实验二 红曲发酵

3、摊凉接种
4、固态发酵
32～33 ℃保温保湿培养。每天翻曲一次，观察到曲粒 表面略有干皮、少数曲粒略有微红斑点等现象时即可 “吃水”, 使曲粒吸收一定水分, 以利菌丝逐渐向内 生长。
5、红曲色素提取： 1）取 200g 固体发酵之红曲, 在植物粉碎机中将其粉 碎； 2）将红曲粉放于 500mL 三角瓶中, 加入提取液(丙 酮 : 水 =80:20)300mL； 3）室温下浸提 1 天, 每隔 2 小时摇动一次, 过滤； 4）沉淀用同样提取液洗涤 2 次, 每次 100ml, 合并 滤液； 5）在旋转蒸发仪中减压蒸去丙酮( 尚有水分 )； 6）用 l mol/L HCl 调残留液(约 l00mL)的pH至3.0, 加至分液漏斗中； 7）用 150mL 醋酸乙酯分次抽提；
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实验过程
1、察氏液体种子培养 配制制液体培养基。500mL 三角瓶中装液体培养基 150mL, 包扎后 0.1MPa 灭菌 20 分钟；液体培养基灭 菌冷却后 , 每瓶中接入 1/4 支红曲斜面菌苔 ( 注意 无菌操作 )；接种后置30℃恒温摇床中 180 rpm 摇瓶 培养 3天。 2、固体培养基制备及接种 1）浸米 :25 ℃以上浸米 5—8h, 大米吸收水分约在 28%～30% 。 2）蒸米: 将浸好的米用清水淋去米浆水, 沥干, 即可蒸米。 上汽火力要强, 待全部圆气以后，蒸煮3～5min, 出饭率在 135%, 饭粒呈玉色, 粒粒疏松, 不结团块。蒸米不能熟透。
思考题


1．比较固态发酵与液体发酵的优缺点，并指出固 体发酵的应用范围。 2．萃取后米粒中仍带有红色, 是否会对结果产生 影响?
参数测定
红曲色价测定（每天测一次，绘制色价曲线） 1）称取红曲米样品 0.5g, 放入带有刻度的 lO mL 具塞 试管中； 2）加入 80%的乙醇 8 mL, 摇匀, 60℃水浴保温萃取 0.5h； 3）取出冷却, 用普通定性滤纸过滤入lO mL 量筒中, 用 80% 乙醇洗涤残渣 2 次, 合并滤液, 并用 80% 乙醇定容 至10mL； 4）以 80% 乙醇作对照, 在 505nm 波长下, 用 lcm 比色 皿测定样品的吸光度。 5）计算: 红曲色价(以lg样品计)=A505×lO×2 注意：发酵后期, 若红色素产生量多, 可稀释后测定。


2、红曲的主要成分及作用 1）红曲色素：黄色素、橙色素和紫红色素 2）活性酶 3）洛伐他汀等 4）抑菌物质：桔霉素(Citrinin)等
实验原理
3）红曲霉菌 红曲菌是腐生真菌，生长的最适pH为3.5-5， 能耐pH3.5，尤嗜乳酸。 生长温度为26-42℃，最适温度为32-35℃；能 耐10%乙醇。 能合成生物素、泛酸、尼克酸硫胺素、核黄素 等。还能产生色素、乙醇、琥珀酸及少量乳酸、 醋酸等。红曲菌的液化型α-淀粉酶的活性弱， 而糖化型β-淀粉酶的活性较强，故可用来生 产红色麦芽糖。红曲菌的蛋白酶的活性较高。
优质的成熟稻米Premium Grown Rice
第一次杀菌 1st Sterilization
植入菌种 Inoculation 固态发酵 Solid State Fermentation 二次杀菌过程2nd Sterilization 干燥 Drying 研磨 Grinding 置入红曲霉菌
实验原理
实验材料及培养条件
1、菌种：红曲霉菌 2、培养基（液体）
蔗糖 3%，(NH4)2SO4 0.3%，K2HPO4 0.1%,KCL 0.05%,MgSO4 0.05%，FeSO4 0.001%，酵母浸粉 0.5%，PH 自然
3、固体发酵培养基 大米培养基：加水浸泡20h，（100℃,灭菌 5min）
生物工艺学实验：实验二
红曲发酵及红曲色素的提 取
生命科学学院
实验目的



1、了解红曲菌液体菌种的制备方法, 为红曲 发酵实验准备液体种子。 2、了解固体发酵的工艺过程 , 在实验室中小 规模制备红曲。 3、熟悉从红曲中分离代谢产物的方法，以及 掌握红曲色素色价的测定方法。
实验原理


1、红曲
红曲又称红曲米，其发明至今己有一千多年的历 史，它是以稻米蒸熟后接种红曲菌(Monascus)发 酵制成的，可直接作为天然色素来使用，安全性 高。