2021年革兰氏染色实验步骤
革兰氏染色步骤6则
革兰氏染色步骤6则以下是网友分享的关于革兰氏染色步骤的资料6篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。
革兰氏染色步骤（1）革兰氏染色步骤步骤革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1、涂片固定。
2、草酸铵结晶紫染1分钟。
3、自来水冲洗。
4、加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5、水洗，用吸水纸吸去水分。
6、加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7、蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。
干燥，镜检。
染色后，革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。
细菌分类：革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。
革兰氏染色法的步骤（2）详细阐叙革兰氏染色法的步骤浏览次数：174次悬赏分：0 | 解决时间：2011-5-25 17:44 |提问者：肖箫2011shaw最佳答案革兰氏染色一、目的：在细胞发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测，判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。
二、原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
革兰氏染色法步骤及注意事项
1. 准备细菌涂片：将待染菌株取一小滴放在玻璃片上，用铅笔头部画成细 线，形成细菌涂片。
2. 固定：将细菌涂片在火焰上反面向上加热，使细菌附着在玻璃片上。 3. 染色： a. 涂上紫晶液：将细菌涂片浸入紫晶液中，静置 1 分钟。 b. 冲
1. 操作环境应保持干净，并采取无菌操作，以避免外界细菌污染。 2. 手套、眼镜和实验室外套是必需的个人防护装备。
3. 严格遵守安全操作规程，如避免将染料接触到皮肤或进入口鼻。
4. 使用优质的试剂和试验器材，以确保结果的准确性。
5. 注意控制染Βιβλιοθήκη 时间和冲洗时间，过长或过短都可能影响染色效果。
6. 在观察细菌涂片时，使用适当的显微镜镜头和光源，以获得清晰的图 像。
洗：用蒸馏水或脱离水轻轻冲洗玻璃片，以去除多余的紫晶液。 c. 酒 精洗涤：滴加酒精洗涤玻璃片，使其被酒精覆盖，持续洗涤 15-30 秒。 d. 再次冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃片，以去除酒精。 e. 涂上碘液： 滴加碘液覆盖细菌涂片，静置 1 分钟。 f. 冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃 片，以去除多余的碘液。 g. 酒精洗涤：滴加酒精洗涤玻璃片，使其被 酒精覆盖，持续洗涤 15-30 秒。 h. 再次冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃 片，以去除酒精。 i. 涂上脱色剂：滴加脱色剂覆盖细菌涂片，持续涂覆 15-30 秒。 j. 冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃片，以去除脱色剂。 4. 染色：将细菌涂片滴上红色染料（如苏丹三染料）覆盖细菌，静置 1 分 钟。 5. 冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃片，以去除多余的染料。 6. 干燥：将细菌涂片放在通风处晾干，或用吹风机低温吹干。 7. 观察：将干燥的细菌涂片放在显微镜下观察，细菌将呈现出紫色或蓝色 的革兰氏阳性颜色，而其他微生物将呈现出红色的革兰氏阴性颜色。 注意事项：
革兰氏染色说明
