氧化苦参碱对银屑病样小鼠模型氧化应激的拮抗作用

氧化苦参碱对银屑病样小鼠模型氧化应

激的拮抗作用

(作者：___________ 单位： __________ 邮编：____________)

【摘要】目的研究氧化苦参碱对银屑病样小鼠模型氧化应激的拮抗作用，探讨其防治银屑病的机制。方法采用注射雌激素刺

激小鼠阴道上皮组织增生的方法复制银屑病小鼠动物模型，同时给予

不同剂量的氧化苦参碱干预，实验10d后，取小鼠血清测定超氧化物歧化酶(SOD)总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)谷光甘肽(GSH) 及一氧化氮(NO)水平的含量，并观察氧化苦参碱对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响。结果氧化苦参碱80、40和20mg・ kg-1均可抑制小鼠阴道上皮的有丝分裂(P0.01);氧化苦参碱80mg - kg-1可升高雌激素周期小鼠血清SOD和T-AOC的含量(P0.05，P0.01)，降低MDA GSH和NC含量(P0.01);氧化苦参碱40mg・kg-1可降低雌激素周期小鼠血清MDA和NC 含量(P0.05，P0.01)。结论氧化苦参碱对实验性银屑病具有保护作用，该作用可能与其抑制表皮细胞增殖并降低血清

MDA GSH及NO含量，升高SOD和T-AOC的含量有关。

【关键词】氧化苦参碱；银屑病;有丝分裂指数；超氧化物歧化酶；丙

二醛;谷光甘肽

氧化苦参碱（Oxymatrine , OMT是苦豆子生物碱的一种，具有抗炎、抗增殖、改善机体免疫功能等作用［1］。银屑病（psoriasis）是一种以皮肤组织为主要病理改变的慢性炎症性皮肤病。近年来研究表明，银

屑病患者体内释放大量的超氧阴离子自由基，对生物膜的结构造成广

泛损伤，引起皮肤炎症的发生［2-3］。作者通过给小鼠注射己烯雌酚的方法复制银屑病样小鼠模型［4］，观察氧化苦参碱对银屑病小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）谷光甘肽（GSH）及一氧化氮（NO）水平及阴道上皮组织细胞有丝分裂的影响，探讨了其防治银屑病的机制。

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物昆明种雌性小鼠，体重18〜22g，宁夏医科大

学实验动物中心提供，合格证SYXK （宁2005- 0001）。

1.1.2药品氧化苦参碱（宁夏制药厂，批号64041201）;甲氨蝶呤（Methotrexate ，MTX浙江海正药业股份有限公司，批号080903A）; 己烯雌酚（Diethylstilbestrol ，DES上海通用药业股份有限公司，批号090203）;秋水仙碱（Colchicin ，CLC昆明制药厂，批号841201）。

1.1.3 试剂和主要仪器SOD MDA GSH T-AOC和NO测试盒（南

京建成生物工程研究所，批号20091115）;752N紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）。

1.2实验方法

1.2.1银屑病模型的制备、分组及给药参照文献［4］，取雌性小

鼠180只，随机分为正常对照组、模型组、MTX（1mg kg-1）组和氧化

苦参碱（80、40和20mg- kg-1）组。除正常对照组小鼠皮下注射（ip）给予O.ImL - 10g-1生理盐水外，其余各组均ip给予己烯雌酚

10mg- kg-1，每日1次，连续3d（3d后隔天注射1次，至实验结束），使小鼠阴道上皮处于增生状态。除正常对照组和模型组给予生理盐水外，其余各组于第4天ip给予相应药物，每日1次，连续6d。第10 天上午& 00时与前相同方法ip注射药物，上午9: 00时给各组小鼠ip注射秋水仙碱2mg- kg-1，使细胞停滞于有丝分裂中期，便于计数。6h后小鼠摘眼球取血，处死小鼠。

1.2.2 血清SOD MDA GSH T-AOC NO含量的测定参照试剂盒说明书方法取血清测定SOD MDA GSH T-AOC NC水平。

1.2.3雌激素周期小鼠阴道上皮基底细胞有丝分裂指数测定解剖小鼠，取阴道组织进行常规组织切片，HE染色。用光学显微镜观

察细胞有丝分裂，每个标本计数300个阴道上皮基底细胞中出现有丝分裂的细胞数（高倍镜下，有丝分裂细胞体积增大，细胞核浓缩深染，呈不规则的分裂或多核状态），换算成每100个基底细胞中有丝分裂细胞数，即为有丝分裂指数（％）。

1.3统计学方法实验结果以（士s）表示，组间比较用SPSS 11.5 统计软件进行方差分析，P0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1氧化苦参碱对雌激素周期阴道上皮有丝分裂模型小鼠血清

SOD MDA GSH T-AOC NO水平的影响

与正常对照组比较，模型组小鼠血清MDA GSH及NO含量升高(P0.01) ,SODT-AOC含量降低(P0.01);与模型组比较，MTXImg・kg-1 可升高银屑病小鼠血清SOD和T-AOC的含量(P0.01，P0.05);氧化苦参碱80mg -kg-1可升高银屑病小鼠血清SOD和T-AOC的含量(P0.05 ,

P0.01)，降低MDA GSH及NO含量(P0.01);氧化苦参碱40mg - kg-1 可降低银屑病小鼠血清MDA和NO含量(P0.05，P0.01);与MTX组比较，氧化苦参碱40mg - kg-1和20mg・ kg-1降低银屑病小鼠血清SOD 含量(P0.05); 80mg - kg-1 降低血清MDA和GSH含量(P0.05); 80mg・kg-1和40mg- kg-1降低血清NO含量(P0.01)的作用更为显著(表1)。表1氧化苦参碱对雌激素周期阴道上皮有丝分裂模型小鼠血清SOD MDA GSH T-AOC NO的影响

2.2氧化苦参碱对银屑病样小鼠模型阴道上皮基底细胞有丝分裂的影响

正常对照组阴道组织被覆分化良好的鳞状上皮，表面角化，基底层偶见处于核分裂相的细胞(图1A，见封3);模型组小鼠阴道上皮细胞呈多层，出现角化，阴道上皮细胞基底层细胞增生活跃，有较多细胞核浓缩深染，呈不规则的分裂状态，体积增大(图1B,见封3); MTX组和氧化苦参碱各剂量组阴道组织被覆分化良好的鳞状上皮，表面角化,基底层处于核分裂相的细胞较模型组减少(图1C〜F，见封3)。计数处于有丝分裂相的细胞(表2),模型组处于有丝分裂相的细胞数明显多于正