染色液的配制
病理制片技术——常用试剂及染液的配制
病理制片技术——常用试剂及染液的配制一、Harris氏苏木精染色液的配制1．试剂准备：苏木精10 g，硫酸铝钾80 g，无水乙醇200 ml，蒸馏水2000 rnl，氧化汞3 g，冰乙酸40ml。
2．配制步骤(1)将2000 ml蒸馏水注入一只3000 的大号三角烧瓶内，加入80 g硫酸铝钾后置电炉或电磁炉上加热硫酸铝钾完全溶解。
(2)将200 ml无水乙醇注入一只300 ml的三角烧瓶内，加入10 g苏木精摇动使之完全溶解。
(3)将已完全溶解于无水乙醇的苏木色精液体缓缓注入已完全溶解的2000 ml硫酸铝钾液体中，继续加热至液体沸腾关闭电源。
此时液体应呈透明的玫瑰红色。
(4)将3 g氧化汞溶于20ml蒸馏水中搅匀后缓缓(一定要缓慢)方入未被氧化的苏木精液体中，边加氧化汞边搅拌。
此时苏木精被氧化，液体的颜色会迅速地变成深蓝紫色。
(5)氧化汞加完后用玻棒充分的搅拌液体并继续加热至液体再度沸腾关闭电源。
(6)用湿毛巾保护，将装有停止沸腾的热苏木精的三角烧瓶转移至冷水中迅速降温至室温。
(7)密封瓶口室温避光直射储存备用，临用前每100 ml苏木精液加入2～3 ml冰乙酸混匀。
二、伊红染色液的配制l. 试剂准备；伊红Y 20 g，蒸馏水1500 ml，95％乙醇500 ml，冰乙酸lml。
2．配制步骤(1)先将20 g伊红Y溶于500 m1蒸馏水中，用玻棒搅拌至其完全溶解后再加入1000 ml 蒸馏水并搅匀，液体呈深红色。
(2)加入500 ml 95％乙醇并搅匀，此时液体由深红色转变为荧光绿色。
(3)加入lml冰乙酸并搅匀，密封瓶口室温储存备用。
三、HE染色分化液的配制0.5％盐酸乙醇液：蒸馏水300 ml与95％乙醇700 ml混合后加入浓盐酸5 ml混匀。
四、HE染色返蓝液的配制0.5％氢氧化氨液：在1000毫拜蒸馏水中溶入5毫升浓氢氧化氨混匀。
丽春红染色液的配制及使用
丽春红染色液的配制及使用丽春红（PONCEAUS）是一种广泛用于生物化学和分子生物学实验中的缺陷染料，主要用于染色蛋白质凝胶和膜，也可用于检测核酸电泳结果。
下面将介绍丽春红染色液的配制方法和使用注意事项，并附上一些相关实验技巧。
配制丽春红染色液：材料：-丽春红染料粉末-乙醇-蒸馏水或去离子水步骤：1.称取适量的丽春红染料粉末并置于一个干燥的玻璃容器中。
建议根据实验需要确定染色液的浓度，通常可选用0.2-0.5%浓度的丽春红溶液。
2.用乙醇溶解染料粉末，可以先加入适量的乙醇湿润染料，再加入足够量的乙醇溶解。
溶解过程中可以用玻璃棒或磁力搅拌器轻轻搅拌。
3.在染料完全溶解后，加入足够的蒸馏水或去离子水将体积稀释至所需的终浓度。
4.最后，用滤纸或滤膜过滤染色液以去除悬浮物。
使用丽春红染色液的注意事项：1.染色前，确保蛋白质凝胶或膜已完成电泳，否则染色效果可能不佳。
2.准备一个干燥的容器，并将蛋白质凝胶或膜放入其中。
3.用足够的丽春红染色液完全浸泡蛋白质凝胶或膜，充分均匀搅拌，以确保染色效果均匀。
4.染色时间通常为10-30分钟，但染色时间应根据染料浓度和样品特性进行优化。
过长或过短的染色时间都可能对结果产生不良影响。
5.染色后，用蒸馏水或去离子水彻底洗涤蛋白质凝胶或膜，直至染色液中没有可见染料残留为止。
6.最后，可将染色后的蛋白质凝胶或膜进行成像或进一步处理。
一些相关实验技巧：1.在染色前，对蛋白质凝胶或膜进行固定可以提高染色效果和染色均匀性。
2.染色液中的染料浓度和染色时间可根据实验需求进行优化和调整。
3.若需要去除丽春红染色液残留在蛋白质凝胶或膜上的染色产品，可尝试用去离子水或含有10%乙酸溶液进行洗涤。
4.染色后的蛋白质凝胶或膜应避免长时间曝露在光线下，以免染色产品褪色。
美蓝染色液的配制方法
美蓝染色液的配制方法
美蓝染色液是一种常用的染色液，可以用于染色各种纤维素材料，如棉、麻、丝、毛等。
以下是美蓝染色液的配制方法：
材料：
美蓝染色剂、醋酸、水、染色器皿、搅拌棒、手套、面罩、眼镜等。
步骤：
1. 按照美蓝染色剂的配方要求，量取适量染色剂。
一般来说，
染色剂的用量应该是纺织品重量的1-3%。
2. 在染色器皿中加入适量水，将水加热至40-60℃左右。
3. 将美蓝染色剂缓慢倒入已加热的水中，并用搅拌棒均匀搅拌。
一般来说，染色液的浓度应该控制在0.5%左右。
4. 加入适量醋酸，醋酸的用量是染色剂用量的1/10-1/5左右。
醋酸的作用是调节染色液的酸碱度，有助于染色剂的溶解和纤维素材料的染色。
5. 继续搅拌染色液，直到染色剂完全溶解，并且染色液呈现出
均匀的深蓝色。
6. 将纤维素材料放入染色器皿中，并用搅拌棒轻轻搅拌，使其
充分浸泡在染色液中。
7. 根据需要，可以在染色过程中适当调整染色温度、时间等参数。
8. 染色完成后，将纤维素材料取出，用清水冲洗干净，直至水
清为止。
然后晾干或烘干即可。
注意事项：
1. 在配制和使用美蓝染色液时，一定要戴上手套、面罩、眼镜等防护用品，以免染料对皮肤和呼吸系统造成伤害。
2. 染色液的浓度、酸碱度等参数，应该根据不同的纤维素材料和染色要求进行调整。