⾰兰⽒染⾊说明⾰兰⽒染⾊【操作步骤】1、操作前准备：戴⼝罩、帽⼦、⼿套，穿⼯作服，准备并清点本试验所需器材。
2、制作涂⽚：细菌涂⽚的制作包括涂⽚、⼲燥、固定3个步骤。
(1)涂⽚：取洁净载玻⽚1张，⽤铅笔标记，并在玻⽚正中间位置滴加⼀滴⽣理盐⽔。
⽤灭菌环挑取菌落少许，均匀涂布于⽣理盐⽔中，并研磨成直径1~1.5cm的菌膜。
若取菌悬液标本涂⽚，则不需加⽣理盐⽔，直接⽤灭菌的接种环取菌液1~2环，直接均匀涂抹成菌膜。
(2)⼲燥：涂⽚最好置室温下⾃然⼲燥，也可将菌膜⾯向上，在酒精灯⽕焰上⽅约10cm处的热空⽓中微微加热烘⼲。
(3)固定：⽤⼿或玻⽚夹夹住载玻⽚⼀端，⼲燥的涂⽚⾯朝上，在酒精灯⽕焰的外焰上尽快对来回通过2~3次，以玻⽚反⾯接触⽪肤热⽽不烫⼿为宜。
3.染⾊（1）初染：在制好的涂⽚上滴加结晶紫染液数滴（以刚好覆盖菌膜为宜），染⾊⼀分钟，倾斜载玻⽚，⽔洗。
甩去积⽔。
（2）媒染：滴加卢⼽碘液数滴，染⾊1分钟，倾斜载玻⽚。
⽔洗，甩去积⽔。
（3）脱⾊：滴加95％⼄醇数滴，轻轻摇动载玻⽚，使其脱⾊。
需10~30s ⾄⽆紫⾊脱出为准。
（4）复染：滴加稀释复红染液数滴，复染0.5min。
倾斜载玻⽚，⽔洗，甩去积⽔。
⽤滤纸吸⼲或者⾃然⼲燥。
4、油镜检查：待标本涂⽚⾃然⼲燥或⽤吸⽔纸吸⼲后，在菌膜上滴加⾹柏油，置油镜下检查。
表⽪葡萄球菌染成紫⾊，为⾰兰阳性菌，呈葡萄球状排列；⼤肠埃希菌染成红⾊，为⾰兰阴性菌，呈散在的杆状。
5、其他：操作后正确处理医疗垃圾，实验器材归回原位。
【注意事项】1、整个操作过程须注意⽆菌操作。
2、因不同菌龄的细菌，⾰兰染⾊的结果也有差异，故⼀般以18~24h的培养物染⾊效果最好。
3、涂⽚若太厚或太薄，固定时菌体过分受热及脱⾊时间长短，都会影响染⾊结果，要严格按要求操作。
4、涂⽚最好在室温下⾃然⼲燥，若置酒精灯上微加热烘⼲时，切勿靠⽕焰太近，以免标本烤枯变形。
5、染⾊时，染液以覆盖标本为宜，不宜过多。
微生物学实验细菌的简单染色和革兰氏染色2021推选
四、实验步骤
〔一〕简单染色的步骤 〔见P11〕
1、涂片：取干净载玻片，火焰灼烧后，横放于玻片架上； 在载玻片中央滴一小滴生理盐水， 用接种环以无菌操作取少许菌体于水滴中〔注：不要挑破培养基〕，
7、镜混检匀：先并用低涂倍成镜找薄到视膜野〔后，注再换：油涂镜观片察 不。 易过厚〕。
菌龄对革兰氏染色结果的影响：选取处于活泼生长期——指数生长期的菌体进行革兰氏染色。
〔二〕革兰氏染色 〔见P12)
1、涂片、固定 〔1〕涂片——“三区〞涂片法。在载玻片的左端先加一滴蒸馏水，用无菌接种 环挑取少量苏云金芽孢杆菌与左边水滴混合；将载玻片倾斜使少量菌液延伸至
玻片中央。在载玻片的右端加一滴蒸馏水，用无菌接种环挑取少量大肠杆菌与 右微菌生龄边物 对学革水实兰滴验氏细染混菌色的结合简果；单的染影将色响和：玻革选片兰取氏处倾染于色活斜泼使生长少期—量—菌指数液生长延期伸的菌至体进玻行片革兰中氏染央色。。 〔三区：左区——苏 云菌体金尚未芽成孢熟或杆菌体菌过区老，；可能中使央染色区结果—呈—现相两反的种结菌果。的混合区；右区——大肠杆菌区〕。 〔菌直体至2尚 流〕未下成的枯熟水燥或为菌无及体色过为固老止定，。可。能使步染骤色结同果呈简现相单反染的结色果。法。 涂烘干片菌液不〔易注：过不能厚直，接在否火焰那上么烘烤造，以成免局菌体部变形菌〕体。 脱色不完全，而使G-菌呈现革兰氏阳性结果。
2混②、匀在并 碱枯涂性燥成、薄中：膜性〔或用注弱夹：酸涂性子片溶不液夹易中住过，厚细载〕菌。菌玻体片通常一带负端电〔荷，菌而碱膜性面染料朝在电上离〕时，，其分反子复的染通色局过部火带正焰电荷高〔处酸性数染料次的，染色局部 带负烘电荷干〕，菌因液此，〔碱性注染：料很不容易能与直菌体接结合在而火是菌焰体着上色烘。 烤，以免菌体变形〕。
革兰氏染色操作方法过程
革兰氏染色操作方法过程革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，用于区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
操作步骤如下：1. 取一支细菌培养液，用无菌棉签蘸取适量的细菌样品。
