辨证论治联合手术及化疗对H22肝癌小鼠疗效的观察

上海中医药大学学报第26卷第4期2012年7月

王艳明

1，2

方肇勤

张园园

潘志强

卢文丽

1．上海中医药大学基础医学院（上海201203）

2．河北省廊坊市妇幼保健中心（河北廊坊065000）

【摘要】目的：探索建立同病异证H22肝癌小鼠中药个体化辨证论治联合手术及化疗的综合治疗方案及初步评价其疗效。方法：采用H22肝癌细胞腋下实体瘤小鼠及小鼠标准化、计量化辨证方法，观察中药个体化辨证论治联合手术及化疗的综合治疗方案对小鼠带瘤生存时间、抑瘤率和证候等的综合疗效。结果：建立了中药个体化辨证论治联合手术及化疗方法，该方法在抑瘤率、术后早期生存率，以及改善小鼠免疫紊乱与衰退方面显示出一定的优势。结论：在实验室可以模拟临床，建立起肿瘤小鼠个体化辨证论治

联合手术及化疗方法，

为综合治疗方案的探索、优化和提高提供了方法学。【关键词】肝癌；小鼠；辨证论治；中西医结合；方法学【中图分类号】R285．5【文献标志码】A 【文章编号】1008-861X （2012）04-0087-05

［基金项目］国家科技重大专项课题（2009ZX09502-018）［作者简介］王艳明，女，在读硕士生，主治医师，主要从事

中医学证和辨证论治的研究。［通讯作者］方肇勤，教授，博士生导师。E-mail ：zqfang@sh163．net

原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其

恶性程度高，发展迅速，病死率高，严重危害着患者的生命健康。当前，原发性肝癌治疗的首选是手术，当不具备手术指征时，常采用肝癌局部介入化疗和物理疗法，放疗也有采用。在我国，大多肝癌患者会

主动寻求中医药治疗，

因此，中西医结合治疗成为肝癌治疗的主要模式。中医药防治肝癌主要采取辨证论治的方法，针对肝癌邪毒、痰瘀、脾虚等主要病机，以及不同患者的特殊证候，予以清热解毒、行气活血、化痰软坚、健脾益气等综合治疗及个体化的辨证

论治

［1-3］

。项目组在前期的研究中发现肝癌小鼠与人类近似，

存在着证候的自然发生、兼夹和演变，是肝癌辨证论治研究的理想模式生物［4］

，并逐步建立

起大鼠和小鼠标准化诊法和辨证方法［5-9］，尝试开

展了以中药复方为主的辨证论治［10-11］

，取得了积极

的进展。并在以往的试验中利用基因芯片的检测发现同病异证的肝癌小鼠在神经-内分泌系统存在一

些重要激素的表达特征，具有各自的物质基础［12］

。为了模拟临床实际，建立肝癌小鼠中西医结合治疗方法，并以此为基础，不断探索和优化中西医结合肝

癌防治方法、

揭示中西医结合防治肝癌的作用机制，我们在以往工作的基础上，进一步探索中药辨证论治联合手术及介入化疗对H22肝癌小鼠的治疗及

疗效评价，

报道如下。1材料与方法

1．1实验动物健康雄性昆明小鼠140只，体质量（25?1）g ，购自上海斯莱克实验动物有限公司，动

物生产许可证号为SCXK （沪）2008-0003，动物使用

许可证号为SYXK （沪）2009-0069。1．2药物

1．2．1中药方剂（1）基本方：半枝莲15g ，白花蛇舌草15g ，香附10g ，八月札10g ，郁金10g ，延胡

索10g ，

当归10g ，川芎10g ，桃仁10g ，法半夏10g ，陈皮10g ，神曲10g 。

（2）气虚方：半枝莲15g ，白花蛇舌草15g ，香附10g ，八月札10g ，郁金10g ，延胡索10g ，当归10g ，川

芎10g ，

桃仁10g ，法半夏10g ，陈皮10g ，神曲10g ，生晒参10g ，黄芪15g ，白术10g ，阿胶10g 。

（3）阳气虚方：半枝莲15g ，白花蛇舌草15g ，香附10g ，八月札10g ，郁金10g ，延胡索10g ，当归10g ，川芎10g ，桃仁10g ，法半夏10g ，陈皮10g ，神曲10g ，生晒参10g ，黄芪15g ，白术10g ，阿胶10g ，淫羊藿10g ，山茱萸10g ，杜仲10g 。

（4）气阴阳虚方：半枝莲15g ，白花蛇舌草15g ，香附10g ，八月札10g ，郁金10g ，延胡索10g ，当归10g ，川芎10g ，桃仁10g ，法半夏10g ，陈皮10g ，神

