生物学综合性实验
微生物综合性实验__水中细菌总数的测定
微生物综合实验水中细菌总数的测定一、实验目的1．学习水样的采集和水样中细菌总数的测定方法。
2．了解和掌握平板菌落计数的原则。
3．复习、巩固微生物实验的各单元操作。
二、实验原理水中细菌总数的测定是进行水质检验的必要项目之一，主要作为判定饮用水、水源水、地表水等被污染程度的标志。
本试验采用平板菌落计数技术来测定水中的细菌总数。
该法是根据在固体培养基上所形成的菌落来进行计数。
菌落总数是指在一定条件下，1 mL水样所生长出来的细菌菌落的总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其它生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基和在一种条件下，使水中的所有细菌均能生长繁殖，因此，这种方法所得到的结果只是一种近似值。
目前一般采用营养琼脂培养基，在需氧条件下，37℃培养36-48 h，所得到的细菌绝大部分是腐生性的嗜中温性需氧菌和兼性厌氧菌。
三、实验材料1．检样：矿泉水等饮用水、河水、湖水、井水等。
2．培养基：营养琼脂培养基（附录Ⅱ-1.3）3．仪器与其它用具：三角烧瓶，广口瓶，吸管，培养皿，试管，培养箱等。
四、实验步骤1. 水样的采集与处理⑴饮用水：采样前，先用酒精棉球擦拭瓶口灭菌，以灭菌移液管或移液枪取水样。
⑵河水、湖水、池水：应取距水面10 cm~15 cm的深层水样。
先将已灭菌的带玻璃塞的广口瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来使瓶口向上，拔去瓶塞，待水盛满后，将瓶塞盖好，再将瓶子从水中取出。
在一定深度采水样时，需要用特制的采水器（图14-14）。
采水器是一金属框，内装玻璃瓶，其底部装有重沉坠，可按需要坠入一定深度。
瓶盖上系有一绳索，拉吊绳索即可打开瓶盖，待水样瓶中水盛满后，放松绳索，即自行盖上瓶盖。
水样采集后，将水样瓶取出，并立即用无菌棉塞或灭菌胶塞塞好瓶口，以备检验。
水样采集后应立即检验，如需要保存或运送，应采取冰镇措施，但一般要求不得超过4 h。
图14-14 采水器1-开瓶绳索2-铁框3-瓶盖4-水样瓶5-沉坠2. 细菌总数的测定⑴饮用水：①用灭菌吸管吸取0.2 mL水样，涂布于事先准备好平板中，共做2个平皿。
生物科学综合实验
《生物科学综合实验》—分子生物学实验1 实验目的1.1学习并掌握在宿主菌中扩增质粒的理论依据与操作方法。
了解大肠杆菌质粒提取的原理和方法，掌握小量快速提取法（试剂盒法）。
1.2学习并掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳的原理与方法。
3.了解大肠杆菌感受态细胞的制备原理，掌握制备方法。
4.以pET28a质粒转化大肠杆菌TOP10为例，学习转化的基本原理及方法。
2 实验原理2.1 PET28a质粒在大肠杆菌中的扩增与试剂盒抽提细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。
各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。
基因工程用质粒都带有选择性标记序列，最常用的的选择性标记是对抗生素的抗性基因。
如本实验所使用的质粒（pET28a），即带有抗卡那霉素（Kan r）抗性基因。
当培养中含有卡那霉素时，宿主（大肠杆菌BL21）的蛋白质合成受到抑制，而pET28a质粒可自行复制，从而将大大增加拷贝数，达到抽提质粒的浓度要求。
图1 pET-28a 质粒基因结构简图一般分离质粒DNA的方法都包括3个步骤：①培养细菌，使质粒DNA大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒DNA。
分离制备质粒DNA的方法很多，其中常用的方法有碱裂解法、煮沸法、SDS法、羟基磷灰石层析法等。
在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的用途进行选择。
本实验介绍碱裂解法提取质粒DNA。
碱裂解法提取质粒DNA是根据共价闭合环状质粒DNA和线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离质粒DNA。
在pH值介于12.0-12.5这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。
生物技术综合性实验教学的探索和实践
近年来 ， 随着现 代生 物技 术 的迅 猛发 展 ， 用功 运 能基 因组 学 、 白质 组学 、 蛋 生物 信息 学等 现代生 化 与
分子 生物 学技术 ， 合 基 因工 程 、 白质工 程 、 结 蛋 细胞
课 ， 一段 理论 课 ， 排 一 次实 验 课 ， 学 内容 多 为 上 安 教
施、 效果等方面探讨 了生物技 术专业综合性 实验 的教 学， 以期为生物技术 实验教 学改革提供借鉴 。 关键词 ： 生物技术 ； 教学改革 ； 综合性实验
中 图分 类 号 ： Ｒ １ Ｇ ４ ． ３ ８ ６ ２０ 文 献标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ： １０ ７ ４ （０ ８ ０ ０ ８ ０ ０ ８— ２９ ２ ０ ）５— ５ ２— ３
重要性 ， 为此 ， 我们开设基 因工程 制药综合性实验 ，
