肺炎衣原体IgM说明书

阴性对照
≤0.150 *)
临界值质控
≥0.200*)
S/Co
阳性质控
2.5-6.1
﹡）已经从这些值中减去了空白孔吸光度。
B. 结果解释
灰区
根据对大约500名芬兰献血者血清和血浆标本进行
分析以及计算 S⁄CO值的分 布 参数，疑 似区 间为
0.5‐1.1。换句话说，得出结果为0.5‐1.1 S⁄CO的
S⁄CO标本＝（A标本‐A空白）⁄（A临界‐A空白） 其中A标本＝标本的吸光度
A空白＝空白孔的平均吸光度 A临界＝临界对照品的平均吸光度
S/Co ＜0.5 0.5＜S/Co＜1.1 ＞1.1
结果 阴性 灰区 阳性
【检测结果的解释】
A. 判断标准
当满足以下条件时，测定的结果可被接受：
吸光值
空白
≤0.100
肺炎衣原体 IgM 抗体检测试剂盒 （酶联免疫法）
本试剂盒用于人血清或血浆 中肺炎衣原体 IgM 抗体的定 性检测。 注册证号：国食药监械（进） 字 2010 第 3401353 号
【产品名称】 通用名称：肺炎衣原体 IgM 抗体检测试剂盒
（酶联免疫法） 英文名称：Chlamydia Pneumoniae IgM EIA 【包装规格】：96 人份/盒 【预期用途】 A.预期用途 肺炎衣原体IgM抗体检测试剂盒用于定性检测人血 清中肺炎衣原体特异性的IgM抗体。阳性结果可辅助 急性肺炎衣原体感染的诊断。 B.背景介绍 自从肺炎衣原体于1986年被描述为病原体以来[1]， 它已被认定是全世界常见的传染源。肺炎衣原体主 要是呼吸道病原体，它在成人和儿童中大约引起了 10‐20 ％ 的 社 区 获 得 性 肺 炎 ， 在 成 人 中 引 起 了 10‐20％的急性支气管炎[2,3,4]。肺炎衣原体还引 起了鼻窦炎、原发性咽炎，并可能激发哮喘[5]。实 际上大多数肺炎衣原体感染为亚临床型、无症状且 极少引起明显疾病[3]。研究表明肺炎衣原体慢性感 染是发生动脉粥样硬化的因素之一[6,7]。 在不同人群中进行的血清流行病学研究表明，幼儿 和青少年的血清阳性率急剧增加[8,9,10,11]。青春 期过后，血清阳性率持续升高，老年人的 IgG 和 IgA 类抗体的血清阳性率可能几乎达到完全饱和[11]。 到目前为止，多数研究均依赖于血清学方法进行诊 断。已经使用补体结合（CF）试验进行了早期研究， 该试验已被用于检测鹦鹉热多年。该试验具有属特 异性，初次感染时的阳性可能性大于再感染时的阳 性可能性[8]。微量免疫荧光法具有种特异性，但主 观成分较大，因此该检测方法需要有经验的技术人 员，不适合自动化和高通量的检测。 【检验原理】 Ani Labsystems肺炎衣原体IgM抗体检测试剂盒的 检测原理基于以辣根过氧化物酶作为标志酶的间接 固相酶联免疫测定。根据下列反应进行测定。 首先病人标本中的肺炎衣原体IgM抗体与包被在聚 苯乙烯微孔板上的肺炎衣原体抗原结合。用洗涤液 洗去多余的成分后，加入与辣根过氧化物酶结合的 羊抗人IgM抗体。洗去未结合的酶结合物，加入无 色的含有色素原（TMB）的无色酶底物（H2O2）。
C. 疑难解答 空白太高 原因⁄错误 1、污染，其它孔有溢出 液。 2、没有正确稀释浓缩洗 涤液。 3、洗涤效果差。 4、试剂槽中的 TMB 底物 溶液被污染。
解决方法 避免污染。
应该按 1∶10（1＋ 9）稀释。 检查洗板机。 保留剩余底物溶液 直到完成试验。检 查试剂槽中的底物 是否变蓝。变蓝表 明存在污染。
H PC S8
图例：BLK＝空白 NC＝阴性对照 PC＝阳性对照
CO=临界值对照
S＝样品
C.检测方法步骤
(一) 试验准备：
1.试剂盒取出后在室温下放置 20-30 分钟，使其恢
复到室温。
2.稀释血清：取 5ul 的血清加入到 500ul 的样本稀释
液中（2 号瓶），稀释比例为 1：101。
3.配制洗涤液：浓缩洗液（WASHING SOLUTION
【检验方法】 A.实验前的控制与操作 在实验开始前，将试剂和微孔板平衡至室温（+20 ℃~25℃）。 并将孵育器预热至 37℃。 B.实验设计 样品分配方案如下所示：
