4、药品微生物实验室质量管理指导原则

环 境
实验室的布局和运行
环 境
实验室的布局和运行
环 境
实验室的布局和运行
环 境
实验室的布局和运行
环 境
实验室的布局和运行
环 境
实验室的布局和运行
定期环境监测，增加换气次数及减少人员干预； 控制人员和物品的移动，适当控温湿度；
环 境
良好的清洁和卫生处理，定期清洁消毒，监测清洁剂和消 毒剂的微生物污染，确认在有效期内使用，A、B级区域应 使用无菌处理的清洁剂和消毒剂； 化学消毒剂应证明其消毒效果，定期更换种类以防止产生 耐受菌株； 紫外线不可替代化学消毒； 熏蒸仍是降低死角的微生物污染有效的方法，并应对残留 水平进行验证。
培 养 基
-促生长能力 -抑制能力 -指示能力 -测试菌株 CMCC 与对照培养基进行比较
监管及实施中常见问题
培养基的重要性？ 配制方法及效期的确认？ 质量控制？ 操作规范性？
应有对试剂进行接收、检查和贮存的程 序； 试 剂 关键试剂在开启和储存过程中，对每批 试剂的适用性进行验证； 管理控制 供货商的评估、质量检测、台帐等 保存和记录相关信息。
中国药典 接种法、薄膜过滤法的方法适用性针对环 节：
菌种是特殊的标准品
菌 种
微生物的种是 生物分类学名 称之一
通常指用于实 验室操作的某 些菌株 习惯用法
来源 标准菌株 认可的国内外 菌种保藏机构 按照验证的方法复活、生长
菌 种
标准储备菌株
纯度和特性确认 分装、低温保藏，解冻转种
工作菌株
可以溯源的商业派生菌株
管理
应有程序文件
菌 种
申购、操作、转种传代、纯度特性确认等
药品微生物实验室质量管理指导原则
及其实施中常见问题探讨
山东省食品药品检验研究院 国 明
相关文件及要求 Guidance for industry: Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing-Current Good Manufacturing Practice 工业指导原则：无菌工艺生 产的无菌产品cGMP指南 Guide to Inspections of Microbiological Pharmaceutical Quality Control Laboratories 药品质量控制微生物实验室检查指南 WHO good practices for pharmaceutical microbiology laboratories（WHO Technical Report Series, No. 961, 2011，Annex 2）
环境监测
应按相关国家标准制定完整的验证和环境监测 SOP；
环 境
监测项目、频率及超标结果应有书面程序； 监测项目应涵盖到位，如悬浮粒子、浮游菌、 沉降菌、表面微生物、物理参数（温湿度、换 气次数、气流速度、压差、噪声等）； 环境监测按药品洁净实验室微生物监测和控制 指导原则（附录）进行。
环境监测
样品采集
微生物实验室若负责抽取实验室的原
样 品
始样品，应保证样品抽取受控； 随机抽样原则； 抽样的消毒不得危害样品中微生物； 抽样容器的唯一性标志。
样品储存和运wenku.baidu.com 样 品
样品应在合适的条件下贮存，保证样 品完整性和不改变性状； 尽量减少微生物种群变化,运输中保 持原有储存条件或采取必要措施； 相关记录。
确认 确认分四个阶段： 一设计确认（DQ） 一安装确认（IQ） 一运行确认（OQ） 一性能确认（PQ）
设 备
20102010-04
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监管及实施中常见问题
未按照质量 规程进行 管理
仪器检定：周期、资质、期间、 标示、记录等； 规程不合理或未制定。

关键设备（包括净化检测仪器设
备等）； 人员资质等。
《生物安全实验室建设技术规范》 GB50346-2004
实验室的布局和运行
要求 “对进出洁净区域的人和物建立控制程序和标 准操作规程，对可能影响检测结果的工作（洁 净度验证及监测、消毒、清洁维护等）能有效 地控制、检测并记录”； “微生物检查使用权限应限于经授权的工作人 员”； “实验人员应了解洁净区域的正确进出程序， 包括净化服的穿戴；该净化区域的预期用途， 使用时的限制及限制原因，适当的洁净级 别”。
