医学微生物学消毒灭菌、细菌的培养及分布

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微生物实验报告(微生物形态观察、分布、灭菌消毒)

微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜（油镜）的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等）2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。

如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。

原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子。

如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。

如：霉菌6．白假私酵母菌（白念）生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜（比菌体大1-3倍）致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1）球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双球菌（蚕豆形）、四联菌2）杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3）螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌（Clostridium Tantenus）；霍乱弧菌（vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛（flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira)五、实验结果绘8幅细菌镜下图，已交。

微生物学第三章消毒与灭菌(共60张PPT)

介质的性质
细菌在非水介质中，比水作介质时对热的抵抗力大
水分、2~4℃石炭酸、油类、干焦空气
不同介质对微生物抗热力的影响
2、低温抑菌法
低温可降低微生物代谢的速度。大多数微生物对低温有很强的抵抗力一般的：4-10℃ 淋球菌、脑膜炎球菌、流行感冒杆菌敏感，
伤寒杆菌、白喉杆菌耐低温冷冻干燥：采用迅速冷冻和抽真空除水。
消毒（Disinfection）：杀灭物体上的病原微生物的方法，
叫消毒。消毒只要求达到消灭传染性的目的，而对非病原微生物及其芽孢、孢子并不严格要求全部杀死。
防腐(Antisepsis)或抑菌：指阻止或抑制物品上微生物生长繁殖的方法，微生物不一定死亡。
无菌（asepsis）：指没有活的微生物的状态。
夜培养，残余的芽孢发芽为繁殖体；
第三天：100℃-30分钟，杀死所有微生物。
巴氏消毒法
常用于牛乳及一些饮料
最大限度地消灭病原体，尽可能少地损害食品的营养物质
•低温维持巴氏消毒法（LTH)： •63～65℃-30分钟； •高温短时间巴氏消毒法(HTST):
•71～72℃-15秒， •超高温巴氏消毒法(UHT): •132℃-1～2秒
•巴氏消毒法
•高压蒸气灭菌法
干热灭菌法
火焰灭菌法
以火焰直接灼烧杀死物体中的全部微生物的方法。
灼烧焚烧
酒精灯
热空气灭菌法
适用于高温下不损坏、不变质的物品，需在 160℃维持1－2小时，才
能达到杀死所有微生物及其芽孢、孢子的目的。
干烤箱
湿热灭菌法
煮沸灭菌
100℃，煮沸10～20分钟，可杀死所有细菌繁殖体，芽孢常需煮沸1－2h才能杀死。
噬菌体（phage）：是指寄生于微生物（细菌、霉形体、螺旋体、放线菌以及蓝细菌等）中的病毒。

灭菌_培训课件

第六页，共三十七页。
正常菌群(normal flora):
正常人的体表和同外界相通的口腔、鼻咽腔、肠道、泌尿生殖道等腔道中都寄居着不同种类和数量的微生物。当人体免疫功能正常时，这些微生物对宿主无害，有些对人还有利，是为正常微
生物群，通称正常菌群
第七页，共三十七页。
正常菌群对人体的有利作用
生物生长繁殖的方法
第十八页，共三十七页。
(三) 方法— 物理灭菌方法
１. 热
湿
煮沸法
力灭菌
热
流通蒸气法
灭菌
高压蒸气灭菌法
法
间歇灭菌法
巴氏消毒法
干
热灭菌
焚烧和烧灼干烤法
法
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(三) 方法— 物理灭菌方法
① 煮沸消毒法：煮沸100℃经5－10 min。主要用于一般外科手术器械、胶管和注射器等的消毒。
所有外科工作人员都应自觉地遵守这个法则：一切与伤口或体内组织器官接触的物品必须是无菌的。
②为防止疾病的传播，对传染病患者的排泄物和实验废弃的培养物亦须进行灭菌或消毒处理。
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（二）消毒与灭菌的概念
1、灭菌(disinfection) ：杀死物体上所有微生物的方法，包括病原微生物和非病原微生物、细菌的繁殖体和芽胞。
(3) 改变细菌细胞壁或细胞膜的通透性，如新洁尔灭、肥皂等
第二十九页，共三十七页。
2. 常用消毒剂的种类和用途
名称石炭酸来苏儿
乙醇
常用浓度
3%~5% 2％
70%~75%
用
途
器皿、排泄物消毒
皮肤消毒
皮肤、体温表消毒
升汞 0.05~0.1% 非金属器皿浸泡

