UV-2600型紫外分光光度计操作指导书

UV-2600型紫外分光光度计操作指导书

1概况

1.1仪器概况：

UV-2600型紫外分光光度计是由日本岛津（Shimadzu）生产制造，与功能强大的操作软件UVProbe结合，操作简单方便，且符合SH/T0181方法的测量精度要求。

1.2主要技术参数

波长范围185nm～900nm

（使用积分球附件ISR-

2600Plus时220nm～1400nm）

分辨率0.1nm

波长准确性±0.3nm

谱带范围0.1、0.2、0.5、1、2、5nm 测光方式双光束方式

杂散光0.005%以下检测器光电倍增管R-928

测光范围-5～5Abs 比色池1cm

光源50W卤素灯、氘灯单色器切尼尔-特纳单色器

主电压AC100V～240V 主频率50/60Hz

1.3使用条件

操作温度：15～35℃

操作湿度：30%～805%

2仪器结构

仪器由UV-2600型紫外分光光度计和计算机组成。

3操作步骤

3.1开机

在使用前先确认仪器和计算机的工作电源，检查仪器样品室应无遮挡光路的物品。确认后先开启计算机，然后开启仪器电源。待分光光度计外侧的指示灯显示绿色时，启动电脑桌面上的UVPROBE程序。

首先从下拉式菜单的仪器项上追加需要的仪器，操作完毕如下图①所示，然后点击上图的连接键②，这样仪器与计算机连接（当然，中间的通讯电缆的连接、通讯口的指定等都是

必须的，此处不再赘述）并开始下示的初始化面。

初始化大约需要5分钟左右，进行一系列的检查和初置，如一切顺利通过就可以开始测定。

3.2 测定

首先选择测定的方式，在主菜单上能发现右图

所示的各键，自左至右

分别为：

①报告生成器：用于制作各种格式的报告。

②动力学测定方式：一般测定吸收值随时间的变化，通常用于酶反应随时间的变化。 ③光度测定（定量）方式：可进行多波长、单波长、峰高或峰面积定量。校准曲线可使用多点、单点、K 因子等方法。由于具有自定义方程的功能，DNA/蛋白质测定等以前需

① ②

① ②

③

④ ⑤ ⑥ ⑦

⑧

⑨ ⑩ ⑾ ⑿ ⒀ ⒁

要特殊选购的软件才能进行的工作，使用UVPROBE可自编程序进行测定。

④光谱测定方式：可进行紫外可见区的光谱测定。

3.3光谱测定方式

3.3.1参数的设定

点击菜单栏上的键，即可出现如下图所示的选择测定条件的画面：

在此对话框中可选择波长测定的范围、扫描的速度、采样间隔等条件。

点击图中［试样准备］标签，可输入重量、体积、稀释因子、光程长等信息。

点击图中［仪器参数］标签，可选择测定种类（吸收值、透射率、能量、反射率）以及通带（狭逢）等条件。

点击主菜单上的键，可分别开关图象面板（图中的左键）、数据处理面板（中）以及方法面板（右键）。

数据处理面板

图象面板

①②③④⑤

方法面板

3.3.2 光谱测定

首先点击上图的②进行基线校正，然后点击③波长设置到500nm，再点击①自动调零。

为何要如此做？原因非常简单，由于一般的分光光度计的能量在500nm 左右最强，在此自动调零可得到最正确的基线。通常上述操作在开机后进行一次就足够了。此后，设置样品点击④键即可开始测定。 3.4 光度测定方式 3.4.1 参数的设定

点击菜单栏中的键，出现下图：

此处显示的波长类型是“点”表示测定高度，如果选择的是范围，则需输入起始和结束波长，并可选择最大、最小、峰、谷或面积等作为定量的依据。

无论如何选择，波长都是必须的，并要加入以后才有效。 在某单栏上有右列各键，点击以后分别出现标准表（最左）、样

品表（左2）、

工作曲线图（右2）和样品图（最右）。

3.4.2 定量测定

首先如前所述，选择了点及波长，然后在方法中选择校准，在此决定用工作曲线法定量，测定的方式

选择测定波长的列名

选择和登录波长

标准表 样品表

工作曲线

样品图

并选择多点、单点或K因子法等。

进行定量测定也需要基线校正和自动调零，方法如前面所述。

此后，样品室内逐个放入标准，点击上图下方的读数键即可。注意，无论是测定标准或未知样品，必须输入名称才有效。标准测定完毕，工作曲线自动显示。接下去就可测定未知样品的浓度了。有时不测定浓度，只测定某些波长的读数，则在校准方法中选择“原始数据”，在登录时选择若干需要的波长，即可测定各波长的读数。

使用SH/T0181方法标准进行光谱测定时，点击③设置波长到287.5nm，再放入两只均装有光谱纯异辛烷的比色皿，点击①自动调零，最后，将外面一只比色皿中装入需要测定的样品，点击④键读数，即可测得在该波长处的样品的吸光度值。

在工作曲线图象上点击鼠标右键，选择属性，可从该图象上得到许多有用的信息，见下图：

只需在这些显示的项目中做标记，相应的信息即出现在工作曲线图象的左下方。见下图的划圈部分：

所谓K因子法实际上可称为已知工作曲线法（而且不局限于直线），即工作曲线回归方程的系数和次数已知，故而只要输入这些系数以及工作曲线的次数。这一方法对工作曲线较为稳定的日常分析非常有效。设置方法见下图：

3.5动力学分析

在菜单栏中点击方法键，得到如下图象：

此处的计时方式选择的是“自动”，时间总量中需手动设置测定的时间。由于是自动计时方式，所以采样步长（图中为时间周期）和读数次数将根据时间总量自动设置。此外可设置波长以及活度计算的开始和结束时间。设置大短的活度范围会出现错误信息。相反，如果计时方式选择的是手动的话，则可输入时间周期和读取次数，而时间总量（测定时间）会根据输入的时间周期和读取次数自动计算得到。活度范围用于酶反应随时间的变化，如果单纯进行时间扫描的话，则可不考虑活度范围。

测定的波长栏内可选择单波长或双波长（波长l-波长2或波长l/波长2）两种方法。选择后输入相应的波长。

主菜单中有如右各键，自主到右分别是时间扫描图象、数据处理面板、