培养基的配制与接种培养
培养基的配制
培养基的配制：由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应＞3000瓶，每瓶灌装5ml，每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基：乳糖＝5ml:1g 在百级下用规格为50ml的无菌针管分装8.2.1调整分装机步数，使分装装量为1.0g，分装于灭菌后的管制瓶中。
8.2.2在无菌分装室百级层流罩下，把准备好的无菌培养基用无菌注射器（规格为5ml）分装到各管制瓶中，每瓶分装5ml，然后加塞，轧盖。
8.2.3阴性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支装有培养基的管制瓶与试验样品同条件培养一起培养，作为阴性对照。
8.2.4阳性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支分装有培养基的管制瓶，其中5支接种浓度<100cfu/ml的枯草芽孢杆菌液，另5支接种浓度<100cfu/ml 的白色念珠菌液，作为阳性对照。
培养基的配制：由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应＞3000瓶，每瓶灌装5ml，每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基：乳糖＝5ml:1g 在百级下用规格为50ml的无菌针管分装8.2.1调整分装机步数，使分装装量为1.0g，分装于灭菌后的管制瓶中。
8.2.2在无菌分装室百级层流罩下，把准备好的无菌培养基用无菌注射器（规格为5ml）分装到各管制瓶中，每瓶分装5ml，然后加塞，轧盖。
8.2.3阴性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支装有培养基的管制瓶与试验样品同条件培养一起培养，作为阴性对照。
8.2.4阳性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支分装有培养基的管制瓶，其中5支接种浓度<100cfu/ml的枯草芽孢杆菌液，另5支接种浓度<100cfu/ml 的白色念珠菌液，作为阳性对照。
培养基的配制：由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应＞3000瓶，每瓶灌装5ml，每批至少配制18L-19L培养基)。
大肠杆菌培养
大肠杆菌培养引言大肠杆菌（Escherichia coli）是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阴性细菌。
它是一种常见的微生物实验室模型生物，在分子生物学研究、基因工程、生物技术等领域发挥着重要作用。
本文将介绍大肠杆菌的培养方法，包括培养基的配制、接种方法、培养条件的控制等。
培养基配制大肠杆菌培养基的配制是培养大肠杆菌的重要前提，不同的菌株和研究目的需要使用不同的培养基。
下面介绍两种常用的培养基配方：Luria-Bertani（LB）培养基LB培养基是最常用的大肠杆菌培养基之一，它是一种富含营养物质的培养基，适用于一般的大肠杆菌培养。
配方：•水：800 ml•Bacto-tryptone：10 g•Yeast extract：5 g•NaCl：10 g•琼脂：15 g将上述成分加入水中，搅拌均匀，然后加热至溶解，最后将pH调节至7.0 ± 0.2。
M9盐基培养基M9盐基培养基是一种缺乏有机碳源和氮源的无营养培养基，适用于研究大肠杆菌的生理特性或用于表达外源蛋白。
配方：•水：700 ml•Na2HPO4：12.8 g•KH2PO4：3 g•NH4Cl：1 g•NaCl：0.5 g•CaCl2：0.1 g•MgSO4：0.2 g•葡萄糖：2 g•琼脂：15 g将上述成分加入水中，搅拌均匀，然后加热至溶解，最后将pH调节至7.0 ± 0.2。
接种方法大肠杆菌的接种方法有多种，常见的有无菌接种环和无菌注射器接种法。
下面分别介绍这两种接种方法：无菌接种环接种法步骤：1.用火焰将无菌接种环烧红，冷却至适宜温度。
2.打开培养基瓶盖，用无菌接种环蘸取待接种的大肠杆菌菌株。
3.快速将无菌接种环插入含有培养基的琼脂平板（或试管）中，并迅速转动接种环1-2圈，使菌体均匀分布在琼脂平板（或液体培养基）表面。
4.关闭琼脂平板（或试管）盖子，使琼脂凝固后，将琼脂平板（或试管）置于适宜的培养条件下。
无菌注射器接种法步骤：1.用火焰将无菌注射器的针头烧红，冷却至适宜温度。
微生物常用培养基配制方法
微生物常用培养基配制方法常用培养基的配制方法可以根据其成分的类型来进行分类。
以下是一些常见的微生物常用培养基的配制方法。
1.琼脂培养基琼脂培养基是一种含有琼脂作为凝胶剂的液体培养基。
其配制方法如下：1）称取所需的琼脂粉量，加入适量的蒸馏水并充分搅拌溶解。
2）将溶解好的琼脂液装入培养瓶中，用胶栓封口，与蒸馏水瓶一同放入高压蒸汽灭菌器中进行高压蒸汽灭菌，通常是121℃，压力为1.05kg/cm²，蒸汽灭菌时间不低于20分钟。
3）取出蒸汽灭菌后的琼脂液，冷却至温度不会杀死微生物，快速倒入培养皿中。
4）待琼脂凝固成凝胶后，可以用于菌株接种。
2.液体培养基液体培养基是由各种有机和无机物质组成的溶液，可以用于微生物的培养和增殖。
液体培养基的配制方法如下：1）称取所需的各种营养成分如氨基酸、矿质盐等，分别加入适量的蒸馏水中。
2）将搅拌棒或磁力搅拌器放入培养瓶中，加热至微生物能够生长的温度。
3）将配制好的营养液煮沸2-3分钟，以杀死其中的微生物，同时带入一些空气中的微生物。