医学微生物学实验报告

医学微生物学实验报告（本科）实验室：姓名：学号：班级：海南医学院微生物学与免疫学教研室编写二OO四年四月第一次实验【实验内容】实验一微生物的形态与结构的观察实验二微生物的分布【结果记录及判定】实验一微生物的形态与结构的观察1、细菌正常形态及特殊结构的观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：特殊结构：霍乱弧菌破伤风梭菌芽胞形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：肺炎链球菌荚膜伤寒沙门菌鞭毛形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：炭疽杆菌脑膜炎球菌2、病毒包涵体观察及记录（示教）：绘图并描述描述：狂犬病毒包涵体（H-E染色）3、真菌的形态观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：白假丝酵母菌皮肤癣菌4、革兰染色法结果观察及记录：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌大肠埃希菌实验二微生物的分布结果记录：1、空气中的细菌种类（种）：数量（个）：2、水中细菌数检测（1）自来水中细菌的种类（种）：数量（个）：（2）污水中细菌的种类（种）：数量（个）：3、物品和手指上的细菌检查（记录本人结果）物品表面的细菌种类（种）：数量（个）：手指表面的细菌种类（种）：数量（个）：结论：成绩：_________________批改教师签名：____________批改时间：________________第二次实验【实验内容】实验三微生物的分离培养实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌【结果记录及判定】实验三微生物的培养1、细菌分离培养方法（分区划线接种法），生长现象为：2、纯种细菌接种技术（1）琼脂斜面接种培养，大肠埃希菌生长现象：（2）液体培养基接种法，大肠埃希菌生长现象：（3）半固体培养基接种技术①标本名称：大肠埃希菌半固体培养基②标本名称：痢疾志贺菌半固体培养基穿刺线：穿刺线：培养基：培养基：结论：结论：3、沙保弱琼脂平板上的真菌菌落观察及描述（示教）：类酵母型菌落：丝状菌落：实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌一、紫外线灭菌法（示教）玻璃盖遮住平板的一半现象：现象：分析：分析：二、机械除菌法（示教）：1、未经过滤的液体培养基培养后的现象：2、经过过滤的液体培养基培养后的现象：分析：成绩：_________________批改教师签名：____________第三次实验【实验内容】实验六细菌的致病性实验七化脓性感染的细菌学检查【结果记录及分析】实验六细菌的致病性一、透明质酸酶试验（示教，实验动物：家兔）测量试验侧与对照测的黑墨水扩散范围（cm×cm）：实验侧：对照侧：分析：二、破伤风外毒素的毒素作用（实验动物：小鼠）实验现象：实验侧：对照侧：分析：实验七化脓性感染的细菌学检查一、病原性球菌的形态观察（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌链球菌形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌二、病原性球菌的鉴别：三、血清学试验抗“O”试验（乳胶凝集法）实验现象：阳性对照：阴性对照：标本1：标本2：结果判定：标本1为________，标本2为_________。

医学微生物学名词解释总结

第一二章细菌的形态结构与生理1、微生物：（P1）存在于自然界形体微小，数量繁多，肉眼看不见，必须借助与光学显微镜或电子显微镜放大数百倍甚至上万呗，才能观察的一群微小低等生物体。

2、微生物学：（P2）用以研究微生物的分布、形态结构、生命活动（包括生理代谢、生长繁殖）、遗传与变异、在自然界的分布与环境相互作用以及控制他们的一门科学3、医学微生物学：（P3）主要研究与人类医学有关的病原微生物的生物学症状、对人体感染和致病的机理、特异性诊断方法以及预防和治疗感染性疾病的措施，以控制甚至消灭此类疾病为的目的的一门科学4、代时：细菌分裂倍增的必须时间5、细胞壁：包被于细菌细胞膜外的坚韧而富有弹性的膜状结构6、肽聚糖或粘肽：原核细胞型微生物细胞壁的特有成分，主要由聚糖骨架、四肽侧链及肽链或肽键间交联桥构成7、脂多糖：（P13）LPS 革兰阴性菌细胞壁外膜伸出的特殊结构，即细菌内毒素。

由类脂A、核心多糖和特异多糖3个部分组成8、质粒：（P15）是细菌染色体外的遗传物质，双链闭合环状DNA结构，带有遗传信息，具有自我复制功能。

可使细菌或的某些特定形状，如耐药、毒力等9、荚膜：（P16）某些细菌能分泌粘液状物质包围与细胞壁外，形成一层和菌体界限分明、不易着色的透明圈。

主要由多糖组成，少数细菌为多肽。

其主要功能是抗吞噬，并有抗原性10、鞭毛：（P16）从细菌细胞膜伸出于菌体外的细长弯曲的蛋白丝状物，是细菌的运动器官，见于革兰阴性菌、弧菌和螺菌。

11、菌毛：（P17）是存在于细菌表面，由蛋白质组成的纤细、短而直的毛状结构，只有用电子显微镜才能那个观察，多见于革兰阴性菌12、芽孢：（P18）那个环境条件下，某些革兰阳性菌能在菌体内形成一个折光性很强的不易着色小题，成为内生孢子，简称芽孢13、细菌L型：（P14）即细菌缺陷型。