曲10g ，

生晒参10g ，黄芪15g ，白术10g ，淫羊藿10g ，山茱萸10g ，杜仲10g ，阿胶10g ，熟地黄20g ，炙鳖甲10g ，炙龟甲10g 。

中药制备：以上4方均按标准的中药水煎醇沉方法，浸膏分别浓缩至1g /ml 。

1．2．2局部介入用化疗液每0．2ml 含5-Fu

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肝癌化疗后复发还能再次化疗吗

肝癌是生活中常见的恶性肿瘤疾病，其早期症状几乎不能被发现，确诊的时候已经到了晚期，严重危害患者健康，甚至生命。化疗是治疗肝癌常用的方法，能够控制病情，缓解病症，延长生存时间，但化疗只是按比例杀死癌细胞，并不能全部杀死癌细胞，有不少患者在治疗后出现了复发的情况，影响患者生存质量和生存期，需要及时采取措施治疗，那肝癌化疗后复发还能再次化疗吗？复发是恶性肿瘤的特性，一旦复发往往意味着病情加重，治疗也会更加棘手，且是造成患者死亡的重要原因之一，需要引起足够的重视，及时采取措施治疗。肝癌化疗后复发，患者能够再次化疗是要根据自身情况来决定的，化疗是一种全身性治疗手段，能作用于全身的癌细胞，可以抑制原发灶和转移，控制病情发展，缓解临床症状，延长生存时间，但化疗的副作用也不容忽视，在治疗前需要对患者的身体状况、骨髓储备情况、营养状况等进行全面的评估，适宜化疗的才能进行。不过需要注意的是，化疗并不能全部将癌细胞杀死，患者治疗结束后还会再次面临复发或转移的问题，因此需要联合其他方法进行综合治疗，如中医药的治疗。中医治疗医扶正祛邪为原则，有助于修复因化疗受损的机体，提高患者的免疫力和抵抗力，缓解化疗引起的并发症和后遗症，还能在一定程度上抑制肿瘤细胞，稳定病情，预防复发转移，延长生存时间。对于不能或者不愿再次化疗的患者，也不能轻易放弃，可以采用中医保守治疗。中医不同于西医的只关注瘤体是否缩小，癌细胞是否被消灭等问题，中医强调以人文本，通过调节机体内的环境，恢复气血、阴阳、脏腑的平衡，去除恶性肿瘤生存的环境，抑制癌细胞的生长繁殖，控制病情发展，提高患者的免疫力和抵抗力，缓解临床症状，提高生存质量，延长生存时间。中医治疗全部使用中草药，副作用小，对患者的伤害小，适用于各个阶段的患者，应及时配合治疗，作为一家集预防、医疗、科研、康复为一体的现代化特色中医肿瘤专科医院，郑州希福中医肿瘤医院自成立以来，严格按照袁希福提出的三联平衡理论指导用药，在辩证与辨病的基础上，通过扶正、通淤、祛毒，改善广大肿瘤患者普遍存在的元气亏虚、痰凝血瘀、癌毒结聚，使患者病情得到一定程度控制的同时，机体的阴阳、气血、脏腑也逐渐恢复平衡，有助于减轻痛苦，延长患者生命，一些患者甚至实现了临床康复或长期带瘤生存。自2004年以来，郑州希福中医肿瘤医院已连续举办了五届百位抗癌明星中医康复经验交流大会。会上，来自全国二十个省、九十多个地区的数百位抗癌明星分享了自己的康复经历和经验。这些经历和经验不仅增强了肿瘤患者抗癌、治癌的信心和决心，也为从事中医治癌的医务人员提供了弥足珍贵的临床案例，更为中医治疗肿瘤积累了详实可靠的资料。部分参考案例：案例1：王春明，男，73岁，原发性肝癌，河南濮阳市人 2006年12月19日，王春明被确诊为原发性肝癌，在濮阳人民医院做了两次介入治疗后身体受创，消瘦虚弱。在他和家人近乎失望的时候，一个老乡-如今已在郑州希福中医肿瘤医院的治疗下带瘤生存17年的肺癌患者高清莲，建议他也去试试。王春明到郑州希福中医肿瘤医院时，已经瘦得皮包骨头，连说话的力气都没有，取药开始服用。半个月后，身体明显好转，体重增加了5斤，生活可以自理了。服药半年之后，他到濮阳市人民医院复查，医院的医生说疗效很好，堪称近几年“肝癌疗效首例”

原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型

World Journal of Cancer Research 世界肿瘤研究, 2015, 5, 15-20 Published Online January 2015 in Hans. https://www.360docs.net/doc/3f11361140.html,/journal/wjcr https://www.360docs.net/doc/3f11361140.html,/10.12677/wjcr.2015.51003 Orthotropic Transplantation to Establish H22 Hepatocellular Carcinoma Model in Mice Chen Han1,2, Hengxiao Wang1,2*, Zhaoxia Wang3 1Department of Immunity, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 2School of Medicine and Life Sciences, University of Jinan-Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 3Department of Pathology, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan Email: *wanghengxiao@https://www.360docs.net/doc/3f11361140.html, Received: Nov. 24th, 2014; revised: Dec. 22nd, 2014; accepted: Dec. 30th, 2014 Copyright ? 2015 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). https://www.360docs.net/doc/3f11361140.html,/licenses/by/4.0/ Abstract Objective: To establish a liver orthotropic transplantation tumor model with H22 cells, for the further development of the related experimental study. Methods: A certain number of H22 cells were directly injected in the left lobe of the liver in C57BL/6 mice, establishing a transplanted tu-mor model of hepatocellular carcinoma in situ. Results: After 7 days of surgery, the liver surface appeared irregular size nodules, nodules increased with the prolongation of time increases, the late abdominal organs appeared invasion, adhesion, ascites was increased. Histopathological ex-amination of liver tumor tissues and adjacent tissues of cancer showed that liver orthotropic transplantation tumor formation rate was 100%, no spontaneous regression. Conclusions: Ortho-tropic injection of H22 cell established orthotropic transplantation tumor formation in the liver, and the tumor formation time was relatively short, tumor formation processes associated with organ metastasis and ascites. This model was reasonable to simulate the pathological and physio-logical body of liver cancer in human, and could satisfy the requirement of research on liver can-cer. Keywords Hepatocellular Carcinoma, Orthotropic Transplantation, Experimental Animal Models 原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型韩琛1,2，王恒孝1,2*，王朝霞3 *通讯作者。