2. 在显微镜片上滴加一滴细菌样品。
3. 用锡夹夹住显微镜片，将显微镜片通过火焰杀菌，以消毒细菌样品。
4. 将显微镜片上的细菌样品放置于乙醇中，浸泡1-2分钟，进行固定。
5. 取出显微镜片，倾倒掉乙醇，用水冲洗显微镜片，以去除残留的乙醇。
6. 滴加革兰氏染色液（由紫色的结晶紫和碘酒混合制成），使其完全覆盖细菌样品。
7. 静置1分钟，将显微镜片冲洗至水清。
8. 将显微镜片放入去结晶紫酒的洗涤液中，浸泡20-30秒，进行除色。
9. 冲洗干净后，加入洗净的碱性碘液，浸泡20-30秒，进行碘固定。
10. 将显微镜片放入无菌水中，冲洗干净。
11. 用酒精洗液将显微镜片沥干。
12. 将显微镜片放入苏木精洗涤液中，浸泡20-30秒，进行染色。
13. 冲洗干净后，用水洗涤。
14. 用酒精洗液将显微镜片沥干。
15. 将显微镜片放入氯仿中，浸泡1-2分钟，清洗细胞。
16. 用酒精洗液将显微镜片沥干。
17. 将显微镜片放入醋酸乙酯中，浸泡1-2分钟，清洗细胞。
18. 用酒精洗液将显微镜片沥干。
19. 将显微镜片倒置在玻璃片上晾干。
20. 最后，在显微镜下观察染色结果。
革兰氏阳性菌为紫色，革兰氏阴性菌为粉红色。
注意事项：- 操作中要使用无菌试剂和器皿，以防止细菌污染。
- 染色液的配制和保存要按照说明书进行。
- 操作过程中要注意不要受伤，避免染色液和化学物品溅到皮肤或眼睛上。
- 染色后，显微镜片要彻底干燥，以便观察。
革兰氏染色方法
实验方法步骤革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）自来水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7）蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。
干燥，镜检。
G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。
呈紫色。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。
革兰氏染色法的主要步骤是先用结晶紫进行初染，再加媒染剂—碘液，以增加染料与细胞间的亲和力，使结晶紫与碘形成分子量较大的复合物，然后用脱色剂（乙醇或丙酮）脱色，最后用番红复染。
凡细胞不被脱色而保留初染剂的颜色（紫色）者为革兰氏阳性菌，如被脱色后有染上复染剂的颜色（红色）者为革兰氏阴性菌。
一般乙醇脱色的时间为30s,如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可能被脱去颜色而被误认为是革兰氏阴性菌；相反，如果时间不够，革兰氏阴性菌未被完全脱色而被认为是革兰氏阳性菌。
染色时间一般控制在1min。
革兰氏染色液的配制：第1液：结晶紫溶液结晶紫乙醇饱和溶液100 mlA液：结晶紫 2.5 g95%乙醇25.0 mlB液：1%草酸铵溶液将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成液；将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
第2液：路（卢）戈碘液碘化钾 2 g碘 1 g蒸馏水300 ml先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶解时可稍加热，最后补充蒸馏水量。
第3液：脱色剂（1）95%乙醇或丙酮乙醇溶液100 ml95%乙醇70 ml丙酮30 ml第4液：番红花红染色液2.5%番红0 （Safranin 0）95%酒精溶液10 ml蒸馏水90 ml。
简述革兰染色法的操作步骤
简述革兰染色法的操作步骤革兰氏染色法：也称革兰氏阴性染色法。
属于活细胞染色法，也是初中阶段接触的细菌学基本技术之一。
此法特别适合观察病毒的形态，故常作为临床微生物实验中重要的染色方法。
简述革兰氏染色法的操作步骤一般方法如下：(1)检查试管，将所需的培养基配制好并检查是否均匀。
(2)液体试剂的制备：取无菌的结晶紫注射液0。
5ml，精氨酸0。
5ml， 0。
01%升汞液2。
