食品微生物快速检测常用方法-ATP生物发光法测菌落总数.
食品中微生物快速检验技术
第五章 食品中微生物标准检验与分析技术
第一节 3M测试片快速分析技 术
第一节 3M测试片快速分析技术
一、什么是3M测试片？
第六章 食品中微生物快速检验技术
第一节 3M测试片快速分析技术
二、3M测试片的优点
1. 工作效率的极大提高 根据大量数据统计，使用 3M Petrifilm， 可以提高实验室工作效
腺苷一磷酸 荧光
第五节 利用酶促反应定量检测微生物
三、 MTT法检测总菌落数
检测原理为活体微生物线粒体中含有琥珀酸脱氢酶，能 使外源性MTT（噻唑蓝）还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜 (Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
Formazan结晶形成的量与活菌数成正比。用酶联免疫检 测仪在490nm波长处测定其光吸收值， 可间接反映活菌细胞数量。
因此只要先用标准方法对比 做出标准曲线，就可以达到快速 定量检测菌数的目的。
第六章 食品中微生物快速检验技术
第三节 利用电导率快速分析测试技术
一、 电导率快速检测微生物技术原理
样品中微生物数量越多，越快进入对数生长期。培养基电导率 发生跃迁的时间越短。
第六章 食品中微生物快速检验技术
第三节 利用电导率快速分析测试技术
• 3. 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留
其③酶酶的作活用性的。底物（显色剂）
第六章 食品中微生物快速检验技术
酶 酶标记抗体
抗体 抗原
1.将抗体包被在固相载体上。 2.如样品中含有抗原，则结合 为抗原抗体复合物。 3.再加入酶标记抗体，则结合 为抗体-抗原-酶标记抗体复合 物。
4.酶催化底物并显色。
第五节 利用酶促反应定量检测微生物
一、利用葡萄糖醛酸酶定量检测E. Coli
食品中有害微生物快速检测方法概述
(一)、概述食用被微生物污染的食品而导致的疾病，称作食源性疾病。
导致这类疾病的微生物叫食源性致病菌。
随着人们居住和卫生条件的不断改善，以及抗生素的滥用，人类对病菌的抵抗能力却在不断下降，食源性疾病一直呈上升的趋势。
因此，对食品中致病菌的监测和检验也就越显示其重要性，常规的检验大多依靠培养目标微生物的方法来确定食品是否受到此微生物的污染，这些方法需要一定的培养时间，少则2～3天，多至数周，才能确定。
而现行有效的一些快速检测方法不仅可以大大缩短检测时间提高微生物检出率并可用于微生物计数、早期诊断、鉴定等方面，以做到快速、简便、准确。
快速方法包括了微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫学和血清学等领域。
（二）、常见、常用的快速、简便的检测微生物数量的方法如下：1、活细胞计数的改进方法（1）、旋转平皿计数方法（2）、疏水性栅格滤膜法（HGMF）或等格法（isogrid method）（3）、血膜系统（Pertrifilm）（4）、酶底物技术（ColiComplete）（5）、直接外荧光滤过技术（DEFT）（6）、“即用胶”系统（SimPlate）2、用于估计微生物数量的新方法（1）、阻抗法（2）、A TP生物发光技术3、其他方法（1）、微量量热法（2）、接触酶测定仪（3）、放射测定法（三）、食品中沙门氏菌的快速筛检方法1、沙门氏菌显色培养基法2、免疫学方法3、分子生物学方法4、自动传导法（四）、大肠杆菌O157：H7快速检测方法大肠杆菌O157：H7肠出血性大肠杆菌的主要血清型，自1982年在美国被分离并命名以来，陆续发现本菌与轻度腹泻、溶血性尿毒综合症、出血性肠炎、婴儿猝死综合症等多种人类病症密切相关，是食源性疾病的一种重要致病菌。
E.coli O157：H7属于肠杆菌科埃希氏菌属，为革兰氏阴性杆菌，有鞭毛。
近年来作为食品卫生及流行病学的研究热点，E.coli O157：H7的分离和鉴定方法已取得了较大进展。
快速ATP卫生监控系统的使用
快速ATP卫生监控系统的使用一、确立关键检测点（标本点）开始拭抹之前，应确定要检测的关键区域、关键点或标本点，确定好关键区域并定期检测后，关键点的检测将能反映出工作区域整体洁净度的真实状况。
二、收集检测数据并设定限定值您须要汇聚各种参照数据以便成立通过、警戒、不通过的rlu限定值标准，这样您就可以推论您已确定的关键点目前的卫生状况。
保存原始数据以便与以后的检测相比较，也可用来监控卫生状况的改进。