有些细菌在某些体内外环境及抗生素等作用下，可部分或全部失去细胞壁。

14、磷壁酸：（P12）是由核糖醇或甘油残基经磷酸二酯键互相连接而成的多聚物。

细菌的分布与消毒灭菌带答案

第三章细菌分布与消毒灭菌一、单5选11.杀灭物体上所有微生物的方法称为:A.消毒B.灭菌C.无菌D.防腐E.无菌操作2.杀灭物体上病原微生物的方法称为:A.消毒B.灭菌C.无菌D.防腐E.无菌操作3.微生物学实验过程中防止污染与感染的方法称为:A.消毒B.灭菌C.无菌D.防腐E.无菌操作4.消毒的含义是:A.杀灭物体上所有的微生物B.杀死物体上的病原微生物C.使物体上无活菌存在D.杀死含芽胞的细菌E.抑制微生物生长繁殖5.灭菌的概念是:A.杀灭物体上所有微生物B.杀死物体上的病原微生物C.抑制微生物生长繁殖的方法D.杀死细菌繁殖体E.使物体不含活菌6.防腐的概念是:A.杀灭物体上所有的微生物B.杀死物体上的病原微生物C.使物体上无活菌存在D.杀死含芽胞的细菌E.抑制微生物生长繁殖7.无菌是指:A.杀灭物体上的所有微生物B.杀死物体上的病原微生物C.物体上无活的微生物存在D.杀死含芽胞的细菌E.抑制微生物生长繁殖8.下列哪项可经巴氏消毒法灭活:A.牛奶B.空气C.手术器械D.基础培养基E.物体表面9.巴氏消毒法的温度和时间是:A.100℃ 10分钟B.121℃ 15分钟C.80℃ 10分钟D.62℃ 30分钟E.71.7℃ 30分钟10.高压蒸汽灭菌法的参数为：A.100℃10～20分钟B.121.3℃15～20分钟C.80 ℃ 5～10分钟D.62℃30分钟E.71.7℃15～30分钟11.正常微生物群是指:A.广泛存在于正常人体内脏的微生物群B.存在于正常人体所有腔道的微生物群C.正常时对人体无害也无利的微生物群D.存在于出生前后的正常人群体表的微生物群E.存在于正常人体体表的微生物群12.条件致病微生物的致病条件不包括:A．寄居部位的改变 B．免疫功能降低 C．微生物群分布失调D．长期大量应用广谱抗菌药，正常微生物群被抑制E．使用有关的微生态制剂13.正常微生物群对人体的生理作用不包括:A．生物拮抗 B．营养作用 C．抗炎症作用D．免疫作用 E．抗衰老作用14.大肠杆菌通常寄生于正常人体的:A．皮肤 B．口腔 C．外耳道 D．肠道 E．尿道15.幽门螺杆菌常寄生于人体的部位是：A．胃 B．口腔 C．皮肤 D．外耳道 E．尿道16.因长期大量使用抗生素引起的腹泻属于:A．外源性感染 B．微生物失调 C．交叉感染D．环境污染感染 E．潜伏感染17.治疗微生物群失调症可使用:A．维生素 B．纤维素 C．抗生素 D.类毒素 E.微生物制剂18.*随着年龄的增长，肠道内明显减少的细菌是:A.双岐杆菌 B．乳酸杆菌 C．大肠杆菌 D．葡萄球菌 E．肠球菌19.关于条件致病微生物感染，下列叙述哪项正确:A.为外源性感染B.均为医院内感染 C．近年感染率明显下降D.当机体抵抗力下降时易发生 E．均为菌群失调所致20.水源被细菌污染后，常可引起：A.呼吸道传染病B.消化道传染病 C．伤口化脓性感染D.泌尿道感染 E．厌氧菌感染21.正常人体有正常菌群分布的部位是：A.脑组织B.胃内 C．血液D.心脏 E．体表及外界相通的腔道22.