新合成蛋白标记-蛋白质组
标记亲和素生物素法
标记亲和素生物素法标记亲和素生物素法是一种常用的生物化学实验技术，用于研究蛋白质的相互作用。
本文将介绍亲和素生物素法的原理、应用和实验步骤。
一、原理亲和素生物素法基于生物素（biotin）与亲和素（avidin或streptavidin）之间的高度特异性结合。
生物素是一种水溶性维生素，与亲和素结合后形成稳定的复合物。
利用这种结合关系，可以将含有生物素的分子与亲和素结合，从而实现对目标分子的标记和纯化。
二、应用亲和素生物素法在生物科学研究中有广泛的应用。
其中一些主要应用包括：1. 蛋白质纯化：通过将含有生物素的标签蛋白与亲和素结合，可以实现对目标蛋白的高效纯化。
2. 免疫组化：生物素标记的抗体可以与细胞或组织中的特定抗原结合，从而实现对抗原的检测和定位。
3. 蛋白质相互作用研究：通过将目标蛋白与生物素标记的配体蛋白结合，可以研究蛋白质的相互作用和信号传导机制。
三、实验步骤亲和素生物素法的实验步骤主要包括以下几个方面：1. 标记生物素：将生物素与所需标记的分子（如蛋白质或核酸）进行化学反应，将生物素引入目标分子中。
2. 制备亲和素柱：将亲和素（如avidin或streptavidin）固定在柱子上，形成亲和素柱。
亲和素柱可以商购买或自行制备。
3. 样品处理：将标记了生物素的分子与亲和素柱接触，使其与亲和素结合。
4. 洗脱：通过改变溶液条件，如改变pH值或添加竞争性配体，使亲和素与目标分子解离，从而洗脱目标分子。
5. 分析和应用：将洗脱得到的目标分子用于后续实验或分析，如Western blot、质谱分析等。
四、实验注意事项在进行亲和素生物素法实验时，需要注意以下几点：1. 使用高纯度的生物素和亲和素，以确保实验结果的准确性。
2. 选择适当的洗脱条件，以实现目标分子的高效洗脱。
3. 控制实验中的非特异性结合，以减少背景信号。
4. 根据实验需要选择合适的生物素标记方法，如目标分子的标记位置和标记方式（N-末端、C-末端或内部标记）。
蛋氨酸合成 新和成 -回复
蛋氨酸合成新和成-回复蛋氨酸是一种必需氨基酸，被广泛用于食品、医药和化妆品行业。
而蛋氨酸合成，指的就是通过化学或生物技术方法合成蛋氨酸的过程。
在这篇文章中，我们将详细介绍蛋氨酸合成的步骤和常见的方法，并探讨一些相关的应用和前景。
蛋氨酸合成的第一步是选择和准备原料。
蛋氨酸的合成一般使用对半胱氨酸作为起始材料，因此需要从合适的原料中提取或合成对半胱氨酸。
对半胱氨酸的提取可以通过酵母或细菌发酵得到，而对半胱氨酸的合成则需要进行一系列的化学反应。
此外，还需要选择其他必要的试剂和催化剂，以保证反应的进行和产物的纯度。
在得到对半胱氨酸后，接下来的步骤就是将对半胱氨酸转化为蛋氨酸。
这一步通常使用还原剂，如亚硫酸氢钠或亚硫酸铵，将对半胱氨酸中的硫-硫键断裂，从而形成两个蛋氨酸分子。
这个过程中一般需要控制反应的温度和PH值，以确保高产率和高选择性。
蛋氨酸的合成还可以通过其他方法实现，比如利用细菌进行生物合成。
在这种方法中，通过改造细菌基因，使其具备合成蛋氨酸的能力。
这样一来，可以在大规模培养细菌的过程中，通过提供适当的培养基和环境条件，使细菌高效地合成蛋氨酸。
这种方法的优势是相对环保和快速，但需要对菌株进行基因改造和优化。
蛋氨酸合成的最后一步是对产物进行纯化和提纯。
由于蛋氨酸和对半胱氨酸的化学性质相似，所以在合成过程中可能会有一些杂质存在。
因此，需要使用适当的分离和纯化技术，如色谱和过滤等，将蛋氨酸与杂质分离开来，得到纯度较高的蛋氨酸产物。
蛋氨酸的合成不仅有广泛的工业应用，还在医药和化妆品领域有一定的前景。
蛋氨酸作为一种重要的氨基酸，对人体健康和美容具有重要的作用。
它可以用作蛋白质的合成和修复，在抗衰老和抗氧化方面也有独特的功能。
此外，蛋氨酸还可以用于治疗一些代谢性疾病，如不育症和某些代谢紊乱。
总之，蛋氨酸合成是一个复杂且多步骤的过程，需要选择合适的原料和试剂，并使用适当的催化剂和分离技术。
随着生物技术的不断发展，蛋氨酸的合成方法也将进一步改进和优化。
蛋白质的合成、转运、修饰
蛋⽩质的合成、转运、修饰蛋⽩质的合成蛋⽩质的种类是由基因决定的,也就是说⼈类基因组有多少个基因,⼈体就有多少种蛋⽩质,只是蛋⽩质表达的时期和部位不同.根据⼈类基因组计划分析得知：全部⼈类基因组约有2.91Gbp,约有39000多个基因；也就是说⼈体蛋⽩质的种类有39000多种蛋⽩质⽣物合成可分为五个阶段，氨基酸的活化、多肽链合成的起始、肽链的延长、肽链的终⽌和释放、蛋⽩质合成后的加⼯修饰⼀．氨基酸的活化分散在胞液中的各种氨基酸需经特异的氨基酰-tRNA合成酶催化，ATP供能，并需Mg2＋或Mn2＋参与在氨基酸的羧基上进⾏活化，⽣成中间复合物（）后者再与相应的tRNA作⽤，将氨基酰转移到tRNA分⼦的氨基酸臂上，即3′末端腺苷酸中核糖的3′（或2′）羟基以酯键相结合形成氨基酰-tRNA【氨基酰tRNA的⽣成】tRNA各种tRNA的⼀级结构互不相同，但它们的⼆级结构都呈三叶草形三叶草形结构的主要特征是:含有四个螺旋区、三个环和⼀个附加叉四个螺旋区构成四个臂，其中含有3′末端的螺旋区称为氨基酸臂，因为此臂的3′-末端都是C-C-A-OH序列，可与氨基酸连接三个环分别⽤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ表⽰环Ⅰ含有5，6⼆氢尿嘧啶，称为⼆氢尿嘧啶环（DHU环）环Ⅱ顶端含有由三个碱基组成的反密码⼦，称为反密码⼦环；反密