建议收集下列数据资料：1、清洁前关键点的数据这些数据提供更多了洁净前表面污染程度的有关信息。
首次食物残渣去除或首次冲洗后，随后的几天应付每个关键点采样5次以上。
标本应当源自每次洁净前肉眼看看上很整洁的表面。
2、清洁后关键点的数据当洁净达至正常工作所建议的标准后，检测表面并记录结果。
检测时应使用相同的拭抹技术，在同一个边线挑选五个相同的时间展开检测。
这样就可以表明常规洁净后可以达至的标准。
3、严格清洁后的关键点数据搜集参照数据后，就可以通过图表去同意每个关键点的限定值，见到下表中：关键点123污染洁净严苛洁净第一次524104第二次857153第三次48980第四次763192第五次615101关键点的参照数据汇聚后，可以通过以下运算获得常规检测工作须要的通过、警戒、不通过的rlu标准：1．通过计算清洁或严格清洁一行的rlu平均值，这个值就是您的标准限定值。
比如：洁净＝（10＋15＋8＋19＋10）/5＝12.4≈122．不通过限定值由通过值除以2获得。
例如：不通过＝12.4×2＝24.8≈253．警戒限定值介乎通过和不通过限定值之间。
有些用户挑选不设立警戒值，有些则把不能通过限定值设定为高出通过限定值一档。
设警戒值范例：通过(pass)标准＝12警戒(caution)标准＝13至25不通过(fail)标准＝26三、推荐的限定值设置仪器初次采用时，我们存有一组所推荐的通用型限量数值。
这些限量数值就是根据gb/t4789.2-2021《食品卫生微生物学检测-菌落总数测量》，由sas统计数据软件分析谋出验菌落总数与atp仪器检测rlu值税金重回方程式去确认的。
食品微生物检验中ATP发光法的应用
论著·防保康复CHINESE COMMUNITY DOCTORS 中国社区医师2017年第33卷第24期食品卫生关乎人们的身体健康与生命安全，是人们普遍关注的一个社会问题。
随着人们对食品卫生质量要求的不断提高，食品卫生检验技术也在不断地完善和进步。
微生物检验是确保食品安全卫生的一个重要环节，是对食品质量的重要保障。
但是，在食品微生物检验的过程中，影响检验质量的因素是多方面的，如果不能很好地对这些影响因素进行有效控制，检验结果就可能有很大的偏差，使得食品卫生无法得到保证。
因此，对食品微生物检验的质量控制进行全面的探究是非常重要的。
食品检验中现代生物技术应用的重要性一个较高品质的食品安全方面的检验能够在一定程度上保证食品的安全性。
最近这些年我们国家对于食品安全的问题越来越重视，借助了现代生物理论作为基础，现代生物技术能够应用到的领域也变得越来越广泛了。
除此以外，生物技术在近些年越来越有优势，有更加安全并且环保、能够精准地进行测试和检验等特点，在食品的安全检验当中运用得十分顺手。
要保证食品的安全性，传统的生物以及食品的检验技术是不具有相关的优势的，现代生物技术具有良好的发展前景。
为此，本文以ATP技术为例对其检测方法进行深入探究。
ATP 生物发光法分析ATP 生物发光法是一种较为高效且操作便捷的检测方法，只需几分钟便可得到检测结果[1]。
技术原理为将细菌内的ATP从自由可溶解的状态中释放出来，在有荧光素酶、镁、氧气存在的条件下和虫荧光素发生反应产生荧光，通过对荧光信号的判断对ATP 的含量进行推测和计算，以检测样品中的含菌量。
其反应过程如图1所示。
以往ATP 生物发光仅用于细菌、酵母以及其他真菌的检测工作中。
但其缺陷是灵敏度不高，对于细菌数量也有严格限制，一般在103～104CFU/mL。
相关技术人员以及学者研究开发了ATP 再生系统，提高了此方法的灵敏度，从而有效弥补了传统ATP 发光法的缺陷。
ATP发光技术快速检测细菌总数研究(卫生工程学)
ATP发光技术快速检测细菌总数研究马妮, 赵虹, 张旭（辽宁省疾病预防控制中心，沈阳，110005）[摘要]：目的：ATP发光技术快速检测细菌总数的可行性。
方法：比较ATP生物发光值与平板计数法对细菌总数进行检测。
结果：检测结果相关性研究分析表明两者在一定范围内具有显著相关性。
结论：ATP生物发光法操作简便，应用范围广，可应用于对食品中细菌总数的快速检测。
