细胞生物学实验
1-细胞生物学实验
如镜台测微尺1mm处(全长)与目镜测微尺75 刻度(150小格)重合，则:
目镜测微尺每小格的实际长度=
1 150
mm
=0.0067mm=6.7μm
④同样的方法标定高倍镜下目镜测微尺 每小格的实际长度
计算公式如下:
目镜测微尺每小格的实际长度
镜台测微尺长度 ＝
目镜测微尺格数
＝ 30×10μm 200
(4)测量细胞并计算核质比
五、实验操作
1. 取猪肝1g，放入小烧杯中，加4ml 0.25M蔗糖缓冲液， 将组织剪成约1mm立方的小块。
2. 将剪碎的组织移入匀浆器的外管中，再将内管（带柄 的活塞）插入外管中，缓慢而均匀地施力，上下旋转拉 动，匀浆7-10分钟，然后用六层纱布过滤回洗净的原烧 杯中。（这两步操作略）
3. 每组取1个5ml离心管，加入匀浆液2ml，2000rpm离 心10分钟。（每组1管）
许多酸性染料不易穿过活细胞的质 膜进入细胞内，却能渗入死亡的细胞 内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。
2.方法 取酵母悬液一滴于洁净玻片上，滴一滴0.2％亚甲基
蓝染液，加盖片，2分钟后于显微镜下观察细胞。
3.结果 死细胞被染成蓝色，活细胞不着色。
实验作业
画图记录细胞吞噬实验所见结果
实验三
细胞核与线粒体的 分级分离
实验内容
实验一、细胞的形态结构与显微测量 实验二、细胞生理活动的实验观察 实验三、细胞核与线粒体的分级分离 实验四、细胞分裂的形态观察 实验五、细胞原代培养 实验六、细胞计数及死活细胞的鉴定 实验七、综合设计性实验
实验一
细胞的形态结构与显微测量
实验目的
(一) 观察并了解细胞的基本形态。 (二)掌握临时制片和显微绘图的方法。 (三)了解显微测微尺的原理及使用方法
细胞生物学实验
1. 什么是细胞培养？细胞生物学实验指从动物活体体内取出组织，并将其分散为单个细胞（机械或酶消化），在体外模拟体内的生理环境，使其在人工培养条件下保持生长、分裂繁殖、细胞的接触性抑制以及细胞衰老过程等生命现象。
最常见的细胞一般有两种，一种是原代细胞，另一种是传代细胞。
原代细胞是指动物组织经过胰酶或胶原酶等酶类的消化，使其分散，从而获得单个细胞，再使这些单个细胞生长于培养容器中的过程。
大多数组织可以制备原代细胞，但制备的方法略有不同，制备的细胞生长快慢及难易程度也不相同。
不同的原代细胞，其形态也不尽相同。
一般将10代以内的细胞称之为原代细胞。
传代细胞一般指无限繁殖的细胞系，理论上这类细胞可以无限次的传代。
做实验的时候也会经常使用这类细胞，如Hela、293、Vero 等细胞。
2. 细胞的生长周期游离期：细胞刚接种到新的培养容器中到贴壁前的一段时期，这个时期的长短由细胞类型决定，从几分钟到几个小时不等。
贴壁期：细胞从游离状态变为贴附到培养器皿表面并展现出一定细胞形态的时期。
潜伏期：细胞在完成贴壁后，并不会马上进行增殖，会进行增殖所必须的物质和能量的储备，这个时候称之为潜伏期。
对数生长期：细胞在完成物质和能量储备后，开始大量的增殖的时期。
这个时期的细胞活力旺盛，且状态稳定，我们所做的绝大多数实验都是在这个时期开展的。
停止期：随着细胞的生长，细胞密度越来越大，由于营养物质的消耗、细胞间的接触抑制等因素，细胞生长缓慢，甚至停止生长。
这个时候，我们就要给细胞进行传代了，使细胞可以继续进行增殖，保持旺盛的活力。
3. 细胞生长所需要营养条件细胞的培养所需要的营养成份一般来自于基础培养基（比如DMEM培养基）和血清。
基础培养基：主要是提供细胞生长所需要的氨基酸（组成蛋白质的基本单位）、维生素（细胞代谢中辅酶的组成成分）、无机离子（K+，Na+等）、碳水化合物（碳源和能量来源）和一些激素等营养物质。
血清：主要是提供一些基础培养基不能提供的生长因子和低分子的营养物质，此外它还有促进细胞的贴壁、中和有害重金属离子等作用。
细胞生物学实验
二、实验原理
植物原生质体是除去细胞壁后为原生质所包围的“裸露细胞”，是开展基础研究的理想材料。其中酶解法分离原生质体是一个常用的技术，其原理是植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质组成，因而使用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶能降解细胞壁成分，除去细胞壁而使原生质体释放出来。
原生质体分离纯化或融合后，在适当的培养基上应用合适的培养方法，能够再生细胞壁，并启动细胞持续分裂，直至形成细胞团，长成愈伤组织或胚状体，再分化发育成苗。其中，选择合适的培养基及培养方法是原生质体培养中最基础也是最关键的环节。
选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。
将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。
利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀桨3-5min。
将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清液，沉淀即是叶绿体(混有部分细胞核)。
二、实验原理
凝集素是一类含糖的(少数例外)并能与糖专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。
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凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体的分布有关。
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三、实验仪器
显微镜、粗天平、载玻片、滴 管、 离心管、离心机等.
