染色剂配制
常用染色液配方
实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
细胞染色剂
1、斐林试剂配制：1）甲液质量浓度为0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml2）乙液质量浓度为0.05g/ml，取5gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml临用时将甲、乙液等量混合作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。
还原性糖与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。
如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。
2、班氏尿糖定性试剂配制：称取17.4克无水硫酸铜（CuSO4）溶解于100毫升热蒸馏水中，冷却后，稀释到150毫升。
称取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3）100克，加蒸馏水600毫升，加热使之溶解，冷却后，稀释到850毫升。
把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中，搅匀后即为班氏尿糖定性试剂。
用细口瓶贮存备用（为了防止氢氧化铜沉淀的生成，故加入柠檬酸钠。
柠檬酸钠是一种亲水性掩蔽性络合物形成剂，它能与铜离子形成可溶性络盐）。
使用方法同斐林试剂，所不同的是班氏试剂可长期使用。
3、双缩脲试剂配制：A液：质量浓度为0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100mlB液：质量浓度为0.01g/ml，取1gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml使用时，先加A液，后加B液作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。
也可用于鉴定多肽。
4、苏丹Ⅲ配制：取0.1g苏丹Ⅲ，溶解在20ml95%酒精中作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。
5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液（1：1）。
作用：用于洋葱根尖的解离，即使组织中的细胞相互分离开来。
能杀死细胞固定。
6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液（或醋酸洋红溶液）配制：是将龙胆紫溶解在质量分阶段数为2%的醋酸溶液中配制而成作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。
7、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液作用：观察成熟植物细胞质分离时用。
常用染色液的配制
常用染色液的配制１．染料饱和酒精溶液的配制配制染色液常先将染料配成可长期保存的饱和酒精溶液，用时再予以稀释配制。
配制饱和酒精溶液，应先用少量95％酒精先在研钵中徐徐研磨，使染料充分溶解，再按其溶解度加于95％酒精之中，贮存于棕色瓶中即可。
附表1 几种常用染料在95%酒精中的溶解度(26℃)染料名称美蓝结晶紫龙胆紫碱性复红沙黄溶100mL95％酒精中的重量(g) 1.4813.8710.003.203.412．常用染色液的配制（１）碱性美蓝(亦称骆氏美蓝)染色液：取美蓝饱和酒精溶液30ml，加入0.01％氢氧化钾水溶液l00mL，混合即成。
此染色液在密闭条件下可保存多年。
若将其在瓶中贮至半满，松塞棉塞，每日拔塞摇振数分钟，并不时加水补充失去的水分，约1年后可获得多色性，成为多色美蓝染色液。
（２）草酸铵结晶紫(亦称赫克结晶紫)染色液：取结晶紫饱和酒精溶液2mL，加蒸馏水18mL稀释10倍，再加入1％草酸铵水溶液80mL，混合过滤即成。
（３）革兰氏碘溶液：将碘化钾2g置乳钵中，加蒸馏水约5mL。
再加入碘片1g，予以研磨，并徐徐加水，至完全溶解后，注入瓶中，被加蒸馏水至全量为300mL即成。
此液可保存半年以上，当产生沉淀或褪色后即不能再用。
（４）沙黄水溶液：沙黄也称番红花红。
将沙黄饱和酒精溶液以蒸馏水稀释10倍即成。
此液保存期以不超过4个月为宜。
（５）石炭酸复红染色液：取3%复红酒精溶液10mL，加入5％石炭酸水溶液90mL混和过滤即成。
（６）稀释石炭酸复红染色液：将石炭酸复红染色液以蒸馏水稀释10倍即成。
（７）3％盐酸酒精(亦称含酸酒精)：加浓盐酸3mL于95%酒精97mL中即成。
（８）瑞士染色色液：取瑞氏染料0.1g置乳钵中，徐徐加入甲醇，研磨以促其溶解。
将溶液倾入有色中性玻瓶中，并数次以甲醇洗涤乳钵，亦倾入瓶内，最后使全量为60mL即可。
将此瓶置暗处过夜，次日滤过即成。
此染色液须置于暗处，其保存期约为数月。
常用染色液和试剂的配制
一、埃利希(EhrIiCh)氏苏木精染液先将苏木精2g溶于IOOm1乙醇中，再加冰醋酸IOm1,混合后加蒸储水IOOm1和IOOm1甘油，然后加硫酸铝钾(约Iog)至饱和，搅拌均匀，倒入瓶中。
将瓶口用1层纱布包着小块棉花塞上，放在暗处通风的地方，并经常摇动促进“成熟”，直到液体颜色变为深红色为止。
成熟时间约2-4周。
若加0.4g碘酸钠可加快成熟。
二、吉姆萨(GiemSa)氏母液将吉姆萨粉末Ig先溶于少量甘油，在研钵内研磨30min以上，至看不见颗粒为止，再将全部(66m1)剩余甘油倒入，于56℃温箱内保温2h。
然后再加入甲醇(66m1),搅匀后保存于棕色瓶中。
母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。
临用时用PH6.8的磷酸盐缓冲液稀释10倍。
三、瑞(Wright)氏染液称取瑞氏染料粉末OJg于研钵内研细后，加入少量甲醇再反复研磨，最后将全部甲醇(总共60m1)加入研匀，染料全部溶解后，将染液保存于棕色瓶内备用。
四、醋酸洋红染液将洋红粉末Ig倒入IOOm145%醋酸溶液中，边煮边搅拌，煮沸(沸腾时间不超过30s),冷却后过滤，即可使用。