码⼦可识别mRNA分⼦上的密码⼦，在蛋⽩质⽣物合成中起重要的翻译作⽤环Ⅲ含有胸苷（T）、假尿苷（ψ）、胞苷（C），称为假尿嘧啶环（TψC环）；此环可能与结合核糖体有关tRNA在⼆级结构的基础上进⼀步折叠成为倒“L”字母形的三级结构起始因⼦原核起始因⼦只有三种（IF1、IF2、IF3）真核起始因⼦(简称为eIF)种类多且复杂，已鉴定的真核起始因⼦共有12种延长因⼦原核⽣物（简称EF）由三部分组成：EF-Tu，EF-Ts，和EF-GEF-Tu它介导氨酰-tRNA进⼊核糖体的空位EF-Ts充当EF-Tu亚基的鸟嘌呤核苷酸交换因⼦,催化EF-Tu释放GDPEF-G催化tRNA的移位和多肽延伸的每个循环后期mRNA从核糖体上掉下来真核⽣物（简称eEF）真核⽣物中分为：eEF-1和eEF-2eEF-1有两个亚基，α和βγα相当于原核⽣物中的EF-Tu亚基，它介导氨酰-tRNA进⼊核糖体的空位Βγ相当于原核⽣物中EF-Ts，核苷酸交换因⼦α,催化GDP从α上释放eEF-2相当于原核⽣物的EF-G，催化tRNA的移位和多肽延伸的每个循环后期mRNA从核糖体上掉下来终⽌因⼦(释放因⼦)原核⽣物细胞的释放因⼦（简称RF）：识别终⽌密码⼦引起完整的肽链和核糖体从mRNA 上释放的蛋⽩质释放因⼦1（RF1）：能识别终⽌密码⼦UAA和UAG⽽终⽌蛋⽩质合成的细菌释放因⼦释放因⼦2（RF2）：能识别终⽌密码⼦UAA和UGA⽽终⽌蛋⽩质合成的细菌释放因⼦释放因⼦3（RF3)：与延长因⼦EF-G有关的细菌蛋⽩质合成终⽌因⼦当它终⽌蛋⽩质合成时，它使得因⼦RF1和RF2从核糖体上释放真核⽣物细胞只有⼀种终⽌因⼦（称为eRF）能识别所有的终⽌密码⼦因为它没有与GTP结合的位点，所以它不能帮助完成合成的多肽从P位点的tRNA的释放在真核⽣物内可能还存在能与eRF合作、帮组多肽从核糖体释放的蛋⽩质核糖体的活性部位单个核糖体上存在四个活性部位，在蛋⽩质合成中各有专⼀的识别作⽤1．A部位：氨基酸部位或受位：主要在⼤亚基上，是接受氨酰基-tRNA的部位2．P部位：肽基部位或供位：主要在⼩亚基上，是释放tRNA的部位3．肽基转移酶部位（肽合成酶），简称T因⼦：位于⼤亚基上，催化氨基酸间形成肽键，使肽链延长4．GTP酶部位：即转位酶（EF-G），简称G因⼦，对GTP具有活性，催化肽键从供体部位→受体部位核糖体上还有许多与起始因⼦、延长因⼦、释放因⼦以及各种酶相结合的位点核糖体的⼤⼩是以沉降系数S来表⽰，S数值越⼤、颗粒越⼤、分⼦量越⼤原核细胞与真核细胞核糖体的⼤⼩亚基是不同的⼆．核糖体循环（肽链合成）1.肽链启动阶段在蛋⽩质⽣物合成的启动阶段,核蛋⽩体的⼤、⼩亚基,mRNA与⼀种具有启动作⽤的氨基酸tRNA共同构成启动复合体。
TMT蛋白组学
TMT蛋白组学
TMT是一种化学标记技术，主要结合质谱应用于定量蛋白质组学的研究。
百泰派克生物科技提供基于质谱的TMT定量蛋白组学分析服务。
TMT蛋白组学
TMT蛋白组学，主要是指利用TMT技术对蛋白质组进行定量分析。
TMT(Tandem Mass Tags)技术是美国Thermo Fisher公司研发的一种化学标记技术，用于基于质谱（MS）的生物大分子（例如蛋白质、多肽和核酸）的定量和鉴定。
TMT属于被称为等压质量标签的试剂家族，它们提供了基于凝胶或抗体的定量方法的替代方法。
除了有助于蛋白质组定量分析外，TMT标签还可在RPLC-MS分析中提高某些高亲水性分析物（如磷酸肽）的检测灵敏度。
TMT蛋白组定量分析原理
TMT采用多个稳定同位素标签，特异性标记多肽的氨基基团后进行串联质谱分析，能够同时比较多达10种不同样本中蛋白质的相对含量。
TMT所有标签的化学结构均相同，由报告基团、平衡基团以及肽反应基团组成，但每个标签都包含在不同位置取代的同位素，因此报告基团和平衡集团在每个标签中具有不同的分子质量。
基团合并则具有相同的总分子量和结构，因此在色谱或电泳分离过程中，以及在单一MS模式下，用不同标签标记的分子是无法区分的。
在MS / MS模式下对标记分子进行片段化后，可从片段化离子获得序列信息，同时从标签的片段化可获取定量数据，从而实现蛋白组定量分析。
TMT蛋白组学。
细胞生物学第十三至十七章作业答案
第十三章细胞增殖及其调控1 什么是细胞周期？简述细胞周期各时相及其主要事件。
答：细胞周期: 是指连续分裂的细胞从一次有丝分裂结束后开始生长到下次有丝分裂终止所经历的全过程。
细胞周期各时相的生化事件：①G1期：DNA合成启动相关，开始合成细胞生长所需要的多种蛋白质、RNA、碳水化合物、脂等，但不合成DNA；②S期: 开始合成DNA和组蛋白；在真核细胞中新和成的DNA立即与组蛋白结合，组成核小体串珠结构；③G2期:主要大量合成ATP、RNA和蛋白质，包括微管蛋白和成熟促进因子等；④M期: 为细胞分裂期，一般包括前期，中期，后期，末期4个时期。
2 细胞通过什么机制将染色体排列到赤道板上？有何生物学意义？答：细胞将染色体排列到赤道板上的机制可以归纳为牵拉假说和外推假说。
①牵拉假说：染色体向赤道面方向运动，是由于动粒微管牵拉的结果。
动力微管越长，拉力越大，当来自两级的动粒微管拉力相等时，即着丝粒微管形成的张力处于动态平衡时，染色体即被稳定在赤道面上；②外推假说：染色体向赤道方向移动，是由于星体的排斥力将染色体外推的结果。
染色体距离中心体越近，星体对染色体的外推力越强，当来自两极的推力达到平衡时，推力驱动染色体移到并稳定在赤道板上。