用镊子撕去叶的下表皮，然后将叶放有酶液的培养皿或带盖三角瓶，每10ml酶液放2g叶片；
洋葱、小麦种子或黄豆幼根根尖
人口腔上皮细胞
五、实验内容与实施过程
1.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察
1.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上 ↓ 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液 ↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞 ↓ 刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中 ↓ 染色10-l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液) ↓ 盖上盖玻片,显微镜下观察
细胞生物学实验教程
细胞生物学实验教程1. 细胞培养细胞培养是研究细胞生物学的重要工具。
其基本原理是将动植物等生物材料分离、挑选出优良细胞群体，通过合适的细胞培养基、培养条件、方法和设备，使细胞在体外生长和繁殖。
其常用培养细胞的类型有：肺、肝、胃肠、心肌、肌肉、神经、结缔组织、卵巢等。
2. 细胞分离将细胞组织挑选出来进行细胞分离，我们需要用到一般的分离试剂，如细胞酶、生物表面活性剂、离子液体、尼龙布、毛细管、细胞分选仪和细胞联合培养等，同时需要注意一些技术细节。
例如合适的分离环境和分离条件、合适的分离时间、细胞貌形的观察以及细胞去污的操作等。
3. 细胞染色细胞染色是存在于细胞的染色体、蛋白质和核酸等物质，借助不同染色剂使之显色的过程。
其优点是操作简便，速度快，结果直观且研究范围广。
根据它的使用范围和目的不同，一般分为核型分析、基因型分析、生化分析、免疫分析和化学分析等。
4. 免疫组化染色免疫组化染色是指利用抗体与细胞中的特定抗原之间的结合反应，使细胞中的抗原在细胞、组织切片或细胞培养物中可视化并得到定位的技术。
这种技术是现代生物技术与分子生物学的重要组成部分，也是研究细胞分子和生物学的密切联系。
5. 荧光标记技术荧光标记技术是指在一定条件下，荧光分子效应的物理特性。
将该技术运用于细胞生物学中，可以标记生物分子，如细胞内结构组分和生物分子中的蛋白质、核酸、糖等，以实现对其特性、运动和转化的动态和定量分析。
同时，它对于研究牛眼改良和细胞砂浆的研究、比较病理学和細胞生理学中细胞示踪标记的定位等过程中也有着积极的作用。
6. 电镜观察电子显微镜（EM）是一种利用电子束代替光束观察样品表面的高分辨率显微镜。
其操作方法较为复杂，需要像样的准备样本和设备，但提供的高分辨率和高对比度，使得研究者可以观察小于光学分辨率的细胞结构，并能发现小分子、细菌和病毒等细胞成分。
7. 分子生物学实验技术目前，分子生物学技术已经成为细胞生物学研究的重要手段之一。
细胞生物学实验PPT课件
目录
• 引言 • 细胞生物学基础知识 • 实验操作流程 • 实验结果分析 • 结论
01 引言
实验目的
01
02
03
04
掌握细胞生物学的基本 实验技能
了解细胞的结构和功能
学习细胞培养和细胞转 染技术
探究细胞信号转导的机 制
实验背景
细胞是生命的基本单位，是生物体结 构和功能的基础
能量转换
细胞中的线粒体和叶绿体 可以将光能或化学能转换 为细胞可利用的ATP等能 量形式。
信息传递
细胞通过分泌化学信号和 电信号传递信息，协调各 种生理活动。
细胞的生命活动
细胞分裂
通过有丝分裂和减数分裂，细胞 可以复制自身并产生新的子细胞。
细胞分化
在发育过程中，细胞会逐渐失去其 全能性，并获得特定的功能和形态。
定性分析
根据实验结果，对实验现象进行解释 和推理，探究可能的机制和影响因素 。
结果解读与讨论
结果解读
根据实验结果，结合理论知识，对实验结果进行解释和解读，明确实验目的和 结论。
结果讨论
对实验结果进行深入讨论，探讨实验的局限性和改进方向，提出可能的假设和 研究方向。
05 结论
实验总结
实验目的
通过实验，学生能够掌握细胞生物学的基本实验技能，了 解细胞的结构和功能，以及细胞的生命活动规律。
实验步骤
实验包括细胞培养、显微观察、细胞计数等步骤，每个步 骤都有详细的操作说明和注意事项。
实验原理
实验涉及细胞培养、显微观察、细胞计数等技术，通过这 些技术，学生可以深入了解细胞的结构和功能，以及细胞 分裂、分化等生命活动过程。
实验结果
实验结果清晰，学生能够观察到细胞的形态、结构和功能 ，并得出准确的实验结论。
医学细胞生物学实验
细胞凋亡诱导与检测
细胞凋亡检测
细胞凋亡诱导
自噬诱导
通过饥饿、药物刺激等手段诱导细胞自噬，以研究自噬的生物学意义和作用机制。
自噬检测
采用荧光染色、电镜观察、蛋白质印迹等方法检测自噬体的形成、数量和相关蛋白的表达。
自噬诱导与检测
03
02
01
实验原理
实验设计
根据实验目的和原理，设计具体的实验方案和操作流程。
实验操作
按照实验方案进行实验操作，包括细胞培养、显微观察、分子生物学检测等步骤。
数据收集与分析
收集实验数据，进行统计分析，得出实验结果。
结果汇报与讨论
将实验结果以书面形式汇报，并进行讨论和总结。
实验步骤
02
细胞培养
CHAPTER
利用免疫荧光染色、荧光共振能量转移等技术，可以检测和定位细胞内特定信号分子的分布和动态变化，进而揭示其在信号转导中的作用机制。
详细描述
总结词
信号转导抑制剂的应用
