螺旋藻中藻蓝蛋白提取的工艺流程

螺旋藻中藻蓝蛋白提取的工艺流程

王艺生物技术二班2010040407

1、预处理

将螺旋藻洗净晾干

2、细胞破碎

利用超声波破碎发破碎细胞，藻胆蛋白属于胞内蛋白质，要提取分离藻胆蛋。首先必须要破坏藻类细胞的细胞壁、细胞膜，使藻胆蛋白以溶解的状态释放出来，并保持其活性。超声波细胞粉碎仪破碎鱼腥藻细胞的最佳处理条件是超声仪的功率为600 W，超声时间为9min，固液比为1：8，破壁容量为20 mL。也可与其他方法合用最大限度的破碎细胞。

3、提取（初步分离）

（1）用超滤膜过滤藻胆蛋白提取液，获得藻胆蛋白粗制品。用NaNO3，高渗一超滤法分离提纯藻胆蛋白，超滤时选用聚砜膜，在超滤过程中，无机盐和小分子蛋白质，包括小分子的藻毒素透过滤膜而去掉，特别适用于易产生水华的微囊藻脱毒，提高产品的安全性。NaNO3高渗．超滤法是提取藻胆蛋白的简单易行的方法，用此法提取的藻胆蛋白是安全无毒的，且易于纯化，脱水方便，产品易于干燥。

（2）也可利用沉淀法将大量盐加到蛋白质溶液中，蛋白质胶粒凝结并沉淀析出，因此向细胞破碎液中加入盐溶液使蛋白质沉淀析出。用25％硫酸铵可将藻红蛋白沉淀出，用30％硫酸铵可将藻蓝蛋白沉淀出，再用50％硫酸铵可将蓝藻蛋白沉淀出。

4、精制（高度纯化）

离子交换层析法，用 DEAE一步纯化藻蓝蛋白；改变传统以离子强度作梯度洗脱的方法，根据藻红蛋白的等电点进行pH梯度洗脱，仅用DEAE一步层析，就将藻红蛋白纯度从1.042提高至5.6，回收率达67.33％。用硅藻土545柱分级洗脱，再用该法纯化，从螺旋藻中获得初度为4.1的藻蓝蛋白和纯度为4.6的别藻蓝蛋白；将提取液上DE。AE一52纤维素柱，提取纯度只有1.9，在上葡聚糖凝胶柱，则得到了纯度较高的蓝藻蛋白。

5、成品制作

随着藻蓝蛋白制品的应用范围的不断扩大，对提取分离工艺的要求也逐渐提高。不仅要有高的提取率、好的产品质量，而且要考虑省时、省力、自动化程度高。利用缓慢冷却加晶种的方法使藻蓝蛋白结晶，干燥后进行保存。

藻蓝蛋白具有较高的促红细胞生成素(EPO)活性，它能直接刺激CFU—E的形成，对骨髓造血具有刺激作用，有很好的抗病毒活性，在细胞受感染前用APC处理的抗病毒效果比感染后处理效果更好，并且还有抗氧化和消炎活性。

因此，可以利用藻蓝蛋白的这些特点把蓝藻蛋白制作成治疗药物或者是保健食品。

分离鸡蛋清中的溶菌酶及卵清蛋白

生物技术二班李美君2010021431

1离子交换法

选用DEAE做骨架，阴离子交换剂，碱性洗脱液，PH值在8.6以下缓冲液，采用硅胶基质阴离子交换剂作为填料制作的色谱分离纯化蛋清中的溶菌酶克服了上述的弊端，获得了良好的分离效果，这种方法比传统的软基质离子交换色谱分离法速度快，纯化效率高。

2离子交换膜色谱

离子交换膜色谱主要是利用膜介质表面的基团与目标蛋白质之间进行离子交换作用进行分离的。选用DEAE做骨架，阴离子交换剂，碱性洗脱液，PH值在8.6以下缓冲液

1.树脂的选择，选择弱酸性羧甲基交联葡聚糖阳离子交换树脂。

2.树脂预处理

3.上柱，将溶菌酶与卵清蛋白的混合液自上向下流过树脂。

4.洗涤，用蒸馏水进行洗涤。

5.洗脱，用硫酸铵溶液洗脱溶菌酶，收集洗脱液，透析得到纯净的溶菌酶。

6.树脂再生，用大量的水冲洗，然后用酸处理。

3超滤法

第一步超滤采用错流过滤，膜的错流过滤可实现混合液中物质的分离，在生物工程领域有着广泛的应用。此步目的是除去分子量大于卵清蛋白的蛋白分子，通过膜的筛选选择了分离及清洗效果均较好的PVDF100KDa超滤膜进行操作条件的优化。同时选择了压力0.08MPa，流速1.5L/min作为最适操作条件。在此条件得到的透过液中卵清蛋白透过率为26.32％，溶菌酶透过率为36.72％。

第二步超滤采用终端过滤，此步的目的是将溶菌酶和卵清蛋白分离纯化，根据两种蛋白的分子量及膜的性能选择了30 KDa再生纤维素超滤膜作为此步超滤膜。