3. 染色液在加热、搅拌等过程中，应该保持均匀和充分，以确保染色剂能够充分溶解和分散。
4. 染色完成后，应该注意对染色器皿和工具进行清洗，以免染色液残留对下次染色造成影响。
常用染色液配方
实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
常用染色液的配制
常用染色液的配制１．染料饱和酒精溶液的配制配制染色液常先将染料配成可长期保存的饱和酒精溶液，用时再予以稀释配制。
配制饱和酒精溶液，应先用少量95％酒精先在研钵中徐徐研磨，使染料充分溶解，再按其溶解度加于95％酒精之中，贮存于棕色瓶中即可。
附表1 几种常用染料在95%酒精中的溶解度(26℃)染料名称美蓝结晶紫龙胆紫碱性复红沙黄溶100mL95％酒精中的重量(g) 1.4813.8710.003.203.412．常用染色液的配制（１）碱性美蓝(亦称骆氏美蓝)染色液：取美蓝饱和酒精溶液30ml，加入0.01％氢氧化钾水溶液l00mL，混合即成。
此染色液在密闭条件下可保存多年。
若将其在瓶中贮至半满，松塞棉塞，每日拔塞摇振数分钟，并不时加水补充失去的水分，约1年后可获得多色性，成为多色美蓝染色液。
（２）草酸铵结晶紫(亦称赫克结晶紫)染色液：取结晶紫饱和酒精溶液2mL，加蒸馏水18mL稀释10倍，再加入1％草酸铵水溶液80mL，混合过滤即成。
（３）革兰氏碘溶液：将碘化钾2g置乳钵中，加蒸馏水约5mL。
再加入碘片1g，予以研磨，并徐徐加水，至完全溶解后，注入瓶中，被加蒸馏水至全量为300mL即成。
此液可保存半年以上，当产生沉淀或褪色后即不能再用。
（４）沙黄水溶液：沙黄也称番红花红。
将沙黄饱和酒精溶液以蒸馏水稀释10倍即成。
此液保存期以不超过4个月为宜。
（５）石炭酸复红染色液：取3%复红酒精溶液10mL，加入5％石炭酸水溶液90mL混和过滤即成。
（６）稀释石炭酸复红染色液：将石炭酸复红染色液以蒸馏水稀释10倍即成。
（７）3％盐酸酒精(亦称含酸酒精)：加浓盐酸3mL于95%酒精97mL中即成。
（８）瑞士染色色液：取瑞氏染料0.1g置乳钵中，徐徐加入甲醇，研磨以促其溶解。
将溶液倾入有色中性玻瓶中，并数次以甲醇洗涤乳钵，亦倾入瓶内，最后使全量为60mL即可。
将此瓶置暗处过夜，次日滤过即成。
此染色液须置于暗处，其保存期约为数月。
常用染色液的配制
一、常用染色液的配制⒈碘—碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂.配方:碘化钾2g ;蒸馏水300ml ；碘1g先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内.用时可将其稀释2—10倍,这样染色不致过深，效果更佳。
⒉苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ)能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。
配方：（1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油（2)先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70％酒精50ml.（3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液.⒊1％醋酸洋红（aceto carmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。
配方：洋红1g ；45％醋酸100ml煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀)，放入棕色瓶中备用.⒋改良苯芬品红染色液（Carbol fuchsine) 核染色剂。
配制步骤：先配成三种原液，再配成染色液。
原液A:3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中。
原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中。
原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林（38％的甲醛）.（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用）染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1～，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著(若立即用，则着色能力差）。
适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法，染色体着色深，保存性好，使用2～3年不变质。
山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色，但效果较差。
