血型鉴定抗体筛选交叉合血PPT课件
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血型鉴定与交叉配血
原理
根据红细胞膜上有无A抗原或B抗原， 将血型分为A型、B型、AB型及O型四 种。通常利用红细胞凝集试验，通过 正定型和反定型鉴定ABO血型。
正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测 定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原； 反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血 清中有无相应的抗A或抗B。
血型抗原
抗B A型RBC B型RBC O型RBC
-
-+
+
-
结果 O
+
--
+
-
A
-
++
--B来自++-
-
-
AB
Rh血型鉴定
一、试剂 1、IgM抗-D试剂血清 2、待检红细胞悬液
二、操作 1、取12×75mm干净小试管1支 2、滴入IgM抗-D试剂血清1~2滴 3、滴入红细胞悬液 4、混匀后3400转/分离心15秒 5、轻轻摇动试管，观察结果 6、凝集为阳性，不凝集为阴性
红细胞血型抗原： 已确定的有29个系统、200多种抗原
其中必查血型抗原： ABO抗原和RhD抗原
血型抗体
常见的血型抗体分子大多属于IgM或IgG两类
*五类免疫球蛋白具有相似的单体结构 *两条轻链(L链)和两条重链(H链)组成的四肽 链 (H2L2)---单体结构
1、 IgG 抗体
分子较小，通常以单体形式存在。多经妊娠 或输血后免疫产生。在盐水介质中只能致敏相应 抗原的红细胞，而不能使之凝集，所以又称为不 完全抗体。必须通过特定的方法（如抗人球蛋白） 使致敏红细胞发生凝集。
2. 各加LIM溶液0.7m1 ，混合均匀后，再各加 Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟。
3．普通离心机1000g离心15秒，然后把上清液 倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
根据红细胞膜上有无A抗原或B抗原， 将血型分为A型、B型、AB型及O型四 种。通常利用红细胞凝集试验，通过 正定型和反定型鉴定ABO血型。
正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测 定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原； 反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血 清中有无相应的抗A或抗B。
血型抗原
抗B A型RBC B型RBC O型RBC
-
-+
+
-
结果 O
+
--
+
-
A
-
++
--B来自++-
-
-
AB
Rh血型鉴定
一、试剂 1、IgM抗-D试剂血清 2、待检红细胞悬液
二、操作 1、取12×75mm干净小试管1支 2、滴入IgM抗-D试剂血清1~2滴 3、滴入红细胞悬液 4、混匀后3400转/分离心15秒 5、轻轻摇动试管，观察结果 6、凝集为阳性，不凝集为阴性
红细胞血型抗原： 已确定的有29个系统、200多种抗原
其中必查血型抗原： ABO抗原和RhD抗原
血型抗体
常见的血型抗体分子大多属于IgM或IgG两类
*五类免疫球蛋白具有相似的单体结构 *两条轻链(L链)和两条重链(H链)组成的四肽 链 (H2L2)---单体结构
1、 IgG 抗体
分子较小，通常以单体形式存在。多经妊娠 或输血后免疫产生。在盐水介质中只能致敏相应 抗原的红细胞，而不能使之凝集，所以又称为不 完全抗体。必须通过特定的方法（如抗人球蛋白） 使致敏红细胞发生凝集。
2. 各加LIM溶液0.7m1 ，混合均匀后，再各加 Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟。
3．普通离心机1000g离心15秒，然后把上清液 倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