[关键词] ATP；细菌总数；相关性The ATP bioluminescence method for rapid determination oftotal bacteriaMa Ni, Zhao Hong, Zhang Xu( Shenyang, )Abstract Objective Feasibility of ATP bioluminescence method for rapid determination of total bacteria. Methods compared ATP bioluminescence method and plate count for colony total examination. Results The Correlation research indicates that they are remarkable relative in proper range. Conclusion ATP bioluminescence method is simple and wide application. It can be used for the colony total in food rapid detection.Key words: ATP; colony total; relativity菌落总数测定是食品微生物国标检测中的一个重要指标［1］，主要是作为判定食品被细菌污染程度的标志［2］。
ATP生物发光法在快速检测物体表面清洁度中的应用
ATP生物发光法在快速检测物体表面清洁度中的应用刘阳;牟金明【摘要】[目的]建立一种快速、准确检测物体表面清洁度的方法.[方法]以ATP生物发光微生物检测技术为指导,提取重组的萤火虫荧光素酶并配制成荧光反应试剂,测定其与ATP发光反应值的线性关系;根据ATP含量与细菌数量成正比例关系原理,测定物体表面ATP发光强度值,同时用国标平皿计数法测定其菌落总数,两者对比分析.[结果]ATP生物发光法检测的相对荧光值与物体表面的菌落总数存在良好的线性相关性,利用ATP发光法实时检测细菌总数可以很好地弥补国标法的不足.[结论]ATP生物发光法与传统的细菌总数国标平板计数法相比较具有操作简便、快速灵敏、成本低廉、绿色环保等优点,可以快速、准确地检测物体表面清洁程度.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】4页(P125-128)【关键词】ATP生物发光法;菌落总数;物体表面;清洁度【作者】刘阳;牟金明【作者单位】吉林农业大学农学院,吉林长春130000;吉林农业大学农学院,吉林长春130000【正文语种】中文【中图分类】TS207.4细菌总数检测是食品卫生学领域的重要检测指标，主要是用来判断食品等被污染的程度。
对细菌总数进行快速准确地检测一直是该领域内重要的研究课题。
对细菌总数进行检测的国标方法是平板计数法[1]，该方法测试时间长，操作繁琐，不适合现场检测。
检测的时效性在食品等行业尤为重要，在加工过程中实时的监控生产环境更是防患于未然的根本方法，显然这是国标法无法做到的。
ATP生物发光微生物检测技术是一种以生物发光反应为基础的快速检测技术[2]，此技术用生物发光法测定细菌体中ATP的含量，再利用细菌体ATP含量与菌落总数成正比这一原理，推算出菌落总数[3]。
与传统的细菌总数国标平板计数法相比，ATP生物发光微生物检测技术具有操作简便、快速灵敏、成本低廉、绿色环保等优点。
利用ATP发光法实时检测细菌总数可以很好地弥补国标法的不足，两者相互辅助，相得益彰。
ATP发光法在食品微生物检验中的应用
ATP发光法在食品微生物检验中的应用发表时间：2019-06-05T15:27:52.043Z 来源：《中国西部科技》2019年第6期作者：申新[导读] ATP发光法在食品微生物检验中的有效利用，一方面能够为传统食品检测平台提供更高效且精准的微生物识别平台，以便提供更详细的资料，保证食品的安全性；另一方面，凭借ATP发光法的应用，使得生物监测灵敏性得以显著增强，为后续食品检测技术的发展也奠定了扎实基础。
本文基于ATP发光法在食品微生物检验中的应用展开分析，期望凭借生物技术能够为后续食品检验工作提供良好参照。
安达市质量技术监督检验检测中心食品安全问题是决定我国群众生活质量与健康权益落实程度关键要素，若是食品安全存在问题，则群众的生命健康与市场权益便很难得到保障，而随着食品加工技术的不断发展，目前许多食品潜在的问题凭借传统食品检验方法已经难以发觉，因此在监测技术方面也需要给予足够的重视，才能使食品安全检测质量得以保障。
因此，ATP发光法在食品微生物检验中的应用，理应得到食品安全相关部门的关注。
一、食品微生物检验技术应用的必要性食品微生物检验技术是目前食品安全管理工作中较常见的应用措施，在检验过程中，通常需要借助微生物学的理论与方法，检查食品内潜藏的微生物种类、数量与特点，以此分辨是否会对人类身体健康造成损害，并根据相关检测指标判定食品可否进入市场平台。