尝试 把 生物 信息 学 、 因工程 、 酵工 艺 、 白质 药 基 发 蛋 物 分离 纯化 等课程 某些 章节 中分 散 的实验课 内容汇
编 成综 合性 大实 验用 于教 学 ， 以期 帮 助 学 生理 清 生 物 技术 的专 业脉 络 ， 进知识 的融会 贯通 ， 促 获得 更好
项 目以验 证性 实验 为 主 ， 验 的教 学 内容 和 教 学 方 实 法陈旧， 已不 能适 应 生 物 技术 迅 猛 发 展 的需 要 。随 着 全 国高校 实验教 学 改革 的开展 ， 实验 向着 综合 性 、 创 新性 等方 向发 展 。近 年 来 ， 们 对 生物 技 术 专 业 我
Ｅｘ ｌ ｒ ｔｏ ｎ ｒ ｃ ｃ ｎ ｃ ｍｐｒ ｈ ｎ ｉ ｅ ｅ ｅ ｉ ｎ ａ ｅ ｃ ｉ ｇ ｏ ｉ ｔ ｃ ｎ ｌ ｇ ｐｏ ａ ｎ ａ ｄ ｐ ａ ｔ ｅｏ ｏ ｉ ｉ ｅ ｅ ｓｖ ｘ ｒｍｅ ｔ ｌｔａ ｈ ｎ ｆｂ ｏ ｅ ｈ ｏ ｏ ｙ ｐ
生物综合性、设计性实验教学模式探究——以植物学实验“植物细胞的质壁分离与复原”为例
成 了任 务 ，但 从学 生综 合素质 培养 方面 则还 有很 多 欠缺 ． 如 果 将 该 实 验 设 计 成 为 既 能 考 察 学 生 的 实 验技 能 ，义 能检 查！ 学生对所 需知 识 掌握 的程度 ，还
能使 学 生充分 发挥创造 性 的综 合性 、设 计性 实验 ，
可 以达 到现代 教学 中提 倡 的以学 生为主 ，鼓 励学 生
骤进 行操 作 完成 实验 ，这 样 做从 实验 目标 山发是 完
整个 实验 始终 体现 “问题 带来 探究 、 生 白觉探 究 、 学
教师指导探究、综合解决探究”的设计理念．
２ 学 生 活 动
２ １ 掌握背 景 知识 ．
在给 出实验题 目时 ，要 给学 生一 个火 概查 找 资
料 的方 向 ，否 则对学 生 、教 师都 会带 来太 人 的 作
中图分类号：Ｇ ４ ． 文献标识码：Ａ 文章编号：１７—９ ９ （０２ ２ ０一ｏ ６—０
“ 物细 胞 的质壁 分 离与 复原 ”是 高 中生物 、 植 火 学 生 物 本 科 专 业 学 生 必 做 实 验 ． 该 实验 从 技 能 上要 求 学生 掌握 显微镜 使用 方 法 、装 片制 作 ，在 理 论知 识 上要 求 学生理 解植 物细 胞结 构 、渗 透 系统 、 质 肇 分 离 的基 本 原 理 ， 实验 简 单 但 经 典 ． 在 教 学 中 ，很 多 教师 都是要 求 学生 按照 实验教 学给 出的步
生物 综合 性 、设计性实验教学模式探 究
— —
以植 物学 实验 “ 植物 细胞 的质壁分 离与复原”为例
贾风勤 ，欧阳艳 ，李紫薇
生物学综合实习教学大纲
《生物学综合实习》教学大纲课程名称（中文）生物学综合实习课程编号课程性质独立设课课程属性生物科学教材及实验指导书名称《生物学综合实习指导》，学时学分：总学时2周总学分2应开实验学期一年级二学期适用专业生物科学先修课程植物学、动物学、生态学一．课程简介及基本要求生物学综合实习是学生学习生物学专业基础课不可缺少的重要环节，是专业基础课教学不可分割的重要部分，是加深、巩固、扩大和丰富课堂及书本知识的基础，也是培养学生观察和研究生物的基本方法和技能的必要手段。
对进一步加强本科生的素质教育和创新能力的培养有重要的意义。
本课程以实践环节为主，根据课程的性质、任务、要求及学习的对象，将课程内容分三个阶段：基本技能训练，野外实践方法，综合设计和科技创新实践。
第一个阶段由教师带领在实验室完成，第二阶段由教师带领，学生在野外进行分组实践活动，第三阶段在教师指导下，分别完成单项内容的研究性实践活动。
使学生学会动植物标本的制作方法，生物学野外调查的基本知识，单项研究及研究报告的写作。
经过多层次，多方式教学的全面训练后，学生应达到下列要求：1．进一步巩固和加深生物学专业基本知识的理解，提高综合运用所学知识，能独立应用专业知识进行野外调查研究的能力。
2．能根据需要选学参考书，查阅手册，通过独立思考，深入钻研有关问题，学会自己独立分析问题、解决问题，具有一定的创新能力。
3．能正确使用仪器设备，掌握测试原理，完成标本的制作和综合实习的野外工作。
4．能独立撰写野外实习报告，准确分析观察、统计结果。
二．课程实验目的要求《生物学综合实习》是继《动物学》、《植物学》、《生态学》课程之后而开设的独立实验课程，是理论教学的深化和补充，具有较强的实践性，是一门重要的技术基础课，可作为生物技术，生物科学专业学生的必修课。
随着科学技术迅速发展，生命科学的大学生不仅需要掌握生物学基础课方面的基本理论知识，而且还需要掌握基本的实验技能及一定的科学研究能力。
医学细胞生物学综合性实验教学的设计与实施
践， 我们逐 渐建立 一套综 合性实 验的教学 体 系 ， 并在 实践 中取得 了较 好 的教 学 效果 。开 展 综合 性 实 验 ， 可 以更 好地发 挥学 生 的主 体 意识 ， 学 生 自主 进行 使 综合性 实验 的前期 准备 、 实施 、 果 及评 价 ， 有效 结 能
提高学 生的综 合实验 能 力 ， 高学 生 解决 问题 的实 提
何 志颖 ， 訾晓 渊 ， 朱 海英 ， 谢 东甫 ， 苏 娟 ， 胡 以平 ’第二军医大学细胞生物学教研室， 上海 ２０３ ） （ ０４ ３
摘要 ： 在 实验课教 学中开展 综合性 实验是 医学细胞生物 学实验课 教 学改革的重要 内容。介绍的综合性 实验 以小鼠胚胎干 细胞的培养和基 因转染为主线 ， 穿插细胞的基本特征 、 细胞增 殖动力 学、 细胞 骨架、 细胞 融合及 染 色体的制备 等教 学 内容 ， 基