4）冷却至微生物能够生长的温度，迅速校准pH值。
5）将培养液分装入无菌试管或瓶中，用胶帽封口。
6）将分装好的培养液放入高压蒸汽灭菌器中进行高压蒸汽灭菌，通常是121℃，压力为1.05kg/cm²，蒸汽灭菌时间不低于20分钟。
7）取出蒸汽灭菌后的液体培养基，可以用于菌株接种。
3.固体培养基固体培养基是通过在液体培养基中添加琼脂来使其凝固。
配制方法如下：1）首先按照液体培养基的配制方法制备好液体培养基。
2）在液体培养基凝固之前，将琼脂粉加入培养基中并均匀搅拌溶解。
3）将溶解好的琼脂培养基充分混合，并倒入无菌培养皿中。
4）待琼脂凝固成凝胶后，可以用于菌株接种。
这里只列举了常见的琼脂、液体和固体培养基的配制方法，实际上在微生物研究中还有许多其他类型的培养基，如选择性培养基、富集培养基和不同用途的专用培养基等。
每种培养基的配制方法都有所不同，需要根据具体的要求和目的进行调整和改进。
培养基的配制实验报告
培养基的配制实验报告说到培养基的配制，哎呀，这可是个有趣又重要的过程，特别是对于那些喜欢搞生物的小伙伴们。
想象一下，你的实验室里弥漫着一股淡淡的营养液的香气，真是让人感到兴奋。
培养基就像是小细胞们的豪华餐厅，给它们提供了成长所需的一切。
你说，这多重要啊！配制培养基就像做饭，有时候得讲究些“火候”，要让这些小家伙们吃得舒舒服服，才能茁壮成长。
好吧，我们得准备好一切材料。
无论是琼脂、氨基酸，还是各种微量元素，都要准备齐全。
这个过程啊，别小看，搞不好就像挑剔的客人，要求特别高。
如果你遗漏了某种成分，那可就麻烦了。
就像做菜，盐放少了，味道就不好。
我们得把这些成分一一称量，准确得让人心惊肉跳。
有时候觉得自己简直像个化学天才，手里拿着天平，心里默念：“这次一定要完美！”接下来就是混合了，哇，那个感觉，真是像在调制一杯美味的鸡尾酒。
把琼脂粉倒入水中，搅拌的时候，小心翼翼，生怕飞溅到四周。
这个过程可不能急，得慢慢来，像是在呵护你的宝宝。
水和琼脂混合后，你会发现，它们渐渐融合成了一种神奇的液体，仿佛在对你眨眼。
然后加热！注意了，要让它们彻底溶解，不然等会儿冷却了，就成了一块块“石头”，那就真得哭了。
我们得加点“调味品”，比如说，营养盐。
这个时候，别小看这些微量元素哦，它们就像是料理中的香料，让整个培养基的“味道”更加丰富。
加的过程就像是在给你的作品增添光彩，心里想着：“今天的配方一定要让小细胞们满意！”搅拌均匀之后，闻一闻，嗯，感觉就是不一样，简直想把它喝下去。
一切都准备好之后，我们得进行灭菌，这可是个关键步骤。
把混合好的培养基放进高压锅里，那一刻，你简直能感受到自己是个顶尖科学家。
高温高压的环境就像是给细胞们制造了一个“温室”，确保它们能在最干净的环境下成长。
过了几分钟，听着高压锅“嘭嘭”的声音，心里满是期待，想知道它们会变得多么茁壮。
等到冷却了，终于可以倒入培养皿，嘿嘿，那种感觉简直太棒了，像是在给小细胞们铺床。
实验 LB培养基制备及大肠杆菌的接种
划线分离具体步骤：
1. 取菌种前灼烧接种环，消灭接种环上的微生物，冷却；
2. 用接种针挑取单菌落，迅速送入培养皿内，培养基的一边 划Z线。划线时，接种针应与平板表面成30°角左右。不 要使接种针碰到培养皿边缘，也不要将培养基划破；
3. 灼烧接种环，待接种环冷却后，转动培养皿约70°角，用 烧过冷却的接种针，通过第1次划线部分作第2次划线；
LB培养基的配方如下： 酵母提取物：5 g 蛋白胨： 10 g NaCl： 10 g 琼脂： 15～20 g 水： 1000 mL pH 7.0
四、实验方法
平板划线分离法 细菌的接种方法有很多种，如划线法、涂布法、倾注法、
斜面接种法、液体培养基接种法、螺旋接种法等。 平板划线分离接种环冷却后，用同样方法，通过第二次 划线部分作第三次划线和通过第三次划线部分作第四次划 线；
5. 划线完毕后，盖上皿盖，以封口条将培养皿封好，标注日 期；
6. 灼烧接种环； 7. 培养皿倒置于恒温箱培养。
灼烧接种环 灼烧接种环 灼烧接种环 灼烧接种环 灼烧接种环
五区 四区
冷却
培养基灭菌
五、实验步骤
LB液体培养基、LB固体培养基、培养皿高压灭 菌。
制作平板 扩大培养 划线分离
菌种保存
超净工作台中，将灭菌后冷却到60℃左右的LB 固体培养基倒入灭菌培养皿中，敞盖冷却，备 用。
将大肠杆菌接种到LB液体培养基中，于37℃摇 床中震荡培养12h。
以接种环取震荡培养后的菌液，在固体培养基 上划线，封口。培养皿倒置与37℃的恒温培养 箱中培养12~24h，观察划线末端的菌落生长情 况；用接种环挑取单菌落，用划线法接种于斜 面上，在37℃的恒温培养箱中培养24h。
细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
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c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
培养基配制
茎尖培养可看作是这方面较为特殊的一种方式。它采用极其幼嫩的顶芽的茎 尖分生组织作为外植体进行接种。在实际操作中，采用包括茎尖分生组织在内 的一些组织来培养，这样便保证了操作方便以及容易成活。 用靠培养定芽得到的培养物一般是茎节较长，有直立向上的茎梢，扩繁时主要 用切割茎段法，如香石竹、矮牵牛、菊花等。但特殊情况下也会生出不定芽，形 成芽丛。 2）不定芽的发育 在培养中由外植体产生不定芽，通常首先要经脱分化过程，形成愈伤组织的细 胞。然后，经再分化，即由这些分生组织形成器官原基，它在构成器官的纵轴 上表现出单向的极性（这与胚状体不同）。多数情况下它形成芽，后形成根。 另一种方式是从器官中直接产生不定芽，有些植物具有从各个器官上长出不 定芽的能力如矮牵牛、福禄考、悬钩子等。当在试管培养的条件下，培养基中 提供了营养，特别是提供了连续不断植物激素的供应，使植物形成不定芽的能 力被大大地激发起来。许多种类的外植体表面几乎全部为不定芽所覆盖。在许 多常规方法中不能无性繁殖的种类，在试管条件下却能较容易地产生不定芽 而再生，如柏科，松科，银杏等一些植物。许多单子叶植物储藏器官能强烈地 发生不定芽，用百合鳞片的切块就可大量形成不定鳞茎。 在不定芽培养时，也常用诱导或分化培养基。用靠培养不定芽得到的培养物， 一般采用芽丛进行繁殖，如非洲菊、草莓等。
