血小板的检测原理及误差分析(1)

PLT-F与PLT-O的差异
FSC
PLT-O (XE)
FSC
PLT-F (XN)
IPF IPF
PLT-O
PLT-F
Lower size PLT
Lower size PLT
SFL
SFL
PLT-F通道的染液对PLT的染色效果更敏感，微小血小板能够检出 检测颗粒数是PLT-O或PLT-I的5倍
各PLT测定模式的重复性比较
解决方案： 枸橼酸钠，肝素，无抗凝， vortex搅拌仪器搅拌，氟化钠+EDTA的血 糖采血管；自身抗体引起的聚集也可采取血浆置换的方法
2、小红细胞+红细胞碎片
分析思路：PLT直方图出现大幅度 抬高，MCV值为53.2，并报警有红 细胞碎片，从PLT直方图目测其高 值鉴别线在25-30fl 之间，怀疑是 高值鉴别线较高原因把部分小红细 胞和红细胞碎片计入了血小板里， 出现PLT-I假性增高。而在PLT-F通 道可以排除小红细胞和红细胞碎片 的干扰，并对血小板值进行修正。
PDW/ P-LCR
• PDW
假设峰值高度为100%，在20%频率 水平上的分布宽度即为PDW。单位用 fL表示，其中1 fL = 10-15L。
• P-LCR
P-LCR为由12 fL界标或更大界标得 到的巨型血小板的比值。计算时，将 固定界标与高界标之间的粒子数，同 低界标与高界标之间的粒子数相比而 得到一个比值。
电阻抗法（PLT-I）
电阻抗法（PLT-I）：悬浮在电解质溶液中的血细胞相对 于电解质溶液为非导电颗粒，其电阻比电解质溶液大，利 用两者导电性的差异，当体积大小不同的血细胞（或类似 颗粒）通过计数小孔时，可引起小孔内、外电流或电压的 变化，形成与血细胞数量相当、体积大小相当的脉冲电压， 从而间接区分细胞，电流或电压变化的频次即为细胞（或 颗粒）的数量，故此法可受小红细胞、红细胞碎片、小微 粒、大血小板、血小板聚集等的影响
正常血小板
大血小板 血小板卫星现象
异常形态血小板 血小板聚集
血小板检测方法及原理
• 1、流式细胞仪法：用免疫法荧光素标记特异的血小板单 克隆抗体，常用CD41或CD61，用流式细胞仪计数血小板。 目前为ICSH推荐的参考方法
• 2、血液分析仪法：主要检测原理包括点阻抗法和（或） 光（或荧光）散射法，为常用方法
误差分析
• 血小板聚集 • 小红细胞/红细胞碎片 • 巨大血小板
1、血小板聚集引起的血小板减少症
镜检
EDTA 和肝素抗凝不良是引起假性血小板减少症最常见的原因。IgG自 身抗体是EDTA-抗凝不良的主要原因，导致血小板聚集，血小板计数假 性降低。
常见病例： ① 免疫疾病：自身免疫性疾病，淋巴增生性疾病患者较多 ② 感染症：败血病，病毒感染等一过性假性血小板减少 ③ 药物：有报告说部分抗生素引起的病例，但致病机理不明 ④ 自身抗体：有报告说健康人有发生
X-axis: anti-CD61 method, Y-axis: PLT-I, -O or -F
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IPF（RP）的临床意义
● 血小板减少症的病因学诊断
• 生成减少：再障、白血病及肿瘤，由于骨髓受抑制，血小板 总数减少， RP比例大致正常，而RP绝对值明显低于正常
• 破坏增加：ITP，骨髓生成血小板加快，外周血中新生血小板 增多，使RP比例升高。但由于血小板寿命缩短，使RP绝对 值减少。脾亢虽有血小板减少，但RP比例接近正常，RP绝 对值亦低于正常水平
PLT-I
*鞘流阻抗法 浮动界标
浮动界标
血小板直方图
• 分布范围：LD(2～6)Fl;UD(12-30）fl之间
• 反映参数：PBaidu NhomakorabeaT、MPV、PDW
• 高位干扰：小RBC、大血小板，血小板聚集
• 低位干扰：电流、尘埃等
PL
12 fl
PU
100 %
20 %
10 fl 20 fl 30 fl 40 fl
分析思路：在RBC/PLT通道中，只是通过体积鉴别，无法将巨大血 小板和红细胞分开。在PLT-F通道中，采用特殊的染料使血小板进 行染色计数。
镜检：镜下发现巨大血小板，与PLT-F结果相符。 PLT-F通道提供的IPF符合镜检，且以数据形式提供给血液科医生， 更方便诊断。
小结
血小板检测影响因素较多，部分病例需要综合 分析，但是sysmex新增的PLT-F通道能够大大提 高血小板检测的准确度和精密度，并且结合XN 的3R自动复检功能能够快速准确的排除影响， 为血小板检测提供了更优的检测方法。
血小板的检测原理及误差分析
