染色剂配制

常用染色液的配制

1．草酸铵结晶紫染色液

A液：结晶紫2.5g，95%乙醇25mL。

B液：草酸铵1.0g，蒸馏水1000mL。

制备时，将结晶紫研细，加入95%乙醇溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合静止48h后，过滤后使用。

2．鲁格尔氏（路戈氏）碘液

碘1.0g，KI 2.0g，蒸馏水300mL。先用3~5 mL蒸馏水溶解KI，再加入碘片，稍加热溶解，加足水过滤后使用。

3．脱色液：95%乙醇；或丙酮乙醇溶液：95％乙醇70mL，丙酮30mL

4．沙黄（番红）染色液

2.5％沙黄（番红）乙醇溶液：沙黄（番红）2.5g，95%乙醇100mL。

此母液存放于不透气的棕色瓶中，使用时取20mL母液加80mL蒸馏水使用。

5．0.1％美兰染色液

0.1g溶解于100mL蒸馏水中。

6．吕氏碱性美蓝色染色液

A液：美蓝0.3g，95%乙醇30mL。

B液：KOH 0.01g，蒸馏水100mL，分别配制A液和B液，混合即可。

7．瑞氏染色液

瑞氏染料粉未0.3g,甘油3mL，甲醇97mL。将染料放乳钵内研磨，先加甘油，后加甲醇，过夜后过滤即可。

8．5％孔雀绿水溶液（芽孢染色用）

孔雀绿5.0g,蒸馏水100mL。先将孔雀绿放乳钵内研磨，加少许95％乙醇溶解，再加蒸馏水。

9．黑色素水溶液（荚膜负染色用）

黑色素10g，蒸馏水100mL，40％甲醛（福尔马林）0.5mL。将黑色素溶于蒸馏水中，煮沸5min，再加福尔马林作防腐剂，用玻璃棉过滤。

10．硝酸银鞭毛染色液

A液：单宁酸5.0g，FeCL3 1.5g，福尔马林(15%) 2.0mL，1%NaOH 1.0mL，蒸馏水100mL。

B液：AgNO3 2.0g,蒸馏水100mL。

将AgNO3溶解后，取出10mL备用，向其它的90mL硝酸银液中加浓氢氧化铵，则形成很厚的沉淀，再继续滴加氢氧化铵到刚刚溶解沉淀成为澄清溶液为之。再将备用的硝酸银慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的沉淀又消失，再滴入硝酸银，直到摇动后，仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为之。如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。

11．改良利夫森（Leifson’s）鞭毛染色液

A：20％单宁（鞣酸）2.0mL；B：饱和钾明矾液(20%) 2.0mL；C：5％石炭酸2.0mL；D：碱性复红酒精（95％）饱和液1.5mL。

将以上各液于染色前1~3d，按B加到A中，C加到A、B混合液中，D加到A、B、C混合液中的顺序，混合均匀，马上过滤15~20次，2~3d内使用效果较好。

12．石炭酸复红染色液

A液:碱性复红0.3g，95%乙醇10mL；B液：石炭酸（苯酚）5g，蒸馏水95mL。

先将染料溶解于乙醇，将苯酚溶于水，AB两液混合即可。

13．乳酸石炭酸棉蓝染色液

石炭酸（苯酚）10g，乳酸（比重1.21）10mL，甘油20mL，棉蓝（苯胺蓝）0.21g，蒸馏水10mL。

将石炭酸加入蒸馏水中，加热溶解，再加入乳酸和甘油，最后加棉蓝。

附录Ⅴ：常用缓冲液的配制

1．pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）（20℃pH值7.0~7.1）

甲液：KH2PO4 34.0g，蒸馏水1000mL；乙液：K2HPO4 43.6g，蒸馏水1000mL。

甲液二份和乙液三份混合即可。

2．0.2mol/l醋酸缓冲液（pH7.0）

甲液：醋酸34.0mL，蒸馏水1000mL；乙液：醋酸钠43.6g，蒸馏水1000mL。

甲液72mL，乙液28mL，NaCL 0.58g，配毕测pH值，以121℃，30min灭菌后备用。

3．明胶磷酸盐缓冲液

成分：明胶2g，磷酸氢二钠4g，蒸馏水1000mL，pH6.2。

制法：加热溶解，校正pH，121℃高压灭菌15min。

4．包被缓冲液(pH9.6碳酸盐缓冲液)的制备

Na2CO3 1.59g，NaHCO3 2.93g，加蒸馏水至1000mL。也可用pH9.6的磷酸盐缓冲液代替。5．洗液(PBS－T)的制备

PBS加0.05%(V/V)吐温-20。

6．抗体稀释液的制备

BSA 1.0g加PBS－T至1000mL；封闭液的制备同抗体稀释液。

7．底物缓冲液的制备

A液(0.1mol/L柠檬酸水溶液)：柠檬酸(C6H8O7·H2O) 21.01g，加蒸馏水至1000mL。

B液(0.2mol/L磷酸氢二钠水溶液)：Na2HPO4·12H2O 71.6g，加蒸馏水至1000mL。