总结词：信号转导抑制剂是一类能够干扰细胞信号转导过程的化合物，具有潜在的治疗作用。
07
细胞凋亡与自噬研究
CHAPTER
通过使用化学物质、射线、病毒等手段诱导细胞凋亡，以研究其发生机制和生物学意义。
电子显微镜
利用电子束代替可见光，观察细胞超微结构。
显微镜观察
通过显微镜或细胞计数板，统计细胞数量。
细胞计数
利用染色剂或荧光染料，检测细胞活性，如MTT法、染色排除法等。
细胞活力检测
细胞计数与活力检测
利用染色剂对细胞进行染色，以便观察细胞形态和结构。
染色技术
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告篇一实验教师：xxx所在学校：xxx中学目的要求：1练习徒手切片2认识叶片的结构3画叶片的表皮细胞和保卫细胞材料用具：新鲜叶片（如菠菜、槐树、蚕豆的叶片），显微镜，双面刀片（两片、并在一起、一侧用胶布粘牢）、镊子、载玻片、盖玻片、叶片的永久切片、盛有清水的培养皿、滴管、吸水纸、碘液、纱布、毛笔、小木板。
方法步骤方法与步骤要点注意事项（一）练习徒手切片，制作叶片横切片的临时切片1将新鲜的叶片平放在小木板上。
2右手捏紧并排的两片刀片，沿着图中虚线的方向，迅速切割。
3把刀片夹缝中存在的切下的薄片放入盛有清水培养皿中。
要多切几次（每切一次，刀片要蘸一下水）。
4用毛笔蘸出较薄的一片，制成临时切片。
叶片下面要垫上小块木板，以防损坏桌面。
刀片要捏紧，切割速度要快，注意安全。
为了便于观察，载玻片的水滴中可以同时放几片叶的横切片，选择切得较薄的一片用来观察。
（二）观察叶片的结构1．用显微镜先观察叶片横切面的临时切片，再观察叶片的永久横切片。
2．观察时注意分清时的表皮、叶肉和叶脉。
仔细观察上、下表皮细胞的`区别（三）观察叶片的下表皮1．用镊子撕下一小块叶片的下表皮，制成临时装片。
2．用显微镜进行观察，下表皮细胞的形态是什么样子的，下表皮上有没有气孔？撕取下表皮时，一定要薄，否则影响观察效果。
注意观察气孔的结构。
（四）画图在下面空白处画出下表皮上一对保卫细胞及周围的几个表皮细胞，这一对保卫细胞要详细画，周围的细胞只需勾出轮廓。
画图时，要真实、实事求是。
讨论与交流1．保卫细胞的结构特点对植物的蒸腾作用有什么意义？2．从结构上看，叶片有哪些方面是适于接受阳光的？细胞生物学实验报告篇二一、实验目的1. 初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法。
2. 理解植物细胞发生渗透作用的原理。
二、实验原理当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中，使细胞壁和原生质层都出现一定的收缩。
细胞生物学实验技术
细胞生物学实验技术细胞生物学实验技术是现代生命科学研究中的关键环节，它为研究人员提供了深入了解细胞结构、功能和相互作用的途径。
本文将重点介绍一些常见的细胞生物学实验技术，包括细胞培养、染色技术、分离技术和显微镜观察等。
一、细胞培养技术细胞培养是一项基础性技术，它可以将细胞从体内取出并在适当的培养基中进行增殖和维持。
细胞培养的首要任务是提供适当的培养基，其中含有必需的营养物质、生长因子和适当的温度、湿度和气体条件。
细胞培养技术广泛应用于细胞生物学实验、组织工程、药物研发等领域。
二、染色技术染色技术是细胞生物学实验中常用的方法之一，它使研究者能够对细胞内各种结构和分子进行可视化观察。
常用的染色方法包括荧光染色、酶标染色和核酸染色等。
荧光染色利用荧光标记的抗体或染料，可使特定的细胞结构或分子在显微镜下发出荧光信号，从而观察其位置和表达水平。
酶标染色则通过酶与底物的反应，使细胞或组织显示出颜色等信号。
核酸染色则利用特定染料与细胞核酸结合，以观察DNA或RNA的分布情况。
三、分离技术分离技术在细胞生物学实验中具有重要作用，它可以将不同类型的细胞或细胞组分进行分离和纯化。
常用的分离技术包括细胞离心、流式细胞术和免疫磁珠分离等。
细胞离心是通过离心机将混合细胞悬液分离成上清液和沉淀，从而获得纯化的特定类型细胞。
流式细胞术则通过流式细胞仪测量细胞的大小、形态和表面标记物，从而实现对细胞的高通量分离和分析。
免疫磁珠分离则利用特定抗体结合在磁珠表面，以实现对需要纯化的细胞或细胞组分的选择性捕获。
四、显微镜观察显微镜观察是细胞生物学实验的重要手段，它使研究者能够观察到细胞内不同的结构和过程。
传统光学显微镜可实现对细胞形态和部分细胞器的观察，但其分辨率有限。
近年来，随着超分辨显微镜技术的发展，研究者们能够突破传统光学显微镜的分辨率极限，实现对亚细胞结构和分子过程的观察。
总结细胞生物学实验技术在现代生命科学研究中发挥着至关重要的作用。
细胞生物学实验
细胞生物学实验细胞生物学是一门复杂而有趣的科学，旨在探索细胞基础结构及其功能。
细胞生物学实验是为了更深入地了解细胞，以便更好地应用。
细胞生物学实验涵盖了在实验室中模拟和测试不同类型的细胞，以发现细胞的结构和功能。
细胞生物学实验可以根据不同的实验目的而有不同的设计。
有些实验的目的是了解细胞的基础结构，例如用来实现细胞分裂的机制和细胞内组织构建的过程；有些实验的目的是了解细胞受环境刺激后该如何反应，例如研究细胞对毒性物质或药物的反应；也有些实验的目的是了解细胞之间的相互作用，例如研究细胞传播信息的机制。
不管实验的目的是什么，它们都需要有效的实验设计、精确的操作技巧和准确的数据分析。
在实验室中，细胞生物学实验的步骤要求详细。
实验的第一步是准备实验材料，根据实验的目的而确定所需的技术和实验材料，细胞培养和试剂的准备非常重要。
