最新色谱分析实验大纲说课讲解
色谱分析课程大纲
《色谱分析》课程教学大纲课程代码：080241006课程英文名称：Chromatograph Analysis课程总学时：32 讲课：20 实验：12 上机：0适用专业：环境工程大纲编写（修订）时间：2017年6月一、大纲使用说明（一）课程的地位及教学目标色谱法是分析化学中发展最快、应用最广的一门技术。
作为一种多组分混合物的分离、分析强有力的工具，经过100余年的发展，尤其是近年来随着科学技术的突飞猛进，色谱分析从理论到技术也得到较快发展，超临界流体色谱、毛细管电泳、毛细管电色谱、微流控芯片等新型高效分离模式相继问世，极大地拓宽了其研究与应用领域。
目前，色谱法已经成为分析化学学科一个重要分支，在化学、化工、轻工、石油、环保和医药等几乎所有科学领域内得到广泛应用，为信息科学、生命科学、材料科学、环境科学等新兴学科的发展作出了重要贡献。
我国的色谱研究与应用始于20世纪50年代，经过几代人的努力，在理论研究与分析实践等方面皆取得了系列成果。
这些成就的取得，得益于人才的培养。
从半个世纪以前的色谱讲习班，到现在的几乎所有高校都开设“色谱分析”课程，一大批高水平色谱分析人才脱颖而出，为色谱学科的发展与壮大奠定了基础。
本课程的教学目的在于培养学生认识色谱分析方法，了解色谱分析的基本理论和技能，能够在实际工作中利用色谱分析技术。
（二）知识、能力及技能方面的基本要求理论联系实际，在掌握基本理论的基础上学习具体的色谱分析方法与技术。
（三）实施说明讲授色谱分析的基本原理及方法，满足应用型色谱学人才培养的需要。
推动色谱法的本科教学。
选配教材内容丰富，通俗易懂，理论联系实际，也对最新的仪器、技术、方法与应用作了浅显的介绍。
（四）对先修课的要求分析化学。
（五）对习题课、实践环节的要求学生要具有理论联系实际，利用所学基础知识分析问题，并具有实际动手操作能力。
（六）课程考核方式1．考核方式：考查。
2．考核目标：考核学生对色谱基本知识、基本原理和方法的掌握程度。
2024版年度气相色谱分析ppt课件
数据处理系统
对检测器输出的电信号进行处 理，得到色谱图及定量结果。
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进样系统与样品处理
2024/2/3
进样方式
01
包括手动进样和自动进样两种方式，手动进样操作简便，自动
进样可提高分析效率。
进样量控制
02
进样量的大小直接影响分离效果和定量准确性，需要根据实际
情况进行调整。
样品处理
03
对于复杂样品，需要进行前处理，如萃取、浓缩、衍生化等，
组分在两相间的分配 样品中的各组分在流动相和固定相之间不断进行吸附、解 吸、溶解、挥发等过程，由于各组分在两相间的分配系数 不同，从而实现分离。
分离效果的评价指标 评价气相色谱分离效果的主要指标有分离度、柱效和选择 性等。
9
检测器的工作原理
检测器的作用
检测器是将色谱柱分离后的组分浓度或质量转化为电信号进行测量的装置。
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03
CATALOGUE
气相色谱仪器与设备
2024/2/3
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气相色谱仪的组成
进样系统
负责将样品引入色谱柱，包括 进样口、进样针、隔垫等部件。
检测器
将分离后的组分转化为电信号， 以便记录和分析。
气路系统
包括载气、燃气、助燃气等气 路，以及流量控制、压力调节 等部件。
2024/2/3
色谱柱
用于分离样品中的各组分，是 气相色谱仪的核心部件。
4
气相色谱分析的重要性
应用领域广泛
包括环境监测、食品安全、石油化工、生物医药等多个领域。
高分离效能
能够分离复杂混合物中的痕量组分，提供高纯度的单一物质。
灵敏度高
对于低浓度组分也有很好的检测效果，适用于痕量分析。
《色谱分析》教学大纲
《色谱分析》教学大纲Chromatography课程编码：21A42089 学分：2 课程类别：专业任选课计划学时：32 其中讲课：32 实验或实践：0 上机：0适用专业：环境科学推荐教材：苏立强主编，《色谱分析法》,清华大学出版社, 2009年参考书目：1.于世林编著，《高效液相色谱方法及应用》,第二版,化学工业出版社, 2004年2.刘虎威编著，《气相色谱方法及应用》,第二版,化学工业出版社, 2004年3.陈义编著，《毛细管电泳技术及应用》,第二版,化学工业出版社, 2004年课程的教学目的与任务色谱分析是环境科学的主要专业课程。
通过本课程的系统学习，使学生对色谱分析法的基本原理与方法有系统全面的了解，初步具有应用此类方法解决相应问题的能力。
并使学生对当今世界各类色谱分析方法和联用技术及发展趋势有一些初步的了解，从而为其今后的工作及更深一步地学习作必要的铺垫。
课程的基本要求1．了解色谱分析在生活、生产实际及科研工作中的重要意义，掌握气相色谱法、高效液相色谱法、平面液相色谱法、超临界流体色谱法和毛细管电泳中利用仪器进行定性、定量分析的基本原理以及仪器各重要组成部分的基本操作。
2．掌握色谱分析测定中的干扰因素、误差来源及其消除的方法。
3．熟悉色谱分析方法的应用对象及基本的分析过程。