染色体排列到赤道板上具有重要的生物学意义，染色体排列到赤道板后，Mad2和Bub1消失，才能启动细胞分裂后期，并为染色体成功分开并且平均分配向两极移动做准备。
3 细胞周期有哪些主要检验点？各起何作用？答：细胞周期有以下主要检验点：①G1/S期检验点：检验DNA是否损伤、能否启动DNA的复制，作用是仿制DNA损伤或是突变的细胞进入S期；②S期检验点：检验DNA复制是否完毕，DNA复制完毕才能进入G2期；③G2/M期检验点：DNA是否损伤、能否开始分裂、细胞是否长到合适大小、环境是否利于细胞分裂，作用是使得细胞有充足的时间将损伤的DNA得以修复；④中-后期检验点：纺锤体组装的检验，作用是抑制着丝点没有正确连接到纺锤体上的染色体，确保纺锤体正确组装。
蛋白质生物合成—翻译及翻译后过程
A
C
C
氨基酸臂
反密码环
氨基酸的活化
氨基酰-tRNA合成酶(aminoacyl-tRNA synthetase)
氨基酰-tRNA合成酶
氨基酸 + tRNA
氨基酰- tRNA
ATP
AMP＋PPi
氨基酸 ＋ATP-E → 氨基酰-AMP-E ＋ PPi 氨基酰-AMP-E ＋ tRNA→ 氨基酰-tRNA＋ AMP ＋ E
翻译中运输过程 （信号肽假说）
信号肽(Signal sequence) —能启动蛋白质运转的任何一 段多肽
使核蛋白体与内质网上的受体结合，合成的肽链进入 内质网内腔运至靶器官，信号肽酶切除信号肽，使成熟 的蛋白质释放至胞外
原核延长因子
生物功能
对应真核延长 因子
EF-Tu EF-Ts EFG
促进氨基酰-tRNA进入A位，结合 分解GTP
调节亚基
有转位酶活性，促进mRNA-肽酰tRNA由A位前移到P位，促进卸载 tRNA释放
EF-1-α EF-1-βγ
EF-2
（一）进位
又称注册(registration)
指根据mRNA下一 组遗传密码指导，使相 应氨基酰-tRNA进入核 蛋白体A位。
过氧化体蛋白 溶酶体蛋白
信号序列或成分 信号肽 信号肽，C端-Lys-Asp-Glu-Leu-COO-(KDEL序列) N端靶向序列（20～35氨基酸残基） 核定位序列（-Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val-， SV40 T抗原） -Ser-Lys-Leu-（PST序列） Man-6-P（甘露糖-6-磷酸）
原核生物mRNA的特点
S-D序列：原核生物mRNA起始密码AUG上游8~13核苷酸 处，存在一段5′-UAAGGAGG-3′的保守序列，称为S-D 序列。是mRNA与核蛋白体识别、结合的位点
细胞生物名词解释
细胞生物名词解释细胞生物名词解释A癌基因：是控制细胞生长增殖分化并具有诱导细胞恶性转化潜能的一类基因氨酰-tRNA:B被动运输：指不需要消耗细胞代谢的能量，将物质从浓度高的一侧经细胞膜转运至浓度低的一侧运输方式。
简单扩散，易化扩散，通道扩散半保留复制：在DNA复制时，两条链分开，然后按照碱基配对的方式合成新的子链，每个子链分子的双链DNA中一条链来自亲代DNA，另一条链是新和成的，这样组成新的DNA分子，这种复制方式称为半保留复制初级溶酶体：指高尔基复合体以出芽方式形成的小体，球形，内不含作用底物，但含多种水解酶，但酶无活性。
次级溶酶体：初级溶酶体与含底物的小泡融合而成的溶酶体，含水解酶和消化物，水解酶有活性。
分为自噬性和异噬性两种超微结构：在电镜下观察到直径小于0.2微米的细微结DNA的包装和构建、DNA复制、基因表达以及核内的一系列生物活动。
在细胞核内，纤维性蛋白组成的骨架结构核型：一个体细胞中全部的染色体，包括染色体数目大小形态特征核小体：染色体的基本结构单位，是由组蛋白和200个碱基对的DNA双螺旋组成的球形小体，其核心由四种组蛋白（H2A、H2B、H3、H4）各两分子共8分子组成的八聚体，核心的外面缠绕了1.75圈的DNA双螺旋，其进出端结合有H1组蛋白分子。
核仁组织区：由于核仁内染色质这一部分的常染色质含有合成rRNA的基因(Rdna)，是形成核仁的关键部位，所以又称核仁组织中心或核仁组织区核纤层：是位于内层核膜靠核质一侧的一层由纤维蛋白组成的纤维状网络结构。
它普遍存在于高等真核细胞间期细胞核中。
呼吸链（respiratory chain）是一组酶复合体，由许多递氢体和传电子体按照一定排列顺序组成的传递体系，分布并嵌在线粒体内膜上。
细胞生命活动作用重要的有机化合物。
包括蛋白质、核酸和酶等。
随体：指位于染色体末端的球形染色体节段，通过副缢痕区与染色体主体部分相连。
它是识别染色体的重要形态特征之一，带有随体的染色体称为sat-染色体四分体：同源染色体联会的结果是形成二价体，每个二价体都由两条同源染色体组成，这样一个二价体有4条染色单体，称为四分体。
分子生物学名词解释哦
1、SD序列shine-Dalgarnoa sequence：存在于原核生物mRNA起始密码上游7-12个核苷酸的富含嘌呤的保守片段，能与16SrRNA3’端富含嘧啶的区域进行反向互补，所以将mRNA 的AUG起始密码子置于核糖体的适合位置以便起始翻译作用。
2、分子伴侣：他是细胞中一类能够识别并结合到不完全折叠或装备的蛋白质上帮助这些多肽链正确折叠、转运或防止它们聚集的蛋白质。
3、简并性：由一种以上的密码子编码同一个氨基酸的现象，对应于同一个氨基酸的密码子称为同义密码子。
4、遗传密码：指mRNA上每三个核苷酸翻译成多肽链上的一个氨基酸，这三个核苷酸就称为一个密码子。
5、终止密码子：不代表任何氨基酸，任何tRNA分子都不能识别的，但可以被终止因子或释放因子并引起新和成多肽链从核糖体上释放的密码子。