实验的第二步是实施实验，要求操作者熟悉实验操作流程和技术，以确保细胞培养和观察的精确性。
实验的第三步是数据分析，分析测得的实验数据，对结果进行概括和解释，并画图显示数据。
细胞生物学实验通常分为室内实验和实地实验。
室内实验用于实验室中实现细胞培养、操作和观测，实现实验过程的模拟，这样能迅速得到实验结果，更方便地探索实验结果的可靠性和可重复性。
实地实验涉及到从实地样本中收集细胞，进行实验室外观测，探究细胞在大自然环境中的表现，进而发现细胞的新特性，从而更好地应用。
细胞生物学实验的重要性不言而喻，其探索的结果可以丰富细胞生物学的理论，为临床药物发现、新药开发和疾病治疗应用提供重要的科学依据。
近年来，细胞生物学实验技术发展迅猛，实验过程日益简化，实验结果也越来越准确可靠，为研究人员在实验室中快速发现细胞的新特性提供了良好的条件。
细胞生物学实验是一种长期探索性的实验工作，一般来说，实验结果最后能揭示的不仅仅是细胞的结构及其复杂的功能，更能揭示人类自身的始祖，以及窥探自然现象的深奥内涵。
综上所述，细胞生物学实验是一项复杂而又有趣的工作，旨在深入了解细胞结构和功能，针对不同实验目的，它要求严格的实验设计、准确的操作技巧和精确的数据分析，研究结果为药物发现、新药开发和疾病治疗提供宝贵的科学依据，进而改善人类的健康水平。
细胞生物学实验(本科生)实验内容
细胞生物学实验（本科生）实验内容实验一细胞的结构目的：1、熟悉实验室规范2、掌握光镜下细胞器的形态、分布特点；3、掌握临时制片法；4、学会生物绘图内容：（一）录像：临时标本片的制作（二）光镜下细胞器形态学观察：1、高尔基体（兔神经节切片）2、细胞核及核仁（蝾螈表皮装片）3、线粒体（肾小管切片）4、细胞骨架（培养肝癌细胞飞片）5、中心体*（马蛔虫受精卵切片）（二）操作：制作人口腔上皮细胞临时制片（显示活体线粒体）（三）实验报告：绘制人口腔粘膜上皮细胞实验二细胞化学细胞工程目的：1、掌握甲基绿-派洛咛染色法原理及操作技巧2、了解几种化学成分的显示方法及原理；3、观察各种化学成分在细胞中的分布；4、了解PCC原理；5、了解细胞融合及其应用；内容：（一）录象：克隆羊（二）观察：1、糖原（动物肝切片，PAS反应）2、酸性蛋白（蟾蜍血涂片，酸性固绿染色）3、酸性磷酸酶*（鼠腹腔液涂片，金属沉淀法显色）4、DNA* （小鼠睾丸切片，Feulgen反应）5、DNA、RNA*（人口腔粘膜上皮细胞涂片，吖啶橙染色，荧光显微镜观察）6、细胞融合（鸡血细胞、培养细胞）7、PCC*（Hela细胞）（三）操作：制作蟾蜍血涂片，显示DNA、RNA（四）实验报告：甲基绿-派洛咛染色原理、步骤及结果实验三显微测量细胞的生理活动目的：1、掌握显微测量技术；2、观察细胞的生理活动；3、掌握死活细胞的鉴别方法及原理；内容：(一)录象：细胞的活动显微测量（二）观察：1、胞质环流（黑藻叶片）2、吞噬作用*（小鼠白细胞）3、吞噬作用（蟾蜍白细胞）（三）操作：1、显微测量（蟾蜍红细胞）2、死活细胞鉴别（酵母细胞）（四）实验报告：1、测量5-10个细胞的大小，计算平均值；2、计算细胞存活率。
实验四细胞增殖染色体（质）目的：1、熟悉细胞增殖的主要方式；2、掌握细胞增殖周期各期的形态学特点；3、熟悉人染色体的基本形态特征；4、掌握X染色质标本的制备方法及原理；内容：（一）观察：1、动物细胞有丝分裂（马蛔虫受精卵切片）2、植物细胞有丝分裂（洋葱根尖纵切片）3、收缩环*（肝癌细胞飞片）4、无丝分裂*（草履虫装片）5、人染色体的基本形态（人血涂片）（二）操作：1、制作有丝分裂压片（洋葱根尖）2、制作X染色质标本片（人口腔粘膜上皮细胞）（三）实验报告：绘有丝分裂图、X染色质图。
细胞生物学实验
细胞生物学实验细胞生物学实验是细胞生物学研究的重要组成部分，在细胞生物学中，细胞生物学实验具有重要作用。
细胞生物学实验可以通过对细胞进行观察，检测，分离和操作等方法，对细胞内外信息进行研究，从而研究细胞的结构、功能、化学反应和物质交换等。
一般来说，细胞生物学实验可以分为直接观察实验，化学分析实验，生物分析实验，生物组装实验，以及细胞移植和培养实验等几种。
这些实验分别有不同的用途，能够更好地帮助科学家研究细胞。
直接观察实验是最基本也是最重要的实验。
它需要将细胞用显微镜放大，形成细胞图谱。
通过观看细胞图谱，能够清楚地了解细胞的结构，细胞内部的构造以及细胞间的关系。
化学分析实验主要是为了研究细胞中的物质及其交互作用，可以采用的实验方法有酶活性测定、亲和纯化及表观遗传学分析等。
这些实验可以帮助科学家了解细胞中各种物质的含量，并对细胞的功能及物质之间的相互作用做出更深入的研究。
生物分析实验主要用于研究细胞内部结构和功能，包括细胞膜和核膜蛋白的定量分析，细胞结构及功能组成分析，细胞膜蛋白及核膜蛋白结构和功能研究等。
这些实验可以帮助科学家更深入地研究细胞的结构和功能。
生物组装实验是在细胞结构的基础上构建更复杂的九聚体，通过把这些九聚体组装到细胞神经元上，可以研究神经系统的功能、结构及行为。
细胞移植和培养实验是将细胞从一种宿主机体迁移到另一种宿主机体，或从一种宿主体中分离出来，然后在体外培养以研究其特性的实验。
这种实验能够为科学家更好地研究细胞的功能和行为提供帮助。
总之，细胞生物学实验是细胞生物学研究的重要组成部分，它能够帮助科学家们更好的研究细胞的结构、功能、化学反应和物质交换等方面，从而对细胞的研究有更深入的了解。
细胞生物学实验报告(3篇)
细胞生物学实验报告（3篇）细胞生物学实验报告（精选3篇）细胞生物学实验报告篇1一、实验目的：1、掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。