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（4）配制MS铁盐母液
一般配制成100倍MS铁盐母液。 依次称取 EDTA二钠 3.73g FeSO4·7H2O 2.78g
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐 母液，共8种母液。 激素母液的配制 各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用
(完整版)大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。
二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠 10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。
2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。
如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。
3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。
所有锥形瓶如上述操作。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。
5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。
液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。
将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。
6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。
四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。
2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。
培养基的制备与细菌的接种的实验报告
培养基的制备与细菌的接种的实验报告篇一：细菌的分离纯化和接种实验环工综合实验细菌的分离纯化和接种实验实验报告环境科学与工程学院实验中心篇二：微生物实验报告细菌微生物实验报告题目年级专业实验者学号小组成员指导老师一、实验目的脓汁和粪便标本中病原菌的检测 2021级临床医学八年制1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。
2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。
3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。
4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。
5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。
6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。
7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。
二、实验器材1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯三、实验方法与步骤1.培养基的制备称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→ 用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌2.空气与人体体表细菌学检查2.1空气的细菌学检查每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告培养基的配制与灭菌实验报告引言：细菌培养是微生物学实验中常见的一项技术，而培养基的配制和灭菌则是细菌培养的基础。
本实验旨在探究培养基的配制方法和灭菌技术对细菌培养的影响，为后续的微生物实验打下坚实的基础。
一、培养基的配制培养基是细菌生长和繁殖所需的营养物质，其配制需要考虑细菌的营养需求和生长环境。
本实验选取了常用的液体培养基和固体培养基进行配制。
1. 液体培养基的配制液体培养基的配制相对简单，主要包括基础成分和营养物质的添加。
首先，按照配方中的要求称取所需的基础成分，如蛋白胨、肉汤等。
然后，将基础成分溶解在适量的蒸馏水中，加热至沸腾，搅拌均匀。
待溶液冷却至室温后，再添加适量的营养物质，如葡萄糖、氨基酸等。
最后，用蒸馏水将溶液稀释至所需的体积，调节pH值至适宜范围。
2. 固体培养基的配制固体培养基的配制相对复杂，需要考虑到培养基的凝固和固化。