与国际标准接轨
从终产品检验向过程控制转变
与GMP的对接
实验室控制系统一般要求
微生物检验技术要求
人员资质及培训要求 设施 无菌及微生物限度检验 等实验区域 教育背景、培训教育
内容
适宜、充分的设施条件 无菌及微生物限度检验等实验区域； 菌种处理、微生物鉴别和阳性对照室； 抗生素微生物检定室； 培养室及其他功能间 。 隔离器、层流柜、灭菌器、过滤器、培养箱 灭菌和消毒方式需经验证合格方可正式使用 按统一操作程序制备菌株保证结果一致性 培养基的制备 、贮藏 、质量控制实验 总数、控制菌、非无菌产品检查频次、内毒素
环 境
70%异丙醇涂抹 99.6 80.6
喷雾+涂抹 100 93.6
99.8 27.6
监管及实施中常见问题
对洁净的理解？ 关键因素的控制？ 质量调查与追溯？
建立完整的仪器设备管理制度
设 备
建立仪器设备的清洁保养制度 建立仪器设备操作规程
清单化管理 标识化管理 分类管理
建立仪器设备使用、监控的记录
强调pH值范围、容器材质 对培养基质量的影响
（一般为玻璃容器）。
培养基的贮存 标示、贮存等一般要求 配制培养基、商品化培养基
标记（信息）等
培 养 基
贮藏、注意事项
温度（高压容器中、0℃及以下）、固体培养基融化 再用（一般水浴或流通蒸汽，1次，8h内）。
培养基的作废及处理原则性要求。
培养基的质控 建立质量控制程序 常规检控pH、适用性试验
环 境
清洁、消毒和卫生
理想的消毒剂 可杀死广泛的微生物；低毒、无害；不腐蚀或污染设备 ；有清洁剂的作用；稳定、起效快；不易被有机物灭活 ； 残留少； 价格低。 主要消毒剂类型 酚类；季铵盐类；次氯酸钠；二氧化氢；过氧化氢；过乙 酸及过乙酸/过氧化氢混合物；戊二醛/甲醛；醇类等。 70%酒精喷雾
金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌
设备 灭菌消毒方式 菌种的管理 培养基 实验分类
药品微生物的检验结果受到很多因素的影响
为保证检验结果的可靠性 必须使用经验证的检验方法并严格按照药 品微生物实验室质量管理指导原则要求进 行检验。
文件 结果判断和检测报告 实验记录
2015版药典药品微生物实验室质量管理指导原则
检验结果质量保证和监测 过程质量控制 污染废弃物处理 检验方法
应注明
名称、标准号、接种日期、代数、培养基和 培养条件、保藏的位置和条件等
管理
保藏原则 尽量使微生物的代谢活动于不活跃或相对 静止的状态，减慢或停止生长繁殖。 避免污染，在一定时间内保持生物学特性。 保藏要素 低温 隔氧 干燥 辅助条件 避光、缺乏营养，添加保护剂也能有 效提高保藏效果。
菌 种
监管及实施中常见问题
环 境
2010版GMP：非最终灭菌产品各工序关键操作环境应为B级背景下 的A级。 无菌检查的洁净环境不得低于生产关键区的洁净环境要求 ！
实验室的布局和运行 生物二级试验室 《实验室生物安全通用要求》GB194892008的规定。 生物安全通用准则》
环 境 WS 233-2002 《微生物和生物医学实验室
外部能力验证：CNAS、各系统组织的活 动…
监管及实施中常见问题
实际重视程度？ 遵守规范的意识？ 人员及设备配置？ 培训实效？
培养基的制备 处方、配制、方法、验证、贮存等一般要求 配制培养基、商品化培养基
培 养 基
配制记录、生产记录等要求
培养基的无菌保证和质量保证
除菌方法、验证、 质量保证等要求
检验方法的验证 （validation of compendial procedures ）
检 验 方 法
方法的确认
（verificationd of compendial procedures ）
方法的转移
（transfer of analytical procedures）
2015CP：药品微生物检验替代方法验证指导原则
框架
样品 设备 环境 菌种 试剂 培养基 人员