UGA UAA UAG6、密码子偏爱性：指不同种属的生物对简并密码具有不同的使用频率。
7、非编码区：不编码目标蛋白质的mRNA序列。
8、蛋白质糖基化：一种翻译后修饰，是氨基酸侧链共价键修饰中的一种，包括O-糖基化：侧链通过GalNAc连接在蛋白质的Ser或The的羟基处；N-糖基化：糖链连接在蛋白质的天冬酰胺的氨基侧链处。
9、反密码子：tRNA分子的反密码子环上的三联体核苷酸残基序列。
10、密码子变偶性：处于密码子3’端的碱基和与之互补反密码子5’端的碱基之间的配对有一定的自由度。
如I可以和密码子上3’端的U C A配对。
这种现象称为密码子的变偶性。
11、开放阅读框：指一组连续的含有三联密码子的能被阅读翻译成多肽链序列的DNA序列。
由起始密码子开始，到终止密码子结束。
12、多聚核糖体：核糖体在细胞内并不是单独执行功能的，而是由多个甚至几十个核糖体串联在一条mRNA分子上高效的进行多肽链的合成，这种具有特殊功能与形态结构的核糖体与mRNA的聚合体称为多聚核糖体。
13、移码突变frame shift mutation：由于单个碱基或者非三的整倍数的碱基的插入或缺失一起的从突变位点整个可读框的改变，从而产生完全不一样的氨基酸序列。
蛋白质工程的基本原理蛋白质工程的研究与进展
蛋白质工程的基本原理蛋白质工程的研究与进展蛋白质工程的研究与进展摘要: 蛋白质是生命的体现者，离开了蛋白质，生命将不复存在。
蛋白质工程开创了按照人类意愿改造、创造符合人类需要的蛋白质的新时期。
它所取得的进展向人们展示出诱人的前景。
关键词:蛋白质工程；研究；进展；蛋白质工程汇集了当代分子生物学等学科的一些前沿领域的最新成就，它把核酸与蛋白质结合、蛋白质空间结构与生物功能结合起来研究。
蛋白质工程将蛋白质与酶的研究推进到崭新的时代，为蛋白质和酶在工业、农业和医药方面的应用开拓了诱人的前景。
1、蛋白质工程 1.1蛋白质工程的定义所谓蛋白质工程，就是利用基因工程手段，包括基因的定点突变和基因表达对蛋白质进行改造，以期获得性质和功能更加完善的蛋白质分子。
1.2蛋白质工程的由来蛋白质工程是在基因工程冲击下应运而生的。
基因工程的研究与开发是以遗传基因，即脱氧核糖核酸为内容的。
这种生物大分子的研究与开发诱发了另一个生物大分子蛋白质的研究与开发。
这就是蛋白质工程的由来。
它是以蛋白质的结构及其功能为基础，通过基因修饰和基因合成对现存蛋白质加以改造，组建成新型蛋白质的现代生物技术。
这种新型蛋白质必须是更符合人类的需要。
因此，有学者称，蛋白质工程是第二代基因工程。
其基本实施目标是运用基因工程的ＤＮＡ重组技术，将克隆后的基因编码加以改造，或者人工组装成新的基因，再将上述基因通过载体引入挑选的宿主系统内进行表达，从而产生符合人类设计需要的“突变型”蛋白质分子。
这种蛋白质分子只有表达了人类需要的性状，才算是实现了蛋白质工程的目标。
1.3蛋白质工程的原理由于基因工程的发展，人们已经可以运用基因重组等理论和方法去设计并制造出预想的各种性能的蛋白质。
这种改变蛋白质的操作可以在蛋白质水平上，也可以在基因水平上。
如基因水平的改变，是在功能基因开发的基础上，对编码蛋白质的基因进行改造，小到可改变一个核苷酸，大到可以加入或消除某一结构的编码序列。
人教版化学 九年级下册 121人类重要的营养物质 知识点讲义
知识点讲义——第十二单元化学与生活课题1 人类重要的营养物质知识点1 食物中的营养素食物中的营养素人类为了维持生命和健康，必须摄取食物。
粮食、蔬菜、水果、肉类、豆制品等食物从营养角度看，基本成分只有六种，分别是：蛋白质、糖类、脂质、维生素、无机盐（也称矿物质）和水，它们通常被称为六大基本营养素。
知识点2 蛋白质（重点）1.蛋白质的生理作用蛋白质是生命的基础物质，没有蛋白质就没有生命。
它与生命及各种形式的生活动紧密联系在一起，机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与，它是构成细胞的基本物质，是机体生长和修补受损组织的主要营养物质。
2.蛋白质的分布动物肌肉、皮肤、毛发、蹄、角等的主要成分都是蛋白质，许多植物（如大豆、花生）的种子里也含有丰富的蛋白质，因此，人类可从肉类、牛奶、蛋、大豆制品、鱼等食品中获得蛋白质。
3. 蛋白质的组成和结构蛋白质是一类在组成和结构上比糖类和油脂更为复杂的有机物，主要含碳、氢、氧、氮元素，还可能含有少量的硫、磷、锌、铁和铜等元素，其相对分子质量从几万到几百万不等。
4．蛋白质对人的生命活动的重要意义蛋白质是生命的基础物质，蛋白质也是备用能量的来源，每克蛋白质完全氧化放出约18KJ的能量。
成人每天摄入60 ~ 70g蛋白质，处于生长发育时期的青少年需要的会更多些。
如果蛋白质摄入量不足，会使人生长发育迟缓、体重减轻、发生贫血等。
5．蛋白质在人体内的转化食物中的蛋白质进入人体后，在蛋白酶和水的作用下，逐步分解成可被人体吸收的氨基酸。
其中一部分氨基酸在人体内重新组合成肌肉、皮肤、毛发、血液和激素等，另一部分氨基酸可被氧化，生成二氧化碳、尿素和水等排出体外，同时放出能量供人体活动的需要。
（1）蛋白质的水解蛋白质被人体摄入后，在肠胃内被水解成氨基酸。
再通过血液循环到全身各处，被细胞进一步利用。
（2）蛋白质的转化氨基酸被小肠壁吸收后，再通过血液循环到全身各组织细胞处，被进一步利用。
细胞生物学名词解释
细胞生物学名词解释细胞生物学研究方法1.冰冻蚀刻技术：将样品快速低温冷冻，在低温下进行断裂，然后用金属和碳喷镀，再用消化液把样品本身消化掉，收集复型膜于载网上进行电镜观察，常用于研究生物膜。