首先，按照液体培养基的配制方法，将基础成分和营养物质溶解在蒸馏水中。
然后，将溶液加热至沸腾，搅拌均匀。
接着，将溶液倒入试管或培养皿中，待溶液冷却至40-50℃时，添加适量的琼脂或琼脂糖，充分搅拌均匀。
最后，将试管或培养皿密封，放置于室温下，待培养基凝固后，进行灭菌处理。
二、灭菌实验灭菌是为了避免培养基受到外界细菌污染，保证实验的准确性和可靠性。
常用的灭菌方法包括高温灭菌、滤过灭菌和化学灭菌。
1. 高温灭菌高温灭菌是最常见的灭菌方法之一，通过加热培养基使其中的细菌被杀灭。
将配制好的培养基装入培养瓶中，盖上瓶盖，放入高压锅或高温灭菌器中。
加热至121℃，保持15-20分钟，使培养基充分灭菌。
待培养基冷却后，即可进行细菌接种。
2. 滤过灭菌滤过灭菌是一种物理灭菌方法，通过滤器将培养基中的细菌过滤掉。
将配制好的培养基装入滤器中，选择合适的孔径和材质的滤膜。
然后，将滤器连接到真空泵或压力泵上，启动泵进行过滤。
待培养基完全通过滤器后，即可得到无菌的培养基。
培养基制作实训报告总结
一、实训目的通过本次培养基制作实训，使学生掌握培养基的配制、灭菌、接种、培养等基本操作技能，提高学生对微生物实验操作的熟练程度，培养学生的实验操作规范和科学思维。
二、实训内容1. 培养基的配制（1）原料的选择与称量：根据培养基配方，选择合适的原料，使用电子天平准确称量。
（2）混合溶解：将称量好的原料放入烧杯或其他容器中，加入适量的水，加热溶解，不断搅拌。
（3）调整pH值：用pH试纸或pH计测定培养基的pH值，用NaOH或HCl溶液调节至所需范围。
（4）加指示剂：对某些培养基，按要求加入一定量的指示剂。
2. 培养基的灭菌（1）高压蒸汽灭菌：将培养基分装于试管或三角瓶内，塞好棉塞，用牛皮纸包扎好，放入高压蒸汽灭菌锅中，121-126℃灭菌30分钟。
（2）干热灭菌：将培养基放入干燥箱中，160℃灭菌2小时。
3. 培养基的接种与培养（1）接种：用无菌接种环或接种针，将菌株接种到培养基上。
（2）培养：将接种好的培养基放入恒温培养箱中，根据菌株生长条件进行培养。
三、实训结果与分析1. 培养基的配制通过本次实训，我们掌握了培养基的配制方法，包括原料的选择、称量、混合溶解、调整pH值等步骤。
在操作过程中，我们注意了无菌操作，确保了培养基的质量。
2. 培养基的灭菌在灭菌过程中，我们使用了高压蒸汽灭菌和干热灭菌两种方法。
高压蒸汽灭菌效果较好，能够有效杀灭培养基中的细菌、芽胞等微生物。
干热灭菌适用于不耐高温的培养基。
3. 培养基的接种与培养在接种过程中，我们注意了无菌操作，防止了污染。
在培养过程中，根据菌株的生长条件，我们成功培养出了所需的微生物。
四、实训体会与收获1. 通过本次实训，我们掌握了培养基的配制、灭菌、接种、培养等基本操作技能，提高了实验操作规范和科学思维能力。
2. 实训过程中，我们学会了如何根据实验目的选择合适的培养基，以及如何调整培养基的配方。
3. 在操作过程中，我们注意了无菌操作，防止了污染，保证了实验结果的准确性。
培养基的配制实验报告
一、实验目的1. 掌握培养基配制的基本原理和操作方法。
2. 熟悉培养基的灭菌技术，确保培养基的无菌状态。
3. 学习不同类型培养基的配制，了解其在微生物培养中的应用。
二、实验原理培养基是微生物生长繁殖和代谢所需的营养物质混合物。
根据微生物的种类和实验目的，培养基可分为基础培养基、选择性培养基和鉴别培养基等。
本实验以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例，介绍培养基的配制过程。
三、实验材料与仪器材料：1. 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、蒸馏水、pH试纸等。
2. 微生物接种工具：接种环、接种针等。
仪器：1. 电子天平、烧杯、量筒、玻璃棒、三角瓶、高压蒸汽灭菌锅、无菌操作台等。
四、实验步骤1. 称量：按照配方比例，准确称取牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、NaCl 5.0g，放入烧杯中。
2. 溶解：加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌，使固体物质充分溶解。
3. 调整pH值：使用pH试纸检测溶液pH值，若pH值不在6.5-7.5之间，需用1mol/L的NaOH或HCl溶液进行调整。
4. 定容：将溶液转移到1000ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
5. 灭菌：将定容后的培养基倒入三角瓶中，用封口膜密封，放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌20分钟。
6. 冷却：灭菌后，将培养基取出，待其自然冷却至室温。
7. 倒平板：将冷却至室温的培养基倒入平板模具中，均匀铺展，待凝固后，即可用于微生物培养。
五、实验结果与分析1. 成功配制了牛肉膏蛋白胨培养基，无杂菌污染。
2. 通过观察微生物的生长情况，验证了培养基的适宜性。
六、实验总结1. 培养基的配制是微生物实验的基础，掌握培养基的配制方法对于微生物实验的成功至关重要。
2. 在配制培养基的过程中，要严格按照操作步骤进行，确保培养基的无菌状态。
3. 本实验成功配制了牛肉膏蛋白胨培养基，为后续的微生物实验奠定了基础。
七、注意事项1. 在称量固体物质时，要准确称取，避免误差。
2. 在溶解固体物质时，要充分搅拌，确保溶解均匀。
培养基的配制及使用记录
培养基的配制及使用记录一、引言在微生物学实验过程中，培养基的配制及使用记录是非常重要的实验步骤之一、正确的培养基配制可以提供适宜的营养物质和环境条件，促进微生物的生长和繁殖。
