花粉活力染色液(I2-KI法)
花粉活力测定
TTC法[2,4]又称氯化三苯基四氮唑染色法(2 3, 5一triphenyl tetrazoliun chloride)。
氯化三苯基四氮唑即红四氮唑,作为非萌发分析花粉生话力的方法,速度快也比较精确地反映花粉的活力红四氮唑是标准的氧化还原色素,水溶液无色,遇到活细胞里的脱氢酶接受氯离子,还原后变红生成不溶于水的三苯甲赝,呈红色。
I-IK染色测定法：此法常用于鉴定不含淀粉的不育花粉,凡染成蓝紫色的为发育好、活力强的花粉,呈黄褐色的为发育不良的花粉。
过氧化物酶测定法具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶,此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色,依据颜色可知花粉的活性强弱。
过氧化物酶测定法
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶,此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色,依据颜色可知花粉的活性强弱［13］。
醋酸洋红法测定花粉活力[14]
取少量花粉置于载玻片上,然后滴加1滴1%的醋酸洋红溶液。
室温下静置5 min观察。
统计染成红色的花粉粒所占比率。
[13]赵鸿杰，乔龙巴图，殷爱华等．3种山茶属植物花粉活力测定方法的比较（Ｎ）．中南林业科技大学学报．2010，30（3）．
[14] 盖伟玲，盖树鹏，郑国生．牡丹新鲜花粉活力的快速测定(J)．育苗科技Seedling Cultivation．2011(5)。
实验四 花粉生活力的测定
• 一、目的 学会用染色法进行花粉生活力的 测定方法。 二、材料 金丝桃即将开放的花蕾。 三、药品 碘-碘化钾溶液 蒸馏水 四、用具 显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、 培养皿、镊子等。
• 五、原理：
• 多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累 较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。发 育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或 积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。因 此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
1
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• 花的解剖结构观察 • 1、依据花被的有无（双被花，单被花，无被花），对 称类型（辐射对称，左右对称，不对称），雄雌蕊有无 （两性花，单性花，无性花，杂性花）分析； • 2、雄蕊的类型（分离雄蕊，单体雄蕊，二体雄蕊，多 体雄蕊，聚药雄蕊）； • 3、雌蕊的类型（单雌蕊，离生雌蕊，合生雌蕊）； • 4、子房的位置 • 子房上位（花下位，花周围）；子房半下位（周位花）； 子房下位（上位花）； • 5、胎座的类型：边缘胎座、侧膜胎座、中轴胎座、特 立中央胎座、基生胎座、顶生胎座
• 【注意事项】 • 此法不能准确表示花粉的活力。因为核期 退化的花粉已有淀粉积累，遇碘呈蓝色反 应。另外，含有淀粉而被杀死的花粉粒遇I2KI也呈蓝色。
• 七、作业 在低倍镜下观察5个视野，计算染色与 未染色的花粉粒数，将计算结果填入表中， 并计算其有生活力的花粉百分数。
测定 花粉 总数 染色数 染色数 有生活力花粉百分 （蓝色） （黄褐色）数（%）
• 六、方法和步骤 • 1、溶液的配制： • I2-KI溶液：取2g KI溶于5～10ml蒸馏水中，加入1g I2，待 完全溶解后，再加蒸镏水300ml。贮于棕色瓶中备用。 • 2、采集花粉 • 采集即将开放的金丝桃的花蕾。 • 3、压片与镜检 • 将花蕾剥开，取一花药于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊 子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1～2滴I2-KI溶液，盖 上盖玻片，在显微镜下观察。凡是被染成蓝色的为含有淀 粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。 观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率， 以染色率表示花粉的育性。 •
花粉活力测定的3种办法
精心整理实验16?花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。
掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法【原理】水放???????1.用。