取 １． ３ ５天孕龄 的小 鼠胚 胎 原 代 培养 制 备饲 养层 细
传至第 三代
时 ＭＥ Ｆ细胞趋 于均一 ， 用丝裂 霉素 Ｃ或 ＾射线处理 ｙ
抑 制 Ｍ Ｆ细胞 的增殖 能力 ， 理后 的饲养 层细 胞种 Ｅ 处
胞， 基本 步骤包 括 ： 取胚 胎 、 剪去头 去脏器 、 修 胰酶 消
・
１ ８・ ０８
山 西 医科 大学 学 报 ： 础 医学 教 育 版 ，０ ０年 １ 基 ２１ １月 ，２ １ １（１
Ｄ ： ０ ３ ６ ／ ． Ｓ Ｎ． ０ ８—７ ４ ． ０ ０． ． ７ ＯＩ １ ． ９ ９ Ｊ Ｉ Ｓ １ ０ ２ ９ ２ １ １ ０１ １
医 学 细 胞 生 物 学 综 合 性 实 验 教 学 的 设 计 与 实 施
际能力 。
该综 合性实验 以小 鼠胚 胎 干 细胞 （ Ｓ细胞 ） Ｅ 的 培养 和基 因转 染为 主线 ， 插细胞 的基本 特征 、 穿 细胞 增殖 动力学 、 细胞骨架 、 细胞 融合及染 色体 的制备 等
分子生物学综合设计性实验 (2)
分子生物学综合设计性实验实验项目：不同限制性内切酶对质粒DNA的切割学院：生命科学学院年级专业班：生科121姓名：廖怡诚学号：1214100058实验地点：生化楼207指导老师：夏岩石摘要：限制酶是一种能将双链DNA切开的酶。
主要作用于DNA分子内的磷酸二脂键，进而于两条DNA链上各产生一个切口，且不破坏核苷酸与碱基。
切割形式有两种，分别是可产生具有突出单股DNA的黏状末端，以及末端平整无凸起的平滑末端。
每种限制酶能识别特定的碱基序列并进行特异切割，所以理论上加入的限制酶能够根据其特异性判断会得出的DNA片段。
通过电泳跑胶能够对得出的片段进行分析粗略判断与理论长度的吻合度。
一、关键词：限制酶酶切质粒DNA 电泳二、引言：自然界中限制性酶具有降解外源的DNA的能力，对保护宿主遗传稳定有着重要的作用。
但随着基因工程的发展，对限制酶的应用尤为重视。
由于它具有识别特定DNA序列并进行切割的能力，在基因工程中进行目的基因的导入发挥着重要的作用。
可以取长补短，增强对人类有益生物产品的产量和质量，如导入的抗铃虫基因的木棉大幅度提高了木棉的产量。
但由于，导入基因与受主本身基因结合后存在着不可预判性，可能导致生物危机，也可能随机的酶切将基因导入后产生异常的新物种。
但总体而言，限制酶对于人类基因工程的研究有着重要的意义，对于导入优越基因剔除无用基因有着很大的发展前景。
如进行疾病的治疗（基因治疗），从内在对致病基因进行剔除或置换上优越基因的研究，对于人类生命的延续无疑有着重要意义。
而研究限制酶最为基础之一就是要了解它识别序列的特性和作用机理，所以本实验选取了多种限制酶，可以随机搭配进行对已确定的质粒DNA进行酶切之后进行电泳分析，可以研究限制酶酶切后的序列长度以及多种限制酶的加入在识别位点时是否会互相干扰。
通过实验结果验证理论的准确性以及对实验过程中出现的不可预测的因素导致的各种结果的分析。
对于进一步了解限制酶的作用机理有更深的认识，为以后限制酶的研究奠定良好的基础。
浅析综合性实验在生物学教育中的应用
浅析综合性实验在生物学教育中的应用综合性实验是指将多个学科的知识和技能综合运用于一个实际问题中的实验。
在生物学教育中，综合性实验的应用可以提供学生综合运用生物学知识和技能的机会，培养学生的综合实践能力和创新思维。
本文将从实验设置、实验内容和实验效果三个方面对综合性实验在生物学教育中的应用进行浅析。
首先要注意的是综合性实验的设置。
综合性实验需要选取一个既能反映学生对生物学基本原理的理解，又能体现学生对多学科知识和技能的综合运用的实验课题。
实验课题可以选择实际问题，例如环境保护、健康饮食等，也可以选择与生物学相关的课题，例如细胞培养、基因工程等。
实验的设置应该考虑到学生的实际情况，既要有足够的挑战性，又要有一定的可行性，以激发学生的学习兴趣和积极性。
其次是要关注综合性实验的内容。
综合性实验要求学生综合运用多学科知识和技能，因此实验的内容应该涵盖多个学科的知识。
在生物学中，实验内容可以包括生物化学、细胞生物学、分子生物学、遗传学等多个方面的知识。
实验还应该涉及到其他学科的知识，例如物理学、化学、数学等。
通过在实验中综合运用这些知识，学生可以更好地理解生物学的基本原理，培养综合运用知识的能力。
最后要考虑综合性实验的效果。
综合性实验可以提供一个实践环境，使学生在实验中运用生物学知识解决实际问题，从而培养学生的实践能力和创新思维。
实验过程中，学生需要设计实验流程、收集数据、分析结果并得出结论，这样可以培养学生的实验能力和科学思维。
学生还需要与其他组员合作，培养团队合作能力和沟通能力。
通过综合性实验的实践，学生可以将理论知识与实际问题相结合，提高学习的有效性和针对性。
初中生物学综合实践教案
初中生物学综合实践教案
【实践目的】
通过本次实践活动，让学生了解生物学的基本概念和实验方法，培养学生的观察能力、实验技能和科学思维。
【实践内容】
本次实践活动将分为以下几个部分：
1. 实验准备：介绍实验材料和操作步骤；
2. 实验操作：让学生逐步完成实验操作；
3. 实验观察：让学生观察实验现象，并记录数据；
4. 实验分析：让学生对实验结果进行分析和总结。
【实践材料】
1. 毛细管、刻度瓶、试管、显微镜等实验工具；
2. 毛细管法测量水的表面张力实验液体；
3. 实验记录表。
【实践步骤】
1. 实验准备：
- 将刻度瓶装满水，并放在平台上；
- 取一根毛细管，浸入水中，然后将水滴到刻度瓶中，直至形成一条水柱；