各章节授课内容、教学方法及学时分配建议（含课内实验）第一章概论建议学时：4[教学目的与要求] 掌握色谱法的分类、特点和局限性；色谱分析法中的色谱图和相关术语；色谱流出曲线的意义；熟悉色谱现代发展及相关联用技术。
[教学重点与难点] 色谱图和相关术语、色谱流出曲线的意义。
[授课方法] 以课堂讲授为主，课堂讨论和课下自学为辅。
[授课内容]第一节色谱分析法的历史第二节色谱法的分类一、按流动相和固定相的物态分类二、按分离原理分类三、按固定相使用的方式分类四、按色谱动力学过程分类五、按色谱技术分类第三节色谱分析法的特点和局限性第四节色谱图和相关术语第五节色谱现代发展及相关联用技术第六节有关色谱得中文工具书和国内外主要色谱期刊第二章基本理论建议学时：4[教学目的与要求] 掌握平衡理论、塔板理论和速率理论；分配系数、分配比和分离度的概念；塔板理论和速率理论的作用和不足。
药物色谱分析课程教学大纲
药物色谱分析课程教学大纲药物色谱分析课程教学大纲（理论课程）（理论课程）◆课程编号：171018 ◆课程英文名称：Chromatographic Analysis of Pharmaceu cals ◆课程类型：◆课程类型： • 通识通修通识通修 • 通识通选通识通选 • 学科必修学科必修 • 学科选修学科选修 • 跨学科选修选修• 专业核心专业核心 • 专业选修（学术研究）专业选修（学术研究） • 专业选修（就业创业）专业选修（就业创业）◆适用年级专业（学科类）：药学专业三年级：药学专业三年级◆先修课程：分析化学、仪器分析、药物化学◆先修课程：分析化学、仪器分析、药物化学◆总学分：2 ◆总学时：34 一、课程简介与教学目标一、课程简介与教学目标（一）课程简介（一）课程简介本课程是药学专业的一门专业课。
色谱分析是分析化学中发展最快、应用最广的分离分析技术。
本课程涉及的内容较广泛，本课程涉及的内容较广泛，其主要内容包括色谱学基本概念和理论，其主要内容包括色谱学基本概念和理论，其主要内容包括色谱学基本概念和理论，色谱仪器的基本原色谱仪器的基本原理和结构，各类色谱方法的分离机理和技术及其在药学中的应用。
色谱分析直接关系到药物研制、药物质量评价、药物生产过程监控、药物临床监控、药物临床实验、药物作用机理探讨等各阶段的工作；它在制订药物的质量标准、探求科学用药规律与安全、有效、合理用药、新药开发等方面具有重要作用。
新药开发等方面具有重要作用。
（二）教学目标（二）教学目标通过本课程的学习，使学生基本掌握色谱分析的基本理论，使学生基本掌握色谱分析的基本理论，常用的定性和定量分析方法，常用的定性和定量分析方法，常用的定性和定量分析方法，仪仪器的构造；器的构造；了解各种仪器分析方法的特点、适用范围、发展方向以及在药学中的应用，了解各种仪器分析方法的特点、适用范围、发展方向以及在药学中的应用，了解各种仪器分析方法的特点、适用范围、发展方向以及在药学中的应用，并初并初步具有应用此类方法解决相应问题的能力。
色谱分析实验教学大纲
《色谱分析》实验教学大纲大纲制定（修订）时间：2017年6月课程名称：《色谱分析》课程编码：080241006课程类别：专业课课程性质：必修适用专业：环境工程课程总学时：32学时实验（上机）计划学时：12学时开课单位：环境与化学工程学院一、大纲编写依据1.环境工程专业2017版教学计划；2.环境工程专业《色谱分析》理论教学大纲对实验环节的要求；3.近年来《色谱分析》实验教学经验。
二、实验课程地位及相关课程的联系色谱分析实验课程的建立有助于使学生加深对于理论课程的理解，是在色谱分析理论课基础上的综合实验能力训练，有助于对色谱分析课程的理解和掌握。
三、实验目的、性质和任务1、了解色谱分析中常用的气相色谱、高效液相色谱、平面液相色谱的理论和方法。
2、训练学生综合运用所学理论和实验技能理解实验方案，完成实验操作，分析实验结果的能力。
学生要学会使用气相色谱仪和高效液相色谱分析仪器。
四、实验基本要求“气相色谱仪原理及应用”通过学习气相色谱仪的构成和使用方法，及其在定性、定量分析中的应用，培养学生严谨的科学态度、细致的工作作风、实事求是的数据报告和良好的实验习惯（准备充分、操作规范，记录简明，台面整洁、实验有序，良好的环保和公德意识）。
培养培养学生的动手能力、理论联系实际的能力、统筹思维能力、创新能力、独立分析解决实际问题的能力、查阅手册资料并运用其数据资料的能力以及归纳总结的能力等。
“高效液相色谱原理及应用”学习高效液相色谱仪的构成和使用方法，及其在定性、定量分析中的应用。
“薄层色谱原理及应用”实验了解薄层色谱的基本原理和应用，掌握薄层色谱的操作技术。
五、实验内容和学时分配六、教材（讲义、指导书）《色谱分析实验指导书》，校内实验指导书。
七、考核方法和评分标准1.按照实验指导书的具体要求，根据每个学生实验前的预习准备，实验过程的考查，实验操作情况及实验报告的质量，综合给出实验成绩。
2.实验评分应包括三个方面：（1）实验预习回答提问占20%；（2）实验操作能力及实验纪律占40%；（3）实验报告占40%。
《色谱分析技术》课程教学大纲(本科)
《色谱分析技术》课程教学大纲英文名称：Chromatography Analysis Technology课程类型：专业课课程要求：必修学时/学分：64/4适用专业：工业分析技术一、课程性质与任务本课程是工业分析与检验专业的一门学科专业课。