⒌中性红(neutral red)溶液用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活。
常用染色液的配制
常用染色液的配制1.吕氏（Loefflev）美蓝染色液A液：2%美蓝（Methylene blue）95%酒精溶液B液：10%KOH溶液取A液30ml、B液0.1ml与100ml蒸馏水混合。
2.石炭酸复红染色液A液：4%碱性复红（basic fuchsin）95%酒精溶液将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%酒精，继续研磨使其溶解、配成A液。
B液：5%石炭酸溶液取A液10ml、B液90ml混合即可。
一般可将此溶液稀释5-10倍使用。
但稀释液易变质失效，一次不宜多配。
3.革兰氏（gram）染色液（1）草酸铵结晶紫染液：A液：1%结晶紫（Crystal violet）95%酒精溶液B液：1%草酸铵（Ammonium oxalate）溶液取A液20mlB液80ml，静置48/小时后使用。
（2）路哥氏（Lugol）碘液：碘片1.0g、碘化钾2.0g、蒸馏水300ml先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液另，待碘全部溶解后，加够水即成。
（3）95%酒精溶液（4）蕃红（沙黄）复染液：2.5%蕃红（Safranlne O）95%酒精溶液。
取此液10ml与90ml蒸馏水混匀即成。
4.芽孢染色液（1）5%孔雀绿(Malachite green)溶液。
（2）0.5%蕃红溶液。
（3）苯酚品红溶液称取11g碱性品红溶于100ml无水酒精中。
再取上述溶液10ml与100ml 5%的苯酚溶液混合，过滤备用。
（4）黑色素(nigrosin)溶液10%黑色素溶液，置沸水浴中30min后，滤纸过滤二次，补加水到100ml，然后加入40%甲醛0.5%(v/v)作防腐剂。
5.荚膜染色液（1）黑色素水溶液将黑色素在蒸馏水中煮沸5min，配成5%溶液，然后加入40%甲醛0.5%(v/v)作防腐剂。
（2）蕃红染色液与革兰氏染色液中的蕃红复染液相同。
6.鞭毛染色液A液：单宁酸5.0g、FeC131.5g、蒸馏水100ml，福尔马林（15%）2.0ml、NaOH(1%)1.0ml。
常用染色液配方范文
常用染色液配方范文
染色液是一种常见的化学染料，用于染色纺织品、皮革、木材等材料。
下面是一些常用的染色液配方，供参考：
1.酸性染色液配方：
-甲醛：5%（染色前处理）
-醋酸：2%（酸洗、pH调节）
-染料：1-3%（根据颜色需求）
-辅料：盐酸、硫酸、硫酸铵等（根据具体工艺条件）
2.碱性染色液配方：
-乙醇胺：5-10%（碱性调节）
-染料：1-3%（根据颜色需求）
-辅料：碱性添加剂（根据具体工艺条件）
3.偶氮染料染色液配方：
-偶氮染料：0.5-2%（根据颜色需求）
-萃取剂：1-5%（用于溶解染料）
-辅料：乙醇、盐酸、润湿剂等（根据具体工艺条件）
4.基于金属盐的染色液配方：
-金属盐：如铜盐、铁盐、铅盐等
-酸洗剂：如盐酸、硝酸等
-辅料：酸性调节剂、沉淀剂等（根据具体工艺条件）
5.响应性染料染色液配方：
-响应性染料：根据所使用的响应性染料种类和需求量决定
-辅料：如还原剂、氧化剂等（根据具体工艺条件）
注意事项：
-在配制染色液时，选择合适的溶剂和添加剂，确保染料能够均匀分
散在溶液中，达到较好的染色效果。
-不同类型的染料有不同的适应pH范围，因此在选择配方时需要考虑
染料的酸碱性。
-染色液的具体配方需根据不同的染色物料和工艺要求进行调整。
这些仅是一些常见的染色液配方，实际应用中还需要根据具体的染料、染色物料和工艺要求进行调整和优化。
最佳的染色液配方应该结合实验室
试验和生产实际，以确保染色效果的质量和稳定性。
染色剂配制
常用染色液的配制1．草酸铵结晶紫染色液A液：结晶紫2.5g，95%乙醇25mL。
B液：草酸铵1.0g，蒸馏水1000mL。
制备时，将结晶紫研细，加入95%乙醇溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合静止48h后，过滤后使用。
2．鲁格尔氏（路戈氏）碘液碘1.0g，KI 2.0g，蒸馏水300mL。
先用3~5 mL蒸馏水溶解KI，再加入碘片，稍加热溶解，加足水过滤后使用。
3．脱色液：95%乙醇；或丙酮乙醇溶液：95％乙醇70mL，丙酮30mL4．沙黄（番红）染色液2.5％沙黄（番红）乙醇溶液：沙黄（番红）2.5g，95%乙醇100mL。
此母液存放于不透气的棕色瓶中，使用时取20mL母液加80mL蒸馏水使用。
5．0.1％美兰染色液0.1g溶解于100mL蒸馏水中。
6．吕氏碱性美蓝色染色液A液：美蓝0.3g，95%乙醇30mL。
B液：KOH 0.01g，蒸馏水100mL，分别配制A液和B液，混合即可。
7．瑞氏染色液瑞氏染料粉未0.3g,甘油3mL，甲醇97mL。
将染料放乳钵内研磨，先加甘油，后加甲醇，过夜后过滤即可。