血型ppt课件
血型鉴定和交叉配血试验
同济医院输血科 魏晴
血型基本知识
一、基本概念
血型： 血液遗传性状,多态性物质 血型系统：由数个相互关联的抗原抗体组
成
二、输血医学中最重要的血型系统
ABO血型系统 、 Rh血型系统
三、分子生物学基础
基因控制，基因的间接或直接产物
ABO血型系统
• 人类最早认识的血型系统 （1900年 Landsteiner 发现）
ABO、 Rh(D)血型鉴定
ABO血型鉴定 • 正反定型两者决定 • 正定型检测红细胞抗原 • 反定型检测血清中抗体 • 正反定型同时检测，才能正确判断ABO血
型 Rh(D)血型鉴定 • 正定型决定 • 正定型检测红细胞膜的D抗原
抗体筛选
• 目的：发现有临床意义的不规则抗体， 保障输血安全。
抗体筛选
• 输血医学中最重要血型系统
ABO血型系统
• 分类 分为A、B、O、AB四种血型 （1）红细胞上是否存在A、B抗原 （2）血清中是否存在抗A或抗B抗体 • 分布
红细胞、组织细胞、体液、分泌液
ABO血型系统分型
红细胞上存在的 血清中存在的 血型ຫໍສະໝຸດ 抗原抗体A抗原
抗B抗体
A
B抗原
抗A抗体
B
A、B抗原
无
AB
卫生部《临床输血技术规范》
筛选细胞
交叉配血
• 目的：检查受血者与供血者是否存在血型 抗原与抗体不合的情况
• 方法 主侧：受血者血清 + 供血者红细胞 次侧：受血者红细胞 + 供血者血清
ABO、Rh血型系统的临床意义
• 输血安全 • 新生儿溶血病 • 器官移植 • 其他
小结
• ABO血型分类 A型、 B型、 O型、AB型
同济医院输血科 魏晴
血型基本知识
一、基本概念
血型： 血液遗传性状,多态性物质 血型系统：由数个相互关联的抗原抗体组
成
二、输血医学中最重要的血型系统
ABO血型系统 、 Rh血型系统
三、分子生物学基础
基因控制，基因的间接或直接产物
ABO血型系统
• 人类最早认识的血型系统 （1900年 Landsteiner 发现）
ABO、 Rh(D)血型鉴定
ABO血型鉴定 • 正反定型两者决定 • 正定型检测红细胞抗原 • 反定型检测血清中抗体 • 正反定型同时检测，才能正确判断ABO血
型 Rh(D)血型鉴定 • 正定型决定 • 正定型检测红细胞膜的D抗原
抗体筛选
• 目的：发现有临床意义的不规则抗体， 保障输血安全。
抗体筛选
• 输血医学中最重要血型系统
ABO血型系统
• 分类 分为A、B、O、AB四种血型 （1）红细胞上是否存在A、B抗原 （2）血清中是否存在抗A或抗B抗体 • 分布
红细胞、组织细胞、体液、分泌液
ABO血型系统分型
红细胞上存在的 血清中存在的 血型ຫໍສະໝຸດ 抗原抗体A抗原
抗B抗体
A
B抗原
抗A抗体
B
A、B抗原
无
AB
卫生部《临床输血技术规范》
筛选细胞
交叉配血
• 目的：检查受血者与供血者是否存在血型 抗原与抗体不合的情况
• 方法 主侧：受血者血清 + 供血者红细胞 次侧：受血者红细胞 + 供血者血清
ABO、Rh血型系统的临床意义
• 输血安全 • 新生儿溶血病 • 器官移植 • 其他
小结
• ABO血型分类 A型、 B型、 O型、AB型
输血前免疫血清学检查PPT课件
序 Rh-hr Kidd MNSs Duffy Diego Kell Lewis P
号 D C E c e JKa JKb M N S s Mur Fya Fyb Dia Dib K k Lea Leb P1 1 ++00+ 0 + ++0+ 0 + + 0 + 0 +0 + 0
2 +0++0 + + 0+0+ / + 0 0 + 0 +0 + 0
输血前免疫学检查
三项检查： ● 血型的鉴定 ● 抗体筛选和鉴定 ● 交叉配血试验
三者互为补充，缺一不可
目的： 使输入的血液成分有效存活 不会引起受血者的红细胞发生破坏
血型鉴定
常规ABO血型鉴定应包括正、反定型，二者起到互相 验证和质控的作用。
反定型要用试管法，不用玻片法
我国已规定常规血型鉴定还应包括Rh（D）定型。
在冷凝集素或ABO系统以外的同种抗体影响定型；自 身对照用于是否存在自身抗体影响定型。
ABO定型不一致的原因