2.20℃条???????1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
二、碘-碘化钾染色测定法多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。
因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】???显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
???【试剂】-KI300ml。
???I2～3张片??基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲??）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。
【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
【试剂】0.5%TTC溶液：称取0.5gTTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。
溶液避光保存，若发红时，则不能再用。
采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
实验四、花粉生活力的测定
实验四、花粉生活力的测定一、实验目的：通过实验掌握花粉生活力测定的具体技术和方法。
二、实验原理：花粉生活力是指在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力。
花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。
三、实验材料：苹果花粉四、实验用具与试剂：指形管、显微镜、载玻片、盖玻片、凹式载玻片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、玻璃棒、微波炉、滤纸、水浴锅、计数器、镊子；碘化钾（KI）、碘、蓝墨水、蒸馏水、蔗糖、琼脂、硼酸等。
五、实验步骤常用的测定花粉生活力的方法：形态观察法、碘-碘化钾染色法、蓝墨水染色法和培养基发芽法。
1. 形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
具体方法：将花粉置于载玻片上，在显微镜下观察3个不同视野，要求被检查的花粉粒总数达到100粒以上，计算正常花粉粒占总数的比率。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
2. 染色法(1) 碘-碘化钾染色法①原理：正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少。
据此，可用化学物质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。
通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形花粉则不积累淀粉，当I-KI染色时呈黄褐色。
②I-KI溶液：取2.0 g KI溶于5～10mL蒸馏水中，然后加入1.0 g I2待全部溶解后，再加蒸馏水至200mL，贮于棕色瓶中备用。
③具体方法：取少量花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴I-KI溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察。
凡被染色呈蓝色表示具有生活力，呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉。
为了保证实验的准确性，要求观察不同的3个视野，求其平均值，统计花粉生活力。
实验一 花粉生活力的测定
2 染色观察法 （1）碘-碘化钾染色法 先称取0.3g碘和1.3g碘化钾溶于100mL的蒸馏水 中，即成碘-碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉 球擦净的普通载玻片上，然后加水一滴，使花粉 散开，再加一滴碘-碘化钾溶液，盖上盖玻片，置 于显微镜下观察不同的三个视野，凡花粉粒被染 成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活 力的花粉（淀粉遇碘变蓝是淀粉的特性）。 （2）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有 氧化还原作用，而无生活力的花粉则无此反应， 因此当TTC渗入有生活力的花粉时，其脱氢酶在 催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成 TTF而成红色。
