄糖琼脂培养基20— 25℃5-7 天5.2.1. XXXXX 立式压力蒸汽灭菌器5.2.2.XXXX 水平流净化工作台5.2.3.XXXXXX 干燥箱5.2.4.XXXXX 型霉菌培养箱 (20 ～25℃)5.2.5. XXXXX 电热恒温培养箱 (30 ～35℃)5.3.稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液6.试验过程6.1 菌液制备取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用 0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物，加入 3-5ml 含 0.05%（ml/ml ）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液 ,将孢子洗脱，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（m l/ml ）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。

微生物限度检测方法验证操作规程(2015年版)

微生物限度检测方法验证操作规程1 目的确认所采用的方法适合于该产品的微生物限度检测。

2 依据《中国药典》2015版。

3 范围所有需进行微生物限度检测的产品。

4 责任4.1验证小组负责检验方法验证/确认方案的起草、验证/确认方案的实施。

4.2验证委员会负责验证/确认方案的审批，验证/确认结论的审核。

5 程序5.1 由验证小组提出验证申请，验证方案编制完成后，填写《确认和验证方案审批表》，经验证小组会签，报验证委员会审核，由生产负责人和质量负责人批准后，验证方案编制人对验证小组其余人员进行培训后，方可按验证方案试验。

5.2 试验完成后及时编制验证报告，并填写《验证报告审批表》，经验证小组会签，报验证委员会审核，由生产负责人和质量负责人批准后，验证报告结论才可实施。

6 内容6.1 概述通过验证以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定及控制菌的检查。

根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方案进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。

若符合，按验证的方法和条件进行产品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。

6.2 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法的验证6.2.1 验证用菌株铜绿假单胞菌[CMCC（B）10 104]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]黑曲霉[CMCC（F）98 003]白色念珠菌[CMCC（F）98 001]6.2.2 验证用菌液制备6.2.2.1接种铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌至胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养18～24小时。

取上述培养物各1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液，备用。

6.2.2.2 接种白色念珠菌至沙氏葡萄糖液体培养基中，于20～25℃培养2～3天。

微生物限度检查方法适用性试验模板2015版药典课件

验证文件类别：编号：部门：XXXX微生物限度检查方法适用性试验方案XXXXX公司2016年XXXX微生物限度检查方法适用性试验方案审批目录1、适用范围2、目的3、概述4、适用性所需要的仪器设备及文件5、可接受的限度范围标准6、测试方法7、异常情况处理8、测试结果9、结论10、再适用性周期11、附表1、适用范围本适用性方案适用于XXXX微生物限度检查的方法适用性试验。

2、目的因《中华人民共和国药典》（2015年版）颁布实施，为确保该产品的微生物限度检查方法的可靠性和可操作性，故对其检验方法进行适用性试验，以符合《中华人民共和国药典》规定。

3、概述3.1根据《中华人民共和国药典》2015年版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法，对XXXX进行需氧菌、霉菌和酵母菌、大肠埃希菌检查方法的适用性试验，以确认供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性。

3.2适用性试验时间及批号：年月日开始分别对、、三批XXXX进行独立的方法适用性试验。

3.3验证小组4、仪器设备及文件4.1需用仪器设备5、可接受的限度范围标准5.1XXXX微生物限度检查质量标准5.2需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法采用《中华人民共和国药典》2015版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法中叙述的平皿法中的倾注法。

控制菌检查方法采用1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法中大肠埃希菌检查方法6、测试方法6.1供试品 XXXX 批号：6.2培养基及菌种6.2.1采用符合中国药典规定的干燥培养基，并经过培养基适用性检查。

胰酪大豆胨琼脂培养基批号：胰酪大豆胨液体培养基批号：沙氏葡萄糖琼脂培养基批号：沙氏葡萄糖液体培养基批号：麦康凯琼脂培养基批号：麦康凯液体培养基批号：MUG培养基批号：6.2.2菌种均购于：6.3菌液制备6.3.1需氧菌、霉菌和酵母菌的检查菌液制备6.3.1.1接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌适量至胰酪大豆胨液体培养基中， 30～35℃培养18～24小时，取上述培养物一定量用PH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成制成适宜浓度的菌悬液，备用。