2.了解细胞凋亡的生物学意义3、掌握凋亡细胞的形态学检测方法二、实验原理：1、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。
中间产物蓝色联苯胺是不稳定的，无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。
2、细胞凋亡是指细胞在生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。
它是一个主动的、高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。
3、凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。
三、实验步骤：细胞中过氧化物酶的显示1、在载片上滴一滴PBS缓冲液；2、取骨髓细胞：用断颈法处死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剥出后肢股骨，剪开股骨一端，用牙签尖的一端插入剪开的小孔中，抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上；3、涂片：用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开，室温晾干；4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸铜液，以盖满涂片为宜，处理30秒-1分钟。
5、倾去硫酸铜液，直接滴入联苯胺混合液反应6分钟（以盖满涂片为宜）6、清水冲洗，番红复染2min。
7、镜检：清水冲洗，室温晾干，先低倍镜下观察，后换高倍镜下观察（油镜100_）细胞凋亡的形态学检测与观察吉姆萨染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、95%乙醇固定5min4、PBS缓冲液洗2次5、吉姆萨染色液染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液7、普通光学显微镜下观察。
吖啶橙染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min4、PBS缓冲液洗2次每次1min5、0.01%吖啶橙染色液在避光环境下染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液6、选用蓝光激发滤片在荧光显微镜下观察。
细胞生物学实验结果解读与讨论教案
细胞生物学实验结果解读与讨论教案一、引言细胞生物学实验是学习和理解生物学中细胞结构和功能的重要手段。
本文将介绍一份细胞生物学实验结果解读与讨论的教案，旨在帮助学生通过实验结果的解读和讨论，深入理解细胞生物学的相关知识。
二、实验目的通过观察和分析细胞生物学实验结果，学生将能够：1. 理解细胞的基本结构和功能；2. 掌握细胞实验的基本操作方法；3. 运用所学细胞生物学知识对实验结果进行解读和讨论。
三、实验材料和方法1. 实验材料：- 显微镜- 细胞切片样品- 细胞染色剂等2. 实验方法：- 准备细胞切片样品，并进行染色处理；- 通过显微镜观察细胞切片样品，并拍摄相关照片；- 记录实验观察结果并进行数据整理。
四、实验结果解读与讨论1. 细胞结构解读学生将观察到细胞膜、细胞质、细胞核等重要结构，并理解它们在细胞内的作用。
学生可以通过对比正常细胞和异常细胞的差异，探讨细胞结构与细胞功能之间的关系。
2. 细胞功能解读学生将观察到细胞内的重要功能器官，如线粒体、高尔基体等，并了解它们的功能。
学生可以通过实验结果分析，探讨细胞的能量转化过程、蛋白质合成等重要生物学过程。
3. 细胞分裂与增殖学生将观察细胞分裂过程中的染色体变化、细胞膜的变化等，并分析细胞分裂对于生物体生长和发育的重要性。
学生可以通过实验结果讨论细胞分裂异常与疾病的关系，如癌症的发生。
4. 实验结果的统计与分析学生将对实验结果进行数据整理和统计，并运用相关统计方法进行分析。
学生可以通过统计结果的比较，探讨不同条件下细胞生物学变化的差异，如不同温度对细胞活性的影响等。
五、实验结果讨论的形式1. 小组讨论将学生分成小组，每个小组根据实验结果进行讨论，并汇报他们的观察结果和结论。
通过小组讨论，每个学生都有机会尽可能多地参与讨论和发表看法，提高学生的思维能力和表达能力。
2. 学生报告鼓励学生选择一个他们感兴趣的实验结果进行深入研究并撰写报告。
在报告中，学生应该详细描述实验过程、结果和讨论，并结合相关文献资料进行分析和思考。
细胞生物学实验
细胞生物学实验
一、细胞培养
1、细胞复苏
将冻存有细胞的冻存管从－70ºC 冰箱中取出，迅速置于已预热37ºC的水浴箱中不断摇动使冻存液在1 min 内解冻。
在超净工作台内吸出细胞悬液并滴加在含6 ml DMEM 培养基的离心管中，放入离心机1 000 rpm 离心6 min, 弃上清液，向离心管中加入DMEM 培养基6 ml 吹打混匀制成细胞悬液种于培养瓶中, 放入37ºC 5%CO2培养箱中继续培养，24 h 内换液，以除去残存冻存液和未贴壁细胞。
2、细胞培养与传代
当细胞长满培养瓶底约85%～90%时弃去原培养液，用PBS 轻洗2～3 次，弃去PBS，加入适量胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察，若胞质回缩，细胞间不再连接成片时，吸弃胰蛋白酶液，加入DMEM 培养基终止消化，轻轻吹打直至细胞全部脱落悬浮，将细胞悬液吸出分装至2~3 个培养瓶中，再加入适量DMEM 培养基和胎牛血清，血清浓度为10%，放入培养箱中静置培养。