微孔板
1
234567891 1 1
012
A BLK S1
B BLK S2
C NC S3
D NC S4
E CO S5
F CO S6
G PC S7
5、在开始之前未将试 剂恢复至室温。
从试剂瓶移取试剂时 应使用无菌操作以避 免污染，否则可能得 出错误结果。 防止试剂过度光照。 保存在＋4℃下。 开始测定时应当为＋ 20℃℃＋25℃。
6、孵育时间太短。 7、互换试剂。
孵育 1 个小时（允许 误差为±5 分钟）或 30 分钟。 不要将不同批号的试 剂混用或互换。
对照品
即用型
酶结合物
即用型
TMB 底物溶液 即用型
终止液
即用型
打开/稀释后试 剂的稳定性 （+2-8℃） 6 个月﹡）
6 个月﹡）
6 个月﹡）
6 个月﹡）
6 个月﹡）
6 个月﹡） 丢弃试剂槽中未 使用的试剂。底 物中出现深蓝色 表明溶液已被污 染，必须丢弃 6 个月﹡）
浓缩洗涤液 （10X）
用蒸馏水 1+9 稀 释 （1：10）
10.向每个孔中加入 100 ul TMB 底物液（5 号瓶）。
11.避光室温下孵育 30 分钟。
12.向每孔中加入 100 ul 终止液（6 号瓶）。
13.在 450nm 和 620nm（590-690nm）处读取吸光度值
注意：
为了提高效率和精密度，建议使用 8 通道加样器。
1.用样本稀释液对样本进行 1：101 稀释（5ul 的样 本加入到 500ul 样本稀释液中），混合均匀。临界值 对照须加两个样本孔。稀释后的样本在 4℃下至少 可以稳定 2 周。对照品不要进行稀释。 2.避免污染：当从试剂瓶中吸取液体时，要运用无 菌技术以避免污染。每一份样本在吸取时都要使用 新的吸头。将所需的样本稀释液、酶结合物、TMB
标本被认为是可疑的，应当用成对标本定时地重新
测定以监测IgM抗体的动态。
急性传染： 原发急性传染时，第一份血清标本中已经可能检测 到 IgM 应答。再感染时 IgM 可能保持阴性。Ani Labsystems 肺炎衣原体 IgA 和 IgG 酶免疫测定为 诊断急性肺炎衣原体感染提供了辅助信息。 非急性传染： 稳定或降低的IgG和⁄或IgA水平加上阴性或疑似的 IgM表明可能存在以下一种感染：既往感染、近期 感染、感染已愈或持续感染。
酶与色原反应生成有色终产物。加入酸（H2SO4）
终止显色反应。颜色强度与患者标本中的肺炎衣原
体抗体浓度成正比。
【主要组成成分】
A.主要组成成分： 1.微孔板，12×8孔 包被好的微孔板。 2.样本稀释液，100毫升 磷酸盐缓冲液，含有专利商品添加剂、蓝色显色剂 和0.05％Bronidox®作为防腐剂。 2a.肺炎衣原体IgG去除剂，20毫升 含有抗人IgG，溶于含有专利商品添加剂和0.05％ Bronidox®作为防腐剂的磷酸盐缓冲液。 3a.阴性对照品，1.0毫升 肺炎衣原体抗体阴性的稀释人血清，含有作为防腐 剂的0.05％Bronidox®和红色显色剂。 3b.临界值对照品，1.0毫升 肺炎衣原体IgM抗体处于临界的稀释人血清，含有作 为防腐剂的0.05％Bronidox®和红色显色剂。 3c.阳性对照品，1.0毫升 含有作为防腐剂的 0.05％Bronidox®和红色显色剂 的稀释人血清。 4.酶结合物，30毫升 缓冲盐溶液，含有专利商品添加剂、红色显色剂、 与辣根过氧化物酶结合的抗人IgM（羊）和作为防腐 剂的0.1％N‐甲基异噻唑酮。 5.TMB底物溶液，即用型, 18毫升 含有专用商品添加剂和0.01％凯松作为防腐剂的 3,3',5,5'‐四甲基联苯胺和过氧化氢柠檬酸缓冲 液。 6.终止液，25毫升 0.45 M H2SO4 7.洗涤液，100毫升 浓缩的柠檬酸缓冲盐水、含有专有添加剂和作为防 腐剂的0.05％Bronidox®。 微孔板贴膜 2个 试剂槽 6 个 注：试剂应保存在+2℃~+8℃下。
+4℃下一个月， 室温wk.baidu.com一个星期