本文将详细介绍培养基的配制和使用记录，以及注意事项和实验结果的记录。
二、培养基的配制1.根据实验需要选择合适的培养基配方。
常见的培养基有肉汤培养基、浓缩肉汤培养基、天然培养基、合成培养基等。
2.按照培养基配方准确称取所需的物质，如蛋白胨、葡萄糖、酵母粉等。
3.将物质加入蒸馏水中，并用玻璃棒搅拌均匀，直至溶解完全。
4.调整pH值。
使用pH计将溶液的pH值调整到所需范围内，通常为6.8-7.25.配制完毕的培养基通过高温高压灭菌器进行灭菌，保持高温高压一段时间。
6.灭菌后的培养基应待其冷却到室温后使用或储存，避免细菌的再度污染。
三、培养基的使用记录1.填写培养基使用记录表。
记录培养基的配制日期、配制者、培养基批号等信息。
2.记录每次使用的培养基的用量。
可通过称重器或容量杯进行测量，确保使用的培养基量能满足实验需要。
3.记录每次使用的细菌菌种名称和数量。
用标准测量容器或移液器进行测量和记录。
4.注意培养基的贮存条件。
培养基应存放在阴凉、干燥、无菌的环境中，避免阳光直射或高温暴晒。
四、注意事项1.在培养基的配制和使用过程中，要严格遵守无菌操作规范，防止微生物的污染。
2.注意培养基的保存时间，过期的培养基会导致细菌的生长受阻。
3.培养基使用完后应及时清洗容器并进行消毒处理，以防止细菌的残留和传播。
4.注意培养基的pH值和温度控制，过高或过低的pH值和温度会影响微生物的生长和繁殖。
五、实验结果的记录1.记录每次实验的细菌生长情况，包括菌落形态、菌液浑浊程度以及生长速度等。
2.对于培养基配制不当或实验操作失误导致的异常结果，要仔细记录并分析原因，以便调整实验方法和改进配制过程。
六、结论培养基的配制和使用记录是微生物学实验的重要步骤之一，正确的配制和使用可以提供适宜的环境条件促进微生物的生长和繁殖。
培养基配方及配制方法
培养基配方1 斜面菌种保存培养基1。
1PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)称取200g马铃薯，洗净去皮切碎,加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml,再加15g葡萄糖和15—20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定）,121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用. 1.2麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。
太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55～63℃(在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4～6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。
在糖化过程中，应每小时搅拌一次.取过滤后的清液,加1.8%琼脂，分装试管，每试管约5—10ml （视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用.2基菌落总数检测2。
1平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH,然后在121℃下灭菌15min,取出,稍微冷却后，带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液成分:胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0。
5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1。
5g，氯化钠5g,蒸馏水1000ml。
pH7.0制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸,调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。
3。
2 HE琼脂成分：胨：12g，牛肉膏3g,乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g,琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，0。
4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml,乙液20ml。
pH7.5制法:将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液,将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解,加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂,并与琼脂液合并，待冷却至50～55℃，倾注浇平板.注1：此培养基不能高温灭菌。
固体培养基的配制方法
固体培养基的配制方法1.准备培养基成分：-碳源：葡萄糖、果糖或琼脂等。
-氮源：氨基酸、蛋白胨或硝酸盐等。
-矿物质源：磷酸盐、硫酸盐或硫酸镁等。
-维生素：硫胺素、核黄素或生物素等。
2.配制培养基溶液：将固体培养基所需的成分逐一称量，并加入适量的蒸馏水中。
搅拌均匀直至完全溶解。
注意避免气泡的产生。
3.调节pH值：使用pH计测量培养基溶液的pH值，并根据需要进行调节。
通常，微生物培养的pH范围在6.5-7.5之间较为常见。