传代第2 天吸出原培养
液，加入新培养液。
细胞约2~3 天传代1 次。
3、细胞冻存
细胞冻存前一天更换培养基，观察细胞生长情况，使细胞处于指数生长期。
按照细胞传代的方法收集，去少量细胞悬液在倒置显微镜下进行细胞计数。
然后将细胞悬液吸入离心管，1000 rpm 离心6min，弃上清，吸取细胞冻存液，吹打混匀细胞，使细胞密度为1×107个/ml，将细胞悬液吸入冻存管中严密封口，冻存管做标记。
先将冻存管放入4ºC 冰箱30 min，接着置于-20ºC 冰箱1 h，再移入超低温冰箱中保存。
细胞生物学实验汇总
细胞生物学实验汇总1.细胞培养实验：细胞培养是一种将细胞在人造环境下生长和繁殖的方法。
这种实验可以用来研究细胞的生长和增殖，观察细胞的形态变化，评估细胞的功能和活性等。
培养的细胞可以来自动物组织、植物组织或微生物等。
2.免疫荧光染色实验：这种实验可以用来观察细胞内特定的蛋白质、细胞器或DNA分布。
研究人员可以利用荧光染料或标记的抗体与目标分子结合，在显微镜下观察细胞瞬态或持久性标记。
这种实验可以帮助我们研究细胞的结构和功能，探索细胞中不同分子的相互作用。
3.转染实验：转染是将外源DNA或RNA引入细胞内的过程。
这种实验可以用来研究基因在细胞中的功能，或将外源基因导入到细胞中来改变其表达。
常见的转染方法包括酵母转染、细菌转染、质粒转染和病毒转染等。
转染实验可以帮助我们了解基因调控机制和研究细胞行为的变化。
4. 测定细胞增殖实验：这种实验可以用来测定细胞增殖速度和细胞生长的影响因素。
常见的细胞增殖实验包括MTT（3-（4,5-二甲基-2-苯唑基）-2,5-二苯基四氮唑）实验、BrdU（5-溴脱氧尿苷）实验等。
这些实验可以帮助我们了解细胞增殖的分子机制和影响细胞增殖的因素。
5.测定细胞凋亡实验：细胞凋亡是一种编程性死亡的过程，是维持细胞内稳态的重要机制。
测定细胞凋亡的实验可以帮助我们研究细胞死亡的调控机制，并评估不同因素对细胞凋亡的影响。
常见的细胞凋亡检测方法包括DNA损伤、细胞膜破裂和细胞色素释放等。
6.蛋白质分离和电泳实验：这种实验可以用来分离和鉴定细胞中的蛋白质。
常见的蛋白质分离方法包括凝胶电泳、二维凝胶电泳和西方印迹等。
这些实验可以帮助我们研究细胞中不同蛋白质的表达和功能，了解蛋白质调控的机制。
7. 实时荧光定量PCR（polymerase chain reaction）实验：PCR是一种在体外合成DNA的技术。
实时荧光定量PCR可以用来定量检测靶基因在细胞中的表达水平。
这种实验可以帮助我们研究细胞基因表达的调控机制和研究基因在不同生物学过程中的功能。
1-细胞生物学实验
五、实验操作
1. 取猪肝1g，放入小烧杯中，加4ml 0.25M蔗糖缓冲液， 将组织剪成约1mm立方的小块。 2. 将剪碎的组织移入匀浆器的外管中，再将内管（带柄 的活塞）插入外管中，缓慢而均匀地施力，上下旋转拉 动，匀浆7-10分钟，然后用六层纱布过滤回洗净的原烧 杯中。（这两步操作略） 3. 每组取1个5ml离心管，加入匀浆液 2ml，2000rpm离 心10分钟。（每组1管） 接下去的操作见下面的流程图。 健那绿染色：各取10μlD4悬浮液和健那绿染液在载玻片 上混合，10分钟后加盖玻片，观察线粒体。 改良苯酚品红染色：取10μlD6涂片，滴10μl改良苯酚品 红染液，5分钟后加盖玻片，观察细胞核。
2.细胞核的分离提取
3.高速离心分离提取线粒体
操作步骤 装有上清液的高速离心管→ 17000rpm 离心 20 分 钟 → 弃 上 清 ， 留 取 沉 淀 物 → 加 入 0．25mol／L蔗糖－0.003 mol／L氯化钙液1ml， 用吸管吹打成悬液→17000rpm离心20分钟→将 上清吸入另一试管中，留取沉淀物，加入 0.1ml 0． 25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙 溶液混匀成悬液→取上清液和沉淀物悬液，分 别滴于载玻片上，各滴一滴 0.02 ％詹纳斯绿 B 染液盖上盖片染20分钟→油镜下观察，颗粒状 的线粒体被詹纳斯绿B染成蓝绿色。
(2) 镜台测微尺
1.外形是一载玻片，上有一带精细刻度的标尺。
2 . 总长度为 1mm，分为 100 等份，每一个格的长度为 0.01mm(10μm)。
(3)标定方法
①将镜台测微尺置镜台上。 ②低倍下找到镜台测微尺，使之与目镜测微尺平行且 左端对齐(0刻度重合)。
细胞生物学实验
究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
▪
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染
料的胶粒固定、堆积在细胞内某些持殊结构里，达到易于识
别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分
离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固
定在活细胞的某种结构上而显色。
Janus green B
电镜下的红细胞
实验原理