通常花粉的形态、花粉中酶的活性以及积 累淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉生活 力密切相关，因此可以利用花粉的形态观 察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀 扮的含量以及在人工培养基上花粉管萌发 的情况作为确定花粉生活力高低的标准。
【实验材料、主要仪器及试剂】 1 实验材料 各种园林植物的花粉。如百合、牡丹、凤仙花、 柳树、菊花、月季、凤仙花、紫茉莉等植物的花 粉。 2 主要仪器 载玻片、凹玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、棉球、 显微镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培养皿、玻璃 棒、玻璃铅笔、凡士林、标签、冰箱。 3主要试剂 碘-碘化钾、氯化三苯基四氮唑、 Na2HPO4· 2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、 H3BO3，Ca（NO3）2，MgSO掌握用形态法、染色法、发芽 法测定花粉生活力的具体技术和方法。 2 观察花粉在人工配制的培养基上的萌 发情况，认识花粉萌发形成花粉管的 外形和伸长过程，为理解植物的生殖 过程奠定基础。
【实验原理】 花粉的生活力因植物种类不同而差异很大。在自 然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能 存活几小时，几天或几个星期。一般木本植物花 粉的寿命比草本植物的长，如在干燥、凉爽的条 件下，柑桔花粉能存活40～50天，椴树45天，苹 果10～70天，樱桃30～100天，麻栎一年。而在 草本植物中，如棉属花粉采下后24小时存活只有 65％，超过24小时很少存活；多数禾本科植物的 存活时间不超过一天，如玉米1～2天，水稻花粉 在田间条件下经3分钟就有50％丧失生活力，5分 钟后几乎全部死亡，是寿命最短的例子。花粉粒 的类型和生活力也表现了相关性，通常三胞花粉 的寿命较二胞花粉短，如水稻等禾本科植物为三 胞花粉，寿命都是比较短的。
花粉生活力萌发试验
实验二花粉生活力的测定―――悬滴培养法一、实验目的：掌握了解花粉生活力测定的意义和方法。
二、实验材料：二月兰花粉三、实验仪器及药品：凹玻片、盖玻片、解剖针、镊子、纱布、标签、铅笔、显微镜、恒温箱、蔗糖、蒸馏水、硼酸、凡士林。
四、实验原理：花粉是植物自然授粉和人工杂交的主要物质基础，花粉生活力的大小是保证杂交成功的关键。
在有性杂交育种中，常因父母本花期的不同，作为父本的花粉必须经过贮藏直到母本植株开花时再用于授粉（花粉在低温0－2℃、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低。
花粉贮藏的原理就是创造代谢强度低的环境，以延长花粉的寿命）；或者双亲不在同一个地方，必须由外地邮寄花粉供应。
经过贮藏或外地邮寄的花粉是否已经丧失生活力，必须经过测定才能确定。
鉴定花粉生活力的方法主要有四种：一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。
此法的缺点是需要的时间较长，且实验的结果易受气候条件的影响。
二是将待测花粉授到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况。
根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。
后两种方法都是根据花粉的萌发率来反映生活力的高低，有一定的参考价值。
但是萌发的不一定都能受精，特别是人工萌发还受许多条件的限制，所以也只有相对的可靠性。
四是用染色方法来鉴定花粉的生活力。
其原理是在活的花粉内有过氧化氢酶的存在，它可以促进过氧化物（如H2O2）放氧分解。
这些刚被放出的活性氧很容易使还原剂氧化，常用无色联苯胺、α－萘酚等还原剂做指示剂，这些还原剂被氧化后表现红色或玫瑰红色。
如果花粉是活的，那么会很快被染成红色或玫瑰红色，如果花粉是死的，则这一反应迟迟不能进行，花粉保持原色。
此法优点是比较快捷，但是比较间接。
本试验采用悬滴培养法鉴定花粉生活力。
五、实验步骤：1.配培养液：用蒸馏水和蔗糖分别配成5％、10%、15％的蔗糖溶液，并在各培养液中加少量硼酸。
2实验二、花粉生活力测定
前 言
花粉生活力测定在育种 力 2．雄性不育系的鉴定
实验目的：
学习并初步掌握作物花粉生 活力测定的常用方法
测定方法:
（一）I-KI染色鉴定
（二）TTC染色鉴定
（三）花粉粒发芽鉴定
实验方法 I-KI染色鉴定：
正常的成熟花粉粒体积较大， 并含有大量的淀粉粒，遇I-KI 呈紫黑色，不正常的花粉粒体 系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。
实验方法 TTC染色鉴定：
具有生活力的花粉中含有 脱氢酶，它能催化引物使脱下 的氢与TTC结合，生成红色化 合物甲替。凡有生活力的花粉 呈红色，生活力弱的呈浅红色， 无生活力的不显色或成黄色。
实验方法
花粉粒发芽鉴定：
在人工培养基上进 行发芽试验，可以比较 准确地判断花粉的生活 力。
实验步骤
I-KI染色鉴定：