4.煮沸和灭菌：将配制好的培养基溶液倒入适当的容器中，如培养皿或试管。
接下来，将容器加盖，并使用自动压力灭菌锅进行煮沸处理。
5.添加琼脂：煮沸后的培养基溶液可添加琼脂作为凝固剂，以将其转变为固态。
通常，将琼脂加入培养基溶液时保持温度在50-60°C之间，并充分搅拌以确保均匀分散。
6.培养基保存：完成配制后，将固体培养基培养器皿密封好，并在室温下保存。
避免阳光直射和潮湿环境。
7.使用固体培养基：可以在固体培养基上直接接种微生物或细胞。
接种时，使用无菌的技术并避免对培养基表面造成污染。
稍微倾斜培养器皿，使培养基均匀覆盖。
需要注意的是，在无菌条件下进行固体培养基的配制和使用是非常重要的，以防止细菌、真菌或其他外源微生物的污染。
在配制固体培养基之前，所有容器、仪器和试剂都必须经过适当的清洁和消毒处理。
如果配制过程中发现任何异常如颜色变化、异味或异物，应立即停止使用。
同时，配制和接种过程中要确保使用洁净的技术和正确的操作步骤，以保证培养基的高质量和微生物或细胞的生长成功。
总结起来，固体培养基的配制方法包括准备培养基成分、配制培养基溶液、调节pH值、煮沸和灭菌、添加琼脂、培养基保存和使用固体培养基。
这些步骤能够在无菌条件下制备高质量的固体培养基，并为微生物或细胞的生长提供一个适宜的环境。
培养基的配制与灭菌技术
培养基的配制与灭菌技术⼀、培养基的配制与灭菌技术培养基是将微⽣物⽣长繁殖所需要的各种营养物质，⽤⼈⼯的⽅法配制⽽成的⽤于培养微⽣物的营养基质。
培养基种类很多，不同的微⽣物所需培养基不同。
就培养基中营养物质的来源可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。
按培养基特殊⽤途可分加富培养基，选择培养基、鉴别培养基。
按培养基制成后的物理状态可分为固体培养基，液体培养基和半固体培养基。
固体培养基是在液体培养基中加⼊1.5 %-2.0 %琼脂作凝固剂; 半固体培养基则加⼊0.5 %-0.8 %的琼脂。
⼀般培养基除含有⼤量⽔分外, 还含有碳素、氮素、⽆机盐类和维⽣素等。
此外, 由于徽⽣物⽣长繁殖必须在最适的酸碱度范围内, 才能表现出最⼤的⽣命活⼒, 因此应根据不同种类的徽⽣物. 将培养基调节到⼀定的pH值范围。
培养基配制后还必须进⾏灭菌, 灭菌是指杀死或消灭所有微⽣物, 包括营养体、孢⼦和芽孢。
灭菌的⽅法很多，可分为物理⽅法与化学⽅法两⼤类。
物理⽅法包括湿热灭菌、⼲热灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等; 化学⽅法主要是利⽤化学药品对接种室空间、⽤具和其它物体表⾯进⾏灭菌与消毒。
消毒⼀般是指消灭有害微⽣物的营养体和病原菌。
(⼀) 培养基的配制⽅法⼀般培养基的配制⽅法如下 (各种天然培养基的配制⽅法略有不同)：l. 按照配⽅的组分及⽤量先分别称量并配成液体；2. 根据要求调到⼀定的酸碱度(pH值)；3. 若要制成固体则加⼊2%琼脂并加热融化；4. 根据需要的数量分装⼊试管或三⾓瓶中, 加上棉塞或盖上纱布；5. 包扎好灭菌后备⽤。
配制斜⾯培养基的⼀般操作步骤为：称量→溶解→调pH值→加琼脂→过滤→分装→加棉塞→包扎→灭菌→摆斜⾯→⽆菌检查。
(图9-7)(⼆) 培养基及常⽤器⽫的灭菌培养微⽣物常⽤的玻璃器具主要有试管、三⾓瓶、培养⽫、吸管等, 在使⽤前必须先进⾏灭菌, 使容器中不含任何杂菌；培养微⽣物⽤的营养基质(培养基), 在接⼊纯种前也必须先⾏灭菌, 使培养基呈⽆菌状态。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告培养基的配制与灭菌实验报告引言：在微生物学研究中，培养基的配制和灭菌是非常重要的实验步骤。
培养基是供养菌落生长和繁殖所必需的营养物质的混合物，而灭菌则是为了杀灭培养基中可能存在的有害微生物，以保证实验结果的准确性和可靠性。
本实验旨在探究不同培养基的配制方法以及灭菌的效果，并提供一种简单可行的实验方案。
一、培养基的配制1. 培养基的种类在微生物学实验中，常用的培养基有固体培养基和液体培养基两种。
固体培养基主要用于菌落计数、分离纯种菌落以及观察微生物生长形态等实验，而液体培养基则适用于大规模培养、生物化学分析等实验。
2. 培养基的配方培养基的配方根据不同微生物的需求而定，常见的培养基配方包括营养物、水和琼脂。
营养物可以是有机物如蛋白胨、肉汤，也可以是无机盐如硝酸钠、磷酸氢二钾等。
水的选择要注意纯净度，最好使用经过蒸馏或纯化的水。
琼脂是一种提供凝胶状基质的物质，常用于制备固体培养基。
3. 培养基的制备步骤（1）称取所需的营养物和琼脂，按照一定比例加入适量的水中。
（2）将容器密封，并在高压蒸汽灭菌器中进行高温高压灭菌，以杀灭培养基中的有害微生物。
（3）取出灭菌后的培养基，待其冷却至适宜生长温度后，即可使用。
二、灭菌实验1. 灭菌的重要性灭菌是为了消除培养基中的有害微生物，以保证实验结果的准确性和可靠性。
如果培养基未经灭菌处理，其中可能存在的细菌、真菌等微生物会与待测微生物相互干扰，导致实验结果的偏差。
2. 灭菌方法（1）高温高压灭菌：将培养基密封于容器中，放入高压蒸汽灭菌器中进行高温高压处理。
高温高压可以有效杀灭细菌、真菌等微生物。
（2）化学灭菌：使用化学消毒剂如酒精、过氧化氢等进行灭菌处理。
这种方法适用于一些耐热菌种，但需要注意化学消毒剂的浓度和作用时间，以避免对待测微生物产生不良影响。
3. 灭菌效果的验证为了验证灭菌效果，可以将灭菌后的培养基分别接种于无菌平板上，并进行培养观察。
培养基配制
一、培养基配制1.培养基是指人工配制的、含有六大营养要素（C 、H 、O 、N 、S 、P ）、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。