肝癌抗癌药物全身治疗疗效评价标准

肝癌抗癌药物全身治疗疗效评价标准索拉非尼是目前肝癌唯一有效的全身性药物，这是一种口服的多激酶抑制剂，具有抗血管生成和抗增殖作用，已被证明可以改善患者的生存率。两个随机对照试验证实了索拉菲尼的安全性，并能将患者的生存率显著提高30％。索拉非尼的成功修改了癌症治疗的原则。按照传统的RECIST标准，癌症患者需要减少肿瘤负荷，才能改善患者的生存率。但索拉菲尼并不需要。它增强了致肿瘤进展时间（TTP）作为评价疗效标准的效用，质疑了由于单纯的放射学进展而中断治疗。然而，肿瘤进展的停止是有限的和不均匀的。目前迫切需要确定生物标志物或开发功能成像技术，以预测疗效。如上面所提到的，mRECIST建议评估肿瘤坏死情况（如果存在）和TTP估计疗效的方法需要前瞻性试验的验证。实际上，影像学上的改变不能直接反应生存率的改变。TTP 是内容丰富，但它需要加以完善，因为并非所有的肿瘤影像学进展都会导致生存率受损。肝癌30%存在RAS突变，在研新药RAS抑制剂安卓健针对无药可医的RAS突变肿瘤表现出了良好的安全性及初步的有效性，患者不良反应小，正常人服用后皆未对生化值产生影响，说明其可以很好地保证患者后期治疗的生活质量，且该药物对肝脏还有保护作用。目前正于FDA进行二期临床试验。在随机对照试验，二线治疗方案brivanib与安慰剂的对比发现患者的TTP得到显著改善，但生存率没有。临床上的无进展生存期（PFS）也可能会产生误会。在舒尼替尼和索拉非尼对比的试验中，两种的PFS相似，但舒尼替尼的生存率较差。如果肿瘤负荷，TTP和PFS都是不可靠的，这就要求我们开发新的工具来确定药物的早期功效。目前我们使用的预测干预后生存率的数据（从手术到全身治疗）是基于从试验开始到特殊处理这一段时间。目前没有关于肝癌患者正常的病情进展情况的评价工具。手术后复发对生存率有影响，但具体的影响是什么，不得而知。这就需要大量的研究。到目前为止，没有任何的治疗方案和联合方案可以超过索拉非尼。目前正在进行的第3阶段临床试验在测试舒尼替尼、linifanib、brivanib或索拉非尼与厄洛替尼的组合在二线治疗中的作用。索拉非尼和化疗或新型方法的组合可以丰富治疗的选择。高C-met 表达的患者使用tivantinib治疗有良好的疗效。目前正在对其应用于2线治疗进行大型3期临床试验。免疫方法治疗癌症也是一种潜在的治疗手段。

小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验

小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验 [摘要] 目的:1.通过可移植性小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验，从感性上认识肿瘤侵袭与淋巴道转移的生物学特性，了解肿瘤动物实验模型建立的过程及意义。2.进一步了解动物尸体解剖、组织取材、染色的过程。3.强化科研思维的培养及实验技能的训练。方法:将高转移力小鼠腹水型肝癌细胞(HCa - F)经 615 小鼠右腋中线皮下接种，定期观察右腋皮下肿瘤的生长和同侧腋窝淋巴结及腹

股沟淋巴结肿大情况，并于接种后 21 天处死全部小鼠，取皮下瘤体及双侧腋窝淋巴结，腹股沟淋巴结称重并测量大小，同时观察肿瘤的形态特点，生长方式，肺、肝、肾等脏器，并将瘤体、淋巴结及脏器做切片处理以作染色和镜下观察。结果:21 天观察，实验使用 10 只小鼠，最终存活 8只，其中形成肿块 7 只（3只形成的肿块较大），成瘤率 70%，淋巴结转移率 70%。肉眼观察，较大肿瘤 2*1.5*1.3cm，灰白色，质地较硬，从中间切开，发现肿块大部分坏死，中心部分出现腔，腔内有肿瘤坏死物质。镜下观察，坏死组织粉染，轮廓尚存。残存肿瘤组织细胞存在异型性：瘤细胞大小和形态不一致，细胞核体积增大并呈现多形性，核浆比增大。核的大小、形状和染色不一。核分裂象增多，核浆比失调，胞浆减少。结论:高转移力小鼠腹水型肝癌细胞通过淋巴道转移，无器官转移，且具有高转移力。 [关键词]HCa-F（高转移力小鼠腹水型肝癌细胞); 615小鼠; 高淋巴道转移 [前言]研究背景:原发性肝癌的发生率地区差异大，在亚非国家较常见，我国的发病率较高，属于常见的肿瘤之一。近年来，我国对肝癌的防治研究取得了明显的成绩，一些直径在1cm一下的小肝癌已被发现并及时治疗取得满意的疗效[1]。随着临床治疗经验的积累，逐渐

肝癌晚期的主要3种治疗方法

肝癌晚期的三种主要治疗方法 1、肝癌的化疗临床上多采用联合化疗为主，介入治疗手段目前已逐渐成为化疗主导。肝癌的化疗在控制症状的同时，有明显的毒副作用，对患者本身伤害较大，多数患者难以坚持治疗，针对这个问题临床多建议结合中药治疗。 2、对于晚期转移部位单一而且患者体质尚可，有手术意愿的肝癌患者，可考虑手术姑息性切除，但在手术治疗前后最好同时也要配合放疗进行治疗，帮助增强患者的免疫功能，提高抵抗力，在术后帮助增强手术治疗的效果，提高手术治疗彻底性，减少术后并发症，防止术后复发和转移，加快患者恢复。 3、肝癌放射治疗包括根治性和姑息性两大类，它是通过电离辐射作用对肿瘤进行治疗，其目的在于对确定的肿瘤体积给予精确的辐射剂量，同时将肿瘤周围的正常组织受到的损伤限制到最小的程度，在根治肿瘤的同时，以最小的代价取得患者高质量的存活，对某些患者放疗则作为高姑息性治疗的重要手段，如缓解症状及减轻痛苦，这是肝癌晚期的治疗方法中效果最好的。放疗是肝癌晚期最佳的治疗方法，它治疗肝癌晚期定位极准确，误差极为微小，尤其以TOMO为代表的现代精确放疗通常在0.5毫米以下，是优于手术和化疗的最新治疗技术，也是目前最成熟、运用最广泛的治疗技术。具有不伤身体、无痛等优点，在减轻患者毒副作用的同时，还能够直接杀伤癌细胞，防复发和转移，提高自身免疫力，提高生活质量。北京空军总医院肿瘤医院的TOMO刀是中国目前最先进的放疗仪器，夏廷毅院长身为中国放疗界领军权威则在国际上享有盛誉，每周二、四上午出诊，由于问诊人数过多，所以挂夏院长的号稍微有些困难，有预约需求的患者可打010---6841-8591。放疗治疗肝癌晚期有它独特的优势：1)不开刀，无创伤，不需要麻醉;2)治疗过程不受年龄，身体状况及其它并存病的影响，无明显禁忌症，尤其适合于不能耐受手术痛苦的患者，对多发转移灶可一次性治疗;3)治疗全过程由计算机控制，精确，安全，可靠，疗效好，对正常组织无损伤，专业人员严密监控全过程;4)术后不受饮食和活动限制，病人不脱发，无严重不良反应。