2 ．准备 TTC 染色和发芽试验的材料， 置培养箱保温； 3．调试显微镜，I-KI染色鉴定； 4．TTC染色鉴定、发芽率调查。
作业
实验三、作物花粉生活力测定 1．测定方法和原理： （一）I-KI染色鉴定：正常的成熟花粉粒体积较大，并含有大量的淀粉 粒，遇I-KI呈紫黑色，不正常的花粉粒体系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。 （二）TTC染色鉴定：具有生活力的花粉中含有脱氢酶，它能催化底物 使脱下的氢与TTC（氯化三苯基四氮唑）结合，生成红色化合物甲替。 凡有生活力的花粉呈红色，生活力弱的呈浅红色，无生活力的不显色或 成黄色。 （三）花粉粒发芽鉴定：在人工培养基上进行发芽试验，可以比较准确 地判断花粉的生活力。 2．实验结果： 材料 I-IK染色率% TTC染色率% 发芽率%
用镊子夹一个花药于载玻片 上滴上一滴1%I-KI溶液 用镊子将花药夹碎并把碎片 去干净盖上盖玻片置显微 镜下观察。
实验八 花粉活力及花粉管伸长的测定
实验八花粉活力及花粉管伸长的测定[实验目的]通过花粉活力的测定，可以了解花粉的可育性，并掌握不育花粉的形态、生理特征。
熟悉测定花粉活力的几种方法。
Ⅰ碘-碘化钾（I-KI）染色测定法[实验原理]禾谷类植物花粉成熟时积累淀粉较多，通常可用I-KI染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，不积累淀粉，用I-KI染色，不呈蓝色，而呈黄褐色。
[器材与试剂]1.实验仪器显微镜，镊子，恒温箱，载玻片，盖玻片待全2.实验试剂 I-KI溶液（取KI 2g溶于5～10mL蒸馏水中，然后加入1 g I2部溶解后，再加蒸馏水至200mL。
（贮于棕色瓶中备用）凡被染成蓝色的为发育好、活力强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。
Ⅱ过氧化物酶测定法[实验原理]具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。
此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉的活性强弱。
[器材与试剂]1．实验仪器显微镜，载玻片，盖玻片，镊子2．实验试剂 0.5%联苯胺[将0.5g联苯胺溶于100mL50%乙醇中（有毒，注意安全）]，0.5%ɑ-萘酚（将0.5g ɑ -萘酚溶于100mL50%乙醇中）， 0.25%碳酸钠（将0.25g碳酸钠溶于100mL蒸馏水中），实验前将上述三种溶液各取10mL混合均匀成试剂Ⅰ，0.3%过氧化氢。
3、实验材料花粉［实验步骤］1．干洁载玻片上放少量花粉，然后加试剂Ⅰ和0.3%过氧化氢各1滴，搅匀后盖上玻片。
30℃下经10min后在低倍显微镜下观察。
如花粉粒为红色，则表示有过氧化物酶存在，花粉有活力，能发芽；如无色或黄色，则表示已失去活力，不能发芽。
2.观察2～3个制片，每片取5个视野，统计100粒，并计算其发芽率。
Ⅲ氯化三苯基四氮唑法（TTC）实验原理见实验7种子活力的快速测定中的TTC法。
[器材与试剂]1.实验仪器显微镜，镊子，载玻片，盖玻片，2.实验试剂 0.5%TTC溶液（参阅实验7-1）[实验步骤]1.取少数花粉于载玻片上，加1～2滴TTC溶液，盖上盖玻片。
育种实验-花粉生活力的测定2011春
三、方法
（二）花粉生活力试验 经贮存的花粉,在使用之前必须作生活力的测定以鉴 定其量。 测定花粉生活力的方法主要有三种。
活体萌发法
离体萌发法
染色法
1、花粉发芽法
人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况 来鉴定花粉生活力的强弱。
（1）培养基的制作与接种
一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。 加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝 固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用头 发（接种针或解剖针）沾以少量花粉。条播（轻轻振动，使 花粉均匀地撒在培养基上），将载玻片放在垫有湿润棉花培 养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签写明处理、种类、播 种日期，将培养皿放于(20_25℃)的恒温箱中培养。
表1 花 粉 生 活 力 观 察 记 载 表
种处 类理
花粉发芽率（或染色后具有生活力的花粉百分率） 时间 重复I 重复Ⅱ 重复Ⅲ 总 计
发 发 发 发 花 未 发 花 未 发 花 未 发 芽 芽 芽 芽 播 检 粉 发 芽 粉 发 芽 粉 发 芽 种 查 率 率 率 率 数 芽 数 数 芽 数 数 芽 数 % % % % 发 芽 法 染 色 法
本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的 方法。
二、材料及用具