也可再加入1%~2%铁明矶水溶液5-10滴，至此液变为暗红色而不发生沉淀为止。
如制作永久标本染色时，可加入饱和氢氧化铁或醋酸铁(媒染剂)溶液数滴，至染色液呈浅蓝色为止。
五、硫堇染液(工作液)①干液(硫堇)：硫堇Ig或2g溶于Ioom150%乙醇中，溶解后过滤备用；②醋酸钠缓冲液：醋酸钠∙3H2O9.7g,巴比妥钠14.7g,溶于50Om1蒸储水中；③0.1mo1/1盐酸；按①：②：③=40：28：32比例配成混合液，调pH5.7±0.2,即得硫堇工作液。
六、0.02%盾纳斯绿B(JanusGreenB)用0.9%生理盐水溶液配制。
七、甲基绿一派洛宁染液(Unna试剂)派洛宁0.25g,甲基绿0.15g,95%乙醇20m1,甘油20m1。
氨基黑染色液配置方法
氨基黑染色液配置方法氨基黑是一种常用的黑色染料，适用于染黑棉、麻、羊毛织物和混纺织物。
它具有上色力强、牢固度高、色彩鲜明等特点。
下面是氨基黑染色液的配制方法：原料：氨基黑染料、辅助染料、助剂、酒精、水、pH调节剂等。
配方：1. 氨基黑染料：根据染色织物的重量确定需要的染料量，一般染浅色用量为1-2%，染深色用量为3-5%。
2. 辅助染料：根据需要选择合适的辅助染料，如还原剂、漂白剂、弥散剂等。
3. 助剂：根据需要选择合适的助剂，如染色增白剂、染色助剂、固色剂等。
4. 酒精：可用于溶解染料，提高染色效果。
5. 水：用于配制染料液，控制染色温度和浓度。
6. pH调节剂：用于调节染料液的pH，保持染色液的稳定性。
具体步骤：1. 将所需的氨基黑染料加入适量的水中，搅拌均匀，按比例计算染色织物的重量确定染料的用量。
2. 在染料溶液中加入适量的辅助染料和助剂，辅助染料可提高氨基黑的染色效果，助剂可增强染色的牢固度。
3. 将溶液加热至适宜的染色温度，一般为60-80摄氏度。
可根据实际需要调整染色温度。
4. 在染色过程中，持续搅拌溶液，确保染料均匀分布在染色织物表面。
5. 染色结束后，用清水冲洗染色织物，直至洗涤水清洁为止。
6. 将染色织物经过定型处理，保证染色的牢固度。
7. 最后，根据需要可进行后处理，如干燥、整理等。
总的来说，氨基黑染色液的配制方法并不复杂，但是要注意控制好每个步骤的操作，确保染色效果和牢固度。
同时，根据染色织物的特性和要求，可以对配方进行适当调整，以达到更好的染色效果。
希望以上内容对您有所帮助，祝您染色顺利！。
实验室常用染色液配方
实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red)2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
常用染色剂的配方
常用染色剂的配方常用染色剂的配方（一）天然染料1、苏木精（Hematoxylin）苏木精是从南美的苏木（Haematoxylon campechianum）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。
苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。
苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。
被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。
所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。
常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。
苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。
分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。
2、洋红（Carmine）洋红又叫胭脂红或卡红。
一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出胭脂红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。
单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。
常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。
洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。
用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。
用洋红配成的溶液染色后能保持几年。
洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。
3、靛蓝洋红（Indigo carmine）是由木蓝（Indigofera）提出的靛蓝（Indigo）加上亚硫酸钠而成。
为蓝色酸性染料，作为细胞质的染色剂。
常与苦味酸合成苦味酸靛蓝洋红（picro-indigo-carmine），呈绿色，可与碱性品红作对比染色。
4、地衣红（Orcein）是由地衣（Lecanora parella）中取得的染料，可在酸性或碱性溶液中染色。
植物细胞学中应用较多，尤其对于某些植物的染色体染色，效果比醋酸洋红更好。
常用染色剂及配制
常用染色剂及配制常用染色剂及配制供组织学诊断用的优秀常规染色剂，不仅须使细胞核和细胞浆有选择性着染，也要使结缔组织着色。
苏木素-伊红染色的切片适当分色，可使这些结构得以区分，胞核表现为蓝色，胞浆和结缔组织纤维呈各种色调的粉红，因此这是一种最常用的常规染色剂。
一、苏木素-伊红染色的基本原理苏木素是最早用于生物学上的天然染色剂之一，百余年来，一直是生物学实验室最常用的组织学中细胞核的染料，它是从苏木树的树心中提炼出来的，为浅褐色结晶或淡黄褐色的粉末状物。
易溶于乙醇、甘油，也可溶于热水。
苏木素本身没有染色能力，它经过氧化后，能产生具有染色能力的苏木红，苏木红又称为氧化苏木素或苏木因。
苏木素变成苏木红的过程叫作“成熟”。
成熟的方法一般有两种：一种是把配制好的苏木素液在开口瓶中放置两个月以上，让其在日光和空气中的氧的作用下使之氧化。
故一般地盛苏木素的瓶子放在向阳处，时间愈长，染色的效果愈好。