人肝癌组织裸鼠移植瘤模型建立及其应用

人肝癌组织裸鼠移植瘤模型建立及其应用王全凯1，杨全会2，郭静2，谢广云1，崔涛1，许荣焜2，许建宁1* 1. 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所，北京 100050 2. 中国医学科学院基础医学研究所，北京 100005 摘要：目的建立人肝癌组织裸鼠移植瘤模型，对其特性进行鉴定，并应用于抗肿瘤药物制剂疗效的观察。方法将人原发肝癌手术新鲜组织移植于BALB/c裸鼠皮下，建立人肝癌组织裸鼠移植瘤动物模型；于同体移植后第15 天连续ig给予长科制剂（CKBM），通过观察动物日常状况、接种部位出现肿块时间，测定瘤体体积和质量、抑瘤率以及进行组织病理学观察，初步评价CKBM的抗肿瘤疗效。结果人肝癌组织裸鼠移植瘤保持了人肝癌组织特性，并能通过同体移植传代；观察发现CKBM对人肝癌荷瘤裸鼠的抑瘤率达45.71%，对癌细胞生长有一定的抑制作用。结论在成功建立人肝癌组织裸鼠移植瘤模型基础上，观察发现CKBM具有一定的抗肿瘤疗效。关键词：肝癌；裸鼠；移植瘤；动物模型；抑瘤率中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)03 - 0398 - 05 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.03.018 Establishment and application of implantation model of human hepatocellular carcinoma in nude mice WANG Quan-kai1, YANG Quan-hui2, GUO Jing2, XIE Guang-yun1, CUI Tao1, XU Rong-kun2, XU Jian-ning1 1. National Institute of Occupational Health and Poison Control, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100050, China 2. Institute of Basic Medical Sciences Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100005, China Abstract:Objective The human hepatocellular carcinoma model was established by implantation in BALB/c nude mice. Its characteristics were certified in the model which was used for the observation of antitumor efficacy. Methods Human hepatocellular carcinoma were sc implanted to BALB/c nude mice for the establishment of the implantation model of the human hepatocellular carcinoma in BALB/c nude mice. The nude mice were exposed to the pharmaceuticals from CK Life Sciences Limited by ig on day 15 after the implantation to find out its healing efficacy through the animal reflecting, the occurring time, volume, weight of tumors, the rate of tumor inhibited, and pathological histology. Results The characteristics of human hepatocellular carcinoma could be kept with passaging by autograft. The tumor inhibiting rate of the pharmaceuticals was 45.71%, showing the certain inhibitory effect on growth of tumor cells. Conclusion A certain antitumor efficacy of the pharmaceuticals made by CK Life Sciences Limited is found out on the basis on the human hepatocellular carcinoma model in nude mice established successfully. Key words: hepatocellular carcinoma; nude mice; implanted tumor; animal model; tumor inhibitory rate 人类肝癌的基础和临床实验研究多数都借助于实验动物模型。目前，以人肝癌组织移植裸鼠建立的动物移植瘤模型是最接近人类肝癌的整体实验模型，是肝癌基础和临床实验研究理想的动物模型。人肝癌组织裸鼠移植瘤模型是指把人肝癌组织块接种于裸鼠皮下建立的实验动物模型，常用于筛选抗肿瘤药物和制剂、实验性治疗和抗肿瘤机制研究[1]。基于为肝癌实验和临床研究以及药物筛选提供体内实验系统的目的，本研究建立了人肝癌组织裸鼠移植瘤模型，对其特性进行鉴定，并应用于抗肿瘤药物长科制剂（CKBM）疗效的观察。 1材料与方法 1.1实验动物 BALB/c（nu/nu）裸小鼠（由北京维通利华实验动物技术有限公司提供）。饲养于中国医学科学院基础医学研究所/中国协和医科大学基础医学部收稿日期：2013-06-03 作者简介：王全凯（1977—），男，北京人，主管技师，研究方向为毒理学。Tel: (010)83132199 E-mail: kylewang@https://www.360docs.net/doc/3f11361140.html, *通信作者许建宁，硕士生导师，研究方向为毒理学。Tel: (010)83132592 E-mail: jnx999@https://www.360docs.net/doc/3f11361140.html,