材料：梨的花粉。 用具：显微镜、盖玻片、载玻片、凹式载玻 片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、 玻璃棒、微波炉
试剂：I-KI溶液、蒸馏水、蔗糖、琼脂等。
三、方法
（一）花粉贮藏 从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放 在纸上或培养皿中，放于干燥的室内阴干，令其开裂， 花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞 以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。再把花 粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条 件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以 放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。
用显微镜进行花粉活力的测定
用显微镜进行花粉活力的测定用显微镜进行花粉活力的测定用显微镜进行花粉活力的测定实验类型：基础内容：一、实验目的1.学习用碘-碘化钾染色测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。
2.学习用过氧化物酶测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。
3.学习用氯...内容：1.学习用碘-碘化钾染色测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。
2.学习用过氧化物酶测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。
3.学习用氯化三苯基四氮唑法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。
（一）碘一碘化钾染色测定法水稻正常花粉呈圆球形，并积累淀粉较多，通常可用I-KI染成蓝色；发育不良的花粉常呈畸形，不积累淀粉，用I-KI染色，不呈蓝色，而呈黄褐色。
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。
此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉有无活性。
（三）氯化三苯基四氮唑法(TTC法)2、3、5-氯化三苯基四氮唑(TTC)的氧化状态是无色的，被氢还原时成红色的TTF。
具有生命力的种子，由于呼吸作用产生的氢能使TTC还原成TTF，因此胚部便染成红色；而无生命的种子没有呼吸代谢活力，TTC不被还原，因而胚部不着色。
所以，可根据种子胚部染不染成红色来判断种子有无生命力，从而测定种子发芽率。
2. 试剂:(1)I-KI溶液(2) 0.5％联苯胺：将0.5g联苯胺溶于100m150％乙醇中。
(3)0.5％a一萘酚：将0.5ga一萘酚溶于100ml 50％乙醇中。
(4)0.25％碳酸钠：将0.25g碳酸钠溶于100ml水中。
(5)0.3％过氧化氢，即试剂Ⅱ。
(6)试剂I：由0.5％联苯胺、0.5％a一萘酚和0.25％碳酸钠溶液各10ml混合配成。
(7)0.5％TTC溶液。
3.器材：、载玻片、盖玻片、镊子、恒温箱。
1.花粉采集、置载玻片上、滴加试剂3.计算1、四氮唑液最好现配现用，如要贮存必须放在棕色瓶中，并放在阴凉黑暗处。
水 稻 花 粉 镜 检
水稻花粉镜检之马矢奏春创作
经由进程花粉活力的测定,可以理解花粉的可育性,并掌握不育花粉的形态和心理特色.在作物杂交育种、作物结实机理和花粉心理的研究中,常涉及花粉活力剖断.掌握花粉活力的快速测定方法,是进行雄性不育株的选育、杂交技能的改良以及揭示表里成分对花粉育性和结实率影响的根本. Ⅰ、碘-碘化钾染色法多半植物正常花粉呈规则外形,如圆球形或椭球形、多面体等,并积累淀粉较多,常日I2-KI可将其染成蓝色.发育不良的花粉常呈畸形,往往不含淀粉或积累淀粉较少,用I2-KI染色,往往呈现黄褐色.是以,可用I2-KI溶液染色法测定花粉活力. 一、仪器、药品与材料（一）实验材料
各类着生花芽的植物枝条,花芽要充分发育并已含苞待放. （二）仪器与用品
显微镜,恒温箱,镊子,载玻片,盖玻片. （三）试剂
I2-KI溶液：取 2 g KI 溶于5~10 mL蒸馏水中,然后参加1 g I2,待全部消融后,再加蒸馏水定容至300 mL.贮于棕色瓶中备用. 二、实验步调
1．花粉收集：取充分红熟将要开花的花蕾,剥除花被片等,掏出花药.
2．镜检：取一花药置于载玻片上,加 1 滴蒸馏水,用镊子
将花药充分捣碎,使花粉粒释放,再加 1~2 滴I2- KI溶液,盖上盖玻片,于低倍显微镜下不雅察.凡被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒,呈黄褐色的为发育不良的花粉粒.不雅察 2~3 张装片,每片取5个视野,统计花粉的染色率,以染色率暗示花粉的育性.