2.设计培养基的原则和方法： （1）原则： ①目的明确②营养协调：C/N 比是培养基设计中重要的原则，主要是指微生物培养基中所含的碳源中碳原子摩尔数与氮源中的氮原子摩尔数之比。
③理化适宜：指培养基中的pH 、渗透压、水活度、氧化还原电势 pH ：pH 的内源调节：借磷酸缓冲液进行调节，例 K 2HPO 4和KH 2PO 4借CaCO 3作为“备用碱”进行调节pH 的外源调节：按照实际需要不断从外界流加酸或碱液 水活度：各种微生物生长的水活度a w 值在0.998-0.60之间氧化还原电势：一般好氧菌生长的E h 在+0.3~+0.4V ，兼性厌氧菌在+0.1V 以上进行好氧呼吸产能，在+0.1V 以下进行发酵产能，而厌氧菌只生长在+0.1V 以下的环境中。
为了培养严格厌氧菌，在培养基中加入适量还原剂，包括巯基乙酸、抗环血酸、硫化钠、半胱氨酸、铁屑、谷胱甘肽、瘦牛肉粒等。
还需要加入化学指示剂，例如刃天青，在无氧条件下无色，有氧条件下与pH 有关，中性呈紫色，碱性呈蓝色，酸性为红色。
④经济节约（2）方法：生态模拟、借鉴文献、精心设计、试验比较 3.培养基种类 根据培养基成分分为微生物 最低pH 最适pH 最高pH 细菌 2-5 6.5-7.5 8-11 酵母菌 2-3 3.8-6.0 7-8 霉菌1-24.0-5.87-8(1)合成培养基：合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。
这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。
如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。
(2)天然培养基：由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。
这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。
实验一配制MS及无菌苗的培养
实验一配制MS及无菌苗的培养一．实验目的学习培养基配制及与灭菌的操作方法二．实验方法（一）培养基配制配制培养基300ml（1/2班级人数）①用量筒量取500ml蒸馏水倒入烧杯中，用玻璃铅笔划好液位线，再将蒸馏水倒出一半。
②称琼脂2.4克倒入烧杯中，再称蔗糖60g备用。
③每组取50ml烧杯一只，用50ml量筒取大量元素30ml，分别用移液管吸取微量元素0.3ml，铁盐1.5ml，维生素B1 0.12ml，维生素B6 0.15ml，烟酸0.15ml，甘氨酸0.3ml，肌醇1.5ml 置于烧杯中备用（注意移液管不能混用）④将加入琼脂的烧杯放在石棉网的文火上煮沸，煮时常用玻璃棒搅动，待琼脂融化后加入蔗糖。
蔗糖溶解后将早已吸好的大量元素，微量元素，铁盐有机物的混合液倒入烧杯中，将装好混合液的烧杯用蒸馏水洗三次，倒入300ml烧杯中，加热片刻（注意不要煮沸），讲烧杯离火，加蒸馏水定容至液位线。
⑤用1M的NaOH或1M的HCL将PH调至5.8，调时应用玻璃棒不断搅拌，并用PH试纸测PH值。
⑥用玻璃漏斗将300ml培养基分注于15只三角瓶中，每瓶约20ml。
（分注培养基时不可将培养基倒在三角瓶内外壁上）⑦封好瓶⑧培养基的灭菌（略）待用（二）培养材料的灭菌与接种①接种前用肥皂洗手，特别是将手指洗干净，然后用沾70%的酒精棉球把手和指尖消毒一次②将大豆种子用70%的酒精浸泡灭菌5分钟，再用0.2%氯化汞浸泡灭菌10分钟，然后用灭菌水洗三次备用③把培养基放在接种台左侧，用70%酒精棉球把接种台擦一遍（清除尘粒）④将接种所用的大小镊子等沾以70%酒精，在酒精灯火焰上灼热灭菌，然后放在支架上，注意不可再行污染。
⑤去掉瓶塞，将三角瓶在火焰上方灼热灭菌（瓶口转动一圈），用镊子将灭菌后备用的大豆放入三角瓶内培养基上，每瓶接种3~5粒（注意大豆的种脐要贴在培养基上，不要放反了）⑥迅速盖上瓶塞，放于培养室内进行培养实验二原生质体融合一、实验目的本实验是学习和掌握利用酶解法，除去植物细胞壁，获得原生质体的方法。
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5、微生物的恒温培养
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二．含有盐分的液体漏出或溢出时，一定要及时 擦干净，沿着盖子的密封圈要彻底擦干，否则会 腐蚀容器和管道。 三．在打开盖子前，确认压力已归于“0/npa”以 下。 四．绝对不许擅自改造这个产品。 五．不要在爆炸性气体附近使用该仪器。
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无菌技术操作原则 （一）操作前准备
无菌操作前30分钟通风，停止清扫地面， 30分钟通风 1：无菌操作前30分钟通风，停止清扫地面，减少走 以降低室内空气中的尘埃，操作区要清洁、 动，以降低室内空气中的尘埃，操作区要清洁、 宽敞。 宽敞。 操作者应修剪指甲，洗手，必要时穿无菌衣、 2：操作者应修剪指甲，洗手，必要时穿无菌衣、戴 无菌手套。 无菌手套。 操作者进行无菌操作时须取下戒指、手表、 3：操作者进行无菌操作时须取下戒指、手表、手链 等手上的饰品
培养基的配制与纯种分离
09工业环保与安全技术 工业环保与安全技术
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原理:
1.单个微生物过小,一般采取菌落培养 法进行培养观察. 2.由于不同的微生物生长环境不同,种 群间有明显界限.一个菌落可认为是同 一菌种的集合.