土壤的芽胞菌感染人体的常见途径为：A.消化道B.呼吸道 C．血液D.伤口E.接触23.下列何种不是湿热灭菌法：A．巴氏消毒法 B. 滤过除菌法 C. 煮沸法D. 高压蒸气灭菌法 E．间歇蒸气灭菌法24．火焰灼烧灭菌法适合的对象是：A.培养基B. 接种环C.手术器械D. 敷料E. 一次性注射用具25.下列消毒灭菌法正确的是：A. 接种环——干烤B. 手术器械——漂白粉C. 饮水——过滤除菌D.体温表——煮沸E.敷料包——离压蒸汽灭菌法26．下列有关紫外线描述，哪项不正确：A．穿透力强 B.常用于空气、物品表面消毒C.消毒效果与作用时间有关D.对人体皮肤、眼睛有损失作用E．能干扰细菌DNA复制与转录27．利用紫外线灯杀菌时,紫外线的照射时间为：A. 5minB. 30minC. 60minD.10minE.15min28. 紫外线最强的杀菌波长应为：A.265-266nmB.200-300nmC.136-390nmD.136-260nmE.236-300nm29．一次性医用塑料制品的大量消毒可采用：A．煮沸 B．巴氏消毒法 C．电离辐射D．干热灭菌法 E．高压蒸汽灭菌法30.不属重金属盐类的消毒剂是：A.高锰酸钾B. 氯化汞C. 汞溴红D.硝酸银E. 蛋白银31.乙醇消毒剂常用的浓度是：A．100% B．95% C．75% D．50% E．30%32.乙醇的消毒机制是：A. 干扰染色体的复制和转录B. 改变细胞膜的通透性C. 蛋白质凝固、变形 D .干扰代谢 E.破坏细胞壁33.新生儿预防淋病奈瑟菌性结膜炎可用哪种化学消毒剂：A.0.1%硝酸银B. 1%硝酸银C. 3%过氧化氢D.75%乙醇E.以上不是34.地面、排泄物消毒可采用的是：A. 0.1%高锰酸钾B. 1%硝酸银C. 3%过氧化氢D .75%乙醇 E.生石灰35.含糖类、血清或鸡蛋的培养基灭菌宜采用：A.煮沸法B.流通蒸汽灭菌法C. 间歇蒸汽灭菌法D.高压蒸汽灭菌法E.干烤法36.正常菌群变为条件致病菌的条件中，错误的是：A.机体免疫力下降B.寄居部位改变C. 机体外伤D.饮食不洁E.大剂量使用抗生素37.常用于手术器械灭菌的是：A.高压蒸汽灭菌法B.紫外线照射法C.巴氏消毒法D.滤过除菌法E.干烤法38.影响消毒剂效果的因素中，最不重要的是：A. 消毒剂的使用浓度B. 消毒剂的作用时间C. 微生物的种类与数量D. 湿度E.温度39.根据微生物的危害程度分类埃博拉病毒属于：A. 第一类微生物B. 第二类微生物C.第三类微生物D.第四类微生物E.第五类微生物40.病原微生物实验室分级中安全防护级别最高的是：A. BSL-1B. BSL-2C. BSL-3D. BSL-4E. BSL-5答案：1.B2.A3.E4.B5.A6.E7.C8.A9.D 10.B 11.E 12.E 13.C 14.D 15.A 16.B 17.E 18.A 19.D 20.B 21.E 22.D 23.B 24.B 25.E 26.A 27.C 28.A 29.C 30.A31.C 32.C 33.B 34.E 35.C 36.D 37.A 38.D 39.D 40.D二、填空题1.化学消毒剂杀菌或抑菌的作用机制有、和改变细胞膜的通透性等类型2.常用于饮用水消毒和游泳池水消毒的消毒剂是和。

