溶液配制参考
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一、常用溶液的配制
(一)溶液配制注意事项
1.药品要有较好的质量试剂分为优级纯(保证试剂,Guaranteed reagent,G.R.)、分析试剂(Antalytical reagent,A.R.)化学纯(Chemical pure,C.P.)和实验试剂(Laboratory reagent,L.R.)等等。工业用的化学试剂,杂质较多,只在个别情况下应用,如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。
2.药品称量要精确。
3.配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水,比电阻值在50万欧姆以上,pH在~之间才可应用,在组织培养等特殊用途时应注意此项要求,配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。
4.配好后的溶液,应立即除菌处理(如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质),以防杂菌生长。
(二)(1/15)Mol/L磷酸缓冲液
1.1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制:称取磷酸二氢钾(KH2PO4,A.R.)9.08g,用蒸馏水溶解后,倾入1 000ml容量瓶内,再稀释至刻度(1 000ml)。
2.1/15Mol/L磷酸氢二钠溶液的配制:称取无水磷酸氢二钠(Na2HPO4,.)9.47g (或者Na2HPO4·2H2O 11.87g)用蒸馏水溶解后,放入1 000ml容量瓶内,再加蒸馏水稀释至刻度(1 000ml)。
3.按附表的比例,配制成不同pH值的缓冲溶液。
附表1 磷酸盐缓冲液配制法(单位:毫升)
pH
1/15Mol/L
Na2HPO4
1/15Mol/L
KH2PO4
pH1/15Mol/L
Na2HPO4
1/15Mol/L
KH2PO4
(三)L PB液
附表2 LPB液配制法
pH L Na2HPO4(ml)L NaH2PO4(ml)
Na2HPO4·2H2O分子量= L溶液含26.3g/L。
Na2HPO4·12H2O分子量= L溶液含53.7g/L。
NaH2PO4·H2O分子量= L溶液含20.7g/L。
NaH2PO4·2H2O分子量= L溶液含23.4g/L。
(四)L PB缓冲液
附表3 L PB缓冲液配制法
pH Mol/L Na2HPO4(ml)L NaH2PO4(ml)
L Na2HPO4·2 H2O溶液35.1g/L
Na2HPO4·12 H2O溶液含71.64g/L
LNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/L
NaH2PO4·2 H2O溶液含31.21g/L
欲配L PB缓冲液则在L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。欲配制PBS液时,则在溶液中加%的NaCl溶液即可。
(五)无钙镁离子磷酸缓冲盐水(PBS)
(L PH )
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.15g
(如为Na2HPO4·12H2O,则为2.89g)
KH2PO4 0.2g
将上述试剂依次溶于 1 000ml去离子水中,完全溶解后,115℃高压灭菌10min~15min,存在4℃冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。
(六)硼酸盐缓冲液(Borate saline buffer)
1.硼酸(H3BO3)
L硼酸:硼酸12.37g加水至1 000ml。
2.硼砂(Na2B4O7)
L硼砂:硼砂19.07g加水至1 000ml。
附表4 不同pH的L硼酸缓冲液配制法
pH L硼砂(ml)L硼酸(ml)pH L硼砂(ml)L硼酸(ml)
(七)巴比妥缓冲液
1.离子强度L巴比妥缓冲液
巴比妥钠 47.6g
蒸馏水 3 000ml
HCl
( N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水)
⑴将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。
⑵加 N HCl 55ml。
⑶用HCl调节pH到,并加蒸馏水至4 265ml。
2. L巴比妥缓冲液
巴比妥 1.84g
巴比妥钠 10.30g
加蒸馏水至 1
3. L巴比妥缓冲液
巴比妥 1.66g
巴比妥钠 12.76g
加蒸馏水 1
(八)L醋酸盐缓冲液见表附表5
附表5 L醋酸盐缓冲液配制法
pH L
Tris(ml)L
HCl(ml)
pH L
Tris(ml)
L
HCl(ml)
23℃37℃23℃37℃
25525
2525
2525
2525
2525
2525
2525(九)三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液(Tris—HCl缓冲液)
不同pH,L
L三羟甲基氨基甲烷加х,加水稀释至100ml(见下表)
附表6 Tris—HCl缓冲液配制法
pH L
Tris(ml)(ml) pH L
Tris(ml)(ml)
23℃37℃23℃37℃
25525
2525
2525
2525
2525
2525
2525
2525
2525三羟甲基氨基甲烷(Tris)
分子量=
L三羟甲基氨基甲烷:Tris24.23g,加水至1 000ml。
:取,加水至1 000ml。
(十)L 碳酸盐缓冲液
NaHCO3 3.70g
Na2CO3 0.60g
溶于蒸馏水中即得。
不用时塞紧瓶塞,以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。
(十一)甘油磷酸缓冲液
1.配制磷酸缓冲液
L Na2HPO4
NaH2PO4
混合即可
2.9份甘油与1份磷酸缓冲液混合,即为甘油磷酸缓冲液。
用途:用于免疫荧光试验。
(十二)Hank’s液
1.贮存液
NaCl 80.00g