是分析化学学科中的一个重要分支，是从事仪器分析相关工作必需的专业知识。
色谱分析法是利用不同性质的物质在互不相溶的两相中分配系数、吸附性能或其它作用不同而被分离，并进行成分、含量、结构等多方面的分析。
课程的任务是使学生了解、掌握各种色谱分析方法的基本理论，了解气相色谱仪和液相色谱仪的主要结构与工艺，培养学生对各种实际分析样品的分析能力和实验方案设计能力，正确应用相关知识解决实际问题。
二、课程与其他课程的联系该课程是在完成分析化学课程学习的基础上学习的一门课程，掌握色谱分析方法可以为走上工作岗位，胜任分析工作打基础。
三、课程教学目标1．学习色谱分析基础知识和基本理论知识；2．学习色谱分析原理，使学生理解色谱分析方法的应用；3．学习色谱分析仪器的使用，培养学生对理论知识的运用及动手操作能力；4．学习色谱分析的定性定量方法，培养学生对色谱分析结果进行分析的能力；5．学习色谱联用技术，使学生了解色谱联用的应用。
四、教学内容、基本要求与学时分配五、其他教学环节（课外教学环节、要求、目标）无。
六、教学方法本课程以课堂教学为主，结合作业及测验等教学手段和形式完成课程教学任务。
在课堂教学中，通过讲授、提问、练习等教学方法和手段让学生理解色谱的定义及原理，掌握色谱分析仪器的使用及定性定量方法。
七、考核方式最终成绩由平时作业成绩、平时测验成绩、期末成绩等组合而成。
各部分所占比例如下：平时出勤成绩：5分。
主要考核学生的出勤情况。
平时作业成绩：5分。
主要考核对课程知识点的复习、理解和掌握程度。
平时实验成绩：10分。
考核学生动手操作能力及对理论知识的运用能力。
期末考试成绩：80分。
主要考核色谱分析的概念，方法和仪器使用的知识的掌握程度。
色谱分析 教学大纲.doc
3、了解计算机技术在色谱分析中的应用
4、了解二纬色谱在样品分离中的应用
授课方法：教师指导下自学
实验部分：
1、气相色谱的基本操作及进样练习
2、掌握气相色谱操作条件的建立
3、掌握气相色谱灵敏度及测限的测定
4、校正归一法定量测定苯系物中各组分的含量建议学时4
5、气相色谱柱的制备建议学时4（选做）
授课方法：讲授
第五章：气相色谱的检测器建议学时：2
1、掌握气相色谱检测器的基本要求、分类和主要的性能指标及测定和计算方法
2、掌握气相色谱的主要检测器，如：TCD、FID、ECD、FPD等的基本结构、工作原理、特点、应用范围、操作条件及使用时的注意事项
授课方法：讲授
第六章：气相色谱填充柱建议学时：4
1、掌握色谱柱系统的基木概念
授课方法：讲授
1、掌握影响液相色谱柱效的主要因素及分离控制授课方法：讲授
第^一章：高效液相色谱的实验技术建议学时：4
1、掌握高效液相色谱中流动相的性质、选择及对分离过程的影响
2、了解梯度洗脱的应用
3、了解制备色谱及应用
4、了解衍生化技术在液相色谱中的应用
5、了解制备色谱及其应用授课方法：讲授结合自学
2、了解固体吸附剂的主要种类及应用
3、掌握固定液的基本要求、分类、特征常数及选择方法
4、掌握色谱载体的基本要求、分类及应用
5、掌握色谱柱的制备方法
6、掌握气相色谱最佳色谱条件的建立过程
授课方法：讲授
第七章：开管柱Biblioteka 相色谱的特点及种类建议学时：21、了解开管柱色谱的速率理论及影像柱效的因素
2、了解开管柱色谱的制备及色谱柱的评价
课程编号：020207
(2024年)分析化学课件9色谱法
在进样过程中，需要注意避免进样歧视现象的发生，以保证分析 结果的可靠性。
2024/3/26
22
样品保存和运输注意事项
样品保存条件
为了保证样品的稳定性和分析结 果的准确性，需要对样品进行妥 善保存，如避光、低温、密封等
。
样品运输注意事项
在样品运输过程中，需要注意防 震、防漏、防污染等问题，以确 保样品的完整性和分析结果的准
效果。
色谱柱选择
根据分析物的性质和分离需求 ，选择合适的色谱柱类型和规
格。
样品前处理
对样品进行适当的预处理，如 提取、净化等，以提高分析的
准确性和灵敏度。
仪器参数调整
优化检测器参数、进样量、流 速等仪器设置，提高分析的精
度和效率。
2024/3/26
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案例分析：提高分离效果或降低成本
2024/3/26
2024/3/26
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03
色谱法仪器设备及操作
2024/3/26
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常用色谱仪器介绍
气相色谱仪
凝胶色谱仪
由气路系统、进样系统、分离系统、 分离和分析。
由溶液储存器、泵、进样器、色谱柱 、检测器、记录仪组成，用于高聚物 的相对分子质量分级分析以及相对分 子质量分布测试。
液相色谱仪
由输液系统、进样系统、分离系统、 检测系统组成，适用于高沸点、热稳 定性差、相对分子质量大的有机物的 分离和分析。
2024/3/26
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仪器操作规范与注意事项