学术应用部 张文忠
血小板基础
• 什么是血小板？ • 血小板（platelet,PLT）是由骨髓造血组织中的巨核细
胞产生，具有维持血管内皮完整性以及黏附、聚集、释 放、促凝和血块收缩等功能。 • 正常血小板形态呈两面微凸的圆盘状，直径约1.5-3um， 新生血小板体积大，成熟血小板体积小。
• 光学法（PLT-O）：在RET通道中，荧光染液（主要成分 为聚次甲基、噁嗪）能够对细胞内的RNA和部分DNA染色， 通过光信号的强弱区分细胞（RET通道特异性针对红细胞 膜表面的RNA）。
白细胞 网织红细胞 红细胞 血小板
侧向荧光 （SFL）
强 中 弱 弱
前向散射光 （FSC）
强 强 强 弱
PLT-O优缺点
• 3、相差显微镜直接计数法：相差显微镜下，血小板立体 感增强，有助于识别血小板
• 4、普通显微镜直接计数法：按不同的稀释液，可分为破 坏和不破坏红细胞的PLT计数，稀释液可用草酸铵、复方 尿素、高铁氰化钾。
Sysmex-XN系列PLT检测方法
• 1、电阻抗法（PLT-I） • 2、光学法（PLT-O） • 3、荧光法（PLT-F）
无PLT体积分布异常报警信息
有PLT体积分布异常报警信息
单位
低值范围的血小板样本中，PLT-F测定的精度最高
在没有干扰的情况下
Correlation with immnological method ( anti-CD-61 Ab; Abbott ). Subjects: Samples with PLT-I measurement abnormality (n=120), fragments, g-PLT and so on.
Normal Platelets
FSC
PLT Clumps FSC
Laser
Laser
FSC
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FSC_W
FSC FSC_W
PLT-F优点
• 优点： • 高特异性，与CD41/CD61流式细胞仪检测相当 • 排除网织红细胞影响，排除红细胞碎片及小红细胞影响 • 排除微小血小板假性减少 • 5倍颗粒检测，即使低值血小板依然有较高的精度 • PLT-F可检测IPF，为诊断PLT减少的原因提供分析数据 • 敏感监测血小板聚集
非常感谢！
PLT-I方法学优缺点
• 优点：目前常规筛检PLT的主要方法 • 1.检测速度快 • 2.重复性好 • 3.准确性高 • 4.同时提供多项指标
• 缺点：容易受干扰因素影响，导致结果出现偏差 • 1.假性增高：小红细胞、红细胞碎片、微小细胞碎片 • 2.假性减低：微小血小板、大血小板、血小板聚集
光学法（PLT-O）
• 消耗增加：TTP，DIC，虽有血小板减少，但RP比例接近正 常，RP绝对值亦低于正常水平
• 分布异常：脾大、血液被稀释等 • 先天性：新生儿血小板减少症、巨大血小板综合征等
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血小板聚集
血小板未聚集散点图
血小板聚集散点图
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FSCW (FSC-Width)
Direction of Sheath Flow
镜检
解决方案： 显微镜镜检发现有红细胞大小不 均，有大量红细胞碎片存在。血 小板散在分布，数量正常。此种 情况下，PLT-I必然假性增高， 使用PLT-F可以完全排除干扰
3、巨大血小板
• 刘某，女70岁，因身体不适，在县城二级医院就诊，血常规检查， WBC:6.1*10E9/L，RBC:5.4*10E12/L，HGB:132g/L,PLT:10*10E9/L， 转诊至某三甲医院血液科就诊，PLT-I：8*10E9/L，使用PLT-F通道 后，PLT-F：24*10E9/L, IPF:75.8%，推片镜检，可见血小板明显减 少，血小板体积明显增大。
• 优点： • 避免小红细胞、红细胞碎片、小微粒引起的PLT假性增高 • 避免大血小板引起的PLT假性减低
• 缺点： • 假性减低：微小血小板、血小板聚集
荧光法（PLT-F）
PLT-F：使用专用通道，染色液Fluorocell PLT主要对含 核酸丰富的细胞内构造进行染色主要是小胞体（核糖体 RNA）和线粒体（MtDNA），PLT-F检测颗粒数是PLT-O或 PLT-I的5倍，能够同时报告IPF（网织血小板或未成熟血 小板），PLT-F通道对血小板聚集更加敏感。