站在长远角度来看，食品微生物检验技术是以源头管控为主的检验措施，特别近些年国民对于食品安全的要求越来越高，而生物技术在近些年的发展中也逐渐展露优势，则便使得生物检测技术更贴合了安全与环保的要求，并随着微生物检测设备的应用，更能够精准的判定不同食品中的风险，因此食品微生物技术在食品安全管理系统中十分常见。
而结合以往资料可知，食品微生物检验技术可分为传统与现代两个部分，其中传统微生物的器械操作较为传统，在食品安全性与微生物特性检测方面不具备专业性的优势，因此经由检测的食品仍存有潜在风险。
食品微生物检验中ATP发光法应用
浅析食品微生物检验中ATP发光法的应用摘要：本文就atp生物发光法的检测原理、检测步骤、特点、检测的影响因素及在食品工业中的应用进行了综述，并提出了目前atp生物发光法检测中存在的问题。
关键词：atp 生物发光法；荧光素；提取剂；温度；检验1 atp 的理化性质1.1 atp广泛存在于各种活的生物体中,活的菌体中也含有atp。
细菌死亡后,在细胞内酶的作用下,atp将很快被分解掉。
atp是高能磷酸化合物的典型代表。
atp 是由一分子腺嘌呤、一分子核糖和三个相连的磷酸基团构成的核苷酸，其分子结构式如图1所示。
图1 atp分子结构式1.2 atp有两个高能磷酸键，一个低能磷酸键。
每个高能磷酸键水解时，可产生30．54kj／mol的能量。
atp是细胞内特殊的自由能载体，广泛地存在于细胞内，如细胞核、细胞溶胶、线粒体等。
易水解，且水解时可释放出大量的能量，但水解易受细胞内环境的ph、mg2+浓度等的影响。
2 atp生物发光法检测的原理及一般步骤2.1 atp普遍存在于所有活的生物体中，被用来贮存和传递化学能，称作为“能量货币”。
当生物体死亡后，在细胞内酶的作用下，atp很快被分解掉。
因此，测定样品中的atp浓度，即可推算出活菌数。
atp生物发光技术产生于20世纪70 年代中期。
1983年，moyer 等最早提出细胞内源性atp的含量可以反映细胞的活性和活细胞的数量。
同年gronroos等也证实该技术是一种可靠、灵敏度高的确定细胞活性度的检测方法。
mcelroy[最先引入荧光素酶．atp检测法，其反应机理为：在mg2+存在下，萤火虫荧光素酶以d-荧光素酶、atp、o2为底物，将化学能转化为光d-荧光素+atp+o2 oxy-荧光素+amp+ppi+h2o能，发出光量子，其发光强度(i)与atp浓度(catp)符合下列函数关系。
式中，imax为最大发光强度；km为1×1o-4。
由上式可知，当catp远小于km时，i正比于样品中的catp。
ATP生物发光法在微生物检验中的应用
文字差，语病及不通顺之处较多，未达到发表要求ATP生物发光法在微生物检验中的应用陈万里邹平县临池中心卫生院山东滨州256220【摘要】ATP生物发光检验法可以广泛的运用在微生物检验中，特别是对食品检验上运用较为广泛，其检测材料的成本不断降低，操作便捷，检验结果有效率高，从而适应性广。
针对其灵敏度不佳以及受盐分或者其他物质的感染，也可以采用滤过法与前培养方式来有效处理，降低检验的干扰性。
【关键词】ATP生物发光法；微生物检验；灵敏度人们的生命与健康受到众多微生物的污染影响，因此需要通过有效的方式对微生物做有效检验，而在国际上的检测方式多采用PCA方式，但是该方法需要持续48h的37摄氏度的环境下进行，操作中有较为繁琐的流程，无法得到快速检验的效果。
而ATP生物发光检验法其操作更为灵敏、快捷、简单，可以有效而广泛的运用在食品等微生物污染检测中。
1 ATP生物发光检验法的操作原理与具体流程在活的生物体内可以有效的发现ATP的存在，活菌中也有ATP存在。
如果细菌衰亡之后，会通过细胞的内酶影响作用而导致ATP受到快速的分解。
因此通过检验的ATP所含水平可以有效的检测出活菌的数量。
而ATP生物发光检验方法其具体操作步骤可以分为以下几个部分：棉拭做检验对象取样，样品萃取，加入荧光素及其酶混合药物，检测生物发光总量，得出ATP浓度与活菌数量。
由于细菌表面会被膜与壁所保护，因此如果不对其样品做处理则无法得到准确的ATP的浓度值。
需要将ATP的提取药剂与样品做融合后充分的打开细胞壁与膜的包裹，而提取APT的提取试剂的基质为细胞表层的活性剂，而后通过荧光素等发光剂来有效的显现ATP。
而本检验方法由于过去其中荧光素等试剂成本高而导致检验方式无法得到广泛普及，而近年来由于相关生存技术升级，其价格得到较大的下降，从而让该检验得到有效的推广。