常配制一大瓶，备长期使用。
另一种方法是在苏木素液中加入氧化剂，如磺酸钠，过锰酸钾，氧化汞，双氧水等。
用这种方法成熟与用第一种方法者不同的是，它放置时间愈长，染色的效果愈低。
这是因为苏木红被继续氧化可生成无色的化合物，故一次不宜配制过多，还应放置40C冰箱内避光保存以延长使用时间。
它的优点是配制后即可使用。
成熟的苏木素对组织并无亲和力，须加入含金属离子的媒染剂，才能达到染色的目的。
一般用于明矾苏木素的媒染剂为钾明矾或氨明矾。
主要是利用明矾中的铝离子和苏木红结合形成的铝沉淀色素为紫蓝色，对染色质有很大的亲和力，水和酒精都不能使其褪色。
用于铁苏木素的媒染剂是三价铁离子，苏木红的铁沉淀色素为黑蓝色，不溶于水，因此，故不能配制大量含媒染剂的混合液，一般用时现配，或在染色过程中，先用铁明矾媒染，然后再染苏木素，如磷钨酸苏木素染色即是。
常规苏木素染色的对比染色是用伊红，也有采用焰红，因为焰红比伊红色泽更鲜明，此外还有采用橘黄G，比布里希猩红，波尔多红等作为对比染色。
考马斯亮蓝G250染液的配制
考马斯亮蓝G250染液的配制
1R250。
2100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50mL 90%乙醇中，加入85%的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1000mL。
此溶液在常温下可放置一个月。
310mg G-250，溶于5mL的95%乙醇中，此时溶液为蓝色，再加入了10mL的85%的磷酸，溶液为血红色，可是加水定容到100mL时又成为了蓝色，据文献说应该是褐色，原因：配置溶液的容器未洗干净，可能沾有蛋白质类药品。
用乙醇把容器全部认真的洗干净后重配，不过配好之后需要过滤才可以用。
4中文名为考马斯亮蓝G250，简称G250，分子式为C47H48N3O7S2Na，分子量为854.02，分析纯。
考马斯亮蓝G250是常用蛋白染色剂，在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为青色。
蛋白质含量在0～1000μg范围内，蛋白质一色素结合物在595nm下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用比色法测定。
5中文名为考马斯亮蓝R250，简称R250，分子式为C45H44N3O7S2Na，分子量为825.97，考马斯亮蓝R250是常用蛋白染色剂，可用于染色丙烯酰氨凝胶和琼脂糖凝胶中的蛋白质。
6、考马斯亮蓝G250和R250都可以作为染色剂，不同的配方、不同的染色方法适合于不同性质的蛋白质。
7、考马斯亮蓝分为G250、R250和R350等，R为红蓝色，G为蓝绿色。
例如考马斯亮蓝G250即二甲花青亮蓝。
瑞氏染液配制、使用方法及注意事项
瑞氏染液配制、使用方法及注意事项南宁市二医院检验科马升俊1.瑞氏染色的原理：瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。
瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物（天青）组成,其深于甲醇后,解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。
各种细胞由于其所含化学成分不同，对染料的亲和力也不一样，因此，染色后各种细胞呈现出各自的染色特点。
2.试剂的配制：2.1 瑞氏染液的配制：2.1.1 自配染液:瑞氏染粉0.1g，甲醇（AR）60ml。
将瑞氏染粉放入清洁干燥研钵中，先加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，将巳溶解的染料倒入棕色试剂瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，甲醇全部用完为止。
染液配好后放于室温下，一周后即可使用。
新配制染液效果较差，放置时间延长，染色效果越好。
久置应密封，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。
染液中也可加中性甘油2～3ml，除可防止甲醇过早挥发外，也可使细胞着色清晰。
2.1.2 成品瑞氏染液:现巳有成品瑞氏染液，如四川迈克科技公司出的快速瑞氏染色试剂（500ml/瓶）其只需室温密闭储存，可长期稳定，染色效果好。
2.2 缓冲液的配制: 称取磷酸二氢钾（无水）0.3 g，磷酸氢二钠（无水）0.2 g；加蒸馏水至1000 ml使其溶解。
配好后磷酸盐缓冲溶液应校正PH值，其范围在PH6.4～6.8即可，后塞紧瓶口备用。
3. 瑞氏染色的使用方法：（以血涂片为例）：3.1把制好的血涂片编好号，然后将血片平放在染色架上；3.2加瑞氏染液数滴，使其覆盖整个血膜，固定细胞约1分钟；3.3滴加等量或稍多的缓冲液（可按1：2滴加），使染液充分混匀，染色5～10分钟；3.4用流水冲洗去染液,待干后镜检。
4.染色结果判断：在正常情况下，血膜外观染成淡紫红色。
显微镜下，红细胞呈粉红色，在厚薄均匀处，略有碟状感。
白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩。
细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。
5.注意事项:5.1 PH对细胞染色有影响。
微生物染色液配制及染色法
微生物染色液配制及染色法2.1 美蓝染色法2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液美蓝0.3g95%乙醇30mL0.01%氢氧化钾溶液100mL 将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。
2.1.2 染色法将涂片在火焰上固定，待冷。
滴加染液，染1～3min，水洗，待干，镜检。
2.1.3 结果菌体呈蓝色。
2.2 革兰氏染色法2.2.1 结晶紫染色液结晶紫1g95%乙醇20mL1%草酸铵水溶液80mL将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
2.2.2 革兰氏碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。