8．5％孔雀绿水溶液（芽孢染色用）孔雀绿5.0g,蒸馏水100mL。
先将孔雀绿放乳钵内研磨，加少许95％乙醇溶解，再加蒸馏水。
9．黑色素水溶液（荚膜负染色用）黑色素10g，蒸馏水100mL，40％甲醛（福尔马林）0.5mL。
将黑色素溶于蒸馏水中，煮沸5min，再加福尔马林作防腐剂，用玻璃棉过滤。
10．硝酸银鞭毛染色液A液：单宁酸5.0g，FeCL3 1.5g，福尔马林(15%) 2.0mL，1%NaOH 1.0mL，蒸馏水100mL。
B液：AgNO3 2.0g,蒸馏水100mL。
将AgNO3溶解后，取出10mL备用，向其它的90mL硝酸银液中加浓氢氧化铵，则形成很厚的沉淀，再继续滴加氢氧化铵到刚刚溶解沉淀成为澄清溶液为之。
再将备用的硝酸银慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的沉淀又消失，再滴入硝酸银，直到摇动后，仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为之。
实验用染色液的配制
实验用染色液的配制1．黑色素液水溶性黑素10g，蒸馏水100mL, 甲醛（福尔马林）0.5mL。
可用作荚膜的背景染色。
2．墨汁染色液国产绘图墨汁40mL，甘油2mL，液体石炭酸2mL。
先将墨汁用多层纱布过滤，加甘油混匀后，水浴加热，再加石炭酸搅匀，冷却后备用。
用作荚膜的背景染色。
3．吕氏(Loeffier)美蓝染色液A液：美蓝(methylene blue, 又名甲烯蓝)0.3g, 95%乙醇30mL;B液：0.0l% KOH l00mL。
混合A液和B液即成，用于细菌单染色，可长期保存。
根据需要可配制成稀释美蓝液，按1：10或1：100稀释均可。
4．革兰氏染色液(1)结晶紫(crystal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL 将两液混匀置24h后过滤即成。
此液不易保存，如有沉淀出现，需重新配制。
(2)卢戈(Lugol)氏碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300mL。
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至300mL即成。
配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色即不能使用。
(3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。
(4)稀释石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱和液(碱性复红1g, 95%乙醇l0mL, 5%石炭酸90mL混合溶解即成碱性复红乙醇饱和液)，取石炭酸复红饱和液l0mL加蒸馏水90mL即成。
(5)番红溶液：番红O(safranine，又称沙黄O)2.5g, 95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。
以上染液配合使用，可区分出革兰氏染色阳性(G+)或阴性(G-)细菌，G-被染成蓝紫色，G+被染成淡红色5. 鞭毛染色液A液：丹宁酸5.0g, FeCl3 1.5g，15%甲醛(福尔马林)2.0mL，l%NaOH 1.0mL，蒸馏水l00mL;B液：AgNO3 2.0g, 蒸馏水100mL。
微生物染色液配制及染色法
微生物染色液配制及染色法2.1 美蓝染色法2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液美蓝0.3g95%乙醇30mL0.01%氢氧化钾溶液100mL 将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。
2.1.2 染色法将涂片在火焰上固定，待冷。
滴加染液，染1～3min，水洗，待干，镜检。
2.1.3 结果菌体呈蓝色。
2.2 革兰氏染色法2.2.1 结晶紫染色液结晶紫1g95%乙醇20mL1%草酸铵水溶液80mL将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
2.2.2 革兰氏碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。
2.2.3 沙黄复染液沙黄0.25g95%乙醇10mL蒸馏水90mL将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
2.2.4 染色法2.2.4.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。
2.2.4.2 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。
2.2.4.3 滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。