注：此法不克不及准确暗示花粉的活力,也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响.因为核期退化的花粉已有淀粉积累,遇 I2-KI呈蓝色反应.别的,含有淀粉而被杀去世的花粒遇I2-KI 也呈蓝色.。
花粉生活力检验
园艺植物花粉的贮藏和生活力的测定
一、实验目的
1.了解花粉的主要贮藏方法。 2.学习并掌握花粉生活力与发芽率的测定方法。
二、材料与用具 1.材料：月季、南瓜正在开花的植株
2.用具：
（1）染色法：碘、碘化钾、蒸馏水等化学试剂；生物显微镜，天 平，载玻片，盖玻片，滴瓶等器具。 （2）花粉发芽试验：生物显微镜，天平，凹玻片，量缸，烧杯， 电炉，玻璃棒，冰箱，量筒，滴瓶等器具；琼脂，蔗糖，蒸馏水
统计出具有生活力的花粉的百分率
2.培养法
（1）原理
正常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适宜的培 养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观 察计算其萌发率，以确定其活力。
（2）方法步骤
①将培养基熔化后，用玻棒蘸少许，涂布在凹玻
片上，放入垫有湿润试纸的培养皿中，保湿备用。
②在25℃左右的恒温箱中培养，5~10min后在显
花 粉
5.装入已消毒而且干燥的花粉瓶
内 6.置于干燥器内（干燥器底部放 入适量的碳酸钙或氯化钙） 7.将干燥器放于冰箱内（温度接
近0℃而又是黑暗的条件）贮
藏备用。
（二）花粉生活力的测定
1.染色法—I-KI
（1）实验原理：碘遇淀粉变兰色，正常的花粉淀
粉含量高而不正常的花粉含量少，正常的染 成兰色颜色较深；生活力弱的染成淡兰色； 无生活力的染色呈黄褐色 （2）方法步骤：在载玻片上放有少量测定花粉， 然后在花粉上滴一滴染色液，用玻棒将之混 匀后，在显微镜下镜检，每片观察5个视野，
微镜下检查5个视野，统计其萌发率。
四、思考题
1.上述方法是否适合于所有植物花粉活力的 测定？
2.哪一种方法更能准确反映花粉的活力试剂。
2-2南瓜的雄花和雌花
水 稻 花 粉 镜 检
水稻花粉镜检之巴公井开创作
通过花粉活力的测定,可以了解花粉的可育性,并掌握不育花粉的形态和生理特征.在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中,常涉及花粉活力鉴定.掌握花粉活力的快速测定方法,是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础. Ⅰ、碘-碘化钾染色法
大都植物正常花粉呈规则形状,如圆球形或椭球形、多面体等,并积累淀粉较多,通常I2-KI可将其染成蓝色.发育不良的花粉常呈畸形,往往不含淀粉或积累淀粉较少,用I2-KI染色,往往出现黄褐色.因此,可用I2-KI溶液染色法测定花粉活力. 一、仪器、药品与资料（一）实验资料
各种着生花芽的植物枝条,花芽要充沛发育并已含苞待放. （二）仪器与用品
显微镜,恒温箱,镊子,载玻片,盖玻片. （三）试剂
I2-KI溶液：取 2 g KI 溶于5~10 mL蒸馏水中,然后加入1 g I2,待全部溶解后,再加蒸馏水定容至300 mL.贮于棕色瓶中备用. 二、实验步伐
1．花粉收集：取充沛成熟将要开花的花蕾,剥除花被片等,取出花药.
2．镜检：取一花药置于载玻片上,加 1 滴蒸馏水,用镊子
将花药充沛捣碎,使花粉粒释放,再加 1~2 滴I2- KI溶液,盖上盖玻片,于低倍显微镜下观察.凡被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒,呈黄褐色的为发育不良的花粉粒.观察 2~3 张装片,每片取5个视野,统计花粉的染色率,以染色率暗示花粉的育性.
注：此法不能准确暗示花粉的活力,也不适用于研究某一处置对花粉活力的影响.因为核期退化的花粉已有淀粉积累,遇I2-KI呈蓝色反应.另外,含有淀粉而被杀死的花粒遇I2-KI 也呈蓝色.。
花粉活力的测定
活种子
死种子
四、注意事项
1、在切种子时，应垫在橡胶垫上，不可直接
在桌面上切，以防切伤桌面； 2、染色时间不可过长，否则不易区别染色与 否； 3、在使用切开的种子时，每粒种子每组只能
使用其中的一半，但两组可以交换使用各自
剩余的另一半。
三、实验步骤
1. 取一花药置于载玻片上，加一滴蒸馏水后，用
镊子将其充分捣碎，再加1~2滴I2-KI，盖上盖 玻片后于低倍镜下观察花粉成熟状况； 2. 取1~2滴花粉培养液于另一凹面载玻片的凹陷处， 再将花粉粒少许撒落于培养液中，盖上盖玻片
后放置30分钟左右，观察花粉管的萌发情况。
有活力的花粉
山茶花花粉管的萌发