2.2.3 沙黄复染液沙黄0.25g95%乙醇10mL蒸馏水90mL将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
2.2.4 染色法2.2.4.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。
2.2.4.2 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。
2.2.4.3 滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。
2.2.4.4 水洗，滴加复染液，复染1min。
水洗，待干，镜检。
2.2.5 结果革兰氏阳性菌呈紫色。
革兰氏阴性菌呈红色。
注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。
2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)2.3.1 石炭酸品红染色液碱性品红0.3g95%乙醇10mL5%酚水溶液90mL将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。
2.3.2 3%盐酸－乙醇浓盐酸3mL95%乙醇97mL2.3.3 复染液吕氏碱性美蓝染色液。
2.3.4 染色法2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。
染液如因蒸发减少时，应随时添加。
染5min，倾去染液，水洗。
2.3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。
常用染色液的配方
一、常用染色液的配制⒈碘-碘化钾I2-KI溶液能将淀粉染成蓝紫色,蛋白质染成黄色,也是植物组织化学测定的重要试剂;配方：碘化钾2g ；蒸馏水300ml ；碘1g先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,待全溶解后再加碘,振荡溶解后稀释至300mL,保存在棕色玻璃瓶内;用时可将其稀释2-10倍,这样染色不致过深,效果更佳;⒉苏丹ⅢsudanⅢ或Ⅳ能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色,是著名的脂肪染色剂;配方：1苏丹III或苏丹Ⅳ干粉；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油2先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中,再加入70%酒精50ml;3苏丹III 70%乙醇的饱和溶液;⒊1％醋酸洋红aceto carmine 酸性染料,适用于压碎涂抹制片,能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色;配方：洋红1g ；45％醋酸100ml煮沸2h左右,并随时注意补充加入蒸馏水到原含量,然后冷却过滤,加入4％铁明矾溶液1～2滴不能多加,否则会发生沉淀,放入棕色瓶中备用;⒋改良苯芬品红染色液Carbol fuchsine 核染色剂;配制步骤：先配成三种原液,再配成染色液;原液A：3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中;原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中;原液C：取原液B 55ml,加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林38％的甲醛;原液A和原液C可长期保存,原液B限两周内使用染色液：取C液10～20ml,加45％冰醋酸80～90ml,再加山梨醇1~,配成10％～20％浓度的石炭酸品红液,放置两周后使用,效果显著若立即用,则着色能力差;适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使用2～3年不变质;山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色,但效果较差;⒌中性红neutral red溶液用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活;配方：中性红；蒸馏水100ml使用时再稀释10倍左右;⒍曙红Y伊红,eosin Y酒精溶液常与苏木精对染,能使细胞质染成浅红色,起衬染作用;配方：曙红；95％酒清100ml也常用于95％酒精脱水时,加入少量曙红溶液,其目的是在包埋、切片、展片、镜检时便于识别材料;⒎钌红ruthenium red染液钌红是细胞胞间层专性染料,其配后不易保存,应现用现配;配方：钌红5～10mg ；蒸馏水25-50ml⒏龙胆紫gentian violet 为酸性染料,适用于细菌涂抹制片;配方：龙胆紫~1 g ；蒸馏水100ml⒐苯胺兰aniline blue溶液为酸性染料,对纤维素细胞壁、非染色质的结构、鞭毛等,尤其是染丝状藻类效果好;还多用于与真曙红作双重染色,对于高等植物多用于与番红作双重染色; 配方：苯胺兰1 g ；35％或95％酒精100ml⒑间苯三酚phloroglucin溶液用于测定木质素;配方：间苯三酚5g ；95％酒精100ml注：此溶液呈黄褐色即失效;⒒橘红Gorange G酒精溶液为酸性染料,染细胞质,常作二重或三重染色用;配方：橘红G 1g ；95％酒精100ml⒓番红safranin O为碱性染料,适用于染木化、角化、栓化的细胞壁,对细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色;并能与固绿、苯胺兰等作双重染色,与橘红G、结晶紫作三重染色;配方：1番红水溶液番红或1 g ；蒸馏水100ml2番红酒精溶液番红或1 g ；50％或95％酒精100ml3苯胺番红酒精染色液甲液番红5 g +95％酒精50ml乙液苯胺油20ml +蒸馏水450ml将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀,过滤后使用;⒔固绿fast green又称快绿溶液;为酸性染料,能将细胞质,纤维素细胞壁染成鲜艳绿色,着色很快,故要很好的掌握着色时间;配方：1固绿酒精液固绿g ；95％酒精100ml2苯胺固绿酒精液固绿1 g ；无水酒精100ml ；苯胺油4ml配后充分摇匀,过滤后使用;现配现用效果好;⒕苏木精hematoxylin染液苏木精是植物组织制片中应用最广的染料,是苏木科植物苏木的心材提取出来的;它是很强的细胞核染料,而且可以分化出不同颜色;配方很多,现举海登汉氏Heidenhain's苏木精染色液,又称铁矾苏木精染色液;配方：甲液媒染剂：硫酸铁铵铁明矾2-4g ；蒸馏水100ml必须保持新鲜,最好临用之前配制乙液染色剂：苏木精；95％酒精10ml；蒸馏水90ml配制步骤：1将苏木精溶于酒精中,瓶口用双层纱布包扎,使其充分氧化通常在室内放置两个月后方可使用;2加入蒸馏水,塞紧瓶口,置冰箱中可长期保存;切片需先经甲液媒染,并充分水洗后才能以乙液染色,染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度;铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂,但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合;⒖亚甲基蓝染液常用于细菌、活体细胞等的染色;取亚甲基蓝,溶于100ml蒸馏水中即成;⒗詹纳斯绿BJanus green B染液将绿溶于100ml蒸馏水,配成饱和水溶液;用时需稀释;稀释的倍数应视材料不同而异;⒘硫堇染液取克硫堇也称劳氏青莲或劳氏紫粉末,溶于100ml蒸馏水中,即可使用;使用此液时,需要用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片,能成多色反应;18.黑色素液水溶性黑素10g,蒸馏水100mL,甲醛福尔马林;可用作荚膜的背景染色;19.墨汁染色液国产绘图墨汁40mL,甘油2mL,液体石炭酸2mL;先将墨汁用多层纱布过滤,加甘油混匀后,水浴加热,再加石炭酸搅匀,冷却后备用;用作荚膜的背景染色;20.吕氏Loeffier美蓝染色液A液：美蓝methylene blue,又名甲烯蓝,95%乙醇30mL;B液：;混合A液和B液即成,用于细菌单染色,可长期保存;根据需要可配制成稀释美蓝液,按1∶10或1∶100稀释均可;21.革兰氏染色液1结晶紫cristal violet液：结晶紫乙醇饱和液结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中20mL,1%草酸铵水溶液80mL;将两液混匀置24h后过滤即成;此液不易保存,如有沉淀出现,需重新配制;2芦戈Lugol氏碘液：碘1g,KI 2g,蒸馏水300mL;先将KI溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加蒸馏水至300mL,即成;配成后贮于棕色瓶内备用,如变为浅黄色能使用;395%乙醇：用于脱色,脱色后可选用以下4或5的其中一项复染即可;4稀释石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱液碱性复红1g,95%乙醇10mL,5%石炭酸90mL10mL,加蒸馏水90mL;5番红溶液：番红Osafranine O,又称沙黄O,95%乙醇100mL,溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中,用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可;以上染色液配合使用,可区分出革兰氏染色阳性G+ 或阴性G- 细菌,前者蓝紫色,后者淡红色;22.齐氏Ziehl石炭酸复红液：碱性复红溶于95%乙醇10mL中为A液；溶液100mL为B液;混合A、B液即成;23.姬姆萨Giemsa染液1贮存液：称取姬姆萨粉,甘油33mL,甲醇33mL;先将姬姆萨粉研细,再逐滴加入甘油,继续研磨,最后加入甲醇,在56℃放置1-24h后即可使用;2应用液临用时配制：取1mL贮存液加磷酸缓冲液即成;也可以贮存液∶甲醇=1∶4的比例配制成染色液;24. 1%瑞氏Wright's染色液称取瑞氏染色粉6g,放研钵内磨细,不断滴加甲醇共600mL并继续研磨使溶解;经过滤后染液须贮存一年以上才可使用,保存时间愈久,则染色色泽愈佳;二、常用试剂的配制一显微镜镜头清洁剂将乙醚和乙醇按7∶3混合,装入滴瓶备用;用于擦拭显微镜镜头上油迹和污垢等注意瓶口必须塞紧,以免挥发;二固定液1.福尔马林-乙酸-酒精固定液FAA,又称万能固定剂福尔马林38％甲醛5ml＋冰乙酸5ml＋70％酒精90 ml,可用于固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类;幼嫩材料用50％酒精代替70％酒精,可防止材料收缩；还可加入5ml 甘油丙三醇以防蒸发和材料变硬;FAA 可兼作保存剂;2.福尔马林-丙酸-酒精固定液FPA福尔马林5ml＋丙酸5ml＋70％酒精90ml,用于固定一般的植物材料,通常固定24h,效果比FAA 好,并可长期保存;3.福尔马林-丙酸-氯仿固定液卡诺固定液配方一：无水酒精3份＋冰乙酸1份;配方二：无水酒精6份＋冰乙酸1份＋氯仿3份;是研究植物细胞分裂和染色的优良固定液,材料固定后,用95％和85％的酒精浸洗,清洗2-3次,也可转入70％酒精中保存备用;4.甘油-酒精软化剂甘油1份＋50％或70％酒精1份,适用于木材的软化,将木质化根、茎等材料排除空气后浸入软化液中,时间至少一周或更长一些,也可将材料保存于其中备用;5. 铬酸-乙酸固定液根据固定对象的不同,可分强、中、弱3种不同的配方：弱液配方：10％铬酸ml＋10％乙酸ml＋蒸馏水;中液配方：10％铬酸7 ml+10％乙酸10 ml＋蒸馏水83 ml;强液配方：10％铬酸10 ml+10％乙酸30 ml＋蒸馏水60 m1;弱液用于固定较柔嫩的材料,例如藻类、真菌类、苔药植物和蕨类的原叶体等,固定时间较短,一般为数小时,最长可固定12-24 h,但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟到1h;中液用作固定根尖、茎尖、小的子房和胚珠等,固定时间12-24 h或更长;强液适用于木质的根、茎和坚韧的叶子、成熟的子房等;为了易于渗透,可在中液和强液中另加入2％的麦芽糖或尿素;固定时间12-24 h或更长;三离析液1. 