﹡）由铝箔包装的微孔板在打开后，应该和干燥剂 一起密封保存在＋2℃‐＋8℃下，将其开口密封好。 开封试剂只有在＋2℃‐＋8℃下正确的保存条件 下，它们才可保持好的稳定性，高的环境温度和污 染可降低试剂的稳定性。 【储存条件及有效期】 本试剂盒储存于+2--8 ℃，有效期 18 个月。 【适用仪器】 A.该试剂盒适用于各种酶标仪 【样本要求】 血清和血浆标本采集后应冷藏（＋4℃），如果不能 在48个小时内进行试验，标本应冷冻（‐20℃或 ‐70℃中各适合的温度下）。标本不应反复冻融。 由于叠氮化钠可使辣根过氧化物酶失活，因此不要 使用叠氮化钠作为防腐剂。 血清或血浆的热灭活（＋56℃，30分钟）可能引起 非特异性结果。 如果被微生物污染、严重溶血或高脂的血清和血浆， 可能产生错误结果。 长期保存血清（冷冻超过一年）可能导致形成脂质 聚集物。这些聚集物可能引起非特异性结果。
每个组分的标签及包装上均印有效期。
避免不必要的光照，主要是预防试剂受光影响，因
为酶结合物及 TMB 底物溶液都是光敏感试剂。
不同试剂盒中的以下几种成分可以通用：
洗液、TMB 底物、终止液
B.需要但未提供的材料
蒸馏水或去离子水，最好是无菌的。
用于稀释试剂的刻度量筒。
保存稀释试剂的试剂瓶。
精密加样器（比如：单道量程为0.5‐10ul、5~50ul、
底物液加入一次性的试剂槽中（试剂盒内提供 6 个）。将未用完的液体丢弃，不要将其倒回原瓶内。 当加底物时，加样器头部不要与微孔壁接触。 3.洗涤时可以手工操作或者用洗板机进行。在洗 涤后，将微孔板在纸巾上将水拍干。 4.在 450nm 处以空气调零，参考波长是 620nm （590-690nm）。大多数的微孔板读数仪可以自动 地扣除试剂空白。样本的吸光值可以自动地扣除 试剂空白。然而，试剂空白的吸光值应该在指控 范围内。 注意：所有的肺炎支原体、肺炎衣原体、百日咳 杆菌的 IgG、IgA、IgM 抗体可以用相同的稀释样 本来进行检测，这样在实验开始时用肺炎支原体或 百日咳杆菌检测试剂盒内的样本稀释液对样本进行 稀释是非常重要的。详细的情况看试剂盒的说明 【参考值范围】 结果计算 结果以吸光值 ⁄ 临界值（S⁄CO）单位表示。 用下列公式计算：
20~200ul、100~1000ul和多道50~300ul）。
纸巾或吸水纸。
定时器，至少可测60分钟。
微孔板恒温孵育箱。
酶标仪。
洗板机。
次氯酸钠溶液，游离有效氯为50‐500 mg/l。
一次性手套。
C.实验中各组份的准备
试剂
准备
包被好的微孔 板 样本稀释液
即用型 即用型
肺炎衣原体 IgG 即用型 去除剂
精密度差
原因⁄错误
解决方法
1、液体处理设备未正 检查移液器设备的校准。 确校准。
2、由于污染了清洗头 定期清洗清洗头的尖端。
尖端不能正常洗涤。
3、洗涤后反应板放置 严格遵循试剂盒说明。 的时间太长（干燥反应
板）。
4、反应板加热不均匀。 维修使用的恒温箱
所有吸光度值均很低 原因⁄错误 1、孵育温度太低。
10X）用酶免级用水进行 10 倍稀释，（1+9）
(二) 试验操作
1.首先加入 100 ul IgG 去除剂（2a 瓶）到每一个试
验所需的微孔中。
2.留出两个孔作为试剂空白对照。
3.加入 10 ul 稀释过的样品到样品孔中。
4.再分别加入 10 ul 对照品到对照品孔（3a,3b,3c 瓶），
一式两份。
5.贴上封口箔后在 37℃下孵育 60 分钟。
6.洗板。每孔加入 300-400ul 洗液，洗 5 次，每次
间浸泡 15-30 秒。
7.向每个孔中加入 100 ul 酶结合物（4 号瓶）。
8.贴上封口箔后在 37℃下孵育 60 分钟。
9.洗板。每孔加入 300-400ul 洗液，洗 5 次，每次
间浸泡 15-30 秒。
2、酶结合物被溅出的 人血清污染
解决方法
在 37℃±1℃下孵育。 不同恒温箱的加热效 率差异很大。最好使 用加热效率高且加热 均匀的恒温箱。 所有的吸光值均低。
只要少量的血清就足
以阻断其活性，要特
别注意防止污染。
3、溅出的人血清污染 了微孔
只有少数几个孔的吸 光值非常低，要特别 注意防止污染。
4、试剂变质。 ﹡由于污染或酶结合 物中的辣根过氧化物 酶变质所致。 ﹡由于储藏不当所致。