5ml，蒸馏水150ml混匀后再加蒸馏水至1000ml。
(3)固体试剂的制备：取无菌的结晶紫指示液0。
5ml，精氨酸0。
5ml，蒸馏水50ml混匀后再加蒸馏水至1000ml。
(4)稀释：在试管内分别加入精氨酸0。
5ml，无菌水20ml，再加蒸馏水至9ml，摇匀，用结晶紫指示液染色20分钟，并随时注意结晶紫是否变蓝，必要时可轻轻摇动或加热。
(5)加生理盐水到标线内，使高度恰好达到培养基中最低部位。
(6)加培养液：吸取配制好的液体培养基分别滴到三个试管中，每个试管各加入100μl的纯化蛋白胨培养基，即为含无菌牛血清的生理盐水，分别置于37 ℃温箱中保存备用。
(1)检查试管，吸出液体试剂，吸干，检查。
(2)准确量取需用量(或先倒在烧杯中，再用量筒量)，检查药液浓度。
(3)用酒精灯火焰点燃试管内的培养基，分别在每管中加入1。
0ml培养基，将试管放回37 ℃温箱中培养。
(4)观察并记录细菌生长情况。
第一，培养时间应足够，以获得足够的细菌数量；第二，以提高对细菌生长曲线的观察能力；第三，缩短细菌培养时间有利于分离、纯化细菌。
(5)取出试管，观察染色的结果。
如果菌落周围染色较浅，表明染料被细菌分泌物包绕，菌体呈现模糊状态；反之，菌落周围染色较深，则表明细菌染色质集中，结构明显。
①加生理盐水到标线内，使高度恰好达到培养基中最低部位。
②加培养液：吸取配制好的液体培养基分别滴到三个试管中，每个试管各加入100μl的纯化蛋白胨培养基，即为含无菌牛血清的生理盐水，分别置于37 ℃温箱中保存备用。
革兰染色实验八步操作流程
革兰染色实验八步操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!革兰染色实验是细菌学中的一种重要的分类方法，通过对细菌细胞壁的不同结构进行染色，可以将细菌分为革兰阳性和革兰阴性两类。
细菌的革兰氏染色实验操作步骤流程
细菌的革兰氏染色实验操作步骤流程革兰氏染色是一种常用的细菌分类方法，通过染色技术可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
这种染色方法简单快捷，对细菌的形态特征有着重要的观察作用。
本文将介绍细菌的革兰氏染色实验的详细操作步骤流程。
实验所需材料1.革兰氏染色试剂盒：–革兰碘液–革兰染色液–醇解液–洗涤液–脱水液2.细菌培养液3.玻璃载玻片4.导览盖玻片5.消毒棉球6.显微镜实验步骤1.预处理玻片和试管–用肥皂水洗净手并彻底冲洗干净。
–取一块干净的抹布或纸巾，将玻璃载玻片擦拭干净。
–取一块干净的纸巾蘸取少量醇解液擦拭玻璃载玻片表面，以去除可能存在的杂质。
–将试管清洗干净，用蒸馏水冲洗干净，并放置在烘箱中晾干。
2.制备细菌涂片–打开培养液管，将一滴细菌培养液滴在玻璃载玻片上，可略带颜色。
–将玻璃载玻片侧倾45度，用细胞棉棒轻轻均匀地将细菌培养液涂抹在玻璃载玻片上，尽量避免涂片过厚。
–将涂片晾干。
3.固定细菌涂片–将制备好的细菌涂片放入烘箱中，用50摄氏度温度固定5分钟。
–取出固定的细菌涂片，待冷却后准备进行染色处理。
4.革兰氏染色处理–取一滴革兰碘液，滴在细菌涂片上，静置1分钟。
–洗涤液冲洗：将细菌涂片放入洗涤液中，静置20秒，然后将涂片提起，用自来水轻轻冲洗10秒。
–脱水液处理：将细菌涂片放入脱水液中，静置20秒。
–将细菌涂片提起并用洗涤液清洗3次，每次间隔10秒。
–将细菌涂片放入洗涤液中，静置20秒。
–用细胞棉棒从上到下蘸取革兰染色液，均匀地在细菌涂片上涂抹。
–将细菌涂片放入革兰染色液中，静置1分钟。
–将细菌涂片提起并用洗涤液轻轻冲洗10秒。
–将细菌涂片放入醇解液中，静置1分钟。
–将细菌涂片提起并用洗涤液轻轻冲洗10秒。
5.干燥和观察–用吹风机或自然风将细菌涂片吹干。
–涂片完全干燥后，将其放置在显微镜载片夹上。
–用显微镜在低倍镜下观察涂片，然后转换到高倍镜下观察。
观察细菌在镜片上的染色结果和细菌形态。
简述革兰氏染色法的实验步骤
简述革兰氏染色法的实验步骤一、准备工作1.1 准备细菌培养物：从培养基上取出革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的培养物，注意保证培养物的纯度和活性。