肝癌化疗多久一个疗程

肝癌是消化道肿瘤疾病中发病率最高的一种，其恶性程度较高，病情发展较快，如果治疗不及时，病情很容易进入晚期，预告极差。化疗是使用化学药物治疗肝癌的一种手段，通过口服、注射等方式将化学药物置入癌组织周围，或遍布患者的全身，以起到杀死癌细胞，缩小肿瘤的目的。化疗的适用范围广，即使是一些晚期患者也可以使用，那么肝癌化疗多久一个疗程呢？肝癌化疗需要进行多个疗程，一般以3-6个疗程为宜，次数少了效果不明显，次数太多对患者的身体伤害太大，每个疗程都有不同的时长，这与患者的病情、体质、用药反应等有很大的关系，有时一个疗程需要3-5次，一天一次，有的需要的次数较多，而由于化疗的药物会抑制骨髓，使白细胞减少，因此两次化疗期间会有一周的间隔让患者调整，等恢复正常指标后再继续下一次的化疗。由于化疗药物具有一定的毒性，其副作用比较大，很多患者在化疗时都会出现一些临床反应，比如恶心呕吐、食欲下降、疲惫乏力等，患者体内的健康组织也遭到破坏，免疫功能下降，正常生活受到很大的影响，也给患者带来了很大的心理负担。不少患者由于出现严重的毒副反应，身体无法承受而不得不停止化疗，其治疗效果也可想而知，也有一些患者由于受损太大，出现血象低、昏迷等严重状况，对患者的生命是很大的威胁。不少肝癌患者并不是死于肝癌本身，而是由于过度治疗死亡的。肝癌患者在进行化疗时，一定要警惕化疗的副作用，尤其是一些年老体弱，抵抗力差的患者，更加需要采取一些措施来应对化疗。化疗虽然能够较快的杀死癌细胞，但是其劣势也不容忽视，一是对患者的伤害太大，不单独化疗不仅无法取得理想的治疗效果，还会加剧患者的痛苦，加快患者的死亡。二是化疗的效果能维持多久并不好说，有的患者刚化疗完肿瘤就复发了，治疗意义不大，难以治本。肝癌患者单一的使用化疗抗癌力量比较薄弱，患者可以使用中西结合的方式综合治疗，能够是治疗的效果更加明显。中医治疗可以说是治疗肝癌的方法中最温和的一种，中医治疗不用开刀，没有创伤，使用纯天然的中草药物，副作用小，各种情况的肝癌患者都能够接受，患者服用中药，在家疗养即可，心理负担小，更利于恢复，而且中医治疗擅长调节，标本兼治，与化疗相结合，能够减轻化疗的毒性，缓解患者的伤害，并提升治疗的效果。著名肿瘤专家肿瘤袁希福说：“肿瘤是一类全身性的疾病，癌症不仅仅是局部的病变，而是全身的病变在局部的表现。”他在传统中医理论及袁氏阴阳平衡疗法的基础上，结合30多年临床抗癌实践经验，把传统中医药理论与当代免疫理论、细胞分化增殖周期理论及基因理论等最新医学理论有机嫁接，融会贯通而创立了中医治疗肿瘤的方法——三联平衡疗法。三联平衡疗法在治疗时遵循中医理念中整体施治，标本兼治的原则，从患者的整体出发，着重对患者进行扶正补虚，疏导排毒，调节患者全身的气血、阴阳、脏腑机能的平衡，使患者气血顺畅、元气充沛、经络舒展，体内的毒素能够快速的排出，减轻对身体的伤害。癌症患者在化疗时使用“三联平衡疗法”，能够修复体内受损的白细胞，提升免疫力，促进化疗的顺利进行，同时能够全面的改善患者的身体内环境，消除适宜肿瘤生长的条件，使肿瘤得到长期有效的控制，不易复发，使治疗效果大大提升。【病例分享】肝癌患者服用三联平衡疗法后病情好转，生活质量提高基本情况：郭宗琴，女，64岁，南阳邓州市刘集镇人，晚期肝癌、双肺多发转移。 2016年5月5日，郭宗琴在邓州市中心医院检查，显示肝左叶占位，双肺多发转移。

建立小鼠肿瘤模型的研究进展

建立小鼠肿瘤模型的研究进展摘要：建立一种理想的肿瘤动物模型对研究肿瘤的发病、治疗和预防有重大的意义。其中小鼠肿瘤模型具有生长周期快、易获得、易操作等优点被基础实验研究所广泛采用，如何选择和建立一个合适的小鼠肿瘤模型对肿瘤的整个研究有着举足轻重的作用。关键字：肿瘤，动物模型，小鼠肿瘤，是一种严重威胁人类健康的多发病和常见病。对肿瘤的研究一般都是在人类疾病动物模型的基础上展开的。建立一个完全反映人类疾病的动物模型比较困难，但可依据不同的实验目的选择相应的动物实验模型。 1.实验动物的选择可用作肿瘤模型的动物有很多，小鼠肿瘤模型作为其中一种常用模型主要因为有以下几个优点。（1）易获得，常用的肿瘤模型小鼠通常采用SPF级小鼠，SPF级小鼠一般医学院校及研究所都能买到。（2）生长周期短，一般小鼠肿瘤模型两周左右就能长大，能大大缩短实验周期。（3）易操作，小鼠的动物实验操作一般简便，因此可适当增加组内样本数量，使实验数据更具说服力。 2.理想的建立肿瘤模型应具备的条件（1）肿瘤生长的过程应与人类肿瘤生长过程相似，做到尽可能复制出与人类肿瘤相同的模型。（2）制作模型的方法简单易行。（3）动物模型的重复性要好，要能满足实验的多次重复试验结果稳定性好。（4）采用的建模方法对实验人员和环境无危害或危害较小。 3.肿瘤来源的选择现在世界上保有近500种的动物移植瘤，但常用于筛药的不到40种，多数为小鼠肿瘤，其次是大鼠和仓鼠移植瘤，包括小鼠L1210淋巴白血病，P1534淋巴白血病，艾氏腹水瘤，Friehd病毒白血病，肉瘤180，白血病P388，Lewis肺癌，腺癌755，白血病615，Walker-256，吉田肉瘤，肉瘤45，Liol淋巴瘤，Dunning 白血病，Ｗagner癌肉瘤，白血病L5170Y，P1798淋巴肉瘤，LPC-1浆细胞瘤，淋巴瘤8，B16或Cloadman黑色素瘤，Ridaway骨肉瘤，Gardner 淋巴肉瘤，肉瘤37，P315白血病，Mur hy-sturm淋巴肉瘤，Jensen肉瘤，Geurin氏癌，仓鼠十二指肠腺癌和人体肉瘤HSL第1代杂交鼠移植。它们对抗癌药作用的敏感性大致可分