铬酸-硝酸离析液铬酸为三氧化铬的水溶液：1 10 ml铬酸；2 10 ml浓硝酸;将上述两液等量混合均匀后再使用;适于对导管、管胞、纤维等木质化的组织进行解离时使用;2. 盐酸-酒精固定离析液将浓盐酸、95％酒精等量混合备用,一般用于离析根尖细胞;四解离液常用于根尖等细胞的涂片,它能使细胞壁中层果胶质溶解,而使细胞分开;1．盐酸酒精配方:95%酒精1份,浓盐酸1份;二者混合即成;2．盐酸溶液11 mol／L盐酸配方：浓盐酸比重用蒸馏水定容1 000ml2／L盐酸配方：浓盐酸比重用蒸馏水定容1 000m1盐酸水解时间对染色效果影响很大,水解时间短,易着色但较难压片；水解时间长,染色慢而色淡；超过20min或水解温度过高,往往染色极淡,或染不上色;各种材料最合适的时间有差别,一般来说,大染色体材料水解时间可较长,小染色体材料宜短;改用／L盐酸于60℃恒温下水解10～15min,对各种类型材料都能获得细胞分离和染色合适的较好效果;五预处理液用于根尖压片的前处理,能使细胞有丝分裂染色体缩短;1．8-羟基奎林水溶液称取8-羟基奎林溶于1 000ml蒸馏水中;2．对二氯代苯饱和水溶液将对二氯代苯加入蒸馏水中搅拌至不再溶解为止,即成饱和水溶液;六各级酒精的配制由于无水乙醇价格较高,故常用95％的酒精配制;配制方法很简便,用95％的酒精加上一定量的蒸馏水即可;可按下列公式推算：原酒精浓度值95％－最终酒精浓度值×100＝所需加水量最终酒精浓度95％酒精用量蒸馏水量85％85ml 10ml70％70ml 25ml50％50ml 45ml30％30ml 65ml七其他试剂1. 生理盐水取NaCl 溶于100mL蒸馏水中;用于两栖类动物;2. 1%硝酸银溶液称取1克硝酸银,溶于100毫升蒸馏水中即可;3.碘酒取碘2g和KI ,先加入少量的75%乙醇搅拌,待溶解后再用75%乙醇稀释至100mL4. 树胶封固剂将固体的加拿大树胶块,溶解于二甲苯或正丁醇中,浓度要适当注意绝对不能混入水或酒精,是玻片标本好的封固剂;也可用人工合成的中性树胶代替;5. 明胶粘贴剂明胶1-2 g＋石碳酸苯酚2g＋蒸馏水100ml＋甘油15ml;配法：先将蒸馏水加温至30-40℃,慢慢加入明胶,待全部溶解后,再加入2g苯酚和15ml甘油,搅拌至全溶为止,然后用纱布过滤,滤液贮于瓶中备用;6.标本消毒剂用于腊叶标本消毒,常用％~1%升汞酒精溶液95％酒精1 000ml+4 g升汞,浸泡标本～2min;升汞有剧毒,不要弄到手上,消毒后注意洗手;。
染液配制方法
88ml 1g
碘化钾
2g
蒸馏水 95%酒精溶液
300ml
0.1%碱性品红水溶液
[操作步骤] 1．Stirling 氏结晶紫溶液过滤滴于涂片上 50~60 秒钟。
2．充分水洗。
3．革兰氏碘溶液 30 秒钟。 4．水洗。
5．95%酒精溶液分化至清晰为止。 6．水洗。 7．0.1%碱性品红溶液 30 秒钟；
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶解时可稍加热，最
后补足蒸馏水量。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色即不能使用。
脱色剂：
95%乙醇
或丙酮乙醇溶液
100 mL
95%乙醇
70 mL
丙酮
30 mL
3 . 番红花红染色液： 2.5%番红 95%酒精溶液
10 mL
蒸馏水
90 mL
21.革兰氏染色液 (1)结晶紫(cristal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫 2g 溶于 20mL95%乙醇中)20mL， 1%草酸铵水溶液 80mL。将两液混匀置 24h 后过滤即成。此液不易保存，如有沉淀出现，需 重新配制。 (2)芦戈(Lugol)氏碘液：碘 1g，KI 2g，蒸馏水 300mL。先将 KI 溶于少量蒸馏水中，然后加 入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至 300mL，即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色 能 使用。 (3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。 (4)稀释石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱液(碱性复红 1g，95%乙醇 10mL，5%石炭酸 90mL)10mL，加蒸馏水 90mL。 (5)番红溶液：番红 O(safranine O，又称沙黄 O)2.5g，95%乙醇 100mL，溶解后可贮存于 密闭的棕色瓶中，用时取 20mL 与 80mL 蒸馏水混匀即可
常用染色液的配制
常用染色液的配制一、骆氏美蓝染色液（碱性美蓝染色液）甲液：美蓝0.3克，95%酒精30ML乙液：0.01%氢氧化钾溶液100ML甲、乙混合即可，密闭保存，一年后可获多色性。
二、革兰氏染色液1、草酸铵结晶紫染液甲液：结晶紫2G，95%酒精20ML，或结晶紫饱和酒精溶液2ML加蒸馏水18ML。
乙液：草酸铵0.8克，蒸馏水80ML。
甲、乙混合，静置48小时，过滤后备用，可较久贮存。
2、革兰氏碘溶液碘片1G，碘化钾2G，蒸馏水300ML碘化钾+3－5ML蒸馏水，溶解后+碘片，摇匀后+蒸馏水至足量。
3、95%酒精，用作脱色剂4、碱性复红染色液碱性复红（一品红）0.1G，蒸馏水100ML可用沙黄水溶液或稀释石炭酸复红液代替此液。
沙黄水溶液：沙黄饱和酒精溶液+10倍蒸馏水，保存期小于4个月。
稀释石炭酸复红染色液：石炭酸复红液10ML+蒸馏水90ML三、抗酸染色液1、石炭酸复红染色液3%碱性复红酒精溶液10ML+5%石炭酸水溶液90ML，过滤即可。
2、盐酸酒精液浓盐酸3ML+95%酒精97ML四、克利特氏荚膜染色液1、美蓝溶液：美蓝1G+96%酒精10ML+100ML蒸馏水2、碱性红溶液：碱性复红0.03G+1ML96%酒精+99ML蒸馏水五、瑞特氏染色液1、0.1G瑞特氏染粉研磨，再加中性甘油3ML，充分研磨，后徐徐加入甲醇液60ML，边研边搅，存于棕色瓶中过夜，过滤后贮于棕色瓶中，越久越好。
2、磷酸盐缓冲液甲液：磷酸氢二钠23.86G，1000ML蒸馏水。
乙液：磷酸二氢钾9.07G，1000ML蒸馏水。
4份甲液+1份乙液即可。
常用染色液的配制.