《医学微生物学》细菌的分布与外界因素对细菌的影响实验

《医学微生物学》细菌的分布与外界因素对细菌的影响实验[目的]1．掌握皮肤消毒方法。

2．掌握标准纸片扩散法(K-B法)的原理、操作方法、结果的判读与解释及其临床意义。

3．掌握纸片扩散法的质量控制方法。

了解空气、水中细菌的检查方法。

4．熟悉人体皮肤、咽喉部细菌检查方法。

5．熟悉紫外线灭菌方法。

6．了解高压蒸汽灭菌方法一、细菌的分布检查[材料]普通琼脂平板，1％高层琼脂，无菌试管，1毫升无菌吸管，无菌平皿。

[方法]1．空气中的细菌检查取琼脂平板一个，打开皿盖，暴露于空气中10分钟，然后盖好，在平皿底面注明地点、班组，放入37℃温箱内培养24小时后观察结果，计算菌落数，并观察不同的菌落形态。

2．污水和净水中细菌数的检查（1）用无菌试管分别采取自来水和未经净化消毒处理的污水各一管。

取自来水样时，须先将水龙头用酒精灯烧灼灭菌，再将龙头完全开放，放水5分钟，然后用无菌试管以无菌操作采集水样。

（2）用无菌吸管吸取自来水及经适当稀释的污水各1毫升，分别放入两个无菌平皿内。

（3）将已溶化并冷至约45℃（手握琼脂管感觉热而不烫手）的高层琼脂1支，倾注入平皿内，盖好平皿，立即将皿底贴桌面轻轻摇动，使琼脂与水样均匀混合后（但勿溢出于皿外），静置桌面，待琼脂凝固。

（4）标记，皿底向上置于37℃培养24小时，取出观察结果。

比较自来水及污水内生长的菌落数。

3．皮肤及飞沫中的细菌检查材料：普通琼脂平板，血琼脂平板。

方法：（1）皮肤细菌检查取普通琼脂平板一块，用手指轻轻涂抹培养基表面，置37℃温箱中培养24小时，观察结果。

（2）飞沫中的细菌检查取血琼脂平板一个，打开皿盖，将培养基面置于口腔前约10厘米处，用力咳嗽数次，约30秒钟，然后盖上皿盖，置37℃温箱培养24小时，观察结果。

二、外界因素对细菌的影响（一）高压蒸汽灭菌法（示教）[材料] 手提式高压蒸汽灭菌器、电炉等构造：手提式高压蒸汽灭菌器是一双层金属圆桶，外层坚厚，顶端有厚盖，盖边有翅状螺旋，借此紧闭此盖，防止蒸汽外溢。

医学微生物学消毒与灭菌和生物安全

微生物的分布
❖ 1、土壤中的微生物： ❖ 多为非致病菌，少数有致病性。 ❖ 芽孢菌致病；药材霉变。 ❖ 2、水中的微生物： ❖ 主要来自人和动物的排泄物、污物。 ❖ 常引起消化道传染病。 ❖ 3、空气中的微生物： ❖ 来源于人畜呼吸道的飞沫及飘扬的尘埃； ❖ 常引起呼吸道传染病。
Carbolic Steam
uW/cm2
紫外线杀菌车
（二）电离辐射
包括高速电子、X射线、β、和射线：60Co－
尤其是γ射线穿透力强，不升高温度，对各种细菌均有致死作用
杀菌机理：细胞中的水分被电离成H+和OH-，这些游离基是强烈的氧化剂和还原剂，能破坏微生物的核酸、蛋白质、酶，使微生物死亡
应用范围：
不耐热的一次性医用塑料制品的消毒，食品、药品、生物制品的消毒，不破坏其营养成分
净台（层流工作柜）、无菌病房。
特点仅能除去细菌，不能去除病毒、支原体、衣原体和有些L型细菌等。
滤菌器的种类
➢ 薄膜滤菌器：孔径0.22～0.45m时，可除去细菌；20～100nm时可除去病毒
➢ 玻璃滤菌器 ➢ 石棉滤菌器 ➢ 素陶瓷滤菌器
滤过除菌法的常用器具
滤菌器
六. 渗透压
主要用于防腐
相互比较
灭菌与消毒的比较：杀菌更彻底。消毒与防腐的比较：浓度和时间。无菌：本身无菌或灭菌处理。无菌操作：保持着原生态的环境。
第一节物理消毒灭菌法
❖ 一热力消毒灭菌法
干热灭菌法湿热灭菌法
❖ 二干燥和低温抑菌法
❖ 三辐射杀菌法
❖ 四超声波杀菌法
❖ 五滤过除菌法——用物理阻留方法除去细菌。
第二节化学消毒灭菌法用于防腐、消毒甚至灭菌的化学药物称为化学消毒剂。只能外用或用于环境的消毒。