2.2.4.4 水洗，滴加复染液，复染1min。
水洗，待干，镜检。
2.2.5 结果革兰氏阳性菌呈紫色。
革兰氏阴性菌呈红色。
注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。
2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)2.3.1 石炭酸品红染色液碱性品红0.3g95%乙醇10mL5%酚水溶液90mL将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。
2.3.2 3%盐酸－乙醇浓盐酸3mL95%乙醇97mL2.3.3 复染液吕氏碱性美蓝染色液。
2.3.4 染色法2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。
染液如因蒸发减少时，应随时添加。
染5min，倾去染液，水洗。
2.3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。
结晶紫染色液配制及使用说明
结晶紫染色液配制及使用说明结晶紫是一种常见的生物染色剂，广泛用于细胞学、组织学和遗传学的研究中。
其配制和使用方法相对简单，下面将针对结晶紫染色液的配制和使用进行详细的说明。
一、结晶紫染色液的配制方法：1.准备材料：结晶紫粉末、乙醇（95%浓度）、去离子水。
2.称取适量的结晶紫粉末，通常在0.1-0.5克之间，根据需要适量调整。
3. 将结晶紫粉末加入约50ml的去离子水中，充分搅拌溶解。
4.将溶解好的结晶紫溶液过滤，以去除杂质。
5.加入等量的乙醇，充分混合。
6.将混合后的溶液过滤，去除沉淀和残渣，得到结晶紫染色液。
7.将染色液保存在干燥、避光的容器中，可长期保存。
二、结晶紫染色液的使用方法：1.准备待染物：细胞、组织或染色玻片。
2.将待染物放置在盛有结晶紫染色液的容器中，保证染液能完全覆盖待染物。
3.染色时间一般为5-30分钟，根据实验要求适当调整。
4.染色结束后，用去离子水轻轻洗涤待染物，以去除多余的染色剂。
5.可选择性地进行漂白、脱水和透明处理，以增强显微镜观察效果。
6.将待染物倒置在载玻片上，擦干水分，待其自然干燥。
7.在干燥后，倒入透明胶泥或透明树脂，覆盖玻片，封闭完整后放置于恒温箱中固化。
8.使用显微镜观察和记录结果。
三、结晶紫染色液的注意事项：1.结晶紫为有毒物质，操作时需佩戴口罩和手套，避免直接接触皮肤和吸入气体。
2.染色液需保存在避光的容器中，避免光照下的降解和失效。
3.染色时间和染液浓度可以根据实验需求进行调整，过长的染色时间可能会导致背景染色过深。
4.在染色过程中，需严密控制温度，避免过高的温度引起细胞或组织的脱离。
5.不同的染物可能需要不同的染色条件，可以根据实验要求进行优化。
6.使用过的染色液需专门处理，以防止对环境和健康产生危害。
7.在显微镜观察过程中，可以通过调节光源的亮度和滤光片的选择，以获取最佳的观察效果。
总之，结晶紫染色液的配制和使用方法相对简单，但在操作时仍需注意安全和实验细节，以保证染色效果和实验结果的准确性。
染液配制方法
88ml 1g
碘化钾
2g
蒸馏水 95%酒精溶液
300ml
0.1%碱性品红水溶液
[操作步骤] 1．Stirling 氏结晶紫溶液过滤滴于涂片上 50~60 秒钟。
2．充分水洗。
3．革兰氏碘溶液 30 秒钟。 4．水洗。
5．95%酒精溶液分化至清晰为止。 6．水洗。 7．0.1%碱性品红溶液 30 秒钟；
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶解时可稍加热，最
后补足蒸馏水量。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色即不能使用。
脱色剂：
95%乙醇
或丙酮乙醇溶液
100 mL
95%乙醇
70 mL
丙酮
30 mL
3 . 番红花红染色液： 2.5%番红 95%酒精溶液
10 mL
蒸馏水
90 mL
21.革兰氏染色液 (1)结晶紫(cristal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫 2g 溶于 20mL95%乙醇中)20mL， 1%草酸铵水溶液 80mL。将两液混匀置 24h 后过滤即成。此液不易保存，如有沉淀出现，需 重新配制。 (2)芦戈(Lugol)氏碘液：碘 1g，KI 2g，蒸馏水 300mL。先将 KI 溶于少量蒸馏水中，然后加 入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至 300mL，即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色 能 使用。 (3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。 (4)稀释石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱液(碱性复红 1g，95%乙醇 10mL，5%石炭酸 90mL)10mL，加蒸馏水 90mL。 (5)番红溶液：番红 O(safranine O，又称沙黄 O)2.5g，95%乙醇 100mL，溶解后可贮存于 密闭的棕色瓶中，用时取 20mL 与 80mL 蒸馏水混匀即可