2.荧光漂白恢复技术：用高能激光束照射，使特定区域的荧光发生不可逆的淬灭，经过一段时间后，光漂白区域的荧光逐渐恢复到初始状态。
3.负染色：用重金属盐对电镜样品进行染色的技术，使得重金属盐沉积在样品周围，而样品不被染色，从而衬托出样品的精细结构。
细胞质膜1.血影（blood ghost）：红细胞经低渗处理后质膜破裂，释放出血红蛋白和胞内其他可溶性蛋白，这时红细胞仍保持原来的形状和大小，这样的结构成为红细胞影，简称血影。
2.“成斑”“成帽”现象：是监测细胞膜流动性的一种技术。
当荧光抗体标记细胞的时间达到一定长度，已均匀分布在细胞表面的标记荧光会重新分布，聚集在细胞表面的某些部位，称为“成斑”现象，进而聚集在细胞的一端，称为“成帽”现象3.脂质体：是根据磷脂分子在水相中形成稳定的双层脂分子球的趋势而制备的人工膜。
4.流动镶嵌模型：细胞膜由流动的双脂层和嵌在其中的蛋白质组成。
磷脂分子以疏水性尾部相对，极性头部朝向水相组成生物膜骨架；蛋白质或嵌在双脂层表面，或嵌在其内部，或横跨整个双脂层，表现出分布的不对称性。
物质的跨膜运输1.主动运输：一种需要消耗能量的物质跨膜运输过程。
被运输的物质与跨膜载体蛋白结合，通过载体蛋白构象改变，从而将底物逆着电化学梯度转运到膜的另一侧。
2.钙泵：在肌细胞的肌质网膜上含量丰富的跨膜转运蛋白，属于P型离子泵，利用A TP水解释放的能量将Ca2+从细胞质基质泵到肌质网内。
每消耗1个A TP，从细胞质基质泵出2个Ca2+。
3.Na+-K+泵：即Na+-K+A TPase，是镶嵌在细胞膜中具有A TP酶活性的主动转运Na＋、K＋的蛋白质。
由2个α亚基和2个γ亚基组成，β亚基不能直接参与离子跨膜运动，但帮助新合成的α亚基进行折叠。
蛋白组学tmt
蛋白组学tmt
蛋白组学TMT是一种高通量的蛋白质组学技术，可以用于研究蛋白质组的组成、结构和功能。
TMT是Tandem Mass Tag的缩写，意为串联质谱标记。
该技术通过将不同样品中的蛋白质分别标记上不同的TMT标记，然后将这些样品混合在一起进行质谱分析，从而实现对不同样品中蛋白质的定量和鉴定。
蛋白组学TMT技术的优点在于高通量、高灵敏度和高精度。
它可以同时分析多个样品，大大提高了研究效率。
此外，TMT标记可以在质谱分析中提供高精度的定量信息，使得研究人员可以准确地测量不同样品中蛋白质的表达水平。
这种技术还可以用于研究蛋白质的修饰和亚细胞定位，从而更深入地了解蛋白质的功能和调控机制。
蛋白组学TMT技术的应用非常广泛。
它可以用于研究各种生物体系，包括人类、动物、植物和微生物等。
在医学研究中，TMT技术可以用于研究疾病的发病机制和诊断标志物的筛选。
在生物工程和生物制药领域，TMT技术可以用于研究蛋白质的表达和纯化，从而提高生产效率和产品质量。
此外，TMT技术还可以用于研究环境污染和食品安全等问题。
总之，蛋白组学TMT技术是一种非常有前景的蛋白质组学技术，可以
用于研究各种生物体系和解决各种生物学问题。
随着技术的不断发展和完善，相信它将在未来的生物学研究中发挥越来越重要的作用。
蛋白质工程
精选ppt
1
一、蛋白质工程崛起的缘由
例如：
满足人类生产 和生活的需要
干扰素（半胱氨酸） 改造 干扰素（丝氨酸）
体外很难保存
体外可以保存半年
玉米中赖氨酸含量比较低
天冬氨酸激酶 （352位的苏氨酸）
玉米中赖氨酸含量可提高数倍
改造
天冬氨酸激酶（异亮氨酸）
二氢吡啶二羧酸合成酶 （104位的天冬酰胺）
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一、 初级改造
➢通过基因突变方法，以达到改变氨基酸进而改造蛋白 质的目的。 ➢目前，主要采用的基因突变方法：
基因定位突变 盒式突变。
精选ppt
15
➢基因定位突变
根据三联体密码，编码DNA（目的基因）的确定位点， 改变其组成核苷酸的顺序或种类，使基因发生定向变 异，使其控制合成的氨基酸种类、顺序发生改变，合 成出具有预期氨基酸序列的修饰蛋白质。
①延长酶的半衰期；
②提高酶的热稳定性；
③延长药选ppt
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一、 消除酶的被抑制特性
➢1985年，美国的埃斯特尔借助寡核苷酸介导的定位 突变技术，用19种其他氨基酸分别替代枯草芽孢杆菌 蛋白酶分子第222位残基上易氧化的Met，获得了一系 列活性差异很大的突变酶。发现除了用Cys代替Met的 突变体以外，其他突变体的酶活性都降低了。
精选ppt
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六、修饰酶的催化特异性
➢利用定点突变技术葡萄糖淀粉酶的催化特性。如将 活性中心的GLu、Asp被Gln、Asn取代时，突变体酶分 解α-1，4糖苷键和α-1，4糖苷键的活性比例发生明 显改变
七、修饰Nisin的生物防腐效应 ➢ Nisin是乳酸球菌分泌的有较强抗菌作用的小分子 肽，可用于罐头食品、乳制品、肉制品的保藏 ➢Nisin由34个氨基酸残基构成
动物遗传学复习资料
第一章绪论1.遗传学：研究动物遗传与变异及其规律的一门学科。