细菌的纯培养技术—消毒与灭菌

理化因素对微生物作用的方式理化因素控制微生物生长繁殖的方式包括杀菌、溶菌、抑菌。 OD值
活菌计数
影响理化因子作用效果的因素：理化因子的强度或浓度、作用时间长短、微生物种类、微生物生理状态等。
一、物理因素对微生物生长的控制
常用的物理因素：加热法、过滤法和辐射法
（一）加热灭菌
当温度超过微生物的最高生长温度时，就会出现致死效应。高温可引起蛋白质、核酸和脂肪等重要生物大分子降解或改变其空间结构等，从而使其功能丧失。
（b）膜滤器（不耐热的液体成分，如酶或维生素溶液、血清等）由硝酸纤维素或醋酸纤维素制成。
（c）核孔滤器（液体过滤）
（a）深度滤器（进入发酵罐的空气）介质：棉花、玻璃纤维、石棉、多层滤纸等。
优点：不破坏营养成分和物质的化学性质缺点：病毒除不掉（0.22um孔径的滤膜）
膜滤器
超净台
防止措施： 1）特殊加热灭菌法分别灭菌（糖液；磷酸盐等）；低压灭菌（含糖类等培养基采用115 ℃灭菌15min）间歇灭菌 2）其他方法加入0.01％EDTA或0.01％NTA等螯合剂到培养基中，防止金属离子发生沉淀；用气体灭菌剂如环氧乙烷等对个别成分进行灭菌；过滤除菌法
(二) 辐射灭菌
二、化学因素对微生物生长的控制
抗微生物剂 (Antimicrobial agent)
生物合成的天然产物人工合成的化合物
一类能够杀死微生物或抑制微生物生长的化学物质
化学物质的抗微生物能力的测定
液体培养法最低抑制浓度（MIC）试验最低抑制浓度：抑制某病原菌生长的最低浓度。
平板培养法抑菌圈（zone of inhibition）试验
工业生产常用的消毒剂

医学专题灭菌和消毒

特定区域或条件
推荐杀菌剂
浓度（ppm）
铝制设备抑菌剂膜
CIP清洗
碘伏季胺酸-季胺酸-阴离子
酸杀菌剂活性氯碘伏
25 200 生产商推荐 100
130 生产商推荐生产商推荐
水泥地面
活性氯
1000~2000
季胺
500~800
防止膜形成雾化，空气
酸杀菌剂碘伏活性氯
手工浸洗（生产）碘伏
２）湿热灭菌法
在同样的温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好，这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高，容易变性。另一方面高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速死亡。
a. 巴氏消毒法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风味，又进行了消毒，保证了食品卫生。该法一般在62℃，30分钟即可达到消毒目的。此法为法国微生物学家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。
2、辐射利用辐射进行灭菌消毒，可以避免高温灭菌
或化学药剂消毒的缺点，所以应用越来越广，目前主要应用在以下几个方面：
１）接种室、手术室、食品、药物包装室常应用紫外线杀菌。
２）应用β射线作食品表面杀菌，γ射线用于食品内部杀菌。经辐射后的食品，因大量微生物被杀灭，再用冷冻保藏，可使保存期延长。
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中护微生物实验3细菌分布检查与消毒灭菌实验

4.常用消毒灭菌器及除菌滤器介绍
高压蒸汽灭菌器干烤箱（干热灭菌器）滤器
三、药物敏感实验（纸片法）
方法：
1. 取琼脂平板一个用记号笔在平板底部标记贴抗生素纸片的位置。 2. 点燃酒精灯。用棉签蘸取菌液，在琼脂平板上密集而均匀地涂布。 3. 待培养基稍干后，无菌操作用镊子分别取抗生素纸片按标记位置贴
因此可逐渐扩散到周围的培养基中其浓度将随与纸片距离的增加而逐渐降低从而形成了以纸片为中心药物浓度逐渐减小的浓度剃度
中护微生物实验3细菌分布检查与消毒灭菌实验
实验目的
1.学会不同部位细菌的检查方法。 2.掌握常用的消毒灭菌方法及其仪器的使用。 3.了解药敏实验的结果及意义。
实验内容与方法
2.咽喉部细菌的检查
(1)咽喉拭子法：
材料：血平皿、咽拭子方法：
1. 用干净棉签咽部取材； 2. 将取得样本以分区划线形式接种在血平皿上； 3. 37℃ 温箱内孵育24小时后观察结果。
(2)咳碟法
• 取血平板一个，将盖打开，置于距口腔10厘米处，用力咳嗽数次，然后盖好，置37度温箱培养18-24小时观察结果。
3.紫外线杀菌实验
材料：琼脂平板、细菌培养物、灭菌长方形纸片方法：取普通琼脂平板一个，密集画线接种大肠埃希菌。用无菌镊子把灭菌长方形纸片贴于平板表面中央。打开平皿盖的2/3，置于紫外灯下距离约20-30厘米
处照射30分钟，除去纸片，盖好平皿盖，置37度温箱培养24小时观察
结果。原理：损伤DNA，阻止DNA的复制
3. 37℃ 温箱内孵育24小时后观察结果。意义：为临床针对性合理用药提供依据
药敏试验
抑菌圈消消毒 Nhomakorabea毒
前
后