2015版中国药典微生物限度

1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑶油脂类供试品
• 取供试品，加入无菌十四烷酸异丙酯使溶解，或与最少量并能使供试品乳化的无菌聚山梨酯 80或其他无抑菌性的无菌表面活性剂充分混匀。表面活性剂的温度一般不超过 40℃（特殊情况下，最多不超过 45℃），小心混合，若需要可在水浴中进行，然后加入预热的稀释液使成 1∶10供试液，保温，混合，并在最短时间内形成乳状液。必要时，用稀释液或含上述表面活性剂的稀释液进一步 10倍系列稀释。
– 培养和计数培养条件和计数方法同平皿计数法，每张滤膜上的菌落数应不超过100cfu。
• 菌数报告规则
– 以相当于 1g、1ml 或10cm2 供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以﹤1 报告菌数（每张滤膜过滤1g、1ml 或10cm2 供试品）,或﹤1 乘以最低稀释倍数的值报告菌数。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑷需用特殊方法制备供试液的供试品
• 膜剂供试品 • 肠溶及结肠溶制剂供试品 • 气雾剂、喷雾剂供试品 • 贴膏剂供试品
1.4.2供试品检查
1. 平皿法
– 平皿法包括倾注法和涂布法。 – 除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性
试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每稀释级每种培养基至少制备2个平皿。 – 培养和计数除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30～35℃培养3~5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20～25℃培养5 ~7天，观察菌落生长情况,点计平板上生长的所有菌落数，必要时可适当延长培养时间至7 天进行菌落计数并报告。菌落蔓延生长成片的平皿不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。 – 若同稀释级两个平皿的菌落数平均值不小于15，则两个平皿的菌落数不能相差1 倍或以上。

2015版微生物计数培养基适用性验证报告汇总

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2〜8℃，可在24小时内使用。

微生物限度检查方法适用性验证方案

微生物限度检查方法适用性验证方案适用性验证是指对微生物限度检查方法所应用范围进行验证，确保方法适用于具体药物产品的检测。

适用性验证需要涉及以下几个方面：1.准确性：准确性是微生物限度检查方法的基本要求。

验证方法的准确性需要进行重复性和中间精密度实验，确保在一定条件下对同一药物样品进行测试时，结果之间具有较高的一致性和准确性。

2.灵敏度：灵敏度是指微生物限度检查方法能够检测到微生物数量的最低限度。

灵敏度验证需要使用一系列稀释溶液，以确定方法可以可靠地检测到微生物的最低限度。

3.特异性：特异性是指微生物限度检查方法只对目标微生物有反应，不受其他微生物的干扰。

特异性验证需要进行对照实验，验证方法能够正确地检测出目标微生物，并排除其他微生物的干扰。

4.精密度：精密度是指方法的重复性和中间精密度。

重复性验证需要多次重复测定同一样品，验证方法在相同条件下的结果具有较高的一致性；而中间精密度验证需要在不同的实验室、不同仪器、不同操作人员下进行测试，验证方法在不同条件下的可靠性。

5.稳定性：稳定性是指方法在一定时间范围内的稳定性。

稳定性验证需要在一定时间范围内对同一样品进行测试，并比较结果的一致性，以确保方法的可靠性和稳定性。

在实施适用性验证时需要注意以下几个方面：1.选择合适的药物样品进行验证，确保样品具有代表性和典型性。

2.严格控制实验条件，包括试验环境、温度、湿度等，以减少实验条件对结果的影响。

3.提高实验人员的技能水平，确保实验人员具有足够的实验操作技能和知识背景。

4.在验证过程中及时记录实验数据，并进行统计分析，确保结果的可靠性和准确性。

5.与相关法规和标准保持一致，确保验证方法的合规性和可靠性。

适用性验证是确保微生物限度检查方法准确性和可靠性的重要环节。

通过适用性验证，可以确保所采用的方法能够可靠地检测药物产品中的微生物限度，从而保证药品的质量和安全性。

2015年版中国药典微生物限度检查法

1.1 总则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
菌数报告规则
– 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于 300cfu 的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于100cfu 的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。取最高的平均菌落数，计算1g、1ml 或10 cm² 供试品中所含的微生物数。 – 如各稀释级的平皿均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1 时，以﹤1 乘以最低稀释倍数的值报告菌数。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备 – ⑴ 水溶性供试品
• 取供试品，用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成 1:10 供试液。若需要，调节供试液 pH 值至 6 ～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步 10倍系列稀释。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。
1.3.1菌液制备及使用
试验菌株试验菌液的制备
金黄色葡萄球菌〔CMCC(B) 26 003)〕
铜绿假单胞菌〔CMCC（B)10 104〕枯草芽孢杆菌〔CMCC(B) 63 501〕白色念珠菌〔CMCC(F) 98 001〕
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基【10版：营养肉汤或营养琼脂培养基】 30～35℃，18～24小时