开机与预热
按照仪器使用说明书要求开机 ，并进行预热，确保仪器处于 稳定状态。
进样与洗脱
按照规定的进样量进行进样， 选择合适的洗脱液及洗脱程序 。
色谱分析讲义(2020.11.27)
2020/11/28
色谱分析-1 22
分离因子 塔板数 塔板高度
2020/11/28
基本关系式
Байду номын сангаас
'
t V R(2)
2/1
'
t V R(1)
' R(2)
' R (1)
N
16
tR W
2
5.54
tR Wh
2
H L N
N和H都有理论值和有效 值两类,其差别在于用保 留时间和校正保留时间
色谱分析-1 23
基本关系式（死时间测定）
死时间的测定很难：
无合适样品（完全不保留并有足够强的紫外信号）
一般测定方法为（紫外检测器）：
1. 正向——四氟乙烯 反向——苯甲酸、硝酸等
2. 比流动相少一个C的同系物
3. 不具备条件时可用下式计算
空管柱体积 柱总空隙度
tM
流动相体积流量
tM tR2
(tR2 tR1) tR3 tR1 tR3 tR2 tR2 tR1
生素）
2020/11/28
色谱分析-1 7
化学研究
➢ 样品提纯—如合成产品的检验等
➢ 物质性质与其配比的相关性——色 谱法和化学计量学方法结合
2020/11/28
色谱分析-1 8
生命科学研究
➢ DNA测序—用CE、HPLC技术、 ➢ 生物工程下游技术—细胞的培养、分离、纯
化和分析检测
参见 刘国诠主编 《生物工程下游技术》 化学工业出 版社，1993年
GC-MS LC-MS GC-MS-MS GC-FTIR
2020/11/28
色谱分析-1 17
色谱基本理论
色谱分析技术大纲
色谱分析技术（Technology of Chromatography）一、课程说明课程名称：色谱分析技术课程编号：083U08Y学分数： 3.0 总学时： 60 学时分配：讲课26+自主学习17+实验17适用专业：化学类专业先修课程：无机化学、有机化学、分析化学二、课程教学目的与任务通过色谱分析技术的学习，使学生掌握气相色谱和高效液相色谱的基本原理和应用。
了解仪器的基本构造和基本操作。
三、课程教学的基本内容及学时分配1.色谱法导论（6学时）了解：色谱分析法的历史及其现代发展理解：色谱法的本质及其在工业生产和科学研究中的应用2.气相色谱仪（4学时）了解：气相色谱仪的构造掌握：气相色谱仪的工作原理3.固定相（4学时）理解：气相色谱仪固定相的分类和选择4.气相色谱检测器（4学时）了解：气相色谱仪的各种检测器掌握：各种检测器的基本原理和特点及影响输出信号的操作因素5.气相色谱定性分析（3学时）掌握：气相色谱各种定性分析方法和原理6.气相色谱定量分析（3学时）了解：峰面积的测量方法掌握：百分含量的计算方法和定量分析误差的来源7.高效液相色谱法简介（3学时）了解：高效液相色谱法的发展和特点掌握：高效液相色谱法的基本理论8.HPLC的类型及类型的选择（4学时）了解：高效液相色谱法的原理和特点掌握：高效液相色谱法的类型和选择9.高效液相色谱仪（4学时）了解：高效液相色谱仪的基本构造掌握：高效液相色谱仪的操作方法10.高效液相色谱仪的固定相和流动相（4学时）了解：固定相和流动相的分类和性质掌握：高效液相色谱仪的实际应用11.高效液相色谱检测器（4学时）了解：各种检测器的基本原理和特点掌握：各种检测器的使用范围四、教学方法课堂主讲为主，结合部分讨论五、考核及成绩评定方式闭卷考试。
实验成绩占总评的15%；理论成绩占总评的85%，其中平时成绩占理论成绩的50%，期末考试占理论成绩的50%。
六、教材及参考书目教材：史景汇主编，《色谱分析法》，重庆大学出版社主要参考书：北京大学化学系仪器分析教学组编，《仪器分析教程》，北京大学出版社傅若农编，《色谱分析概论》，化学工业出版社各类《仪器分析》教材七、实践环节教学大纲详见本课程教学大纲实验部分。
色谱 教学大纲
色谱教学大纲色谱是一门重要的分析化学技术，在化学、生物学、药学等领域都有广泛的应用。
为了更好地推动色谱教学的发展，制定科学合理的色谱教学大纲是必不可少的。
本文将探讨色谱教学大纲的内容和重点。
一、引言色谱是一种通过分离混合物中各种成分的技术，其原理是利用不同物质在固定相和流动相之间的相互作用力的差异，实现物质的分离。
色谱技术的发展已经取得了巨大的成就，因此在教学中需要明确色谱的基本原理和应用。
二、色谱教学大纲的设计1. 基本原理色谱教学大纲的第一部分应该包括色谱的基本原理。
这包括固定相和流动相的选择、样品的预处理、色谱柱的选择和操作等内容。
学生需要了解不同色谱技术的原理和适用范围，以及如何根据实际情况选择合适的色谱方法。
2. 色谱仪器色谱教学大纲的第二部分应该介绍色谱仪器的原理和操作。
这包括气相色谱仪、液相色谱仪、超高效液相色谱仪等常用的色谱仪器。
学生需要了解仪器的构造和工作原理，以及如何进行仪器的操作和维护。
3. 色谱分离技术色谱教学大纲的第三部分应该介绍不同的色谱分离技术。
这包括气相色谱、液相色谱、离子色谱、薄层色谱等常见的色谱技术。
学生需要了解每种色谱技术的原理、特点和应用领域，以及如何选择合适的色谱技术进行分析。
4. 色谱分析方法色谱教学大纲的第四部分应该介绍不同的色谱分析方法。