常用染色液的配制1.番红水液番红0.1g溶入蒸馏水,定溶至100ml。
2. 番红酒液番红0.5g或1g溶入50%酒精,定溶至100ml3. 固绿染液固绿0.1g溶入95%酒精，定溶至100ml。
4. 碘-碘化钾染液碘化钾溶入100ml蒸馏水，再加入1g碘，溶解后即可使用。
5. 苏丹Ⅲ（或Ⅳ）染液将0.1g苏丹Ⅲ或Ⅳ溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。
6.改良苯酚品红染液原液A：将3g碱性品红溶入100ml 70%酒精，此液可长期保存。
原液B：将10mlA液加入到90ml 5%苯酚水溶液中。
原液C：将55mlB液加入到6ml的冰醋酸和6ml的38%的甲醛中。
染色液：取C液20ml，加45%冰醋酸80ml，充分混匀，再加入1g山梨醇，放置14天后使用，可保存3年。
7. 间苯三酚染液将5g间苯三酚溶入100ml 95%酒精（若溶液呈黄色，即为失效）。
8. 中性红染液将0.1g中性红溶入100ml蒸馏水，用时稀释10倍。
9. 钌红染液将5~10mg钌红溶入25~50ml蒸馏水，现用现配。
10.龙胆紫染液将0.2g龙胆紫溶入100ml蒸馏水。
现常用结晶紫代替。
必要时可将医用紫药水稀释5倍后代用。
11.铁醋酸洋红染液先将100ml 45%醋酸水溶液置入200ml的锥形瓶中煮沸，移去火苗，然后慢慢地分多次加入1g 洋红粉末（切记不可一次倒入）。
待全部倒入后，再煮沸1~2min，并悬入一生锈的小铁钉于染液中，过1min后取出，使染色剂略含铁质，以增加染色性能。
静置12h后过滤于棕色瓶中备用（置于避光处）。
12.苏木精染液苏木精的配方很多，常用的有如下3种：配方Ⅰ：苏木精水溶液0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。
配方Ⅱ：代氏苏木精（De larfield’s haematoxylin）甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml丙液：甘油25ml + 甲醇25ml分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加入丙液，混匀后静置1~2月，至颜色变为深紫色后，过滤备用，可长期保存。
实验室各种染料的配比
实验室常用染料性能介绍及常用药品试剂和培养基的配制一、生物标本常用染料性能简介（一）天然染料1、苏木精苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。
苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。
苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。
被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。
所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。
常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。
苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。
分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。
2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。
一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。
单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。
常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。
洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。
用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。
用洋红配成的溶液染色后能保持几年。
洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。
（二）人工染料人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。
它的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。
在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。
1、酸性品红酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。
他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。
他跟甲基绿同染，能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。
酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。
玉石染色渗透剂配方
玉石染色渗透剂配方
玉石染色渗透剂：
1、原料：
(1) 梭子石20克；
(2) 金铅箔10克；
(3) 氢氧化钠10克；
(4) 胆汁酸10克；
(5) 苏打水250毫升；
2、操作步骤：
(1) 把梭子石和金铅箔加入苏打水，搅拌均匀至溶解；
(2) 向溶液中加入氢氧化钠和胆汁酸，再搅拌均匀；
(3) 把染色渗透剂放入装有玉石的容器中，放置30分钟，至玉石表面出现自然染色；