1.2 准备玻璃片：将玻璃片洗净，并用酒精炉烘烤杀菌，确保无菌。
1.3 准备染色试剂：包括革兰碘液、革兰酒精、洗净的蒸馏水和苏木精染色液。
二、制备细菌涂片2.1 取一支无菌的注射针，将其浸入细菌培养物中，沿着玻璃片上划出一条细菌涂片。
2.2 将涂片晾干，避免细菌在涂片上移动。
三、革兰氏染色3.1 将制备好的细菌涂片放在染色盘上，用革兰碘液滴在涂片上，静置一分钟。
3.2 用蒸馏水洗去多余的革兰碘液。
3.3 倾斜染色盘，用革兰酒精沿涂片滴流，停留时间约为30秒，直到滴落的酒精不再有颜色流出。
3.4 用蒸馏水洗去多余的革兰酒精。
3.5 将涂片放在苏木精染色液中，静置1-2分钟。
3.6 用蒸馏水冲洗涂片，直到冲洗液不再有颜色流出。
3.7 用纸巾轻轻吸干涂片上的水分。
四、观察和解读4.1 将制备好的革兰氏染色涂片放在显微镜下，使用100倍或1000倍镜进行观察。
4.2 革兰氏阳性菌：细菌的细胞壁含有大量的革兰染色复合物，因此在显微镜下呈紫色或蓝色。
4.3 革兰氏阴性菌：细菌的细胞壁较薄，不含革兰染色复合物，在显微镜下呈红色或粉红色。
4.4 根据颜色可以初步判断细菌的革兰氏染色特性。
五、注意事项5.1 实验过程中要注意无菌操作，避免外源细菌的污染。
5.2 染色时间要控制好，过长或过短都会影响染色效果。
5.3 在染色过程中要轻柔操作，避免细菌涂片的脱落或损坏。
5.4 染色后的涂片要及时观察，避免颜色的变化影响结果的解读。
通过以上实验步骤，可以使用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
这对于临床医生和微生物学研究者来说具有重要意义，可以帮助他们快速鉴定细菌种类，并选择合适的治疗方法。
同时，革兰氏染色法也是微生物学实验中常用的基础技术，对于学习和理解细菌的结构和特性有着重要的作用。
革兰氏染色法的过程及原理之欧阳结创编
革兰氏染色法的过程及原理一，过程1 ．涂片将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。
固定时通过火焰l 一2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2 ．染色( 1 ）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。
( 2 ）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。
( 3 ）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。
( 4 ）复染用番红液染1 一2 分钟，水洗。
( 5 ）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。
以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。
( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。
二，原理革兰氏染色法（Gram stain ）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G＋表示：染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G 一表示。
细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。
革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌：而脱色，不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。
此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。
青霉素作用机制干扰细菌细胞壁的合成。