常用染色液的配制
常用染色液的配制一、骆氏美蓝染色液（碱性美蓝染色液）甲液：美蓝0.3克，95%酒精30ML乙液：0.01%氢氧化钾溶液100ML甲、乙混合即可，密闭保存，一年后可获多色性。
二、革兰氏染色液1、草酸铵结晶紫染液甲液：结晶紫2G，95%酒精20ML，或结晶紫饱和酒精溶液2ML加蒸馏水18ML。
乙液：草酸铵0.8克，蒸馏水80ML。
甲、乙混合，静置48小时，过滤后备用，可较久贮存。
2、革兰氏碘溶液碘片1G，碘化钾2G，蒸馏水300ML碘化钾+3－5ML蒸馏水，溶解后+碘片，摇匀后+蒸馏水至足量。
3、95%酒精，用作脱色剂4、碱性复红染色液碱性复红（一品红）0.1G，蒸馏水100ML可用沙黄水溶液或稀释石炭酸复红液代替此液。
沙黄水溶液：沙黄饱和酒精溶液+10倍蒸馏水，保存期小于4个月。
稀释石炭酸复红染色液：石炭酸复红液10ML+蒸馏水90ML三、抗酸染色液1、石炭酸复红染色液3%碱性复红酒精溶液10ML+5%石炭酸水溶液90ML，过滤即可。
2、盐酸酒精液浓盐酸3ML+95%酒精97ML四、克利特氏荚膜染色液1、美蓝溶液：美蓝1G+96%酒精10ML+100ML蒸馏水2、碱性红溶液：碱性复红0.03G+1ML96%酒精+99ML蒸馏水五、瑞特氏染色液1、0.1G瑞特氏染粉研磨，再加中性甘油3ML，充分研磨，后徐徐加入甲醇液60ML，边研边搅，存于棕色瓶中过夜，过滤后贮于棕色瓶中，越久越好。
2、磷酸盐缓冲液甲液：磷酸氢二钠23.86G，1000ML蒸馏水。
乙液：磷酸二氢钾9.07G，1000ML蒸馏水。
4份甲液+1份乙液即可。
革兰氏染色液的配制,超详细
革兰氏染色液的配制一、实验试剂：（结晶紫、草酸铵、碘、碘化钾、番红）1. 结晶紫溶液：A液：结晶紫：2g，95%乙醇：20ml。
B液：草酸铵：0.8g，蒸馏水：80ml。
需在用前24小时将A液. B液混合，过滤后装入试剂瓶内备用.2. 碘液：碘：1g，碘化钾：2g蒸馏水：300ml。
出碘与碘化钾混合并研磨，加入几毫升水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸馏水至完全溶解，最后补足水量。
也可用少量蒸馏水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。
3. 脱色液：95%乙醇。
4. 复染液：A.贮存液：番红：2.5g，95％乙醇：100ml。
B.应用比例：A液：10ml，蒸馏水：90ml。
菌片制备：染色的第一步是制作涂片。
菌液涂片时，用接种环蘸取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布，菌落涂片时，先取生理盐水1滴，置玻片上，用接种针挑去菌落，在盐水中涂布。
涂片时必须注意应轻轻操作。
猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准确性。
制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不易过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变。
将固定后的涂片进行染色。
操作步骤：1 ．涂片将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。
固定时通过火焰1一2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2 ．染色( 1 ）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。
( 2 ）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。
( 3 ）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。
( 4 ）复染用番红液染1 一2 分钟，水洗。
( 5 ）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。
以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。
( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。
GUS染色液配制
一染色液配制1）X－Gluc母液：X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺(DMF)配成20mM的贮存液，分装成每管100μL，保存于-20℃。