2 ATP生物发光检验法的问题解决对策对于ATP生物发光检验法的优缺点分析上，优点方面主要为其操作较为迅速，随时需要可以随时进行，同时可以使用在较广的范围，几乎涵盖微生物总体范围，而操作中由于自动仪器的操作让流程进行更为迅速，减少的人工误差，结果较为科学等。
食品中微生物的快速检测
ATP生物荧光法
一.原理
• “ATP荧光法微生物快速检测系统”简称“细菌快检仪”， 依据萤火虫发光原理研制，由试剂组、微量荧光检测仪、 样品预处理耗材三部件组成。该仪器可在短短1-5分钟内即 完成测试，并提供实时检测数据，具备准确、便携、操作 容易等特点，同时可以连接电脑，对数据进行储存。 • ATP＋萤光素+萤光素酶+O2—AMP+Ppi+二氧化碳+氧化萤光 素+光
通过颜色变化检测
• 微生物生长导致培养基pH值发生变 化，由光学检测器检测底部琼脂层 的颜色变化，记录达到突变点的时 间。 • 与阻抗法类似，可以实现快速检测。 • 缺点：需要购买原厂的预装培养基， 应用范围受限制，成本高昂。
流式细胞技术
• 原理
液体样品流过仪器中的激光照射的流动池，当微生物流过 显微镜聚焦的流动池时就能被自动地检测到。
微量量热法
利用细菌生长时产生热量的原理设计而成。微生物在生长 和代谢的过程中，能产生大量的代谢热。由于各种微生物 的代谢产物热效应不同，因此可显示出特异性的热效应曲 线图。热效应曲线图的形成，是由于培养基含有多种成分， 微生物则产生多种不同的代谢产物，以此表现出的热效应 为多个曲线峰，如为单一营养成分，则只有一个峰出现。 在细菌生长的过程中，用微量量热计测量产热量等热数据， 经计算机处理，绘制成以产热量对比时间组成的热曲线图， 以此推断细菌存在数量。
检测步骤
• • • • • • 放入样本 打开瓶盖，加入11ml无菌水 放入液态（固态）样本0.1~1.0ml（0.1~1.0g） 盖紧瓶盖 摇动瓶子直到溶剂充分溶解 充分溶解混合后立即放入检测仪 ，得到100%定量分析结 果 • 使用后无菌处理 ：按下RVL微生物检测瓶的瓶盖上方 • 放心安全丢弃（与过期药物同样处理）
食品微生物快速检测方法
食品微生物快速检测方法传统的微生物培养法耗时太多，不利于工厂生产的快速调整，因此，需要建立现代的微生物快速检测方法。
快速测定方法建立的基础是：利用现代技术测定微生物的代谢产物或微生物的繁殖速度，以确定微生物的数量。
现将国外较成熟，常刚的典型快速测定方法介绍如下：微生物的快速检测方法按检出时间可分为三类：第一类方法是在比相应的传统方法短的时间内得出结果。
此类方法的典型例广是：膜过滤一微菌落一荧光法。
具体方法是将一定量的样品(或样品稀释液)经膜过滤(过滤膜φ巾≤0．45μm)，再过滤膜放在培养基上或放在浸行液体培养基的厚纸板上在适宜温度条件下培养一段时间，然后将膜放在浸过0．1％ANS(8一苯胺基萘磺酸镁)溶液的纸片上作用10分钟，将膜揭下，在80℃条件下干燥 5—10分钟，最后在100倍的荧光显微镜(入=340~ 380nm)下计数蓝绿色菌落的数目。
对于不同样品，膜过滤一微菌落一荧光法使用的培养基和培养时间不同。
检验凝乳中酵母菌时，可采用含琼脂的固体培养基，也可放在2ml双料液体培养基浸润的纸片上培养15—24小时。
检验食品中需氧性细菌数时，可用琼脂计数平板，也可用营养肉汤或酪蛋白胨一豆粉蛋白胨液体培养基，培养8小时。
食品中酵母和霉菌的选择性检测可使用添加100ppm氯霉素的麦芽汁提取物琼脂培养基，或添加100ppm氯霉素的双料麦芽汁提取物液体培养基。
糖果中耐渗透酵母的检测可采用50% 葡萄糖液体培养基，培养时间为48小时(菌数>10个／克)—72小时(菌数≤10个／克)。
第二：类快速检测方法一般在6—12小时内得出检验结果。
典型的方法有放射性示踪法和阻抗测定法。
放射性示踪法是以放射性标记物作碳源，测定经微生物发酵产生的有放射性标记的CO2量，从而确定样品中含菌量。
测定菌数小于1000个／毫升的样品，大约需要7小时。
阻抗测定法可根据食品的微生物污染程度在一天内完成检测。
这种方法依据的原理是：微生物在培养基中不断缯殖，其代谢产物的增加会导致液体培养基中电阻的变化，使介质的导电性增强，即电阻减小。
有哪些食品快速检测方法
有哪些食品快速检测方法快速检测方法是指从样品制备到出具检测结果的整个检测过程能够在短时间内完成的检测方法，包括在样品制备、实验准备、操作过程中和自动化上加以简化的方法。
目前，国际上对“短时间”的共识主要在于三个方面。
①对于理化指标的检测分析在2 h 内完成。
②应用于现场检查的能够在30 min 内完成。