2.在遗传学建立与发展领域起到重大作用的人物与代表作、年代达尔文《物种起源》 1859孟德尔《植物杂交论文》 1866摩尔根《基因论》 1910Watson和crick DNA的双螺旋结构 1953第二章遗传物质的基础1.DNA作为遗传物质的直接证据（1）肺炎双球菌的转化实验（2）噬菌体的侵染实验(3)烟草花叶病毒的重建实验（RNA为遗传物质的证据）2.作为遗传物质的几个条件●精确复制，确保遗传的世代遗传●储备，传递信息的潜在能力●时间，空间的稳定性●能够变异3.DNA的一级结构：4种核苷酸的排列顺序二级结构：双螺旋直径是2nm 螺距3.4nm4.基因：是有功能的DNA片段，含有合成有功能的蛋白质多肽链或RNA所必需的全部核苷酸序列，是遗传物质的结构和功能单位。
5.外显子：把断裂基因中的编码序列叫为外显子6.内含子：把断裂基因中的非编码区叫为内含子7.启动子：准确而有效的起始基因转录所特需的核苷酸序列8.C值矛盾：C值得大小与物种的结构组成和功能的复杂性没有严格的对应关系的现象。
9.基因组：一个物种单倍体染色体所携带的一整套基因。
10.染色质由核酸和蛋白质组成（或者为DNA RNA 和蛋白质）11.染色质的分类与区别12.端粒：染色体末端的特化结构。
功能：防止染色体末端被酶酶切；防止染色体末端与其他粘连；防止染色体在DNA复制时保持完整。
13.染色体的几个参数：●臂比●着丝粒指数●相对长度14着丝点位置：中着丝粒染色体；近着丝粒染色体；近中着丝粒染色体；端着丝粒染色体。
15.同源染色体：在体细胞中成对存在的染色体中有一对来自父方一对来自母方，大小相同、结构形状功能相似的一对染色体。
16联会：同源染色体彼此靠拢并精确配对的过程。
14.染色体的核型分析：根据各个细胞中染色体的长度、大小、着丝粒位置，随体有无等因素把他们排列起来研究的过程。
●染色体异常引起的遗传疾病●动物育种，鉴定远缘杂交●研究物种间的亲缘关系，物种进化机制●追踪鉴别外源染色体或染色体片段18.有丝分裂与减数分裂的区别19.第一次减数分裂前期的五期：细线期；偶线期；粗线期；双线期；终变期第三章遗传物质的基础1.DNA的复制：以亲代DNA为模板合成一个新的与亲代相同的子代DNA的过程2.半保留复制：一个双链DNA分子合成一个双链子代DNA分子，一条是新和成的一条是原来的。
病理生理学精编名词解释
水、电解质代谢紊乱Dehydration脱水：体内体液总量明显减少，任何类型的脱水均有水和盐的丢失。
Dehydration fever脱水热：严重高渗性脱水患者，尤其是小儿，由于从皮肤蒸发的水分减少，散热受到影响，体温升高，称为--。
Hypertonic dehydration高渗性脱水：因患者失水多于失钠，细胞外液Na+浓度增高，使细胞外液呈高渗状态的脱水类型。
Hypotonic dehydration低渗性脱水：因患者失钠多于失水，细胞外液Na+浓度降低，使细胞外液呈低渗状态的脱水类型。
Isotonic dehydration等渗性脱水：患者水和钠等比例丢失，丢失大量等渗液体后短时间内，细胞外液的Na+浓度和渗透压无明显变化。
Acute serious hyperkalema急性高度高钾血症：在短时间内血钾浓度超过7.0mmol/l，最严重的影响是抑制心肌收缩和骨骼肌迟缓性麻痹。
酸碱平衡紊乱Acid-base disturbance酸碱平衡紊乱：人体通过完善的调节功能使体液的PH值维持在7.35-7.45之间，当机体酸碱物质增多并超多机体调节能力或调节功能障碍时，引起ph偏离7.35-7.45的范围称为酸碱平衡紊乱，或机体通过代偿调节维持正常PH范围，但血浆中相应的酸碱物质（HCO3-和H2CO3）偏离正常范围。
Fixed acid固定酸：不能变成气体由肺呼出，只能通过肾由尿排出的酸性物质。
Partial pressure of carbon dioxide in arterial blood动脉血二氧化碳分压：动脉血中以物理溶解在血浆中的二氧化碳分子运动产生的张力。
Base excess,BE碱剩余：在标准条件下（即38度1个大气压，所测标本用PaCO2为40mmHg 的气体平衡）用酸碱定全血标本至PH7.40所需的酸或碱量。
若用酸滴定，使血液PH值达7.40，则表示所测定血液的碱过多，称为碱剩余，反之为碱丢失。
细胞生物学简答题归纳
简答题及知识点归纳第一章1.简述细胞生物学创立的几个重要时期：①细胞学创立时期(1665~1875)：以形态描述为主的生物科学时期②细胞学经典时期(1875~1900)：在显微镜下的形态描述——对细胞认识的鼎盛时期。
③实验细胞学时期(1900~20世纪中叶)：细胞与各门学科的交融与汇合④亚显微结构和分子水平的细胞生物学时期(20世纪中叶至今)—-Vr.第二章2.为什么说细胞是生物活动的基本单位：①是构成有机体的基本单位②是代谢与功能的基本单位③是有机生长发育的基础④是遗传的基本单位，具有发育的全能性。
⑤没有细胞就没有完整的生命3.细胞的共同结构：①具有生物膜结构②具有DNA和RNA两种核酸③具有蛋白质合成机器④具有细胞质基质4.细胞的共同特点：①细胞有共同的结构②细胞能够自我复制③细胞具有应激性④细胞的高度复杂性⑤细胞的自我调控能力⑥细胞获得并利用能量5.原核细胞的特点：①体积较小，结构简单②由细胞膜包绕③胞质内含有拟核④唯一的细胞器是核糖体⑤质膜外有坚韧的细胞壁6.水的存在方式：①结合水②游离水水的功能：①在细胞中及时反应物也是溶剂②调节温度③参加酶反应④参与物质代谢⑤质膜外有坚韧的细胞壁。
7.无机盐的作用：①维持细胞内酸碱平衡和调节渗透压，保障细胞正常生命活动②与蛋白质结合成具有特定功能的结合蛋白，参与细胞的生命活动。