2）X－Gluc基液（50mM PBS，pH7.0）。
配制方法：50mM NaH2PO4・0.78g/100ml；50mM Na2HPO4 1.79g/100ml共同溶解；Na2EDTA （10mM，372mg），Triton-100（0.1％，100μl）,K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）（0.5mM，16.5mg）K4 [Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾）（0.5mM，21.1mg）染色液：50μl X-Gluc母液＋450μl基液需要试剂：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）；N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ；NaH2PO4；Na2HPO4 ；Na2EDTA ；Triton-100；K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）；K4 [Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾）二染色方法：1.将准备好的试材浸泡在染液，于25—37℃保温1小时至过夜。
2.叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。
3.肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。
三实验原理适宜的反应条件下，β- 葡萄糖苷酸酶（GUS）可将X－Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。
gus基因是目前常用的一种报告基因，是β－D－葡萄糖苷酸酶(gus)基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)能催化裂解一系列的β－葡萄糖苷酸，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）分解为蓝色的物质,也可以将4-甲基-伞形花酮-β-D-葡萄糖苷酯(4-MUG)分解为蓝色物质。
其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。
gus基因的最大优点是它能测定外源基因表达的具体细胞和组织部位，这是其它报告基因所不能及的。
纺织品染液配制 染液的配制
染色液的配制
了解了染料母液的配制方法，那么如何配制染色液呢？
依然来看下面的处方：
活性红BES 活性黄BES 活性蓝BET
NaCl
Na2CO3 浴比：1：50
0.5%（owf） 0.3%（owf） 0.2%（owf） 30ｇ/Ｌ-1 15ｇ/Ｌ-1
织物重2g
计算结果：
活性红BES 活性黄BES 活性蓝BET NaCl Na2CO3
0.01g 0.006g 0ห้องสมุดไป่ตู้004g 3ｇ
1.5ｇ
现在已配制有三种浓度均为2g/L的染料母液，那么该分别吸取多少体积的染料母液呢？
所需染料母液体积的计算公式如下:
染料母液的体积 =
织物重量×%owf 染料母液浓度
上例中，移取活性红BES的染料母液体积
同理
V1 = 2×0.5%owf /2 = 0.005 L = 5mL V2（活性黄BES的染料母液体积）= 3mL
即%owf的数值越大，染料母液的浓度也应该相应地大一些
owf＜1%
浅色 可配制染料母液浓度：1g/L
1%＜owf＜3% 中色 可配制染料母液浓度：2g/L
owf＞3%
深色 可配制染料母液浓度：4g/L
染色液配制
实操视频！
V3（活性蓝BET的染料母液体积）= 2mL
染色液的配制步骤：
1. 分别移取红黄蓝三种染料母液5mL、3mL、2mL； 2. 补充水量90mL，使染液总体积为100mL； 3. 按照染色工艺曲线开始染色； 4. 注意确认各种染料染色工艺条件。
注意事项：
为了减少移取染料母液时的相对误差，一般应按照%owf染色浓度配制相 应的染料母液浓度。
抗酸染色液配制
抗酸染色液配制
抗酸染色液的配制步骤较为复杂，首先需要配成三种原液，然后再混合成染色液。
以下是具体的配制步骤：
- 原液A：将3g碱性品红溶解在100ml的70％酒精中；
- 原液B：取上述原液A的10ml，加入到90ml的5％石炭酸水溶液中；
- 原液C：取原液B的55ml，然后进行下一步操作；
- 染色液：取第一液（即上一步的原液C）10ml加第二液（即硫酸美兰液）2滴，混合均匀即可。
涂片经火焰固定后，滴加第一液微热染3分钟，水洗后再用盐酸酒精处理也不脱色。
这种方法可以使得分枝杆菌细胞壁内的脂质（主要成分为分枝菌酸）与石炭酸复红牢固结合成复合物，当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色。