③与传统方法相比，能够缩短1/2 或1/3 的时间。
一、农药残留检验1.农残快速检测卡农残快速检测卡是一种生化测定方法，利用酶抑制法，通过比色能够快速测定果蔬中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留。
定性检测，适用于大量样品的初筛。
2.农药残留快速检测仪根据国标酶抑制率法原理，在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。
正常情况下，酶催化神经传导代谢产物(乙酰胆碱)水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在并测定其含量。
二、兽药残留检验1.瘦肉精检测1.1.胶体金速测卡胶体金速测卡的检测原理是竞争性免疫层析。
可用于盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇的快速筛查。
1.2.瘦肉精快速检测仪瘦肉精快速检测仪采用固相酶联免疫吸附ELISA的原理,即酶联免疫法;可定量快速检测克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇;瘦肉精快速检测仪广泛应用于养殖场、屠宰场、肉产品深加工企业、检验检疫单位使用。
2.孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫、隐性结晶紫检测2.1.胶体金速测卡胶体金速测卡的检测原理是竞争性免疫层析。
可用于定性筛查，不能确定其精确含量。
2.2.快速检测仪方法快速检测仪采用固相酶联免疫吸附ELISA的原理,即酶联免疫法。
可定量快速检测水产品中孔雀石绿药物残留量。
3.抗生素及其他药物残留快速检测药物残留快速检测试剂盒：利用酶联免疫原理制成相应检测项目的检测试剂盒，提取加样后，使用酶标仪读数，可以快速的对多种药物残留进行检测。
ATP生物发光技术在微生物检测中的应用[1]
![ATP生物发光技术在微生物检测中的应用[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/68d9fca7dd3383c4bb4cd2c0.png)
作者简介：尹子波（1986—），男（汉)，在读研究生，研究方向：食品分析。
*通信作者：尹建军（1966—），男，高级工程师，长期从事食品质量安全技术研发管理工作。
微生物污染严重威胁着人类的身体健康与生命安全，目前国际上检测微生物的标准方法是营养琼脂平板计数法（PCA ），但PCA 法需37℃下培养48h ，操作繁琐，不能做到快速检测。
现在国内外开始广泛的研究与应用各种微生物快速检测技术，如免疫学方法（ELISA [1-2]）、电阻抗测量法[3]、快速纸片法[4]、核酸法[5]、微菌落技术[6]等。
ATP 生物发光法具有简便、快速、灵敏度高的优点，适合对微生物污染进行实时监控，符合食品加工企业的需求。
目前，国内外对该方法进行了大量的研究与应用。
1ATP 生物发光法的发展历史、原理及检测步骤1.1ATP 生物发光法的发展历史ATP 的生物发光机理最早在1949年由McEIroy 和Strehler 提出[7]。
1983年，James D.Moyer 和J.FrankHenderson [8]提出细胞内源性ATP 的含量可以反映细胞的活性和活细胞的数量。
1985年，de Wet ，J .R 等[9]首次克隆了北美荧火虫（P.Pyralis ）的萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase ）基因，并在大肠杆菌（E.coli ）中表达，从中得到具有活性的虫荧光素酶。
该酶分子量为62ku ，与荧光素反应能够产生波长为560nm 的荧光。
20世纪80年代，英国人首先研制出ATP 检测仪，随后发展到欧洲、美国和日本。
2002年，我国卫生部颁发了食品加工企业HACCP （Hazard Analysis and Critical Control Point ）实施指南，鼓励食品企业引入ATP 生物发光快速检测系统。
目前，在餐饮服务食品安全现场快速检测设备配备基本标准中，ATP 生物发光快速检测系统被应用于环境洁净度的评估检测。
ATP荧光法微生物(细菌总数)快速检测系统