肝癌动物模型的建立_徐静

共识.中华肝脏病杂志,2004,12∶425～428 11　Perrillo RP ,Lai CL ,Liaw YF ,et al .Predictors of HBeAg loss after lamivudine treatment for chronic hepatitis B .Hepatotogy ,2002,36∶186～194 12　Rizzetto M ,Tassopoulos NC ,Goldin RD ,et al .Extended lamivu -dine treatment in patients with HBeAg -negative chronic hepatitis B .J Hepatol ,2004,41∶1070～1076 13　Ryu SH ,Chung YH ,Choi MH ,et al .Long -term additional lamivu -dine therapy enhances durability of lamivudine -induced HBeAg loss :a prospective study .J Hepatol ,2003,39∶641～619 14　Chien RN ,Yeh CT ,Tsai SL ,et al .Determinants for sustained HBeAg response to lamivudine therapy .Hepatology ,2003,38∶1267～1273 15　党红星,何瑞,马跃东.拉米夫定致小儿锥体外系反应二例.中华儿科杂志,2004,42∶436 16　Lok ASF ,Zoulim F ,Locarnini S ,et al .Monitoring drug resistance in chronic hepatitis B virus (HB V )-infected patients durin g lamivud ine therapy :evaluation of performance of INNO -LiPA HBV DR assay .J Clin Microbio ,2002,40∶3729～3734 17　Suzuki F ,Suzuki Y ,Tsubota A ,et al .Mutations of polymerase , precore and core promoter gene in hepatitis B virus during 5-year lamivudine therapy .J Hepatol ,2002,37∶824～830 18　Qaq ish RB ,Pharm D ,Mattes KA ,et al .Ad fovir dipivoxil :A new antiviral agent for the treatment of hepatitis B virus infection .Clin Therapeut ,2003,25∶3084～3099 19　Bozdayi AM ,E yigun CP ,Turkyilmaz AR ,et al .A novel pattern (sW195a )in surface gene of HBV DNA due to YSDD (L180M plus M204S )mutation selected during lamivudine therapy and success -ful treatment with adefovir dipivoxil .J Clin Virol ,2004,31∶76～77 20　Qarugan RB ,Gomez LC ,Serrano PL .Use of adefovir in the treat -ment of the chronic hepatitis B virus infection with res istance to lamivudine .Transplant Proc ,2003,35∶1841～1843 21　Villeneuve JP ,Durantel D ,Durantel S ,et al .Selection of a hepati -tis B virus strain resistant to adefovir in a liver transplantation pa -tient .J Hepatol ,2003,39∶1085～1089 22　梁扩寰,主编.肝脏病学.第1版,北京:人民卫生出版社, 1995.520 23　张瑞琪,缪晓辉,倪武.膦甲酸钠治疗慢性乙型肝炎47例. 中华传染病杂志,2002,20∶180～181 (收稿:2004-12-10) (校对:郭顺明) 肝癌动物模型的建立徐　静　综述　李　旭　审校作者单位:230022　合肥市　安徽医科大学附属医院感染科自20世纪初获得小鼠自发性肝癌动物模型以来,人们对肝癌动物模型的研究不断深入,逐渐建立了诱发性肝癌模型、移植性肝癌模型及转基因动物肝癌模型。下面就各类肝癌动物模型的建立方法和特点作一简述。一、自发性肝癌动物模型　是指实验动物未经任何有意识的人工处置,在自然情况下所发生的肿瘤。实验动物多选用近交系小鼠,由于实验动物种属、品系的不同,肿瘤发生类型和发病率有很大差异。14月龄以上的C3Hf 系雄鼠、C3H 系雄鼠和C3He 雄鼠的发生率分别为72%、85%和80%[1]。自发性肝癌动物模型最大的优点是,系完全在自然条件下发生的疾病,排除了人为因素,肝癌的发生、发展与人类肝癌相似,反映了动物的肿瘤易感性和环境致癌物质、促癌物质的积聚程度,但其发生率低且不稳定,发生时间较长、难预测且参差不齐,荷瘤动物个体在动物(性别、体重、肿瘤发生时间等)和肿瘤(大小、数目、部位等)两方面差异较大,造模有一定的困难。该模型主要用于病理学研究和作为移植性肿瘤的瘤源。二、诱发性肝癌动物模型　诱发性肝癌模型是指用化学、物理、生物的致癌因素在实验条件下诱发动物发生肝癌,它是进行实验肿瘤学研究的常用方法。其中化学性致癌物最常见,如亚硝胺类(DEN )、黄曲霉素类(AFB1)、氨基偶氨燃料类(3′-Me -DAB )、芳香胺类化合物(2-AAF )等。最常用的实验动物为大鼠,多选用敏感性高的纯系大鼠。目前常用的品系有:Wistar 、Spraque -Dawley 和Fischer344,前两者在国内应用更为广泛。大鼠的年龄和性别均对致癌性有影响。一般认为幼年雄性大鼠对致癌的敏感性较高,但有时也可出现幼年雌性大鼠诱癌成功。鼠龄以3个月以内、体重120克以下的大鼠诱癌启动率高于月龄大的大鼠,而体重200克以上或1岁以上的大鼠的肝癌启动率低,很难诱发肝癌。这与其组织中的肝细胞或幼稚细胞的状态以及细胞的增殖水平有关。诱发性大鼠肝癌的给药途径主要有经口给药法和注射给药法。经口给药法又分为自动口服给药和强制灌胃两种,前者是将水溶性致癌物溶于水中或将非水溶性致癌物混于饲料中让大鼠自动摄取,此法简单方便,但由于动物饮水和饲料的摄取量不同,不能保证给准确药量;后者是将溶于水或悬浮于载体的诱癌剂通过特制的灌胃针头给大鼠灌胃,此法能准确掌握给药量,但强制性操作和定时给药会对动物造成一定程度的机械性损伤和心理上的影响。注射法也是一种常用的方法,可将诱癌剂溶于可溶性液体中或悬浮于载体中,通过各种部位注射