青霉素你的结果与细胞壁的成分粘肽结构中德D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可与后者竞争转肽酶，阻碍你粘肽的形成，造成细胞壁的缺损，使细菌失去细胞壁的渗透屏障，对细菌起到杀灭作用。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤引言：革兰氏染色是一种常用的细菌染色技术，由丹麦细菌学家Hans Christian Gram于1884年发明。
该技术以细菌细胞壁结构的不同为基础，将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰氏染色的步骤简单易行，适用范围广泛，被广泛应用于医学、生物学等领域的细菌鉴定工作中。
本文将对革兰氏染色的步骤进行详细介绍，以帮助读者更好地了解和掌握革兰氏染色技术。
一、准备工作1.1 试剂准备进行革兰氏染色需要的试剂主要包括：革兰碘液、革兰洗涤液、乙醇和碱性紫。
1.2 样品处理将待染菌株铺在平板上，选择好光洁的玻璃片，取少量样品用针头将菌液均匀涂布在玻璃片上。
待菌落完全干燥后，即可开始染色。
二、革兰氏染色步骤2.1 固定将涂布好菌液的玻璃片朝上放置在架子上，使用银夹将玻璃片固定住。
将固定好的玻璃片在灯火或火焰中加热，直至菌液完全干燥。
此步骤的主要目的是固定菌液，使其不易脱落。
2.2 革兰碘液染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入足量的革兰碘液，浸泡5-10分钟。
革兰碘液的作用是增强染色效果，使细菌细胞壁紧密结合革兰紫染料。
2.3 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
这一步是为了去除多余的碘液。
2.4 乙醇洗涤将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的95%乙醇，浸泡20-30秒。
乙醇的作用是洗去革兰紫颜料。
2.5 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
这一步是为了去除多余的乙醇。
2.6 碱性紫染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的碱性紫，浸泡30-60秒。
碱性紫的作用是染色细菌细胞。
2.7 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
2.8 水分干燥将玻璃片放置在架子上晾干或用纸巾轻轻吹干。
确保玻璃片完全干燥后，即可进行观察和分析。
三、结果观察和分析革兰氏染色后，观察玻璃片上的细菌染色情况。
革兰阳性菌一般呈紫色或深紫色，革兰阴性菌一般呈粉红色。
通过观察颜色的不同，可以初步判断细菌的分类，并进一步进行鉴定和分析。
需要注意的是，革兰氏染色技术在细菌鉴定中是一种初步的判断方法，对于一些特殊的细菌，染色结果可能会有一定的误差。
细菌革兰氏染色法标准流程
细菌革兰氏染色法标准流程细菌革兰氏染色法是一种常用的鉴别染色法，它能够将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。
下面是细菌革兰氏染色法的标准流程：
1.涂片固定：将细菌培养物均匀涂布在玻璃片上，并使其干燥。
2.火焰固定：用火焰将涂片上的细菌固定在玻璃片上。
3.草酸铵结晶紫染液染色：将涂片放入草酸铵结晶紫染液中，染1分钟。
4.水洗：用自来水冲洗涂片，洗去未结合的染液。
5.碘液媒染：将涂片放入碘液中，媒染1分钟。
6.水洗：用自来水冲洗涂片，洗去未结合的碘液。
7.脱色：将涂片放入95%酒精中，脱色20秒。
8.水洗：用自来水冲洗涂片，洗去未结合的酒精。
9.蕃红染色液复染：将涂片放入蕃红染色液中，复染2分钟。
10.水洗：用自来水冲洗涂片，洗去未结合的蕃红染色液。
11.干燥：将涂片干燥，以便于显微镜观察。
12.显微镜观察：将涂片放在显微镜下观察，根据细菌的革兰氏染色结果进行分
类鉴定。
需要注意的是，在进行革兰氏染色时，应按照规定的步骤进行操作，每一步的操作时间和温度也需要严格控制。
此外，为了提高革兰氏染色的准确性和可靠性，需要使用新鲜的染液和媒染液，并在使用前进行过滤处理。