这包括定量分析方法、定性分析方法、样品前处理方法等。
学生需要了解如何进行色谱分析的方法选择、样品制备、仪器操作和数据处理等。
5. 色谱应用领域色谱教学大纲的第五部分应该介绍色谱在不同领域的应用。
这包括环境监测、食品安全、药物研发、生物分析等领域。
学生需要了解色谱在不同领域的应用案例，以及如何将色谱技术应用到实际问题的解决中。
三、色谱教学大纲的实施为了更好地实施色谱教学大纲，需要采取一系列的措施。
首先，教师需要具备扎实的色谱理论知识和丰富的实践经验，能够将理论知识与实际应用相结合。
其次，教学设施和实验室条件应该配备齐全，以满足学生的实验需求。
色谱分析实验讲义
实验一气相色谱的基本操作及进样练习一、实验目的(1) 了解气相色谱仪的主要结构组成和应用。
(2) 掌握仪器基本操作和调试程序，熟悉气路运行过程。
(3) 明确热导池检测器的操作注意事项。
(4) 掌握气相色谱进样操作要领，练习微量注射器的使用方法。
二、实验原理通过实验了解气相色谱仪的结构与原理。
气相色谱仪是实现气相色谱过程的仪器，按其使用目的可分为分析型、制备型和工艺过程控制型。
但无论气相色谱仪的类型如何变化，构成色谱仪的5个基本组成部分皆是相同的，它们是载气系统、进样系统、分离系统(色谱柱)、检测系统及数据处理系统。
载气系统：载气是构成气相色谱过程中的重要一相——流动相，一般由高压钢瓶供气。
进样系统：汽化室是进样系统中不可缺少的组成部分，它的作用是把液体样品瞬间加热变成蒸汽，然后由载气带人色谱柱。
分离系统：色谱柱比作气相色谱仪的“心脏”，样品就是在此根据其性质的不同进行分离的。
检测系统：检测器是气相色谱仪的关键部件。
它的作用是将经色谱柱分离后顺序流出的化学组分的信息转变为便于记录的电信号，然后对被分离物质的组成和含量进行鉴定和测量。
数据处理系统：数据处理系统目前多采用微机型色谱数据处理机和配备操作软件包的工作站，既可对色谱数据进行自动处理，又可对色谱系统的参数进行自动控制。
三、仪器与试剂1．仪器气相色谱仪(GC9790型)；检测器(热导池TCD)；色谱柱(邻苯二甲酸二壬酯DNP)；微量进样器(1 μL)。
2．试剂环己烷(AR)；载气(氮气或氢气，含量99.99%以上)。
四、实验内容1．开机操作步骤(1)通气：首先连接好色谱柱，在检查气路密封良好的情况下，先逆时针旋转钢瓶总阀，调整减压阀输出压力0.4 ~ 0.5 Mpa，调节气相色谱仪上的载气稳压阀(总压)，使其输出压力为0.3Mpa，调节柱前压1和2的稳流阀2~3圈，载气流量氮气约为30mL·min-1，氢气约为40 mL·min-1。
《色谱分析》教学大纲
《色谱分析》教学大纲一、课程信息课程名称（中文）：色谱分析课程名称（英文）：Chromatography Analysis课程类别：专业主干课课程性质：必修课计划学时：40（其中课内学时：36，课外学时：4）计划学分：2.5先修课程：《无机化学》《分析化学》（上）选用教材：《色谱分析法》夏之宁等主编，2012年；非自编；十二五规划系列教材开课院部：化学与环境工程学院适用专业：应用化学（工业分析方向和有机合成方向）课程负责人：陈伟课程网站：超星慕课平台二、课程简介（中英文）色谱分析是一种重要的分离分析方法。
它有若干分支，包括气相色谱、液相色谱、薄层色谱、纸色谱和凝胶渗透色谱等。
色谱法被广泛地应用于药学研究、食品分析、生物医学分析、石油化工、有机合成、环境保护、生命科学等许多领域。
在药学研究中，药物化学、药剂学、药理学、中药学、植物化学、药物动力学、生化制药学、药物分析学等药学分支学科无不广泛使用色谱技术解决各种复杂困难的分析课题。
《色谱分析》是工业分析和应用化学专业的一门专业基础课。
色谱分析直接关系到药物研制、药物质量评价、药物生产过程监控、药物临床监控、药物临床实验、药物作用机理探讨等各阶段的工作；它在制订药物的质量标准、探求科学用药规律与安全、有效、合理用药、新药开发等方面具有重要作用。
Chromatography, although primarily a separation technique, is mostly employed in chemical analysis. Chromatography is probably the most powerful and versatile technique available to the modern analyst. In a single step process it can separate a mixture into its individual components and simultaneously provide an quantitative estimate of each constituent. Samples may be gaseous, liquid or solid in nature and can range in complexity from a simple blend of two entantiomers to a multi component mixture containing widely differing chemical