微生物知识及消毒与灭菌知识培训

概念
灭菌——使达到无菌状态的方法（GMP 指南）。用物理或化学方法杀灭传播媒介上所有的微生物，使其达到无菌（GB）。通常是指杀灭或除去全部活的微生物（包括繁殖体和芽孢）。消毒——用物理或化学方法杀灭或清除传播媒介上的病原微生物，使其达到无害化（GB）。通常是指杀死病原微生物的繁殖体，但不能破坏其芽孢。所以消毒是不彻底的，不能代替灭菌。
滤过除菌

利用细菌不能通过致密孔滤材的原理，除去对热不稳定的药品溶液或液体物质中的细菌的方法。过滤法一般只能除菌，不能除去支原体和病毒。过滤除菌的效果与滤膜的性能、孔径的大小、密度、滤膜的厚度等因素有关。滤过除菌法要求最终过滤的滤膜孔径为0.22μm。由于各厂家生产的相同规格的滤膜质量并不一致，为了保证除菌效果，在使用前后应检查滤器的完好性（如压力维持试验或起泡点试验）。一个过滤器的使用时间应根据品种验证后确定，一般不应超过8小时。
干热灭菌
常见的有火焰、烧灼、干烤和红外线灭菌等。 ①火焰、烧灼：通常用于实验室无菌操作中金属或其它耐火材料制成的器具的灭菌。 ②干烤和红外线：利用干热空气或热辐射进行灭菌。一般135~145℃需3~5h，160~170℃需 2h以上，170~180℃需1h以上，180~200℃需 0.5~1h。除热原，则需250℃30min，或 200℃45min，180℃2h。空气传热慢，穿透力不强，故干热灭菌时间长。干热灭菌时烤箱内装入物品应留有空隙，以利空气流动，否则使箱内温度不均，部分物品灭菌不彻底。

湿热灭菌
通过热蒸汽或沸水使蛋白质变性而杀灭微生物的方法。湿热穿透力强，灭菌效果较干热好。 ①煮沸或流通蒸汽灭菌：常压下沸水和蒸汽的温度是100℃，一般处理30~60min可杀死细菌繁殖体，但不能完全杀灭芽孢。此法适用于不能高压蒸汽灭菌的物品。 ②低温间隙灭菌（巴斯德灭菌法）：将物品先用60~80℃加热（或煮沸）1h，然后置 20~25℃保存24h（或常温过夜），使其中残存的芽孢萌发成繁殖体，再用以上条件灭菌，如此反复三次。本法适用于不耐高温或高温下易变质的物品，但很费时。

细菌的分布与消毒灭菌【优质最全版】

2.水中的细菌
(1)水体中微生物的来源土壤、空气、动植物尸体、人和动物的排泻物、工业及
生活污水。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ(2)水体中的病原微生物通过水体传播的病原微生物主要有沙门氏菌属、志贺氏
菌属、霍乱弧菌等。可引起消化系统传染病，甚至爆发流行。
因此，做好水的卫生学检查对预防疾病至关重要。
3.空气中的细菌
（1）空气中缺乏营养物质与水分，且受日光照射，细菌不易繁殖。（2）但由于人群和各种动物的呼吸道及口腔中的细菌可随唾液、
。
抹布和砧板上的细菌模式图
针头上的细菌模式图
第一节细菌的分布
一、细菌在自然界的分布二、人体正常菌群及分布
一、细菌在自然界中的分布
1.土壤中的细菌
☆ 土壤是细菌生存的天然场所（因为土壤中有水分、营养物质、空气、一定的PH环境和温度）。
☆ 自然界中，以土壤的含菌量（种类）最多，土壤素有“天然培养基”之称。
{ 消毒（disinfection）：杀死物体上病原微生物的方法，
但不一定杀死细菌芽胞。 { 灭菌（sterilization）：杀死物体上包括芽胞在内的所有病原性和非病原性微生物的方法。 { 防腐（antisepsis）：防止或抑制细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。 { 无菌（asepsis）：不含活菌的意思。防止微生物进入机体或物体的操作方法，称为无菌操作或无菌技术。进行微生物实验、外科手术及医疗技术操作等过程，均需进行严格的无菌操作。
{煮沸法：水温100℃经5分钟可杀死细菌繁殖体，常用于食具、刀剪、注射器等的消毒，细菌芽胞需煮沸1～ 2小时才被杀灭。水中加入2%碳酸氢钠，可使沸点达 105℃，既可促进杀灭芽胞，又能防止金属器械生锈。