肝癌患者手术后一定要做放化疗吗

作为高发的恶性肿瘤，肝癌时常令人们闻名丧胆，其危害可见一般，它总是难以察觉，发现时往往已是晚期，治疗难度较大。手术是治疗肝癌常用的方法，能够直接切除肿块，短期内使病情得到有效的控制，但手术只能切除肉眼可见的肿块，术后患者体内可能还有残癌，会面临复发转移的问题，因此不少患者为了巩固疗效，预防复发转移，会在术后进行放化疗，但也有患者在了解到放化疗的副作用后，并不愿接受放化疗，那肝癌患者手术后一定要做放化疗吗？肝癌术后放化疗能够抑杀血液和淋巴液里残存的癌细胞，稳定病情，降低术后复发转移的风险，延长患者生命，不过放化疗也存在着不足之处，会产生一系列的副作用，对患者机体造成一定的损伤，患者身体也会变得虚弱。肝癌术后是否需要放化疗是根据患者自身的情况决定的，如患者身体的恢复程度、免疫力、病理分型、病理分期、手术切除的效果等等，一般来说分期越早，需要放化疗的可能性就越小，分期越晚就越有必要放化疗。针对放化疗的副作用，有的患者会联合中医药的治疗，有助于起到增效减毒的功效。肝癌患者在放化疗期间通过补气养血、健脾和胃、滋肝补肾等中药，有助于调节机体，补充元气，减轻放化疗的副作用，缓解患者不适症状，增强患者的免疫功能，提高自身的耐受程度，使治疗顺利完成。在放化疗后给予扶正祛邪的中药，有助于修复因放化疗受损的机体，巩固放化疗的疗效，进一步延长患者生命。另外对于无法耐受放化疗副作用的患者，也不能忽视术后巩固治疗，可以选择以中医为主进行巩固治疗，中医预防肝癌复发、转移的理念与西医不同，是通过整体调理。大量临床实践证明，肝癌是一种全身性疾病，患者产生肿瘤，机体内也会形成适宜肿瘤生存、生长的癌环境。中医正是通过扶正患者元气，调理气血、阴阳、脏腑平衡，逐步稳定癌环境，从而预防病情反复。一方面，抑制了病情，控制了复发与转移，另一方面，又调理病患的体质、免疫机能，提高生存质量，延长生存时间。中医治疗与阴阳、五行相结合，注重调节患者全身机制的平衡，提倡标本兼治，郑州希福中医肿瘤医院院长袁希福经过从医30余年来不断的临床实践，对数十年来所搜集到的6000多个抗癌秘、单、验方和2000余种中草药进行了精心比较、筛选、整理，并与袁氏医方进行优化组合，终于摸索出来以三联平衡理论为指导的抗癌新思路。 “三联平衡理论”的实质就是针对“虚”、“瘀”、“毒”三大病机，统筹兼顾，采取“扶元”、“通瘀”、“排毒”三大治疗措施，有的放矢，重点用药，调节人体阴阳、气血、脏腑生理功能平衡，使人体达到自然状态下的康复。正如肿瘤患者用药，既不能过于攻伐，以免进一步加重元气损伤，又不能只为扶元固本，忽视对于其他病机的治疗，只有三者兼顾，才能更有效地抗癌。多年来，众多肿瘤患者在该理论指导用药下减轻了痛苦，延长了生命，甚至一些患者实现了临床康复或长期带瘤生存。部分参考案例：案例1：王敬贺(化名)，男，肝癌，江苏人求医经历：2014年年底，王敬贺老是感觉右腹部有胀痛、刺痛感，且劳累后疼痛更加严重。去医院检查结果显示：肝癌。为了能让老人接受更好的治疗，2015年1月家人带着老人到上海某医院求诊，并做了肝癌切除手术，术后三次复查，前两次检查便已发现小淋巴结，可医院建议继续观察。2015年4月21日，第三次复查时，CT显示：肝门区及腹膜后淋巴结转移。

【CN110004109A】一种肝癌类器官模型的体外构建方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910255261.0 (22)申请日 2019.04.01 (71)申请人南通大学附属医院地址 226001 江苏省南通市西寺路20号 (72)发明人郑文杰　姚登福　张捷　金云峰　倪温恺　徐育青　 (74)专利代理机构南通市永通专利事务所(普通合伙) 32100 代理人葛雷 (51)Int.Cl. C12N 5/071(2010.01) C12N 5/09(2010.01) (54)发明名称一种肝癌类器官模型的体外构建方法 (57)摘要本发明公开了一种肝癌类器官模型的体外构建方法，将肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，按特定比例混悬于培养基A；培养至第4天，半量换液维持培养；第7天开始，换为培养基B，连续培养7天；第14天传代扩增培养。本发明基于肿瘤微环境中复杂的细胞构成，快速构建大小均一、结构稳定、可检测抗癌药物有效性，并可扩增培养的3D肝癌类器官体外模型。本发明构建的肝癌类器官模型方法简易，构建迅速，可操作性强，适用于研究肝癌发生发展机制、以及肝癌药物高通量筛选等，具有产业化意义。权利要求书1页说明书4页附图3页CN 110004109 A 2019.07.12 C N 110004109 A