species.Chromatography is an extremely versatile technique; it can separate gases, and volatile substances by GC, involatile chemicals and materials of extremely high molecular weight (including biopolymers) by LC and if necessary very inexpensively by TLC. All three techniques, (GC), (LC) and TLC have common features that classify them as chromatography systems.This is an interdisciplinary course suitable for qualified seniors in Applied Chemistry and Industrial Analysis Specialty. The objective of this course is to familiarize the student with the theory and practice of the state of the art of analytical and preparative chromatographic separation processes. Topics include: general concepts; liquid chromatographic techniques; modes of operation; novel morphologies and chromatographic applications in biotechnology. Critical reviews of the current literature will be carried out to expose the students to the latest developments in the field. Laboratory demonstrations as well as computer simulations will beemployed throughout the course to illustrate important concepts. An individual project on a chromatographic topic of interest will be required for graduate students and will be optional for undergraduates.三、课程教学要求序号专业毕业要求课程教学要求关联程度1 工程知识2 问题分析对试样的来源及分析对象及分析任务作系统分析M3 设计/开发解决方案能就未知试样提出合理的分析测试方法M4 研究会分析问题并结合现代分析技术研究开发新试剂的分析测试方法M5 使用现代工具会选择使用现代测试仪器和工具H6 工程与社会7 环境和可持续发展将分析用于环境监测中H8 职业规范9 个人和团队10 沟通11 项目管理12 终身学习注：“课程教学要求”栏中内容为针对该课程适用专业的专业毕业要求与相关教学要求的具体描述。
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气相色谱法分析苯、甲苯、萘混合物一、实验目的1. 气相色谱图的分析。
2. 温度对保留时间的影响。
3. 保留因子、分离度的计算。
4. 标准曲线的建立。
二、实验原理基本术语基线(base line)--经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。
一般应平行于时间轴。
噪音(noise)--基线信号的波动。
通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
漂移(drift)--基线随时间的缓缓变化。
主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
色谱峰(peak)--组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线上的突起部分。
正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。
峰高(peak height，h)-峰的最高点至峰底的距离。
峰宽（peak width，W)-峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。
半峰宽（peak width at half-height，W h/2)-峰高一半处的峰宽。
峰面积(peak area，A)-峰与峰底所包围的面积。
死时间(dead time，t0)--不保留组分的保留时间。
即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。