- 将刻度瓶水平放置，记录水柱的高度。
2. 实验操作：
- 将刻度瓶放在平台上，让学生逐步进行实验操作；
- 让学生用毛细管法测量水的表面张力。
3. 实验观察：
- 让学生观察实验现象，记录数据；
- 让学生用显微镜观察水的分子结构。
4. 实验分析：
- 让学生对实验结果进行分析和总结，讨论表面张力的原理和影响因素。
【实践总结】
通过本次实践活动，学生了解了水的表面张力的实验方法和原理，培养了他们的观察能力和实验技能。
同时，学生还能够应用科学方法对实验结果进行分析和总结，培养了他们的科学思维和创新能力。
希望学生在今后的学习中能够继续努力，探索更多生物学知识。
生物化学综合性、设计性实验教学的尝试与分析
综 合性 、 计性 实 验教 学 对 学 生 创 新 及 实践 能 力 的 设
培养 和实 验教 学 的初步 实验 方 案的 内容及 框 架 设
培养 学生 的综 合 能力 和 创 新 精 神 ， 以及 初 步 的科 研 能力 的形 成都 起着 非 常重 要 的作 用 。但 现有 的生物 化学 实验 教学 内容大 多 以验 证 性 实 验 为 主 ， 培 养 而
学生 的综 合 能力 、 新 能 力 的综 合 性 实 验 较 少 。我 创 们在 具体 的教 学 实践 中尝 试 开 设 的综 合 性 、 计 性 设 生物 化 学实验 ， 仅使 实验 教学 内容有 了新 的变 化 ， 不
更重 要 的是对 开 发学 生 智 力 、 培养 学 生 的创 新 和 实
中 图 分 类 号 ： Ｒ ４ Ｇ ４ ． ３ ６ ２４ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： １０ ０ ８—７４ （０ ０ ０ ０ ０ ０ ２ ９ ２ １ ）４— １— ３ ４
生物 化学 是一 门实 践 性 很 强 的 学科 ， 物 化 学 生
实验 对 于学生 掌握 生物 化 学 的基 本 知识 、 基本 技 能 ，
且培 养 了学生药 理学实验设 计和科研 能 力 ， 使学 生具 备 了从 事本专业 实际工作 和科研工作 的初步能力 。
参考文献 ：
［］ 高允生 玉 云， 娟 ， ． １ 朱 李 等 临床 医学 本 科 药 理 学 实验 教 学 模 式
教 师综 合 素质 的 提 高 是 教 学改 革 成 功 的保 障 。
［ 收稿 日期 ： ２０ ０９—１ ３ ］ ２— ０
生 物 化 学 综 合 性 、 计 性 实 验 教 学 的 尝 试 与 分 析 设
刘 洋 丁 建 中 ， 何 小兵 （ ， 长江大学医学院分子生物学部生化教研室， 荆州 ４４２ ； 长江大学医学院病 ３０３
细胞生物学综合性实验的设计
（ 开大 学 生命科 学学 院 ，天津 ３ ０ ７ ） 南 ０ ０ １ 摘 要 ： 基础 实验 课程 基础 上 ， 在 开设 综合 性 实验 ， 实验课 教 学改 革 的一 项 内容 。所设 计 实施 的微 管 是
相 关的综 合性 实验 内容 ， 既是 当前的研 究热 点 ， 又是 学 生较 熟 悉的细胞 结构 ， 学生在 完成 的过程 中 ， 实践
性实 验 为主 ， 而综合 性 、 计 性 实验 内容 少 ， 利 于 学 设 不
时， 能够 了解 实验设 计 思 路 ， 析 实 验 结 果 ， 系 实 际 分 联 问题 认识 到实 验 的重要 性 ， 强独 立解 决 问题 的能力 。 增 现有 的基 础实 验课对 学 生 的培养很 有 限 。在 基本 细胞
Ｄｅ ｉｎ ｏ ｙ ｔ ｅ ｉａ ｌ Ｂｉｌｇ ｘ ｅ ｉ ｎ ｓｇ ｆＳ ｎ ｈ ｔ ｌ ｃ Ｃｅｌ ｏｏ ｙ Ｅ ｐ ｒ ｍｅ ｔ
Ｌ ｎ — ｅｔ ＺＨＯＵ Ｊ ｎ ＩＤｅ ｇ ｗ ｆ， ｕ
（ ｏｌ ｅｏ ｉ ｃｅｃｓ Ｎ ｎ ａ Ｕ ｉ ｒ ｔ Ｔａｊ ０ ０ １ Ｃ ｉ ） Ｃ ｌ ｇ ｆ ｆ Ｓ ｉ ｅ ， ａ Ｋ ｉ ｎｖ ｓ ｙ ｉ ｉ ３ ０ ７ ， ｈｎ ｅ Ｌｅ ｎ ｅ ｉ ｎ ｎ ａ
实验 技术 培训 的基 础上 ， 增加 综合 性实 验 内容 ， 以充 可
分 发 挥实验 教学 的作 用 ， 使学 生在 实验 教学 过程 中 ， 养 成 良好 的创新 思维 习惯 ， 而 提高 分 析 问题 和解 决 问 从
Ａｂｓｒ ｃ ｔ ａ ｔ：Ｔｈ ｙ ｔ ｅｉ ａ ｅｌ ｂｏ ｏ ｙ ｅ ｐｅ ｉ ｅ ｔ ｉ ｗ ｏ ｄ ｎ ｕ ｒｃ ｌ ｍ ｂ ｓ ｄ ｎ ｒ ｇ ｌｒ ｃ ｌ ｂｉｌｇ ｘ ｅ ｉ ｅ ｓ ｎ ｈ ｔｃ ｌｃ ｌ ｉｌｇ ｘ ｒｍ ｎ ｓ ａ ｎｅ ｆｕｎ ｉ ｇ ｃ ｒｉｕ ｕ ａ ｅ ｏ ｅ ｕ ａ ｅｌ ｏ ｏ ｙ ｅ ｐ ｒ— ｍｅ ｔ ａ ｄ ｉ ｉ ｌｏ ａ ｐ ｒ ｆｅ ｐ ｒｍ ｅ ｔｒ ｆ ｒ ａ ｉｎ Ｔｈ ｘ ｒｍ ｅ ｔ ｌｃ ｎ ｅ ｔｆ ｃ ｓ ｓｏ ｉｒ ｔ ｂ ｌ ｎ ， ｎ ｔ ｓａｓ ａ ｔｏ ｘ ｅ ｉ ｎ ｅｏ ｍ ｔｏ ． ｅ ｅ ｐｅ ｉ ｎ ａ ｏ ｔ ｎ ｏ ｕ ｅ ｎ ｍ ｃ ｏ ｕ ｕ ｅ，ｃ ｎｓｄ ｒｎ ｔｉ ｏ ｉｅｉｇｉ ｓ ｎ ｔｏ ｌ ｅ ｅ ｒ ｈ ｈ ｔｐ ｉ ｕｔａ ｓ ｎ ｉ ｏ ｎ ｙ ａ ｒ ｓ ａ ｃ ｏ ｏｎｔｂ ｌｏ ａ ｍｐｏ ｔｎ ｙｏ ｋｅｅｏ ｎ ｃ ｌ． Ｔｈ ｏ ｇ ｈｅ ｅ ｐ ｒｍ ｅ ｔ ｓｕ ｅ ｔ ａ ｒ ｃ ｉｅ ｒａ ｔｃ ｔ ｓ ｌ ｔｎ ｉ ｅ１ ｒ ｕ ｈ ｔ ｘ ｅ ｉ ｎ ， ｔ ｄ ｎ ｓ ｃ ｎ ｐ ａ ｔｃ ｍｕｌ ｐ ｅ ｔｃ ｎ ｑ ｅ ， ｏ ｅ ｐ ｒｍ ｅ ｔ ｌｐ ｅ ｒ ｔｏ ｎｄ ｐ ｏ ｅ ｕ ｅ ｄ ｓｇ ｔ ｌ ｅ ｈ ｉ ｕ ｓ ｄ ｘ ｅ ｉ ｎ ａ ｒ ｐａ ａｉｎ ａ ｒ ｃ ｄ ｒ ｅ ｉｎ． Ｔｈ ｎｅ ｒ ｔ ｄ ｓｕ ｙ ｉ ｍ ｕ ｄ ｆｓｅ ｔ ｄ ｎ ｓ ｉ ｅ ｉｔ ｇ ａｅ ｔ ｄ ｔ ｅ ｗｏ ｌ ｏ ｔｒｓｕ ｅ ｔ ’ ｒ ｓ ａ ｃ ｎ ｅ ｅ ｔｎ ｎ ｃ ｌ ｂｏ ｏ ｙ ａ ｄ ｉ ｒ ｖ ｈ ｉ ｎ ｏ ａｏ ｙ ａ ｉ ｔ ． ｅ ｅ ｒ ｈ ｉ ｔｒ ｓｉ ｇ ｏ ｅ ｌ ｉｌ ｇ ｎ ｍｐ ｏ ｅ ｔ ｅｒ ｉ ｎ ｖ ｔｒ ｂｌ ｙ ｉ Ｋｅ ｏ ｄ ｙ ｗ ｒ ｓ：ｃ ｌ ｉｌ ｇ ｅｌｂ ｏｏ ｙ；ｓ ｎｈｅｉａ ｘ ｅ ｉ ｎ ； ｍｉｒ ｔ ｂｕ ｅ；ｔ ａ ｈ ｎ ｅｏ ｍ ｙ ｔ ｔｃ ｌｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ｃ ｏｕ ｌ ｅ ｃ ｉ ｇ ｒ ｆｒ
综合性、设计性实验教学在医学微生物学实验教学中的尝试与分析
我国高等 医学院校 的实验室一般采用 校 、 院、 教研室三级 管理 。笔者学 校 口腔 实验室实 行第 二临床 医学 院领 导 ， 临床
技 能中心负责 、 口腔教研 室协 助的管理 体制 。以前 由于笔者 学校 第二临床医学 院 尚未成立 口腔 教研 室 ， 口腔 实验室 的实 验教学工作由第一临床 医学 院承担 ， 出现 了实验 室与教 师 的 亲 和力不 同程度 的降低 。 自从第二临床 医学院成立 口腔 教研 室 以来 ， 实验室和教研室 、 理论教学和实验 教学的联系更加 密
综合性 、 设 计 性 实验教 学在 医学微 生物 学 实验 教 学 中的 尝试 与 分 析
苏
江苏
丽 ， 孙晓雷 ， 贲志云 ， 徐邦生 （ １ ． 南通大学 医学 院形态学 实验室 ， 江苏
南通 ２ ２ ６ ０ ０ １ ）
南通
２ ２ ６ ０ ０ １ ； ２ ． 南 通大学 医学院微免 教研室 ，
［ ４ ］ 许春 姣 ， 吴颖芳 ， 彭解 英 ， 等． 以创 新思维 为主体 的引导
牙周组再生术 实 验课 ［ Ｊ ］ ． 湖南 医科 大学 学报 ： 社 会科 学 版 ，
２ ０ ０ ６ ， ８ （ ３ ） ： ２ ５ ０ ．
［ 收稿 日期 ： ２ ０ １ ３一Ｏ ｌ 一 ２ ２ 编校 ： 朱林 ］
培养学生 的实 践 能力 以及 分 析解 决 问题 的能力 具 有重要 作 用 。笔者 以南通大学 教学课 题— —“ 医学微生 物学实 验中 综合性设计性实验 的探 索” 为例 ， 就 医学微生 物学综 合性 、 设 计性实验教学对学生 实践 能力 以及 创新 能力 的培养 ， 对整个 实验教学的初 步成效进行了分析与总结。
医学微生物学实验综合性实验一
随着我国基础设施建设的快速发展，隧道工程在交通、能源、通信等领域发挥着越来越重要的作用。
为确保隧道工程的安全、优质、高效完成，针对隧道施工过程中的各个环节，制定了相应的专项方案。
以下是对隧道专项方案的总结：一、编制依据1. 国家相关法律法规和行业标准，如《公路隧道施工技术规范》、《隧道工程安全规程》等。
2. 隧道工程的设计文件、地质勘察报告等。
3. 施工单位的技术水平和施工经验。
4. 当地气候、地质条件等因素。
二、编制目的1. 保障施工人员的人身安全，预防事故发生。
2. 确保隧道工程质量，提高施工效率。
3. 节约资源，降低施工成本。
4. 促进隧道施工技术的进步。
三、专项方案内容1. 施工组织与管理（1）明确施工组织机构，落实各级责任。
（2）制定施工进度计划，确保工程按期完成。
（3）加强施工现场管理，提高施工效率。
（4）做好施工资料收集、整理和归档工作。
2. 安全生产（1）加强施工现场安全管理，落实安全责任制。
（2）严格执行安全操作规程，确保施工安全。
（3）做好施工现场的应急救援工作。
（4）加强施工现场的消防安全管理。
3. 施工技术（1）根据地质条件，合理选择隧道施工方法。
（2）做好隧道施工的测量、监控工作。
（3）加强隧道施工过程中的质量控制。
（4）做好隧道施工过程中的环境保护工作。
4. 质量控制（1）严格按照设计要求进行施工。
（2）加强原材料、施工过程、施工质量等方面的检验。
（3）做好隧道施工过程中的质量事故处理。
（4）建立健全质量保证体系。
5. 通风与照明（1）根据隧道长度、地质条件等因素，合理设计通风系统。
（2）确保隧道施工过程中的照明充足、稳定。
（3）做好隧道施工过程中的通风与照明设备的维护保养。
四、实施与监督1. 施工单位要严格按照专项方案进行施工。
2. 监理单位要加强对施工过程的监督检查。
3. 施工单位要定期对专项方案进行总结和评估，及时发现问题并改进。
总之，隧道专项方案是确保隧道工程施工安全、优质、高效完成的重要依据。
医学微生物学实验综合性实验三
匀。琼脂完全凝固以后，37℃培养48小时。 ❖ 选择菌落数在30～300之间的平板作为菌落总
数测定标准。 ❖ 将计数得到的菌落数乘以稀释倍数得出
cfu/g(ml)。
医学微生物学实验 综合性实验三
❖ 空气细菌学检查结果分析
❖ 手指皮肤细菌学检查结果分析
空气的细菌学检查
组号
时间(min)
地点
菌落形成单位(CFU)
1
15
2
15
3
15
4
15
5
15
6
15
7
15
8
15
9
15
10
15
CFU /m3 ＝ 50,000N÷AT ≈86N(直径7cm平板）
N：平板上的菌落数
A：平板面积(38.5cm2)
Ⅲ级区
200～ 500