相关的教育背景； 上岗前培训、考核； 生物安全方面培训，保证安全； 不断地继续培训，保证知识与技能不断 地更新； 熟悉、规范理解和执行； 能力评估-通过质量控制、能力验证等； 培训、考核等档案。
人 员
能力评估
人员比对
人 员
内部质量控制
留样再测 标准菌株等
设备的维护
定期维护和性能验证并记录， 使用前要重新检查或校准；
设 备
专人管理，特殊设备应持证上岗； 使用自动记录设备; 发生偏差应进行评估并采取纠正措施； 定期清洁和消毒； 清洁灭菌SOP； 特殊设备专用，防止交叉污染。
校准、性能验证和使用监测
校准日期、维修日期和重新校准日期；
设 备
温度测量装置对实验结果有直接影响，要求可靠 质量并确保精确度； 校准应遵需国家或国际标准； 容量测定设备、玻璃器具检定； 离心机的校准； 高效过滤器等专业人员安装、更换，验证； 一次性使用容器的质量控制。
选择：根据检验目的选择适宜方法。
检 验 方 法
确认：药典方法、标准方法应进行方法 适用性确认； 验证：新方法使用前进行替代方法的验 证（附录-指导原则）； 注意对商业系统的试剂盒等检测方法和 数据的确认。
方法适用性
检 验 方 法
检验程序或产品发生变化影响检验结果 时，应重新适用性实验。 无菌检查采用的方法和条件应与方法适 用性实验确认的方法一致。 无菌试验中若需使用表面活性剂、灭活 剂、中和剂等，应证明其有效性，且对 微生物无毒性。
发现污染的调查应该从人、机、料、 法、环各个方面进行调查。
环 境
（1）环境监测数据（粒子、浮游菌、沉降碟等） （2）对人员的监测结果 （3）高效过滤器的完整性检测数据 （4）层流台性能数据（气流流速、压差记录等） （5）区域监控数据（空气流向、工作台面气流方 向速度） （6）人员培训情况，操作资质和能力 （7）干扰模拟的执行情况 （8）无菌室用具和其他相关物品的灭菌储存情况
相关文件及要求 美国药典(USP) Microbiological Test 欧洲药典(EP) Microbiological Test(14.K) 微生物检查法 药品检查合作组织（PIC/S） Inspection of Quality Control Laboratories 质量控制实验室检查 GMP2010版 实验室控制系统 GMP 实施指南 微生物检查法
对菌种的理解？ 经验与技术？ 操作规范性？
实验室的布局和运行 基本原则 最大可能防止微生物污染； 防止对人和环境的危害； 合理划分区域、 避免交叉污染、 提高监测可靠性。
环 境
实验室的布局和运行 要求 设计和建筑材料的适用性； 独立的空气机组或空气净化系统以及其 更换、维护和记录； 温度、湿度、照度、压力、噪声、洁净 度应符合相关要求； 划分为相应的洁净区域和活菌操作区 （生物安全柜等）如检测区。
环 境
实验室的布局和运行 具有开展各类实验独立设置的洁净室；
环 境
相应的功能区域 阳性菌室 培养间 实验结果观察区 准备间 样品间 标准菌种储藏间 阳性物处理间及文档处理等
实验室的布局和运行
无菌室 B级背景下的A级单向流区域或D级保护下 的隔离器条件进行； 微生物限度检查室 不低于受控环境下的B级单向 流区域； A级和B级区域的空气供给应通过终端高校空气过 滤器（HEPA）。
清洁、消毒和卫生 建立清洁、消毒等SOP及检测结果记录；
环 建立污染处理SOP。 境 对消毒剂的要求
低毒高效，无腐蚀； 应对消毒剂的微生物污染进行监控； A级和B级洁净区应使用无菌的消毒剂 和清洁剂。
清洁、消毒和卫生 消毒剂的选择 – 接触时间 – 拟杀灭的微生物种类 – 效力确认 – 毒性 – 残留 – 使用方法 取样点的设置原则 – 取决于洁净室的设计和操作流程 – 易导致样品受到污染的位置 – 可以靠近但不要接触样品
样品的确认和处理
样品的传递、接收、储存和识别管理程序； 根据规定尽快开检；
样 品
有数量、包装、标签、温度等问题，应尽快与委 托方沟通，以确定是否开检； 防止外包装污染扩散，外部消毒不应影响样品完 整性； 不可忽视内包装； 污染样品应灭菌丢弃。
监管及实施中常见问题
样品污染的不均一性？ 样品包装及外观的重要性？ 原辅料的检验？ 样品来源？