▪ 细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透 性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出 细胞。水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照 物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透 压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。
▪ 将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到 细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中， 由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶 液，这种现象称为溶血。
4、显微镜观察方法
▪ 标本置于载物台上-----先于低倍镜（10×）观察------高倍镜（40×）------上抬1cm --------加香柏油到标本上------调节镜头（100×）， 并使之埋入油中 --------适量调节粗、微调焦螺旋至看清材料--------镜 下观察，并绘图；
▪ 实验结束，上升镜筒-------滴加二甲苯----用擦镜纸 擦拭镜头--------将显微镜恢复原位，放入镜箱
【实验材料】
▪ 1、主要设备：普通离心机、组织捣碎机、扭 力天平、光学显微镜。
▪ 2、小型器材：500m1烧杯2个，250m1量筒1 个，滴管10支，10m1刻度离心管20支，纱布 若干，载玻片和盖片各4片。
▪ 3、 0.35mol/L NaCl溶液。 ▪ 4、 新鲜菠菜。
【操作方法】
▪ A、游离叶绿体的制备与观察
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实验1 细胞膜的通透性【实验目的】了解分子量、脂溶性大小、电解质和非电解质溶液对细胞膜透性的影响。
【实验原理】细胞膜在不断变化的环境中，必须保持自身的稳恒状态，才能生存。
细胞膜允许一些物质通透，又能降低甚至阻挡另一些物质的通透，所以细胞膜具有选择通透性。
水分子可以自由通过细胞膜，当细胞处于低渗液环境时，水分子大量渗到细胞内，使细胞膨胀，进而破裂，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这就是溶血现象。
溶血现象可作为测量物质进入红血细胞速度的一种指标。
红细胞置于乙二醇、丙三醇（甘油）、葡萄糖等摩尔浓度的高渗液中，乙二醇等分子进入红血细胞，使细胞内的渗透性活性分子的浓度大为增加，继而导致水的摄入，使细胞膨胀，细胞膜破裂，发生溶血。
溶血现象发生的快慢与进入细胞的物质的分子量大小有关。
分子量大的进入细胞慢，发生溶血所需时间也长。
非极性化合物易溶于脂溶剂，但在水中溶解度甚小。
碳链越长，脂溶性越大。
一种化合物在脂溶剂中的溶解度与其在水中溶解度之比，叫分配系数。
各种非电解质溶液，只要单位面积中所含的分子数相同，就具有相同的渗透压。
电解质溶液，如氯化钠与葡萄糖分子数相等时，氯化钠产生的渗透压要大的多。
具有相同渗透压的某非电解溶液与某电解质溶液浓度之比，叫等渗系数。
用ⅰ来表示。
ⅰ= 葡萄糖的等渗摩尔浓度/ 氯化钠的等渗摩尔浓度发生溶血者为低渗液，所以把发生溶血的前一管溶液的浓度近似视为红细胞等渗。
【实验仪器、材料和试剂】（一）仪器、用具小烧杯、试管、试管架、刻度吸管、注射器、秒表（二）材料含适量肝素的兔血或鸡血（三）试剂1M乙二醇水溶液、1M丙三醇水溶液、1M葡萄糖水溶液、3M甲醇、3M乙醇、3M丙醇、M/8、M/9、M/10、M/12、M/14葡萄糖溶液、M/12、M/13、M/14、M/16、M/18氯化钠溶液【方法与步骤】（一）分子量大小对膜通透性的影响1．在编号的三支试管中，分别用吸管吸入2ml 1M乙二醇，1M丙三醇，1M葡萄糖高渗液。
2．先后分别用注射器滴加两滴血液，用手指按住管口，倒置一次。
3．观察溶血时间，最长延至10min。
4．将实验结果列入如下所示的表格中。
（二）脂溶性大小对细胞膜透性的影响1．编号的三支试管分别加入2ml 3M的甲醇、乙醇、丙醇溶液。
2．分别先后加入两滴血液，按住管口倒置一次。
3．观察溶血时间。
4．将实验结果记入如下所示的表格中。
（三）电解质和非电解质溶液对细胞膜透性的影响1．将试管编号，注明溶质名称及摩尔浓度。
2．按编号分别加入不同浓度的葡萄糖及氯化钠溶液2ml。
3．每管各加入两滴血液，按住管口，倒置一次。
4．室温放置15min ，观察发生溶血的浓度，确定等渗浓度。
5．按下表记录实验结果。
6．计算等渗摩尔系数实验2 鸡红细胞的体外融合【实验目的】1．了解聚乙二醇（PEG ）诱导体外细胞融合的基本原理。
2．通过PEG 诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。
【实验原理】细胞融合（cell fusion ）又称体细胞杂交，是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞，随后，异核体同步进入有丝分裂，核膜崩溃，来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞（hybrid cell ）。
细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。