一般病房、治疗室、放射室、衣帽室、 按摩室、盥洗室、手术室浴室
我国公共场所空气卫生细菌学标准 （GB9663～9673-1996，GB16153-1996,平皿直径9cm）
撞击法 沉降法 cfu/m3 个/皿
适用范围
≤1000 ≤10 3～5星级宾馆、饭店
≤1500 ≤20 ≤2500 ≤30 ≤4000 ≤40 ≤7000 ≤75
❖ 形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等。
❖ 边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。
❖ 表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、 湿润或干燥。
❖ 溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不 透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。
生物技术综合实验
课程简介
现代生物技术综合性实验是以分子生物学为基础的基因克隆 重组技术和生物化学的蛋白质分离、纯化技术为核心的教学， 它是现代生物技术的核心。
主要内容：包括实验理论和实验技术 实验技术－生物技术综合实验，它是集目的基因的制备、克
隆、表达和蛋白质的分离纯化及其活性测定等实验方法和技 术为一体的一门综合性实验课。
chaotropic nature. As with other procedures involving RNA, gloves should be worn at all times to avoid cont
amination
of
samples
with
ribonucleases.
This method describes preparation from small quantities (~ 50mg) of tissue. Appropriate scaling of the volu mes involved can be performed to accomodate larger quantities.
目的：通过本门课程的学习，使学生掌握现代生物工程的上、
下游实验技术，对以基因克隆重组技术为主线的生物实验技
术有一个较全面的了解。
3
教学要求
通过教学，要求学生掌握分子生物学与基因工程的基本理论，巩固所学的理论知识； 使学生了解科研工作的基本思路，学会如何设计实验，如何分析实验，培养分析问题和
解决问题的能力； 培养和训练学生的基本实验技能，培养学生的独立工作能力和创造能力。 掌握基因重组的基本过程，如：核酸DNA、RNA和质粒DNA提取、酶切、连接、转化及
脱氧胆酸钠(DOC)是阴离子去污剂
综合性实验报告 质粒的提取及酶切
当迁移足够距离后，就可以通过Gelview染色来观察DNA片断
Gelview是一种荧光染料。它可以在做胶时混入其中在电泳时进行染色，也可以待电泳完成后将凝胶浸泡在稀释的Gelview溶液中进行染色。但必须将凝胶置于紫外透射仪中才可以对凝胶中的DNA或RNA进行观察。
To visualize DNA or RNA, the gel is placed on a ultraviolet transilluminator.
质粒是存在于几乎所有细菌中染色体之外的外状DNA分子。质粒通常携带有染色体上所不存在的基因，并表现出一些有用的性状，如抗生素抗性，耐受重金属等。质粒拥有自己的复制原点，因此可以不依赖于染色体而进行独立复制。一些小的质粒利用宿主细胞的酶进行复制，而较大的质粒则自身携有编码与复制有关的酶。
Agarose is typically used at concentrations of 0.5% to 2%.
The distance DNA has migrated in the gel can be judged by visually monitoring migration of the tracking dyes.
质粒分为：严紧型(低拷贝数)和松弛型(高拷贝数)。
质粒通常用作克隆载体，而碱裂解法是制备质粒DNA最为常用的方法之一。
本方法是依据共价闭合环状质粒DNA与染色体DNA在变性和复性之间存在差异进行的。
当细胞悬浮于NaOH和十二烷基酸钠(SDS)溶液中时，在高pH(碱)的作用下细胞发生裂解，此外，蛋白质和染色体DNA发生变性与细胞碎片一起沉淀下来。
The higher the agarose concentration, the "stiffer" the gel. Higher concentrations of agarose help in the separation of small DNAs, while low agarose concentrations allow resolution of larger DNAs.
微生物学实验综合实验设计题目
微生物学实验综合实验设计题目
1.从自然界筛选能产生蛋白酶和纤维素酶的嗜盐菌株，你讲如何完成，请写出实验方案。
1）什么是嗜盐菌。
2)样品来源：取自盐场或盐制品。
3)培养：培养基的选用
酸水解酪素5 g, 酵母膏12 g, 细菌蛋白胨6 g, 柠檬酸三钠3 g, KCl 3 g, MgSO4 。
7H2O 18 g, CaCl2 0.2 g, FeSO4 0.001 g, NaCl 70g, 海水1 000 mL, pH 值调至7.5, 121℃灭菌20m in.