保留时间(retention time，t R)--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
保留因子：分离度：气相色谱中随着温度升高，目标物保留时间减少，分离度降低。
三、仪器与试剂仪器：高效液相色谱仪；超声波清洗器；色谱柱(C18)；微量注射器(20ul)。
试剂：甲醇（A.R.）；苯（A.R.）；甲苯（A.R.）；萘（A.R.）。
四、实验步骤1. 色谱条件为气相色谱柱:流动相：氮气进样量：10.0ul进样口：150 o C柱温箱: 80 o C检测器: 250 o C2.溶液配制（1）储备溶液配制：准确称取苯2.000g、甲苯2.000g、萘2.000g分别置于3个100mL容量瓶中，用甲醇溶解后，定容至刻度。
（2）标准溶液配制：根据实验需要，准确吸取一定量的储备液，分别配制成苯0.04-1.0 mg/mL、甲苯0.04-1.0 mg/mL、萘0.04-1.0 mg/mL标准溶液.3.基线走稳后，分别注入苯、甲苯、萘的标准溶液10.0uL，记录各物质的色谱峰。
记下各组分的死时间、保留时间、峰宽和峰面积。
4. 注入待测样品溶液10.0uL，记下各组分的死时间、保留时间、峰宽和峰面积。
5. 实验完毕，按要求关好仪器。
五、思考题【1】气相色谱中温度对保留时间的影响及原因。
【2】计算保留时间、分离度和理论塔板高度。
【3】建立标准曲线。
液相色谱法分析苯、甲苯、萘混合物一、实验目的1. 气相色谱图的分析。
2. 流动相对保留时间的影响。
3. 保留因子、分离度的计算。
4. 标准曲线的建立。
二、实验原理基本术语基线(base line)--经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。
一般应平行于时间轴。
噪音(noise)--基线信号的波动。
通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
漂移(drift)--基线随时间的缓缓变化。
主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
色谱峰(peak)--组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线上的突起部分。
正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。
峰高(peak height，h)-峰的最高点至峰底的距离。
峰宽（peak width，W)-峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。
半峰宽（peak width at half-height，W h/2)-峰高一半处的峰宽。
峰面积(peak area，A)-峰与峰底所包围的面积。
死时间(dead time，t0)--不保留组分的保留时间。
即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。
保留时间(retention time，t R)--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
保留因子：分离度：工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。
在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度。
反相液相色谱中随着有机相浓度增加，目标物保留时间减少，分离度降低。
三、仪器与试剂仪器：高效液相色谱仪；超声波清洗器；色谱柱(C18)；微量注射器(20ul)。
试剂：甲醇（A.R.）；苯（A.R.）；甲苯（A.R.）；萘（A.R.）。
四、实验步骤1. 色谱条件为色谱柱C18：4.6mm×150.0mm流动相甲醇：水=70：30，80：20，90：10（超声半小时脱气）进样量：10.0ul检测器UV，波长254nm灵敏度0.02～0.2AUFS2.溶液配制（1）储备溶液配制：准确称取苯2.000g、甲苯2.000g、萘2.000g分别置于3个100mL容量瓶中，用甲醇溶解后，定容至刻度。
（2）标准溶液配制：根据实验需要，准确吸取一定量的储备液，分别配制成苯0.04-1.0 mg/mL、甲苯0.04-1.0 mg/mL、萘0.04-1.0 mg/mL标准溶液.3.基线走稳后，分别注入苯、甲苯、萘的标准溶液10.0uL，记录各物质的色谱峰。
记下各组分的死时间、保留时间、峰宽和峰面积。
4. 注入待测样品溶液10.0uL，记下各组分的死时间、保留时间、峰宽和峰面积。
5. 实验完毕，按要求关好仪器。
五、思考题【1】反相高效液相色谱中流动相组分对保留时间的影响及原因。
【2】如何建立标准曲线。
高效液相色谱分析茶叶中的生物碱一、实验目的1. 茶叶中生物碱的提取。
2. 茶叶中生物碱含量的测定。
二、实验原理溶解性咖啡因：乙酸乙酯、氯仿、嘧啶、吡咯、四氢呋喃中可溶，酒精和丙酮中一般可溶，石油醚、醚及苯中微溶。
茶碱：常温下溶于水、乙醇、氯仿、氢氧化碱液、氨水、稀盐酸和稀硝酸中，微溶于乙醚。