二、实验材料、试剂及用具
1.仪器设备：培养皿、刀片、烧杯、镊子。
2.试剂：5%红墨水 3.材料：小麦种子
三、实验步骤
1、浸种：将待测小麦种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种6 小时左右，以 增强种胚的呼吸作用。
2、染色：取已吸胀的种子100粒，沿胚的中线切为两半，将一半置于 培养皿中（不能仅取50粒），加入 5% 红墨水（以淹没种子为度 ），染色 10 ～ 15 min （温度高时间可短些）（时间不宜太长，为 什么？）。 3、观察：染色后倒去红墨水，用水冲洗多次，至冲洗液无色为止。 检查种子死活，凡种胚不着色或着色很浅的为活种子；凡种胚与 胚乳着色程度相同的为死种子。可用沸水杀死的种子作对照观察 。 4、计算有生活力种子的百分率。
不能被染色或着色较浅；成熟花粉具有较强的活力， 在适宜的条件下就能萌发出花粉管。多种植物花粉 能在含10％蔗糖、100ppm硼酸的花粉培养基上萌 发，在显微镜下可观察花粉管的伸长。
二、实验材料、试剂及用具
1.仪器设备：显微镜、载玻片及盖玻片、解
实验一 花粉生活力的测定
【思考题】 1 用染色法计算花粉生活力（3个视野）。用 发芽法计算花粉生活力（3个视野）。 2 同一品种花粉用不同方法测定时其生活力 高低的结果分析。
通常花粉的形态、花粉中酶的活性以及积 累淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉生活 力密切相关，因此可以利用花粉的形态观 察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀 扮的含量以及在人工培养基上花粉管萌发 的情况作为确定花粉生活力高低的标准。
【实验材料、主要仪器及试剂】 1 实验材料 各种园林植物的花粉。如百合、牡丹、凤仙花、 柳树、菊花、月季、凤仙花、紫茉莉等植物的花 粉。 2 主要仪器 载玻片、凹玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、棉球、 显微镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培养皿、玻璃 棒、玻璃铅笔、凡士林、标签、冰箱。 3主要试剂 碘-碘化钾、氯化三苯基四氮唑、 Na2HPO4· 2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、 H3BO3，Ca（NO3）2，MgSO4，KNO3。
（2）培养基发芽法 a．培养基的制备：在250 mL的烧杯中加 入90 mL蒸馏水，再加入1g的琼脂，在酒精 灯上加热，使之完全熔解，然后加入10g蔗 糖，制成10％的糖液（如有可能，可配置 同含糖量的培养基，进行比较试验）。 注意用玻璃棒不断搅拌，使其融化均匀， 有条件时还可加入微量柱头渗出液、维生 素等以形成花粉粒发芽的最适环境条件。
2 染色观察法 （1）碘-碘化钾染色法 先称取0.3g碘和1.3g碘化钾溶于100mL的蒸馏水 中，即成碘-碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉 球擦净的普通载玻片上，然后加水一滴，使花粉 散开，再加一滴碘-碘化钾溶液，盖上盖玻片，置 于显微镜下观察不同的三个视野，凡花粉粒被染 成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活 力的花粉（淀粉遇碘变蓝是淀粉的特性）。 （2）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有 氧化还原作用，而无生活力的花粉则无此反应， 因此当TTC渗入有生活力的花粉时，其脱氢酶在 催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成 TTF而成红色。
花粉活力染色液(I2-KI法)
花粉活力染色液(I 2-KI 法)简介：花粉活力的大小直接影响授粉、受精过程，与植物的产量密切相关，通过花粉活力的测定，可了解花粉的发育，并掌握不育花粉的形态、生理特征。
花粉中所含淀粉的有无和多少可以作为判断花粉发育程度的指标，大多数正常成熟的花粉呈球形，含有较多淀粉，遇见I 2-KI 溶液可被染成蓝色；发育不良的花粉常呈畸形，通常不含淀粉或含淀粉少，遇见I 2-KI 溶液不会被染色或被染成黄褐色，根据花粉染色情况，可鉴别花粉的活力。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、取成熟将要开放的新鲜花朵，小心去除花瓣和雌蕊。