③作为酶反应的辅助因子8.四大类有机物：多糖；磷脂；蛋白质；核酸9.糖类分子的组成形式：寡糖；单糖；二糖；多糖10.脂类物质的分类及作用：①脂肪酸：营养和构成细胞的结构②中性脂肪（如甘油三酯）：能源物质/蜡③磷脂:分为甘油磷脂和鞘磷脂两大类，是构成生物膜的基本成分，是许多代谢途径的参与者④糖脂：是构成细胞膜的成分，与细胞的识别和表面抗原性有关⑤萜类和类固醇类：胆固醇是构成细胞膜的成分11.钠钾泵工作原理：①刺激ATP水解，蛋白质结构改变②Na+由内到外（Na+外流）③K+结合位点朝向细胞表面，去磷酸化导致蛋白质构型再次变化④K+由外到内（K+内流）⑤蛋白质构型恢复原状第四章12.细胞膜的功能：①包围细胞，是细胞与外界环境的界限②选择性的物质运输（代谢底物的输入与代谢产物的排除）③提供细胞识别位点，并完成细胞内外信息的跨膜传递④为多种没提供结合位点，是没出反应高效而有序的进行⑤介导细胞与细胞，细胞与基质之间的连接。
蛋氨酸合成 新和成
蛋氨酸合成新和成蛋氨酸是一种非必需氨基酸，在动物体内主要由精氨酸合成而来。
下面是有关蛋氨酸合成的参考内容:1. 蛋氨酸在机体内的合成途径蛋氨酸的合成途径主要包括两个步骤，首先是精氨酸的合成，然后是将精氨酸转化为蛋氨酸。
精氨酸是由琥珀酸和谷氨酰胺结合而成的。
精氨酸转化为蛋氨酸涉及到一系列酶的作用，包括精氨酸脱羧酶和精氨酸转氨酶等。
2. 精氨酸脱羧酶在蛋氨酸合成中的作用精氨酸脱羧酶是一个重要的酶，在蛋氨酸的合成中起着关键的作用。
该酶能够将精氨酸分解为脱氨的丙酮酸和一分子的氨。
精氨酸脱羧酶的活性受到多种因素的调控，包括基因表达水平、底物浓度和细胞内环境的调节。
3. 精氨酸转氨酶在蛋氨酸合成中的作用精氨酸转氨酶是另一个重要的酶，在蛋氨酸合成途径中起到催化精氨酸转化为蛋氨酸的作用。
精氨酸转氨酶将精氨酸与α-酮戊二酸反应，产生蛋氨酸和谷氨酸。
该反应是可逆的，可以根据需要在合成和降解之间进行调节。
4. 蛋氨酸的生物学功能蛋氨酸在生物体内发挥着多种重要的生理功能。
首先，蛋氨酸是蛋白质合成的必需物质，参与构建和修复组织。
其次，蛋氨酸还是许多重要物质的前体，包括多种生理活性物质如肾上腺素、甲状腺激素和肌酸等。
此外，蛋氨酸还参与到胆固醇代谢和甲硫氨酸合成等重要的代谢过程中。
5. 蛋氨酸的摄入和合成蛋氨酸可通过饮食中的富含蛋氨酸的食物来摄入，如肉类、奶制品和大豆制品等。
此外，人体内部还可以通过精氨酸的合成来产生蛋氨酸。
然而，一些特定的生理条件，如婴儿期、怀孕和某些疾病状态下，需要额外补充蛋氨酸。
6. 影响蛋氨酸合成的因素蛋氨酸合成受到多种因素的影响。
首先，蛋氨酸合成途径中所需的酶的活性和基因表达水平对合成速率有很大影响。
此外，底物供应和节点酶的调节也会对蛋氨酸的合成起到重要作用。
营养和环境因素也可能影响蛋氨酸合成，例如摄入不充足的精氨酸和维生素B6等会限制蛋氨酸的合成。
蛋氨酸合成是机体中重要的代谢途径之一，对于维持正常的生理功能至关重要。
纯化重组人血清白蛋白的融合蛋白的方法
纯化重组人血清白蛋白的融合蛋白的方法
纯化重组人血清白蛋白的融合蛋白的方法可以通过以下步骤进行：
1. 培养表达重组人血清白蛋白融合蛋白的宿主细胞，如大肠杆菌（E. coli）。
2. 收集宿主细胞培养物，离心去除细胞残渣。
可以使用低速离心去除大部分细胞，然后使用高速离心去除细胞碎片和聚集物。
3. 使用亲和层析技术来富集含有融合蛋白的物质。
可以利用融合蛋白自身或融合标签（如His标签）与亲和基质（如镍柱或GST柱）的亲和作用进行捕获。
4. 进行洗脱步骤，以去除非特异性结合物质和杂质。
可以使用不同的洗脱缓冲液来控制洗脱条件，如改变pH值、离子强度等。
5. 对洗脱的样品进行浓缩和纯化，可以使用浓缩装置或者离子交换层析柱等纯化方法。
6. 最后使用适当的缓冲液将纯化的融合蛋白调整至所需的浓度和条件。
这些步骤可以根据具体实验室条件和融合蛋白的特性进行相应的调整和优化。
蛋氨酸合成 新和成
蛋氨酸合成新和成蛋氨酸合成是指通过化学反应和生物合成的方式合成蛋氨酸（D-Aspartic Acid，简称DAA）。
蛋氨酸是一种天然产生的氨基酸，它在生物体内起着重要的生理作用。
它存在于多种生物体中，包括人类、动物和植物。
蛋氨酸合成是一项重要的科学研究领域，对于了解蛋氨酸的生理功能和开发蛋氨酸相关的药物具有重要意义。
蛋氨酸的合成方法有多种途径。
其中一种主要方法是通过化学反应合成。
化学反应合成蛋氨酸主要是通过将L-门冬氨酸（L-Aspartic Acid）经过酸碱处理后，经过一系列反应得到蛋氨酸产物。
这种化学方法合成的蛋氨酸具有较高的纯度，适用于一些科学研究和实验室研究。
另一种重要的蛋氨酸合成方法是通过生物合成。
生物合成是指利用生物体内的酶和代谢途径合成所需的物质。
对于蛋氨酸的生物合成，主要是通过菌类和植物体内的代谢途径来完成。
菌类比如泛菌属（Panus）、脱麦角酸镰刀菌（B. extensum）等，以及一些植物比如白花鲜毛花（E. cruciata）等都被发现可以合成蛋氨酸。
通过对这些生物体的研究，可以了解到蛋氨酸的生物合成路线，进而可以尝试利用基因工程等方法增强蛋氨酸合成能力。
蛋氨酸合成的研究不仅有助于了解蛋氨酸的合成途径，还有助于深入研究蛋氨酸的生理功能和作用机制。
蛋氨酸作为一种天然产生的氨基酸，在生物体中参与了多种重要的生理过程。
它在神经系统中起着重要的传递物质的作用，对于神经递质的合成和释放具有重要的影响。
此外，蛋氨酸还参与了蛋白质合成、细胞增殖和免疫应答等多个生物学过程。