ATP荧光法微生物（细菌总数）快速检测系统使用说明书第一部分ATP荧光法微生物（细菌总数）快速检测系统简介1、系统原理 (3)2、组成部件及相关功能 (4)3、应用领域、特点、效益 (4)4、检测注意事项及操作步骤 (4)5、ATP快检系统使用注意事项及故障排除 (9)6、对应关系曲线 (10)7、有关食品安全和卫生检测的问答 (11)8、具体样品检测的操作方法及方案 (14)第二部分ATP荧光法微生物（细菌总数）快速检测系统使用说明1、技术参数及性能 (23)2、仪器操作说明 (24)2．1开机、初始化 (24)2．2参数设置 (24)2．2．1选择RLU方式 (25)2．2．2选择其它样品名方式 (25)2．2．3设置文件类型............................... . (26)2．2．4设置日期时间......................... (27)2．2．5设置检测时间 (27)2．2．6 U盘格式化 (27)2．3测试 (27)2．4查询 (28)2．4．1查询测试结果 (28)2．4．1．1删除测试结果 (29)2．4．1．2删除文件 (29)2．4．2查询文件信息 (30)2．4．3查询仪器信息 (30)2．4．4查询电池电量 (30)2．4．5快速查询 (30)2．5通讯 (32)3、上位机软件 (33)3．1软件安装 (33)3．2驱动程序的安装 (36)3．3软件启动 (38)3．4软件运行 (39)3．5样品及回归方程设定 (40)3．6 “文件名”说明 (41)3．7文件、记录操作和数据库 (42)4、电池充电 (43)5、保修 (43)第一部分ATP荧光法微生物（细菌总数）快速检测系统简介1、系统原理萤火虫会发光是由于它能合成将化学物质的化学能转变为光能的生物催化剂—萤火虫荧光素酶（简称虫光素酶，luciferase）、虫荧光素（D-luciferin）以及所有细胞生物都产生的生物能量物质—三磷酸腺苷（ATP）。
ATP生物发光法快速测定物体表面的菌落总数
ATP生物发光法快速测定物体表面的菌落总数侯玉柱;田雨;柯润辉;尹建军;宋全厚【摘要】In this paper Escherichia coli was used as an indicator to evaluate the surface hygiene by ATP bioluminescent method.We also simulated hygienic control from food factory to laboratory and determined the aerobic plate count of representative surface in laboratory by this method.Meanwhile,it was analyzed and compared with national standard microbiological examination.The results showed a good linear relationship between ATP fluorescence values and aerobic plate counts of E.coli,and their correlation coefficient R2 was 0.982 6.The designated laboratory surfaces were taken as blind samples.There was a good linear relationship between their ATP fluorescence values and aerobic plate counts,and their correlation coefficient R2 was 0.915 9.It illustrated that ATP bioluminescent method could assessed and determined accurately solid surface hygiene.%以大肠埃希氏菌作为指示菌考量了ATP生物发光法测定物体表面卫生状况的准确性,并在实验室内模拟食品企业卫生管控,采用ATP生物发光法对具有代表性的台面进行细菌总数测定,与国家标准微生物检测方法进行了比对分析.结果显示:大肠埃希氏菌的ATP荧光值与菌落总数的线性相关性良好,相关系数R2为0.982 6;以实验室内指定台面作为盲样进行对比测定,其ATP荧光值与菌落总数的线性相关性良好,相关系数R2达到0.915 9,说明ATP生物发光法能够准确评估和测定物体表面的卫生状况.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2015(041)002【总页数】4页(P217-220)【关键词】ATP生物发光法;菌落总数;数学模型;预测【作者】侯玉柱;田雨;柯润辉;尹建军;宋全厚【作者单位】中国食品发酵工业研究院,北京,100027;中国食品发酵工业研究院,北京,100027;中国食品发酵工业研究院,北京,100027;中国食品发酵工业研究院,北京,100027;中国食品发酵工业研究院,北京,100027【正文语种】中文食品生产加工过程的卫生监控能够有效预防和降低微生物污染事故发生的可能性。