同时，对于不同的细菌种类和不同的实验目的，可能需要调整染色时间和媒染时间等参数。
总之，细菌革兰氏染色法是一种重要的细菌鉴别方法，它能够将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，对于细菌的分类、鉴定和治疗具有重要的意义。
在进行革兰氏染色时，需要按照规定的流程进行操作，并注意控制实验条件和提高实验技巧，以提高革兰氏染色的准确性和可靠性。
革兰氏染色试验步骤
革兰氏染色试验步骤所需试剂和设备：1.菲尔水2.结晶紫3. Lugol液4.酒精5.活菌片6.显微镜7.显微制片玻片8.火焰消毒器实验步骤：1.取一枚无菌的显微制片玻片，并用菲尔水清洗干净，以保证玻片无污染。
2.取一滴无菌的水滴在玻片上，将一枚均匀悬浮的细菌样品加入水滴中。
细菌样品可以是培养物中的细菌液体培养物，也可以是细菌单克隆的菌落。
3.用火焰消毒器将显微镜取出并消毒。
将显微镜调整为100倍放大倍数，并将显微镜使用菲尔水沾湿。
4.用火焰消毒器将显微镜片摆放在火焰上加热，待其冷却后再用纸巾擦拭干净。
确保显微镜片无污染。
5.用取有活菌片的设备，在细菌悬液上取片，使细菌均匀分布于显微片的表面上。
待片上的细菌液体干燥后，将片置于火焰中加热数秒，以固定细菌在片上。
6.将固定后的细菌片依次按如下顺序进行染色:用菲尔水冲洗干净玻片上的细菌，倒入1-2滴的结晶紫液，静置1分钟。
7.用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下结晶紫。
8. 倒入1-2滴的Lugol液，静置1分钟。
9. 用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下Lugol液。
10.迅速地将细菌片倒入酒精中，进行脱色。
脱色的时间应控制在10-20秒之间，直到从细菌片上冲洗下少量酒精。
11.用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下酒精。
12.将细菌片放在火焰上加热数秒，使其干燥。
13.将细菌片挂在显微镜上，通过100倍的放大倍数观察细菌的形态和染色性质。
在革兰氏染色中，革兰氏阳性细菌呈紫色或紫黑色，而革兰氏阴性细菌呈红色或粉红色。
观察细菌形态和染色性质可以帮助确定细菌的分类。
1.归纳革兰氏染色法操作步骤、注意事项和实验结果
1.归纳革兰氏染色法操作步骤、注意事项和实验结果下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor.I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!详解革兰氏染色法：步骤、注意事项与实验结果分析革兰氏染色法，是微生物学中一种经典的细菌分类方法，通过染色可以将细菌大致分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。
革兰氏染色的操作流程及操作技术要点
革兰氏染色的操作流程及操作技术要点下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor.I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!革兰氏染色法的操作流程与技术要点革兰氏染色法，是细菌学中一种经典的鉴别染色方法，通过这种染色技术，我们可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤
革兰氏染色法的步骤包含涂片、干燥、固定、初染、水洗、媒染、水洗、脱色、复染、水洗、干燥观察共11步，应注意把握涂片的薄厚、加热温度，脱色时间及各染液质量。
1.涂片：在灭菌后的载玻片中央滴一滴待检样品，用烧红冷却后的接种环将液体铺匀。
2.干燥：载玻片置于酒精灯上加热至水分蒸发。
3.固定：载玻片在酒精灯火焰上快速过2至3次，用2至3秒后待冷却。
4.初染：滴加1至2滴草酸氨结晶紫染液，染色时间约一分钟。
5.水洗：用小水流冲洗载玻片，冲洗至水呈无色。
6.媒染：滴适量革兰氏染液，染色时间约一分钟。
7.水洗：同步骤5。