通过研究蛋氨酸的合成和功能，可以为开发蛋氨酸相关的药物提供理论指导和技术支持。
近年来，蛋氨酸的合成及其生理功能的研究得到了广泛关注。
研究人员在蛋氨酸的研究中发现了许多新的生理功能和配体受体。
例如，某些研究表明蛋氨酸可以调节乳腺癌的发生和转移，对于乳腺癌的治疗具有潜在的价值。
此外，蛋氨酸还与一些代谢性疾病如糖尿病和肥胖等有关，对于这些疾病的治疗可能也具有一定的作用。
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BONCAT (bioorthogonal noncanonical amino acid tagging)
azidohomoalanine (AHA, 1)
Substrates are newly synthesized proteins BONCAT is based on introduction of AHA AHA is acepted by tRNA synthetase AHA incorporation is unbiased incorporation of AHA enables chemoselective tagging with an alkyne affinity tag
Relative abundance of newly synthesized proteins.
66 proteins >2 92 proteins ~1.5-2 186 proteins <1.5
COFRADIC has several advantages
it utilizes standard chromatographic techniques and chemicals
David Tirrell’s group
Growth rate and viability of cell cultured in AHA
methionine auxotrophic E. coli strain
M9+19aa+Met OD=1.0, wash
M9+19aa+Met M9+19aa+AHA
Quantitation of newly synthesized proteins induced by heat shock
M9+19aa+Met 37oC M9+19aa+Met
A labeling time of 15 mins
ห้องสมุดไป่ตู้AHA A 37oC B
Protein extraction, digestion
iTRAQ reporter
114
115
AHA A 44oC B
116
117
1:1:1:1 ICAT cation exchange cartridge
First run on RP-HPLC TCEP treatment O/N Second run on RP-HPLC On diagonal fraction were discarded, off diagonal fraction were pooled
diaminobutyrate (DAB) residue
Homoserine (HS) residue
Tandem-MS spectra of a peptide observed in two forms.
Proposed TCEP-induced reaction scheme
Venn diagram’s of proteins identified in this and other studies.
it provides a simple and robust approach to enrichment of
labeled peptides.
Thank you
Growth rate, protein synthesis and viability in the present
of AHA and methinonine is the same during the first 30 min.
After prolonged labeling growth arrest does occur
cell viability, Growth curve
Growth rate and viability of cell cultured in AHA
Number of colony forming units per OD600 per ml of culture over time
Growth of E. coli strain MTD123 on a range of concentrations of AHA
The principle of the COFRADIC approach
Chromatographic separation of enriched labeled peptides isolated by COFRADIC.
Extracted ion chromatogram of a peptide identified in two forms
to achieve separation of labeled from unlabeled peptides.
it provides chromatographic fractionation as well as
enrichment of labeled peptides, thereby facilitating mass spectrometric identification.