2、将花药物质置于载玻片，滴加一滴蒸馏水，用镊子或其他工具将花药捣碎，使花粉粒释放出来。
3、滴加1－2滴I 2-KI Stain ，盖上盖玻片，显微镜下观察。
4、观察2-3张片子，每片取5-6个视野，统计花粉的染色率。
染色结果：活力强蓝色 活力弱不被染色或被染成黄褐色 无活力或不育无色计算：观察统计100粒花粉，计算有活力花粉的百分数。
其公式为：花粉活力百分数(%)=有活力花粉数/100×100%注意事项：1、 染完色后，应立即显微镜下观察。
2、 染色时需要将花粉完全浸没于染色液中。
编号 名称 DP0105 DP0105 Storage I 2-KI Stain 10ml 50ml RT 避光使用说明书 1份3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：编号名称DC0032 Masson三色染色液DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)TC1243 甘油三脂(TG)检测试剂盒(GPO-PAP单试剂比色法)。
溲疏花粉的萌发特性及活力测定
溲疏花粉的萌发特性及活力测定李娟;路丙社【摘要】以溲疏(Deutzia scabra Thunb)花粉为材料,用染色法(TTC染色法和I2-KI染色法)对花粉活力进行了测定.采用液体培养的方法探讨了不同贮藏温度、不同培养温度、蔗糖浓度、H3BO3浓度以及CaCl2浓度对其花粉萌发的影响和花粉的萌发动态.结果表明:(1)TrC染色法和I2-KI染色法所得结果存在一定的差异,TTC染色法所测得花粉活力为68.24％,I2-KI染色所测得花粉活力接近100％.用TTC染色能够更加准确的测定花粉活力.(2)在20℃,5℃,-15 ℃的贮藏环境下储藏24 h后花粉萌发率分别为49.15％,30.28％,38.50％,因此贮藏溲疏花粉最佳温度为20℃.(3)溲疏花粉萌发的最适宜的糖的质量浓度为100 g/L,最适宜培养温度为25℃.(4)溲疏花粉萌发的最适宜的H3B03和CaCl2质量浓度分别为0.3 g/L和1.5 g/L.(5)溲疏花粉接种后经过2～3h的培养,花粉管长度增长量最高,是花粉萌发的最佳观察时机.【期刊名称】《河北科技师范学院学报》【年(卷),期】2018(032)003【总页数】5页(P10-14)【关键词】溲疏;花粉;花粉活力;花粉萌发率;花粉管生长【作者】李娟;路丙社【作者单位】河北农业大学园林与旅游学院,河北保定,071001;河北农业大学园林与旅游学院,河北保定,071001【正文语种】中文【中图分类】S685.990.1溲疏(Deutzia scabra Thunb)虎耳草科、溲疏属落叶灌木；花粉白色；喜温暖、潮湿的气候环境，耐寒、耐旱，喜光照、稍耐阴；富含腐殖质、pH6～8并且排水良好的土壤是溲疏生长的最适宜土壤条件。
溲疏萌芽力强，极其耐修剪。
溲疏的园林应用广泛，能够丛植于路边、林缘、花篱及岩石园。
对于瓶插观赏来说，溲疏花枝也是不错的选择。
其根、叶、果都可以药用，具有极高的药用价值。
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染色结果：
活力强 活力弱 无活力或不育
蓝色 不被染色或被染成黄褐色 无色
计算：
观察统计 100 粒花粉，计算有活力花粉的百分数。其公式为： 花粉活力百分数(%)=有活力花粉数/100×100%
注意事项：
1、 染完色后，应立即显微镜下观察。 2、 染色时需要将花粉完全浸没于染色液中。
北京雷根生物技术有限公司
遇见 I2-KI 溶液可被染成蓝色；发育不良的花粉常呈畸形，通常不含淀粉或含淀粉少，遇见 I2-KI 溶液不会被染色或被染成黄褐色，根据花粉染色情况，可鉴别花粉的活力。
组成：
名称 I2-KI Stain 使用说明书
编号 DP0105 DP0105 Storage
10ml
50ml 1份
RT 避光
操作步骤(仅供参考)：
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12 个月有效。
相关：
编号 DC0032 DF0135 TC1243
名称 Masson 三色染色液 多聚甲醛溶液(4% PFA) 甘油三脂(TG)检测试剂盒(GPO-PAP 单试剂比色法)
北京雷根生物技术有限公司
简介：
花粉活力染色液(I2-KI 法)
花粉活力的大小直接影响授粉、受精过程，与植物的产量密切相关，通过花粉活力
Байду номын сангаас
的测定，可了解花粉的发育，并掌握不育花粉的形态、生理特征。花粉中所含淀粉的有无
和多少可以作为判断花粉发育程度的指标，大多数正常成熟的花粉呈球形，含有较多淀粉，