一、人为因素 试剂不标准、失效或污染 操作中加错样本或试剂 离心速度不足或过度 细胞与血清比例不当，结果判断错误等 人工判读结果有可能发生书写错误
二、客观因素 因某种疾病（如白血病）导致抗原减弱 红细胞发生多凝集现象或产生类B物质 抗体效价低（如婴幼儿、老年人、低免疫球蛋白血症） 血清中有意外抗体，某些药物干扰等 可溶性血型物质过多 血浆蛋白异常导致红细胞缗钱状凝集或假凝集 嵌合体血型或近期输入异型血造成混合外观凝集
侧
者红细胞进行试验
次
献
侧
• 次测配血
号 D C E c e JKa JKb M N S s Mur Fya Fyb Dia Dib K k Lea Leb P1 1 ++00+ 0 + ++0+ 0 + + 0 + 0 +0 + 0
2 +0++0 + + 0+0+ / + 0 0 + 0 +0 + 0
输血前免疫学检查
三项检查： ● 血型的鉴定 ● 抗体筛选和鉴定 ● 交叉配血试验
三者互为补充，缺一不可
目的： 使输入的血液成分有效存活 不会引起受血者的红细胞发生破坏
血型鉴定
常规ABO血型鉴定应包括正、反定型，二者起到互相 验证和质控的作用。
反定型要用试管法，不用玻片法
我国已规定常规血型鉴定还应包括Rh（D）定型。
在冷凝集素或ABO系统以外的同种抗体影响定型；自 身对照用于是否存在自身抗体影响定型。
ABO定型不一致的原因
一、人为因素 试剂不标准、失效或污染 操作中加错样本或试剂 离心速度不足或过度 细胞与血清比例不当，结果判断错误等 人工判读结果有可能发生书写错误
二、客观因素 因某种疾病（如白血病）导致抗原减弱 红细胞发生多凝集现象或产生类B物质 抗体效价低（如婴幼儿、老年人、低免疫球蛋白血症） 血清中有意外抗体，某些药物干扰等 可溶性血型物质过多 血浆蛋白异常导致红细胞缗钱状凝集或假凝集 嵌合体血型或近期输入异型血造成混合外观凝集
侧
者红细胞进行试验
次
献
侧
• 次测配血
血型鉴定及交叉配血
严格进行血型鉴定和交叉配血试验， 确保供、受体血型一致。
症状
寒战、高热、腰背酸痛、血红蛋白尿、 黄疸等，严重者出现血压下降、休克 和急性肾衰竭。
非溶血性输血反应
发生机制
与免疫因素有关，如过敏反应、 发热反应等。
症状
皮肤瘙痒、红斑、荨麻疹、咳嗽、 呼吸困难等，严重者出现过敏性
休克。
预防
对有过敏史的受血者进行预防性 用药，输血前仔细询问受血者过
O型血与疾病的关系
O型血人群患心血管疾病的风险 较低，但也有一定的风险。
O型血人群对某些病毒和细菌的 抵抗力较强，如流感病毒、肺炎
球菌等。
O型血人群患某些癌症的风险较 高，特别是结直肠癌和乳腺癌。
04 输血反应
CHAPTER
溶血性输血反应
发生机制
预防
由于供、受体的血型抗原不匹配，导 致红细胞在血液循环中溶解破坏。
A型血人群易感染某 些病毒和细菌，如流 感病毒、幽门螺杆菌 等。
A型血人群患癌症的 风险也相对较高，特 别是消化系统癌症。
B型血与疾病的关系
B型血人群患心血管疾病的风 险较低，但也有一定的风险。
B型血人群患某些自身免疫性 疾病的风险较高，如类风湿性 关节炎、系统性红斑狼疮等。
B型血人群易感染某些病毒和 细菌，如流感病毒、肺炎球菌 等。
敏史。
输血传播疾病
疾病种类
包括乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒等。
传播途径
通过血液中携带病毒的微量红细胞或白细胞传播。
预防
对献血者进行严格的筛选和检测，采用病毒灭活 技术处理血液制品。
05 输血前检查
CHAPTER
输血前检查的内容
01
02
03
交叉配血试验ppt课件
7
一、 病人的病史和标本等的检查核对及处理
2．标本的要求: 标本必须有正确的标签。如果标本标签上的内 容与血液申请单上的内容不一致或对病人身份 确认有疑问的话，必须重抽一份新的血液标本， 任何人不得对错误的标签进行修改。
所用血标本能代表患者当前的免疫学状态。输 血前检查的各项试验必须使用3天内采集的血 标本，反复输血的患者更应注意抽取新的标本 作配血试验，避免因回忆反应而产生的抗体漏 检。
批号
效期
厂商
试剂质控 批号变化
通过质控 质控失控 失控原因
1
批号: 12345
2
3
…….