4)分离方法：
菌株分离纯化培养：
株
产蛋白酶和纤维素酶的菌株筛选：
刚果红染色法和羧甲基纤维素酶活力法筛选
复筛，纯培养。
2.怎样确定自来水中的微生物是否符合城市饮用水的国家标准，写出详细试验方案。
1）城市饮用水国家标准
2007年7月1日，由国家标准委和卫生部联合发布的《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）强制性国家标准和13项生活饮用水卫生检验国家标准将正式实施。
微生物
总大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得检出
耐热大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得检出
大肠埃希氏菌（MPN/100mL或CFU/100mL）不得检出菌落总数（CFU/mL）100。
生物综合实践教学设计(3篇)
第1篇一、教学目标1. 知识目标：（1）掌握生物学实验的基本原理和操作技能。
（2）了解生物学实验的基本步骤和方法。
（3）熟悉生物学实验仪器的使用和维护。
2. 能力目标：（1）培养学生的观察能力、动手能力和分析解决问题的能力。
（2）提高学生的实验设计和实验操作能力。
（3）培养学生的团队协作精神和沟通能力。
3. 情感目标：（1）激发学生对生物学实验的兴趣和热情。
（2）培养学生的严谨科学态度和良好的实验习惯。
（3）增强学生的环保意识和责任感。
二、教学内容1. 实验一：观察植物细胞和动物细胞（1）目的：了解植物细胞和动物细胞的形态结构差异。
（2）内容：制作临时装片，观察植物细胞和动物细胞的形态、结构。
（3）步骤：取植物叶片、洋葱鳞片叶、动物口腔上皮细胞等材料，制作临时装片，使用显微镜观察。
2. 实验二：探究植物光合作用（1）目的：探究光合作用的基本条件和过程。
（2）内容：观察植物叶片在光照、二氧化碳、水分等条件下的光合作用。
（3）步骤：设置对照组和实验组，观察植物叶片在不同条件下的光合作用。
3. 实验三：观察微生物（1）目的：了解微生物的基本形态和培养方法。
（2）内容：培养和观察微生物，学习微生物的分离纯化方法。
（3）步骤：取土壤样品，进行微生物分离纯化，观察微生物的形态和培养特征。
4. 实验四：探究动物行为（1）目的：了解动物行为的基本类型和特点。
（2）内容：观察和记录动物的行为，分析动物行为的原因。
（3）步骤：选择动物，观察其行为，记录并分析行为特点。
5. 实验五：生态调查（1）目的：了解生态系统结构和功能，培养学生的生态调查能力。
（2）内容：选择校园内或周边生态环境，进行生态调查。
（3）步骤：分组进行生态调查，记录调查结果，分析生态环境状况。
三、教学方法1. 案例分析法：通过实际案例引导学生分析问题，提高学生的实践能力。
2. 实验探究法：通过实验操作，让学生亲身体验生物学实验过程，培养实验技能。
3. 小组合作法：让学生在小组内讨论、交流，培养学生的团队协作精神。
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扩增产物凝胶电泳
扩增片段通常用变性聚丙烯酰胺凝 胶电泳，根据扩增片段大小范围选 择应用4%一10%的凝胶电银染、荧 光测序仪等方法显示结果， 通过Gene-Scan, Gel-Compare 等软件进行数据分析。
DNA的提取（SDS法和CTAB法）
SDS是Sodium dodecyl sulfate的缩写称为 十二烷基磺酸钠， CTAB是Cetyl trimethyl ammonium bromide的缩写十六烷基三甲基溴化氨， 两种都是去污剂，它们都能破坏细胞膜 使膜蛋白变性沉淀，故而使核酸释放出 来，另外，它还能保护DNA不受内源核 酸酶的降解。
主要是因为生物具有多样性 ！！？？
生物的多样性主要包括四个层次即：遗 传多样性、物种多样性、生态系统多样 性和景观多样性。 而遗传多样性是其它多样性的基础，也 可以说，生物多样性归根到底就是遗传 多样性。 那么遗传多样性又是如何检测的呢？
（1）形态学标记 （2）细胞学标记 （3）生化标记 （4）分子标记
利用一套特别的引物在不需要知道DNA序列的情况下， 可在一次单个反应中检测到大量的片段。由于AFLP扩增 可使某一品种出现特定的DNA谱带，而在另一品种中可 能无此谱带产生，因此，这种通过引物诱导及DNA扩增 后得到的DNA多态性可作为一种分子标记。所以说AFLP 技术是一种新的且功能强大的DNA指纹技术。
连接
酶切后的DNA片段在T4 DNA连接酶作用 下与两种内切酶相应的特定接头相连接， 形成带接头的特异性片段。接头为双链， 由两部分组成，一部分是核心序列，一部 分是酶特定序列(能与酶切片段粘端互补)， 通常在酶特定序列中变换了一个内切酶识 别位点的碱基，保证了连接片段不能再被 酶切。只有遵循“引物扩增原则”设计的 接头才能得到满意的扩增结果。
预扩增(Pre-amplified)
扩增所用引物3′端有一个选择碱基，通过 预扩增对扩增模板进行初步筛选，一方面 可以避免直接扩增造成的指纹带型背景拖 尾现象，另一方面可以避免直接扩增由引 物3′端3个选择碱基误配形成的扩增产物。
选择性扩增(Elective amplified)
预扩增产物经稀释后进行选择性扩增，使 所需模板量不受限制。所用引物3′端有3个 选择碱基的延伸，通过3个选择碱基的变换 获得丰富的DNA片段。
AFLP（Amplidied Fragment Length Polymorphism）是1993年荷兰科学家Zbaeau和Vos 发展起来的一种检测DNA多态性的新方法。
基本原理是基因组DNA经两种限制性内切酶酶切，形 成分子量大小不等的随机限制性酶切片段，将特定的人 工合成的短的双链接头连在这些片段的两端，形成一些 带接头的特异片段，通过接头序列和PCR引物3ˊ端选择 性碱基的识别，对特异性片段进行预扩增和选择性扩增。 结果只有那些两端序列能与选择性碱基配对的限制性酶 切片段才能被扩增；最后将选择性扩增产物在高分辨率 的变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳，寻找多态性扩增片段。
（3）测序板处理的注意事项 a) 在单向擦玻璃板时不要过度用力,否则会带走过多粘合硅烷, 使凝胶不能很好地粘附； b) 一定要更换手套，防止粘染粘合硅烷,否则将导致凝胶撕裂；
c) 用过的凝胶可在水中浸泡后用剃须刀片或塑料刮刀刮去。玻 璃板须用去污剂完全清洗。或者凝胶用10% NaOH浸泡30～ 60min后除去；