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染色液的配制
一、吕氏(Loeffler)碱性美蓝染液
A液：美蓝(methylene blue) 0．6g
95%酒精 30ml
B液：KOH 0．01g
蒸馏水 100ml
分别配制A液和B液，配好后混合即可。
二、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液
A液：碱性复红(basic fuchsin) 0．3g
95%酒精 10ml
B液：石炭酸 5．0g
蒸馏水 95ml
将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%酒精，继续研磨使其溶解，配成A 液。
将石炭酸溶解于水中，配成B液。
混合A液及B液即成。
通常可将此混合液稀释5—10倍使用，稀释液易变质失效，一次不宜多配。
三、革兰氏(Gram)染色液
1．草酸铵结晶紫染液
A液：结晶紫(crystal violet) 2g
95%酒精 20ml
B液：草酸铵(ammonium oxalate) 0．8g
蒸馏水 80ml
混合A、B二液，静置48小时后使用。
2．卢戈氏(Lugol)碘液
碘片 1．0g
碘化钾 2．0g
蒸馏水 300ml
先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。
3．95%的酒精溶液。
4．番红复染液
番红(safranine O) 2．5g
95%酒精 100ml
取上述配好的番红酒精溶液10ml与80ml蒸馏水混匀即成。
四、芽孢染色液
1．孔雀绿染液
孔雀绿(malachite green) 5g
蒸馏水 100ml
2．番红水溶液
番红 0．5g
蒸馏水 100ml
3．苯酚品红溶液
碱性品红 11g
无水酒精 100ml
制法取上述溶液10ml与100ml5%的苯酚溶液混合，过滤备用。
4．黑色素(nigrosin)溶液
水溶性黑色素 10g
蒸馏水 100ml
称取10g黑色素溶于100ml蒸馏水中，置沸水浴中30分钟后，滤纸过滤
二次，补加水到100ml，加0．5ml甲醛，备用。
五、荚膜染色液
1．黑色素水溶液
黑色素 5g
蒸馏水 100ml
福尔马林(40%甲醛) 0．5ml
将黑色素在蒸馏水中煮沸5分钟，然后加入福尔马林作防腐剂。
2．番红染液
与革兰氏染液中番红复染液相同。
六、鞭毛染色液
A液：单宁酸 5g
FeCl3 1．5g
蒸馏水 100ml
福尔马林(15%) 2．0ml
NaOH(1%) 1．0ml
配好后，当日使用，次日效果差，第三日则不宜使用。
B液：AgNO3 2g
蒸馏水 100ml
待AgNO3溶解后，取出10ml备用，向其余的90mlAgNO3中滴入浓NH4ON，使之成为很浓厚的悬浮液，再继续滴加NH4OH，直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。
再将备用的10mlAgNO3慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状沉淀又消失，再滴入AgNO3，直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。
如所呈雾不重，此染剂可使用一周，如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。
七、富尔根氏核染色液
1．席夫氏(Schiff)试剂
将1g碱性复红加入200ml煮沸的蒸馏水中，振荡5分钟，冷至50℃左右过滤，再加入1mol/LHC120ml，摇匀。
待冷至25℃时，加Na2S2O5(偏重亚硫酸钠)3g，摇匀后装在棕色瓶中，用黑纸包好，放置暗处过夜，此时试剂应为淡黄色(如为粉红色则不能用)，再加中性活性炭过滤，滤液振荡1分钟后，再过滤，将此滤液置冷暗处备用(注意：过滤需在避光条件下进行)。
在整个操作过程中所用的一切器皿都需十分洁净、干燥，以消除还原性物质。
2．Schandium固定液
A液：饱和升汞水溶液
50ml升汞水溶液加95%酒精25ml混合即得。
B液：冰醋酸
取A液9毫升+B液1毫升，混匀后加热至60℃。
3．亚硫酸水溶液
10%偏重亚硫酸钠水溶液5ml，1mol/LHCl5ml，加蒸馏水100ml混合即得。
八、Bouin氏固定液
苦味酸饱和水溶液 75ml
福尔马林(40%甲醛) 25ml
冰醋酸 5ml
1g苦味酸可制成75ml饱和水溶液。
先将苦味酸溶解成水溶液，然后再加入福尔马林和冰醋酸摇匀即成。
九、乳酸石炭酸棉蓝染色液
石炭酸 10g
乳酸(比重1．21) 10ml
甘油 20ml
蒸馏水 10ml
棉蓝(cottolue) 0．02g
将石炭酸加在蒸馏水中加热溶解，然后加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，使其溶解即成。
十、瑞氏(Wright)染色液
瑞氏染料粉末 0．3g
甘油 3ml
甲醇 97ml
将染料粉末置于干燥的乳。