8.脱色：在载玻片上滴加95％乙醇，至流下乙醇不呈紫色，大约用时半分钟后水洗。
9.复染：滴加1至2滴沙黄染液，染色时间约一分钟。
10.水洗：同步骤5。
11.干燥、观察：待标本片干燥后观察，紫色为革兰氏阳性菌，红色为革兰氏阴性菌。
革兰氏染色实验报告
革兰氏染色实验报告实验目的，通过革兰氏染色实验，观察和比较革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在染色后的显微镜下的形态特征，从而对细菌进行初步鉴定。
实验材料和方法：1. 实验材料，革兰染色试剂（碘液、靛洋红、洗涤液）、玻璃片、无菌吸管、显微镜、革兰氏阳性菌培养液、革兰氏阴性菌培养液。
2. 实验步骤：（1）取一张无菌玻璃片，用无菌吸管分别取革兰氏阳性菌培养液和革兰氏阴性菌培养液滴于玻璃片上。
（2）将玻璃片放在火焰上加热，使细菌液均匀分布在玻璃片上。
（3）用吸管滴加碘液，静置1分钟后倾倒干净。
（4）用吸管滴加靛洋红，静置1分钟后用水冲洗干净。
（5）将玻璃片挂在显微镜载玻片上，用100倍镜观察。
实验结果：在显微镜下观察，革兰氏阳性菌呈紫色或蓝紫色，球菌呈葡萄簇状，链球菌呈链状排列；革兰氏阴性菌呈红色或粉红色，杆菌呈杆状或弯曲状排列。
实验结论：通过本次实验，我们成功地进行了革兰氏染色，观察到了革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在染色后的形态特征。
革兰氏染色是一种简单而有效的细菌初步鉴定方法，对于临床医学和微生物学研究具有重要意义。
实验注意事项：1. 实验过程中要保持玻璃片的无菌状态，避免外界污染。
2. 染色试剂的使用要按照规定比例和顺序进行，避免试剂浓度不足或过高影响染色效果。
3. 在观察细菌形态时，要注意调节显微镜的焦距和光线，以获得清晰的观察效果。
4. 实验结束后，要及时清洗实验器材，保持实验台面的清洁。
总结：革兰氏染色实验是微生物学实验中常用的一种方法，通过本次实验的学习和实践，我们对革兰氏染色的原理和步骤有了更深入的理解，并且掌握了正确的操作技巧。
革兰氏染色在细菌鉴定和临床诊断中具有重要的应用价值，希望通过今后的学习和实验，能够进一步提高自己的实验操作能力和科研水平。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
革兰氏染色
欧阳光明（2021.03.07）
一．实验流程：
1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。
涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。
2、涂片：
液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。
3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。
4、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。
5、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。
6、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。
简单染色结束可观察细胞形态。
7、媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。
8、脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液
无紫色，立即水洗。
9、复染：滴加蕃红复染3-5min，水洗。
至此，革兰氏染色结束。
二．染色结果：革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。
备注：
1.革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌。
2.革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。