依据融合过程采用的助融剂的不同，细胞融合可分为：（1）病毒诱导的细胞融合，如：仙台病毒（hemagglutinating virus of Japan ，HVJ ）；（2）化学因子诱导的细胞融合，如：聚乙二醇（polyethyleneglycol ，PEG ）；（3）电场诱导的细胞融合；（4）激光诱导的细胞融合。
PEG 是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子质量的多聚体。
PEG 可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，引起细胞融合。
该方法应用分子质量为400—6000的PEG 溶液引起细胞的聚集和粘连，产生高频率的细胞融合。
融合的频率和活力与所用PEG 的分子质量、浓度、作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。
【实验仪器、材料和试剂】（一）仪器、用具刻度离心管、离心机、血细胞计数板、水浴锅、滴管、显微镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、酒精灯等。
（二）材料 鸡红细胞 （三）试剂1．0.85 % NaCl 溶液2．GKN 液：8.0g NaCl ，0.4g KCl ，1.77 g Na 2HPO 4·2H 2O ，0.69 g NaH 2PO 4·H 2O ，2.0g 葡萄糖，0.01g 酚红，溶于1000ml 重蒸水中。
3．50%（W/V ）PEG 溶液1. 取50g PEG （分子质量=4000）放入100ml 瓶中，高压灭菌20分钟。
2. 让PEG 冷却至50～60℃，勿让其凝固。
3. 加入50ml 预热至50℃的GKN 液，混匀，置37℃备用。
4．Hanks 原液 (10×)：NaCl 80.0gNa 2HPO 4·12H 2O 1.2ｇKCl 4.0g KH 2PO 40.6ｇMgSO 4·7 H 2O 2.0ｇ葡萄糖 10.0g CaCl 21.4g1）称取1.4g 的CaCl 2，融于30～50ml 的重蒸水中。
2）取 1000ml 的烧杯及容量瓶各一个，先放重蒸水800ml 于烧杯中，然后按上述配方顺序，逐一称取药品。
必须在前一药品完全溶解后，方可加入下一药品，直到葡萄糖完全溶解后，再将已溶解的CaCl 2溶液加入，最后加水至1000ml 。
5．Hanks 液： Hanks 原液 100ml重蒸水 896ml 0.5%酚红 4ml配好的Hanks 液，分装包扎好贴上标签，经过灭菌后，4℃保存。
6．Janus green 染液【方法与步骤】1. 鸡红细胞的获得：取新鲜鸡血，迅速加入肝素（100U 肝素/ 5ml 全血）混合，制成抗凝全血。
2. 鸡红细胞储备液的制备：在抗凝全血的试管中，加入4倍体积的0.85 %NaCl 溶液，制成红细胞储备液，置于4℃冰箱内可供一周内使用。
3. 鸡红细胞悬液的制备：取鸡红细胞储备液1ml ，加入4ml 0.85 %NaCl 溶液，混匀后，1200rpm 离心5min ，弃去上清液，再加入5ml 0.85 %NaCl 溶液按上述条件离心一次。
最后，弃去上清液，加入10ml 的GKN 溶液制成鸡红细胞悬液。
4. 计数：取0.5ml 鸡红细胞悬液，加3.5ml 的GKN 溶液进行稀释，在血细胞计数板上计数。
若细胞浓度过大，用GKN 溶液稀释至1 107个/ml 左右。
5. 鸡红细胞的收集：吸取1ml 鸡红细胞悬液放入离心管中，加入4mlHanks 液混匀，1000rpm 离心5min 。
弃去上清液，用手指轻弹离心管底部，使沉淀的血细胞团块松散。
6. PEG 诱导细胞融合：吸取0.5ml 37℃的50%PEG 溶液，慢慢沿着离心管壁逐滴加入，边加边轻摇离心管，使PEG 与细胞混匀，然后在37℃水浴中静置2min 。
7. 终止PEG 作用：缓慢加入5ml Hanks 液，轻轻吹打混匀，于37℃水浴中静置5min 。
8. 制备细胞悬液：用吸管轻轻吹打细胞团数次使细胞团分散，1000rpm 离心5min ，使细胞完全沉降。
弃去上清液，加Hanks 液，再离心一次，弃多数上清，留少许溶液，混匀。
9. 染色和镜检：吸取细胞悬液，在凹面载玻片上滴一滴，加入Janus green 染液混匀，染色3min 后盖上盖玻片，在显微镜下观察细胞融合情况。
10. 计算细胞融合率：细胞融合率是指在显微镜的视野内，已发生融合的细胞其细胞核总数与该视野内所有细胞（包括已融合细胞）的细胞核总数之比，通常以百分比表示。
采用方法如下：在高倍镜下随机计数200个细胞(包括融合的与未融合的细胞)，以融合细胞(含两个或两个以上的细胞核的细胞)的细胞核数除以总细胞核数(包括融合与未融合的细胞核)即得出融合率。
公式如下：【注意事项】1. 本实验中，用0.85%NaCl 液代替了Alsver 液。
实验证实，用Alsver 液保存的红细胞时间较短，而改用生理盐水则明显延长红细胞的保存时间且不影响细胞融合率。
2. 高Ca 2+浓度能够提高细胞融合率。
有些抗凝剂中含有和Ca 2+结合的化合物，比如Alsver 液中柠檬酸钠的酸根与血液中的Ca 2+形成难解离的可溶性络合物，导致血液中的Ca2+浓度降低，故起抗凝血作用，同时会造成细胞的融合率较低。
3. 必须严格控制PEG 的作用时间，通常处理细胞1～2min 。
PEG 和二甲基亚砜（DMSO ）并用，可以提高细胞的融合率。
4. 融合细胞继续培养就变成一个杂种细胞，它的染色体数不是两核的倍数，因为一些染色体会逐渐消失。
【作 业】1. 画出观察到的融合细胞，并计算融合率。
2. 试说明细胞融合的关键。