实验二 重要功能微生物的筛选及生物学特性

样品：土壤 培养基：血平板 无菌水 土壤悬液制备，系列稀释，涂布平板培养
观察血平板上长出的菌落，比较溶血圈的 大小。 挑取菌落，进行革兰氏染色，并进行镜检， 对所观察到的细菌进行形态描述。

4、放线菌的筛选及其对金黄色葡萄球菌的抑制作用
• 放线菌产生的抗生素对细菌具有抑制作用，可以
• 磷细菌(也称溶磷细菌或解磷细菌)：主要是指 土壤中的一类溶解磷酸化合物能力较强的细菌 的总称，可以分为无机磷细菌和有机磷细菌。 • 本实验利用无机磷培养基直接从土壤中筛选无 机磷细菌，培养出的目的菌菌落周围会产生透 明的溶磷圈。
材料和器具
① – 样品：土壤 培养基配方：去离子水1000 ml 、葡萄糖10克、 (NH4 )2SO4 0.1克、 KCl 0.2克、 MgCl2•6H2O 5克、 Ca3(PO4)2 5克、 MgSO4•7H2O 0.25克；pH7.0，115℃ 灭菌25min。 其他器具：500ml烧杯、 250ml三角瓶、试管、酒精灯、涂 布棒、1ml和100μl移液枪及枪头、灭菌锅、显微镜、载玻 片等。
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挑取菌落，进行革兰氏染色，并进行镜检，对所 观察到的细菌进行形态描述。
实验结果
1.观察菌落并将实验结果记录下表
菌落形态
不同溶磷 菌落 1 2 3 …… 形状 大小 颜色 透明 粘稠 边缘 形状
溶磷能力
菌落 溶磷圈 圈径/ 直径 直径 菌径 (mm) (mm)
2.选取（不同形态）菌落1-2个制作装片，显微镜观察结果记录下表
3、生物表面活性剂产生菌的筛选
• 生物表面活性剂 （Biosurfactants)）是一类由 微生物合成的、结构不同的表面活性分子，具有 一定表/ 界面活性，集亲水基和疏水基结构于一 分子内部的两亲化合物。 在工业领域如采油和能 源工业、药物和化妆品、食品、环境工程等中的 广泛应用。 • 一些生物表面活性剂具有抗生性和溶解红血球的 特性，这些特性被用于建立血平板筛选模型。
抗性平板的制备 将灭菌后的1/10LB培养基融化，待温度适宜后，与 CuSO4溶液混匀，制成终浓度为2mg/L、5mg/L、 10mg/L的含铜筛选平板，待用。
Cu2 : 200ml培养基+40ul CuSO4 Cu5 : 200ml培养基+100ul CuSO4 Cu10 : 200ml培养基+200ul CuSO4
将放线菌菌液涂布在混有金黄色葡萄球菌的培养 基中培养一段时间，观察放线菌周围产生的抑菌
圈。


样品：土壤 培养基：LB培养基，高氏1号培养基 双层平板制备： • 将灭菌后的LB培养基融化，待温度适宜后，与 金葡菌液混匀，倒入培养皿，制成底层含菌培 养基。凝固后，在上层倒入高氏1号。 土壤悬液制备，系列稀释，涂布平板培养 观察平板上长出的菌落，比较抑菌圈的大小。
2、重金属Cu抗性细菌的筛选
• 样品：土壤 • 培养基：1/10 LB(1000ml)
– 酵母膏 0.5g 蛋白胨 1g 氯化钠 1g pH 7.0 琼脂 2%， 配制600ml，分装至3个250ml的三角瓶，灭菌待用
• 无菌水
– 准备100ml无菌水置于250ml三角瓶中，内加5颗玻璃珠， 灭菌待用。 – 准备3根试管，每根加入9ml无菌水，加塞，灭菌待用。
实验二 重要功能微生物 的筛选及生物学特性
• 重要功能微生物
– – – – 农业微生物（磷细菌） 环境微生物（重金属抗性细菌） 工业微生物（生物表面活性剂产生菌） 医药微生物（放线菌）
• 筛选
– 系列稀释，平板培养，选择性培养基
• 生物学特性
– 菌落特征，菌体特征，革兰氏反应，功能大小 等
1、磷细菌的筛选
菌 1 2 革染特性 形态 有无芽孢
分析讨论
• 实验结果的分析讨论
• 那些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？ 其最关键的环节是什么? • 重金属对细菌的生理代谢有何影响？
② 培养基：无机磷培养基
③
实验步骤
① 配制无机磷培养基100ml， ② 取250ml三角瓶，向其中加入100ml去离子水和几颗小玻璃珠， 再取三只试管各加9mL去离子水，将准备好的上述材料在 115℃下灭菌25分钟。灭完菌好待培养基冷却到60℃左右倒 平板6块。 ③ 称取土壤样品1g，加入到加有玻璃珠的100ml无菌水中，震 荡30分钟，配成10-2菌悬液。 ④ 吸取1mL菌液加入到装有9mL无菌水的试管中，震荡均匀， 配成10-3菌悬液。如法依次制成10-4 、10-5 的菌悬液。 ⑤ 吸取各稀释度的菌悬液100μL加入到冷却的平板中，稀释涂 布，倒置放入30℃恒温培养箱中培养。 ⑥ 待菌体长出，观察细菌菌落形态和溶磷菌溶磷圈。并测量溶 磷菌菌落直径和溶磷圈直径，计算比值，定性比较各溶磷菌 落溶磷能力。 ⑦ 制片，革兰氏染色，镜检，观察菌体形态等特性。
土壤悬液制备，系列稀释，涂布平板培养 选择10-3、10-4、10-5的稀释度，分别吸取100ul土壤稀 释液，分别加入Cu2、Cu5、Cu10抗性平板中，每个稀 释度设置三个重复，用涂布棒涂布均匀。(3x3x3=27) 观察抗性平板上长出的菌落，比较三种浓度的抗性平板， 将外观形态一致的视为同一种菌以确定抗性范围。 挑取菌落，进行革兰氏染色，并进行镜检，对所观察到的 细菌进行形态描述。