1.一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：包括下列步骤：（1）将肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，混悬于培养基A，静置培养；（2）第4天使用培养基A半量换液，维持培养；（3）第7天换为培养基B培养7天；（4）第14天取肝癌类器官消化传代，消化后的细胞按步骤（1）~（3）的培养方法继续培养；所述培养基A包括：青霉素、链霉素、I型鼠尾胶原蛋白、维生素C、牛胰岛素、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、氢化可的松、谷氨酰胺、胎牛血清、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和DMEM/F12培养基；所述培养基B包括：青霉素、链霉素、转铁蛋白、维生素C、牛胰岛素、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、氢化可的松、谷氨酰胺、胎牛血清、Wnt3a、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子和DMEM/F12培养基。 2.根据权利要求1所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：将肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，使用计数仪计数，按7:2:1的特定比例，混悬于培养基A。 3.根据权利要求书2所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：将肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，按特定比例混匀于培养基A后，计数并按每孔2000个细胞使用排枪均匀地接种于96孔-超低吸附圆底细胞板，每孔接种细胞混悬液体积为100μL。 4.根据权利要求书3的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，按比例混悬于培养基A，接种于96孔-超低吸附圆底细胞板，然后放入37℃二氧化碳培养箱，静置培养，尽量避免移动。 5.根据权利要求书4所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：第4天半量换液一次，使用微量移液枪紧贴培养基液面，吸弃孔中50μL培养基，并加入等量培养基A。 6.根据权利要求书5所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：培养至第7天，使用微量移液枪，紧贴培养基液面，吸出旧培养基；再沿孔壁缓慢加入100μL培养基B，隔日吸弃50μL培养基，加入等量培养基B，持续培养7天。 7. 根据权利要求书6所述的一种肝癌类器官模型的体外构建方法，其特征是：培养至第14天，使用1000μL移液枪，吸出96孔板中所有类器官置离心管，吸弃上清，加入500μL Accutase放入37℃二氧化碳培养箱孵育30min，离心去上清后使用培养基A计数、重悬并稀释，按步骤（1）~（3）的培养方法继续培养。8. 根据权利要求书1、2、3或4所述的一种肝纤维化类器官模型的体外构建方法，其特征是：培养基A包括：100U/mL青霉素、100μg/mL 链霉素、2~10μg/mL I型鼠尾胶原蛋白，1μg/mL维生素C、10μg/mL牛胰岛素、2μmol/mL 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、10ng/mL氢化可的松、2~10μmol/mL谷氨酰胺、4~8%胎牛血清、10~50ng/mL表皮生长因子、10~50ng/mL碱性成纤维细胞生长因子和DMEM/F12培养基；培养基B包括：100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、2~10μg/mL转铁蛋白、1μg/mL维生素C、10μg/mL牛胰岛素、2μmol/mL 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、10ng/mL氢化可的松、2~10μmol /mL谷氨酰胺、8-12% 胎牛血清、2~50ng/mL Wnt3a、10~50 ng/mL表皮生长因子、10~50 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子、10~100 ng/mL肝细胞生长因子和DMEM/F12培养基。权　利　要　求　书1/1页2CN 110004109 A

肝癌需要放化疗一定是晚期了吗

肝癌对于人体的危害是非常大的，它对于人的消化吸收能力有很大的破坏性，若是得了肝癌长时间不治疗，会出现浑身乏力没劲儿的症状。所以一旦发现肝癌的存在，应该及时抓紧时间治疗。一旦病情到了晚期治疗难度较大，致死率也较高，因此很多患者都害怕病情进入晚期，如被告知要放化疗的患者，那肝癌需要放化疗一定是晚期了吗？在肝癌的治疗中，放化疗占据着比较重要的地位，通过对机体内癌细胞的抑杀，可以达到控制病情，缓解病症，延长生存时间的目的，但患者进行放化疗并不意味着病情到了晚期，有不少早中期患者也是需要进行放化疗的。对于肝癌早期的治疗手术多为首先考虑的方法，可以直接切除肿块，快速控制病情，但手术也有一定的局限性，并不能全部清除癌细胞，如果肿瘤恶性程度较高，术后有脉管侵犯、淋巴管侵犯等容易引起局部复发或远处转移的预后不良因素，则需要联合放化疗。肝癌术后通过放化疗可以抑杀机体内残存的癌细胞，降低术后复发转移几率，进一步延长生存时间。但需要注意的是，放化疗也只是按比例杀死癌细胞，并不能全部杀死癌细胞，患者治疗结束后可能还会出现复发转移的情况，而且放化疗在治疗过程中也会伴随一系列的副作用，损伤患者机体，导致患者免疫功能失衡，而免疫力下降又是体内残存癌细胞死灰复燃的重要原因之一，因此患者在放化疗后也要重视巩固治疗，提高患者的免疫力，此时中医发挥了独特的优势。肝癌患者在放化疗期间通过补益气血、健脾和胃、滋肝补肾等中药，有助于扶正元气，调理脾胃，减轻放化疗的副作用，缓解不适症状，提高患者的免疫力和耐受力以及抵抗力，使治疗顺利完成；在放化疗后通过扶正祛邪的中药，有助于修复受损的机体，抑制肿瘤细胞，巩固放化疗的疗效，预防病情反复，进一步延长生存时间。中医治疗与阴阳、五行相结合，注重调节患者全身机制的平衡，提倡标本兼治，郑州希福中医肿瘤医院院长袁希福经过从医30余年来不断的临床实践，对数十年来所搜集到的6000多个抗癌秘、单、验方和2000余种中草药进行了精心比较、筛选、整理，并与袁氏医方进行优化组合，终于摸索出来以三联平衡理论为指导的抗癌新思路。该理论的实质内涵是：针对“虚”、“瘀”、“毒”三大病机，统筹兼顾，采取“扶元”、“通瘀”、“排毒”三大治疗措施，有的放矢，重点用药。目的在于调节人体阴阳、气血、脏腑生理功能，使人体紊乱的内环境重新得以平衡，此时五脏六腑都处在一种和谐的状态，疾病亦趋康复。如在郑州希福中医肿瘤医院先后举办的五届百位抗癌明星中医康复经验交流大会上，有部分参会患者在该理论指导用药下减轻了痛苦，延长了生命，甚至一些实现了临床康复或长期带瘤生存。部分参考案例：案例1：白淑采，女，巨块型肝癌，河南省巩义市人 2000年10月18日，白淑采在河南省人民医院诊断为巨块型肝癌，医生看到诊断结果表示肿瘤太大，手术风险也很大。白淑采万念俱灰，在老伴的多方打听下，得到了袁希福专治肿瘤的消息。10月20日，他们赶到郑州希福中医肿瘤医院寻求中医的治疗，服药20副后，白淑采感到腹胀、肝区疼痛消失，能吃下饭了。看到疗效后，他们继续服用中药，慢慢的，白淑采恢复了精神，能继续劳动，肿块也变小了。 2013年12月，袁院长带领一行医护人员赶赴白淑采家中探望她，此时白淑采已经如同正常人一样生活劳动，一顿能吃两碗。袁院长亲自带她到巩义市人民医院复查并为其出资。根据检查发现，肝区肿块不仅缩小了很多，而且已经钙化，