可可碱：微溶于水、乙醇，中度溶于胺。
蛋白质的胶体性质：蛋白质分子颗粒大小在1~100nm胶体范围之内。
维持蛋白质溶液稳定的因素有两个：（1）水化膜：蛋白质颗粒表面大多为亲水基团，可吸引水分子，使颗粒表面形成一层水化膜，从而阻断蛋白质颗粒的相互聚集，防止溶液中蛋白质的沉淀析出。
（2）同种电荷：在pH≠pI的溶液中，蛋白质带有同种电荷。
pH＞pI，蛋白质带负电荷；pH ＜pI，蛋白质带正电荷。
同种电荷相互排斥，阻止蛋白质颗粒相互聚集，发生沉淀。
蛋白质沉淀法有：1．热变性及酸碱变性沉淀法用于选择性的除去某些不耐热及在一定PH值下易变性的杂蛋白。
2．有机溶剂沉淀法多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。
有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数，导致具有表面水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。
该法优点在于：1）分辨能力比盐析法高，即蛋白质或其它溶剂只在一个比较窄的有机溶剂浓度下沉淀；2）沉淀不用脱盐，过滤较为容易；3）在生化制备中应用比盐析法广泛。
其缺点是对具有生物活性的大分子容易引起变性失活，操作要求在低温下进行。
总体来说，蛋白质和酶的有机溶剂沉淀法不如盐析法普遍。
3．等电点沉淀法用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。
但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。
4．非离子多聚体沉淀法用于分离生物大分子。
5．生成盐复合物沉淀用于多种化合物，特别是小分子物质的沉淀。
6．盐析法三、仪器与试剂仪器：高效液相色谱仪；超声波清洗器；加热磁力搅拌；色谱柱(C18)；微量注射器(20ul)。
试剂：甲醇（HPLC）；乙醇（A.R.）；乙腈（A.R.）；咖啡因（A.R.）；茶碱（A.R.）；可可碱（A.R.）；茶叶。
四、实验步骤1. 色谱条件为色谱柱C18：4.6mm×150.0mm流动相甲醇：水=30：70（超声半小时脱气）进样量：10.0ul检测器UV，波长254nm灵敏度0.02～0.2AUFS2. 茶叶中生物碱的提取：将10.0g粉碎后的茶叶粉末置于100.0 mL 50%乙醇的烧瓶中加热至70.0 o C萃取30.0分钟。
沉淀、过滤后得到的滤液1：1加入乙腈沉淀蛋白质。
用0.45um水相滤膜过滤。
3.溶液配制（1）储备溶液配制：准确称取咖啡因1.0mg、茶碱1.0mg、可可碱1.0mg分别置于3个4.0 mL样品瓶中，用甲醇溶解。
（2）标准溶液配制：根据实验需要，准确吸取一定量的储备液，分别配制成咖啡因0.01-0.5 mg/mL、茶碱0.01-0.5 mg/mL、可可碱0.01-0.5 mg/mL标准溶液.4.基线走稳后，分别注入咖啡因、茶碱、可可碱的标准溶液10.0uL，记录各物质的色谱峰。
记下各组分的保留时间和峰面积。
5. 注入待测样品溶液10.0uL，记下各组分的保留时间和峰面积。
6. 实验完毕，按要求关好仪器。
五、思考题【1】天然物中生物碱的提取要注意什么。
【2】提取时什么条件对提取效果有影响。
高效液相色谱分析盐角草中的酚酸一、实验目的1. 盐角草中的酚酸的提取。
2. 盐角草中的酚酸含量的测定。
3. 液相色谱分析中流动相添加剂的应用。
二、实验原理溶解性原儿茶酸：溶于水、乙醇、乙醚。
咖啡酸：易溶于热水、冷乙醇。
阿魏酸：溶于热水，乙醇和乙酸乙酯。
流动相添加剂作用原理（1）抑制色谱柱上残留硅醇基的电离。
（2）控制化合物的电离状态了，酸性化合物加酸时基本能控制在分子状态，而碱性化合物的分离在酸性条件下也只有一种电离状态了，如果不加酸，对某些PKa在中性左右的离子型化合物会出现裂峰的现象的（一个化合物出两个峰）。
分析酸性化合物加酸起到改善峰型，改善分离度，防止拖尾的效果。
三、仪器与试剂仪器：高效液相色谱仪；超声波清洗器；加热磁力搅拌；色谱柱(C18)；微量注射器(20ul)。
试剂：乙腈（HPLC）；原儿茶酸（A.R.）；咖啡酸（A.R.）；阿魏酸（A.R.）；盐角草。
四、实验步骤1. 色谱条件为色谱柱C18：4.6mm×150.0mm流动相乙腈：水：三氟乙酸=20：80：0.1（超声半小时脱气）进样量：10.0ul检测器UV，波长270nm灵敏度0.02～0.2AUFS2. 盐角草中酚酸的提取：将1.0g粉碎后的盐角草粉末置于20.0 mL去离子水中加热至80.0 o C 萃取30.0分钟。
沉淀、过滤后得到的滤液1：1加入乙腈沉淀蛋白质。
用0.45um水相滤膜过滤。
3.溶液配制（1）储备溶液配制：准确称取原儿茶酸1.0mg、咖啡酸1.0mg、阿魏酸1.0mg分别置于3个4.0 mL样品瓶中，用流动相溶解。
（2）标准溶液配制：根据实验需要，准确吸取一定量的储备液，分别配制成原儿茶酸0.01-0.5 mg/mL、咖啡酸0.01-0.5 mg/mL、阿魏酸0.01-0.5 mg/mL标准溶液.4.基线走稳后，分别注入原儿茶酸、咖啡酸、阿魏酸的标准溶液10.0uL，记录各物质的色谱峰。