微生物快速检测方法
样品。每天检测量不品进行有害肠道菌及原生动物 妆品等样品。每天检
大于40个样品。
进行快速检测
测量大于40个样品。
微量量热法
利用细菌生长时产生热量的原理设计而成。微生物在生长 和代谢的过程中，能产生大量的代谢热。由于各种微生物 的代谢产物热效应不同，因此可显示出特异性的热效应曲 线图。热效应曲线图的形成，是由于培养基含有多种成分， 微生物则产生多种不同的代谢产物，以此表现出的热效应 为多个曲线峰，如为单一营养成分，则只有一个峰出现。 在细菌生长的过程中，用微量量热计测量产热量等热数据， 经计算机处理，绘制成以产热量对比时间组成的热曲线图， 以此推断细菌存在数量。
分子生物学方法
? 优缺点
? 分子生物学方法检测致病菌，特异性较强，技术较为前沿， 特别是相对国标方面来说。
? 假阳性概率仍然较高，因此只能作为一种初筛方法。 ? 速度方面：仍然需要增菌，一般是第二天出结果，与免疫
法比没有速度优势。 ? 目前不少产品已经通过AOAC的认证。
有假阳性存在，阳性结果需要确认。通常的原理有EIA ， ELISA ，GLISA ，荧光酶免、免疫磁分离等方法。 ? 分子生物学方法：以基因探针检测法和PCR法为主。 ? 基因芯片
显色培养基法
? 原理
在选择性培养基的基础上经过改良。 利用细菌特有的生理生化反应，使培养基中的指示剂产生 颜色变化，以将目标菌与其他菌区别开来
√
贾第鞭毛虫和隐孢子虫
√
处理速度
10-1个4 样品/小时
90分钟内出定量结果
50个样品/小时
灵敏度 适用范围
100-100,0个00细胞/g
1-500个0 细胞
1-1000cfu/g(mL)
适用于含菌量较高的特别适用于医药工业、饮用水 适用于含菌量较低的
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一
ATP生物发光法检测原理
二
ATP生物发光法检测过程
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食品营养与检光法检测原理
一
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ATP存在于包括微生物在内的一切活细胞内，ATP生 物发光法是利用ATP与荧光素酶系统接触时的发光现象 建立起来一种检测方法。 各生长期的微生物均有较恒定水平的ATP含量，微生 物死亡后，ATP将很快被分解掉。因此，提取细菌的 ATP，利用生物发光法测出ATP含量后，即可推算出样 品中的含菌量，ATP浓度与活细胞数密切相关。
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谢 谢
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ATP 生 物 发 光 法 测 菌 落 总 数
操作步骤 指示菌ATP的提取：TCA法和加热煮沸法 ATP的检测： 先用标准ATP试剂作一条标准曲线。测 量得到样品的相对发光值。 测定样品发光值,与标准曲线对比，得到 样品中的ATP含量, ATP含量可以转化为微生 物的浓度。
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试剂
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ATP生物发光法检测过程
一
1.设备和试剂
2.操作步骤
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ATP 生 物 发 光 法 测 菌 落 总 数
• 设备和试剂 ATP荧光仪：包括样品过滤膜、ATP一生物荧 光反应器、荧光增强及数据处理系统。 试剂：荧光素-荧光酶试剂 、ATP提取液 、标 准ATP试剂