(4) 将玉石抽出，放入容器中，然后放入温水中稀释，冲洗掉多余染色剂，即可完成渗透染色。
3、注意事项：
(1)在染色前，要对玉石的表面清洗干净，以免影响效果；
(2)使用染色剂时务必按照比例正确配制，以保证染色效果；
(3)注意温度控制，过高或过低均会影响染色效果，可以通过冷却或加
热环境控制。
(4)染色时应注意控制好染色时间，过久或过短会影响染色效果。
氨基黑染色液配置方法
氨基黑染色液配置方法
一、氨基黑染色液成分
二、配制容器与工具：烧杯或玻璃容器、搅拌棒、磁力搅拌器、量筒、移液管、漏斗和滤纸，、
三、配制步骤：首先按照预定比例，使用量筒或移液管准确量取氨基黑染料、溶剂和辅助剂，
再将染料和溶剂倒入烧杯或玻璃容器中，然后使用搅拌棒或磁力搅拌器搅拌溶液，直至染料完全溶解，如果溶液中有杂质，可使用漏斗和滤纸进行过滤，确保溶液纯净，步骤不能马马马虎，一定要仔细！
四、配制环境要求
五、配制注意事项
六、溶液储存方式
七、溶液使用方法
八、安全与防护措施。
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常用染色液的配制
1．草酸铵结晶紫染色液
A液：结晶紫2.5g，95%乙醇25mL。
B液：草酸铵1.0g，蒸馏水1000mL。
制备时，将结晶紫研细，加入95%乙醇溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合静止48h后，过滤后使用。
2．鲁格尔氏（路戈氏）碘液
碘1.0g，KI 2.0g，蒸馏水300mL。
先用3~5 mL蒸馏水溶解KI，再加入碘片，稍加热溶解，加足水过滤后使用。
3．脱色液：95%乙醇；或丙酮乙醇溶液：95％乙醇70mL，丙酮30mL
4．沙黄（番红）染色液
2.5％沙黄（番红）乙醇溶液：沙黄（番红）2.5g，95%乙醇100mL。
此母液存放于不透气的棕色瓶中，使用时取20mL母液加80mL蒸馏水使用。
5．0.1％美兰染色液
0.1g溶解于100mL蒸馏水中。
6．吕氏碱性美蓝色染色液
A液：美蓝0.3g，95%乙醇30mL。
B液：KOH 0.01g，蒸馏水100mL，分别配制A液和B液，混合即可。
7．瑞氏染色液
瑞氏染料粉未0.3g,甘油3mL，甲醇97mL。
将染料放乳钵内研磨，先加甘油，后加甲醇，过夜后过滤即可。
8．5％孔雀绿水溶液（芽孢染色用）
孔雀绿5.0g,蒸馏水100mL。
先将孔雀绿放乳钵内研磨，加少许95％乙醇溶解，再加蒸馏水。
9．黑色素水溶液（荚膜负染色用）
黑色素10g，蒸馏水100mL，40％甲醛（福尔马林）0.5mL。
将黑色素溶于蒸馏水中，煮沸5min，再加福尔马林作防腐剂，用玻璃棉过滤。
10．硝酸银鞭毛染色液
A液：单宁酸5.0g，FeCL3 1.5g，福尔马林(15%) 2.0mL，1%NaOH 1.0mL，蒸馏水100mL。
B液：AgNO3 2.0g,蒸馏水100mL。
将AgNO3溶解后，取出10mL备用，向其它的90mL硝酸银液中加浓氢氧化铵，则形成很厚的沉淀，再继续滴加氢氧化铵到刚刚溶解沉淀成为澄清溶液为之。
再将备用的硝酸银慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的沉淀又消失，再滴入硝酸银，直到摇动后，仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为之。
如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。
11．改良利夫森（Leifson’s）鞭毛染色液
A：20％单宁（鞣酸）2.0mL；B：饱和钾明矾液(20%) 2.0mL；C：5％石炭酸2.0mL；D：碱性复红酒精（95％）饱和液1.5mL。
将以上各液于染色前1~3d，按B加到A中，C加到A、B混合液中，D加到A、B、C混合液中的顺序，混合均匀，马上过滤15~20次，2~3d内使用效果较好。
12．石炭酸复红染色液
A液:碱性复红0.3g，95%乙醇10mL；B液：石炭酸（苯酚）5g，蒸馏水95mL。
先将染料溶解于乙醇，将苯酚溶于水，AB两液混合即可。
13．乳酸石炭酸棉蓝染色液
石炭酸（苯酚）10g，乳酸（比重1.21）10mL，甘油20mL，棉蓝（苯胺蓝）0.21g，蒸馏水10mL。
将石炭酸加入蒸馏水中，加热溶解，再加入乳酸和甘油，最后加棉蓝。
附录Ⅴ：常用缓冲液的配制
1．pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）（20℃pH值7.0~7.1）
甲液：KH2PO4 34.0g，蒸馏水1000mL；乙液：K2HPO4 43.6g，蒸馏水1000mL。
甲液二份和乙液三份混合即可。
2．0.2mol/l醋酸缓冲液（pH7.0）
甲液：醋酸34.0mL，蒸馏水1000mL；乙液：醋酸钠43.6g，蒸馏水1000mL。
甲液72mL，乙液28mL，NaCL 0.58g，配毕测pH值，以121℃，30min灭菌后备用。
3．明胶磷酸盐缓冲液
成分：明胶2g，磷酸氢二钠4g，蒸馏水1000mL，pH6.2。
制法：加热溶解，校正pH，121℃高压灭菌15min。
4．包被缓冲液(pH9.6碳酸盐缓冲液)的制备
Na2CO3 1.59g，NaHCO3 2.93g，加蒸馏水至1000mL。
也可用pH9.6的磷酸盐缓冲液代替。
5．洗液(PBS－T)的制备
PBS加0.05%(V/V)吐温-20。
6．抗体稀释液的制备
BSA 1.0g加PBS－T至1000mL；封闭液的制备同抗体稀释液。
7．底物缓冲液的制备
A液(0.1mol/L柠檬酸水溶液)：柠檬酸(C6H8O7·H2O) 21.01g，加蒸馏水至1000mL。
B液(0.2mol/L磷酸氢二钠水溶液)：Na2HPO4·12H2O 71.6g，加蒸馏水至1000mL。