如EcoRI引物和MseI引物(EXT用NNN表示，N表示任何碱基)
CORE EcoRI
ENZ
EXT NNN-3
5GACTGCGTAC AATTC C 5GATGAGTCCT GAG TAA
MseI
NNN-3
接头一般由二部分组成：核心序列和酶特异序列， 如EcoRI接头和MseI接头：
EcoRI-adapter: 5-CTCGTAGACTGCGTACC CATCTGACGCATGGTTAA-5 MseI-adapter:5-GACGATGAGTCCTGAG TACTCAGGACTCAT-5
AFLP反应对模板DNA浓度不是很敏感，在25ng甚至 25pg时，均可以观察到多态性带，但为了实验的准确性， DNA浓度不能太低，而且模板DNA最好纯一些，以防干扰实 验。
3
DNA扩增反应
AFLP扩增一般使用二对引物，扩增的条件依赖于 AFLP引物的选择性核苷酸的性质，扩增反应需经过几十 次循环。 当引物无或有一个选择性核苷酸时，AFLP只需20个循环， 每一次循环分为以下几步：94℃，DNA样品变性30秒， 56℃退火1分钟，72℃延伸1分钟。 当引物有2或3个选择性核苷酸时，AFLP反应是36个循环。 第1个循环是：94℃DNA变性30秒，65℃退火30秒，72℃ 延伸1分钟；第2到13个循环，DNA退火温度每次递减 0.7℃，其余步骤同第一个循环；第14～36循环，退火温 度是56℃，其余步骤同第一个循环 。
a.多态性高； b.共显性遗传，在二倍体的生 物中能区分纯合与杂合状态； c.在基因组中频繁出现，甚至 贯穿分布于整个基因组； d.选择中性； e.容易获得； f.容易操作，自动化程度高； g.重复性好； h.所得数据可在实验室之间交 流和比较
分子标记的历史：
第一代分子标记技术 RFLP （Restriction Fragment Length Polymorphism，限制性片段长度多态性） 第二代分子标记技术 RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA，随机扩增多态性DNA ） AFLP （Amplified Fragment Length Polymorphism， 扩增片断长度多态性） 事实上，还有很多分子标记技术像SSR、ISSR、 SRAP（相关序列扩增多态性）另外，还有现在号称 为第三代分子标记的SNP（ 单核苷酸多态性) 等
应用AFLP技术分析植物基因组
实验目的： 1、掌握植物基因组DNA的提取方法 2、了解AFLP的实验原理、操作过程及其应用
实验内容
1植物基因组DNA的提取
2 植物基因组DNA的AFLP操作及结果分析
实验背景：
我们都知道世界是多姿多彩的，可以说是 五彩斑斓，千姿百态，无奇不有！从生物 学角度来看，这到底是什么原因呢？
PCR扩增(PCR AMPLIFIED )
应用与接头相识别的引物进行扩增。AFLP引物由三部 分组成：（1）5′端的与人工接头序列互补的核心序列 (core sequence)（2）限制性内切酶特定识别序列 (enzyme-specific sequence) （3）3′端的带有选择性碱基 的粘性末端(selective extension)，其中AFLP接头的设计 (包括核心序列和酶特定序列)是关键之处，常用的多为 EcoRI和MseI接头，接头和与接头相邻的酶切片段的碱 基序列是引物的结合位点，合成的寡核苷酸接头经过 94℃变性，37℃退火，4℃保存备用；理论上每增加一 个选择性碱基，将只扩增限制性片段的1/4，而在两个 引物上都有三个选择性碱基的情况下，则仅获得1/4096 的片段；也就是说，只有那些两端序列能与选择碱基配 对的限制酶切片段被扩增。所以选择性碱基是选择用于 扩增的特定的限制性片段的一种精确而有效的方法；
实验材料： 小麦幼苗或菊花等其它材料 实验主要仪器： 水浴锅 PCR仪 高速离心机 电泳仪 DNA序列测定电泳槽 凝胶成像系统 移液器等
实验方法与过程
1 引物和接头(adapter)合成 引物和接头合成是AFLP技术中重要的步骤，引物 和接头的改进是AFLP较RAPD、PCR最主要的变革。 引物可通过DNA自动合成仪人工合成，AFLP引 物的设计主要由接头的设计决定，AFLP引物的一个 重要特征是所有引物起始于5′残基，5′端是与接头序 列相对应的。 引物主要由3部分组成：①核心序列(CORE)； ②酶特异序列(ENZ)；③选择性延伸序列(EXT)。
引物由三部分组成：与人工接头互补的核心碱基 序列、限制性内切酶识别序列、引物3’端的选择 碱基序列（1—10 bp）。接头与接头相邻的酶 切片段的几个碱基序列为结合位点。
AFLP的实验流程
模板制备 DNA的提取（SDS法和CTAB法） 酶切 连接 PCR扩增(PCR AMPLIFIED ) 预扩增(Pre-amplified) 选择性扩增(Elective amplified)
酶切
为了使酶切片段大小分布均匀，一般采用两个限制性内 切酶，一个用6个碱基识别位点的限制性内切酶(常用 EcoRI,、PstI或SacI )，另一个用4个碱基识别位点的限制 性内切酶(常用MseI 、TaqI)。采用双酶切的主要原因有： (1)多切点酶产生较小的DNA片段，而切数点较少的酶 能够减少扩增片段的数目，因为扩增片段主要是多切点 酶和切点数较少的酶组合产生的酶切片段，这样就可以 减少选择扩增时所需要的选择碱基数。(2) 双酶切可以 对扩增片段数进行灵活调节。(3)通过少数引物可产生许 多不同的引物组合，从而产生大量的不同的AFLP指纹。 这样，经过酶切后就形成了三种类型的酶切片段，如 EcoRI/MseI酶切形成EcoRI一EcoRI片段、EcoRI一MseI 片段、Mse工一MseI片段，由于AFLP技术革新成功的关 键在于DNA的充分酶切，所以对模板质量要求很高，要 注意避免其它DNA污染和抑制物质存在。
2 模板DNA制备 DNA提取,双酶切,接头连接 扩增反应中的模板DNA可以用基因组DNA也可以用cDNA。
首先，采用CTAB法提取植物基因组DNA，然后双酶切目 的DNA，如EcoRI/MseI两种酶。然后用T4 DNA连接酶，将 EcoRI和MseI接头与酶切片段连接起来，连接后，稀释10倍， -20℃贮存。则模板DNA可用于扩增反应。
4 制胶 测序凝胶板的制备 玻璃板的处理：银染测序的玻璃板一定要非常清洁。实验 过程中，先用温水和去污剂洗涤，再用去离子水冲洗玻璃 板，除去残留的去污剂，最后用乙醇清洗玻璃板。玻璃板 上遗留的去污剂微膜可能导致凝胶染色时背景偏高。每次 铺胶前均需分别严格处理长玻璃板和短玻璃板。