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选择培养基
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2.灭菌与消毒
灭菌与消毒： 实验中所用于培养的培养基和接种等 用到的器具都需要进行灭菌，灭菌的方法 常用的有高压蒸汽灭菌和干热灭菌。 接种时，手需要用70%酒精消毒，接种 环或接种针需要灼烧灭菌。接种时，保持 在火焰周围（火焰周围5cm处）。 用于微生物培养与接种的区域需要用 紫外灯进行杀菌。
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烘干锅内物）
10.取物（若发现包装被破坏，则需重新灭菌） 11.放水
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一．不能使用此高压蒸汽灭菌器消毒任何有破坏性 材料和含碱金属成份的物质。消毒这些物品将会 导致爆炸或腐蚀内胆和内部管道，以及破坏垫圈。 危险物品清单： 1.爆炸物质 2.可燃性物质 3.氧化剂 4.易燃物质
最常见的就是用培养皿，培养基中加 入琼脂，倒成平板，可用来筛选、计 数、鉴别、菌种复壮等。 还有液体摇瓶培养，这个一般用于扩 大培养、发酵、产物提取等。 试管斜面，可用于菌种短期保存。
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培养条件
恒温生化培养箱 培养时间从几个小时到几天 特殊培养条件，如厌氧
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原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白 质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜 热存在。所以效果比同温度下干热好。 高压蒸汽灭菌法： 1、设备：高压灭菌锅 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。 3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用 于玻璃器皿的灭菌。 4、注意事项： 1）冷空气彻底go
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操作流程
1.检查灭菌锅（清除锅内杂物） 2.加水（加之刻度处，不能少也不需多） 3.放入待灭菌物（不能太拥挤，盖上锅盖是，对角线旋紧螺丝） 4.接通电源（插座电源和灭菌锅电源同时打开） 5.放气（排除空气，知道有持续蒸汽排出为止） 6.升压（关掉排气阀门，使压力指针升至1.05kg/cm2 ，121℃） 7.保持（控制电源开关或者设定程序保持在121℃，30min） 8.降压（关电源） 9.烘干（等压力降至0后，打开螺丝，让锅盖移出部分空隙，让蒸汽
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干热灭菌
干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。 1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等， 试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。 2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170 ℃ ）加热灭 菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白 质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝 固越快。 3、注意事项： 1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法； 2）温度控制在<180 ℃ ； 3）物品不能太挤； 4）温度降至70℃时才开箱门。
常见的，培养细菌用肉汤培养基，培 养放线菌用高氏一号培养基，培养真 菌用马丁氏培养基。
具体看培养的菌种和用途，去查阅相关资 料，比如一些实验指导教材、专门的著作 或手册等。各种培养基的配方、用量、适 合培养什么菌，都可以查得到的。
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培养 方法
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基本操作程序
培养基的配制 灭菌 倒平板
微生物接种 恒温箱中培养
培养基的配制 菌种保存
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操作内容
1.根据配方配制100ml牛肉膏蛋白胨培养基，溶解，调pH 值后，分装在三角瓶中，加塞包扎。 2.分装约50ml蒸馏水在三角瓶中，加塞包扎。 3.包装5个培养皿，待用。 4.将以上物品置于高压蒸汽灭菌锅内灭菌。121℃，20min。 5.检查桌面用品是否齐全。 6.等灭菌锅压力将为0后，打开灭菌锅。烘干培养皿，适当 6. 0 冷却培养基与无菌水。 7.在酒精灯火焰5cm内倒平板，待冷却后，倒置。 8.将土壤样品置于冷却后的无菌水中，摇匀。 9.在酒精灯火焰5cm内，用接种环划线分离菌株。 10.倒置培养于培养箱内。
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无菌技术操作原则
（三）无菌物品保管 三
1：无菌物品和非无菌物品应分别放置。 无菌物品和非无菌物品应分别放置。 无菌物品必须存放在无菌容器或无菌包内， 2：无菌物品必须存放在无菌容器或无菌包内，无菌包外要注 明物品的名称、灭菌日期，物品按先后顺序放置。 明物品的名称、灭菌日期，物品按先后顺序放置。 定期检查无菌物品保存情况，无菌包在未被污染的情况下， 3：定期检查无菌物品保存情况，无菌包在未被污染的情况下， 保存期一般以7天为宜，过期或包布受潮应重新灭菌。 保存期一般以7天为宜，过期或包布受潮应重新灭菌。
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无菌技术操作原则
（二）操作中保持无菌
1：工作人员应面向无菌区域，手臂保持在腰部水平以上，不 工作人员应面向无菌区域，手臂保持在腰部水平以上， 可跨越无菌区。操作时，不可面对无菌区讲话、咳嗽、 可跨越无菌区。操作时，不可面对无菌区讲话、咳嗽、打喷 嚏。 用无菌钳取无菌物品；无菌物品一经取出，即使未使用， 2：用无菌钳取无菌物品；无菌物品一经取出，即使未使用， 也不可放回无菌容器内；一套无菌物品，仅供一次使用， 也不可放回无菌容器内；一套无菌物品，仅供一次使用，防 止交叉感染。 止交叉感染。 无菌操作中，无菌物品疑有污染或已被污染，不可使用， 3：无菌操作中，无菌物品疑有污染或已被污染，不可使用， 应予更换或重新灭菌
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高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌法 可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，是灭菌 效果最好、应用最广的灭菌方法。方法是将需灭 菌的物品放在高压锅内，加热时蒸汽不外溢，高 压锅内温度随着蒸汽压的增加而升高。在 103.4kPa（1.05kg/cm2）蒸汽压下，温度达到 121.3℃，维持15～20分钟。适用于普通培养基、 生理盐水、手术器械、玻璃容器及注射器等物品 的灭菌。