细菌G染色体,细菌群体特征,放线菌形态观察

细菌G染色体、细菌群体特征、放线菌形态观察

一、实验目的

1、观察细菌菌落的特征，掌握革兰氏染色体的原理及操作步骤，并在油镜下

观察细菌个体的形态。

2、辨认放线菌的营养菌丝、气生菌丝、孢子丝、包子形态，学习放线菌的观

察方法。

二、实验原理

细菌的群体特征又叫培养特征，有菌落形态特征、液体培养特征、琼脂斜面生长特征以及穿刺培养特征。细菌菌落大多数表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质地颜色均匀、多样，同培养基结合不紧密。菌落特征包括大小、形状、边缘形态、表面状况、颜色和透明程度，与组成菌落的细胞结构、生长状况、排列方式、好气性和运动性等相关。细菌个体微小，且较透明，必须借助染色体法使菌体着色，显示出细菌的一般形态结构及特殊结构，在显微镜下用油镜进行观察。

革兰氏染色：主要原因是由于革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）的细胞壁的构造不同。细菌经初染和煤染，在细胞内形成深紫色的结晶紫-碘复合物，当用酒精脱色时，G+细胞壁的肽聚糖层网状结构孔径收缩以致关闭，阻止不溶性复合物结晶紫-碘的逸出，这样使菌体呈色。G-脂类物质溶解，结晶紫-碘复合物随之被抽提，固菌体呈复染后的红色。

放线菌的丝状体可分为营养菌丝、气生菌丝和孢子丝，放线菌用美兰染色后，可观察其形态。

三、实验步骤

（一）革兰氏染色体

1、涂片：

取洁净载玻片，在火焰上微热，除去油脂，冷却，在中央滴一小滴无菌水，用接种环接种（取菌量不要过大）。

2、干燥：涂布后，待其自然干燥。

3、固定：将已干燥好的涂片标本向上，在微火上通过7次进行固定。

4、染色：

A、初染：在涂片处结晶紫1~2滴，染色90s

B、煤染：滴加碘液，染90s，水洗；

C、脱色：滴加95%乙醇，脱色15s，立即水洗，以终止脱色。

D、复染：滴加沙黄，染色150s，水洗后晾干，也可用吸水纸轻轻吸干。

5、镜检：干燥后，置油镜下观察。

（二）菌落特征观察

分别从正面、侧面观察大肠杆菌，枯草芽孢杆菌的菌落特征（包括大小、色泽、透明度、边缘和表面隆起形状）。

（三）放线菌形态观察

1、制片：

用镊子从培养皿中取出已经培养4~7天地盖玻片，放置在已滴加美兰的载玻片上，用吸水纸吸取盖玻片周围多余的美兰液，放在显微镜下观察。

2、镜检：

先用低倍镜，后用高倍镜观察，仔细观察放线菌的营养菌丝、气生菌丝和孢