细菌的分布

菌素可抑制痢疾杆菌生长；唾液链球菌产生的H2O2抑制脑膜炎球菌生长。
④免疫作用：微生物具有免疫原性、促分裂和佐剂的作用。可剌激机体免疫系统发育和成熟。
2、正常菌群转化为条件病原菌
• 条件致病菌：凡属正常菌群的微生物，由于机体抵抗力降低、寄居部位的改变或因数量改变等情况而引起疾病者。
①机体免疫机能低下：如大面积烧伤，过度疲劳，受凉，长期患消耗性疾病。
• 2.微生物的种类与数量：同种消毒剂对不同微生物的杀菌效果不同。如结核杆菌对酸、碱的抵抗力比其他的菌强；70%乙醇可杀死一般细菌繁殖体，但不能杀灭细菌芽胞。因此，必须根据消毒对象选择合适的消毒剂。
• 3.环境中有机物的影响：消毒环境中如有有机物存在，如血清、脓汁、痰、粪便等，可与消毒剂结合而影响杀中的细菌
抹布和砧板上的细菌
针头上的细菌
• 细菌种类多，繁殖快，适应环境的能力强，是自然界中分布最广泛的一群微小生物。
微生物在自然界中的分布可概括为：
“无孔不入，无处不有”
本章提要： ➢ 第一节细菌的分布 ➢ 第二节消毒与灭菌 ➢ 第三节生物安全
• 自然界中，以土壤的含菌量（种类）最多，土壤素有“天然培养基”之称。土壤也是一切自然环境中细菌的总发源地，也是人类利用细菌的主要来源
• 在肥沃的土壤中，每克土壤含菌量达几十亿-几仟亿（沙漠含菌量仅10万/g）。
• 细菌在土壤各层分布不均：表面含菌量少；距表面10-20cm土壤含菌量最多
• 菌群失调症：指严重的菌群失调使机体发生功能紊乱表现出明显临床症状者。菌群失调症又叫菌群交替症（二次感染）。
• 菌群失调经常发生而菌群失调症则少见。患二重感染的机体抵抗力很弱，细菌对抗菌素药物不敏感，治疗难度大，应严加预防，避免发生。

细菌的分布与消毒灭菌

第十二章细菌的分布与消毒灭菌种类繁多的细菌在自然界的分布极为广泛，它们与外界环境及宿主一起构成相对平衡的生态体系，大多数细菌对人体是无害的，但有些细菌侵入人体或因某些原因导致人体内微生态平衡失调时，可以引起疾病。

因此，了解细菌在自然环境及正常人体的分布，认识正常菌群的作用及微生态平衡与失调的关系，对加强无菌观念、正确使用消毒灭菌方法、防止医院感染、传染病及菌群失调的发生均有十分重要的意义。

第一节细菌的分布一细菌在自然界的分布土壤含有细菌生长繁殖必需的营养物质、水分、适宜的pH及气体环境。

因此，细菌的种类和数量很多，一般离地面10cm～20cm耕作层的土壤中，细菌含量最多。

土壤中的细菌多数为非病原菌，在自然界的物质循环中起着重要的作用。

土壤中的病原菌可来自人和动物的排泄物以及死于传染病的人畜尸体，多数病原菌在土壤中容易死亡。

但有一些能形成芽胞的细菌，如破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、炭疽芽胞杆菌等，它们在土壤中可存活几年或几十年，并能通过伤口感染，因此，当伤口被泥土污染时，应采取清创等必要的措施进行预防和治疗。

水也是细菌生存的天然环境，水中的细菌主要来自土壤和人、动物的排泄物等，水中细菌的数量通常是地面水多于地下水，静止水多于流动水，沿岸水多于中流水，由于水容易受人和动物的粪便及多种排泄物的污染，所以水中可含有伤寒沙门菌、痢疾志贺菌、霍乱弧菌等病原菌。

水源被污染可引起多种消化系统传染病的流行，因此，保护水源，加强水和粪便的管理，是预防和控制肠道传染病的重要环节。

空气中缺乏营养物质与水分，且受日光照射，细菌不易繁殖。

但由于人群和各种动物的呼吸道及口腔中的细菌可随唾液、飞沫散布到空气中。

土壤中的细菌也随尘埃飞扬在空气中，因此空气中可存在不同种类的细菌。

尤其在人口密集的公共场所或医院，空气中细菌种类和数量显著增多。

常见的病原菌有金黄色葡萄球菌、链球菌、结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌及脑膜炎奈瑟菌等，可引起伤口或呼吸道感染。