口 改变 口 改变 ……. 口 未改变 口 未改变
日期 签名
55
ABO/RhD定型质控
检测标本时必须设立阳性和阴性对照试验：对照 试验的频次取决于工作模式、使用的方法和试剂 的使用说明
每一批抗-A，抗-B，都必须与A1，B和O细胞有合 适的反应能力。每一批试剂反定型红细胞都必须 与抗-A，抗-B有合适的反应能力。
包括病人的姓名，年龄，床号、住院号及唯一 性标识码，性别，种族，临床诊断，输血史， 药物史，妊娠史。 凡资料填写不全的输血申请单要退回临床科室 补充，不得迁就，也不能通过电话修改。
6
一、 病人的病史和标本等的检查核对及处理
1．病史资料和信息 如果病人以前有过试验，则要注意核查病人以前
检查的血清学试验记录及以往输血反应的记录等。 把以前的ABO、Rh血型和抗体检测的解释同现在 的解释及任何异常情况的解答进行比较。 如既往曾经检出某种血型抗体，即使目前该抗体 检测阴性，也应选择无相关抗原的血液输注。
35
用于ABO反定型的试剂红细胞
A 细胞- 与抗A，抗A1反应4＋，与抗B无反应 B 细胞- 与抗B反应4＋，但与抗A，抗A1无反
一、 病人的病史和标本等的检查核对及处理
2．标本的要求: 标本必须有正确的标签。如果标本标签上的内 容与血液申请单上的内容不一致或对病人身份 确认有疑问的话，必须重抽一份新的血液标本， 任何人不得对错误的标签进行修改。
所用血标本能代表患者当前的免疫学状态。输 血前检查的各项试验必须使用3天内采集的血 标本，反复输血的患者更应注意抽取新的标本 作配血试验，避免因回忆反应而产生的抗体漏 检。
批号
效期
厂商
试剂质控 批号变化
通过质控 质控失控 失控原因
1
批号: 12345
2
3
…….
口 改变 口 改变 ……. 口 未改变 口 未改变
日期 签名
55
ABO/RhD定型质控
检测标本时必须设立阳性和阴性对照试验：对照 试验的频次取决于工作模式、使用的方法和试剂 的使用说明
每一批抗-A，抗-B，都必须与A1，B和O细胞有合 适的反应能力。每一批试剂反定型红细胞都必须 与抗-A，抗-B有合适的反应能力。
包括病人的姓名，年龄，床号、住院号及唯一 性标识码，性别，种族，临床诊断，输血史， 药物史，妊娠史。 凡资料填写不全的输血申请单要退回临床科室 补充，不得迁就，也不能通过电话修改。
6
一、 病人的病史和标本等的检查核对及处理
1．病史资料和信息 如果病人以前有过试验，则要注意核查病人以前
检查的血清学试验记录及以往输血反应的记录等。 把以前的ABO、Rh血型和抗体检测的解释同现在 的解释及任何异常情况的解答进行比较。 如既往曾经检出某种血型抗体，即使目前该抗体 检测阴性，也应选择无相关抗原的血液输注。
35
用于ABO反定型的试剂红细胞
A 细胞- 与抗A，抗A1反应4＋，与抗B无反应 B 细胞- 与抗B反应4＋，但与抗A，抗A1无反
交叉配血知识ppt课件
（13）低丙种球蛋白血症 可能会因免疫球蛋白水平全面下降使 血清定型时不见凝集或仅见弱凝集反应。
（14）药物等因素 药物、右旋糖酐等静脉注射某些造影剂可引 起红细胞聚集而类似凝集。
（15）年龄因素 如新生儿、老年人等。
2019/5/20
15
正反定型不一致的处理方法
- 细胞成细沙状沿试管壁流下 + 细胞成块状或成齿状沿试管壁流下
切不可用力使劲摇试管，那样凝集颗粒会被摇散，
弱凝集的记录符号及所示的凝集强度
4 一个大的凝集块,背景透明,无游离细胞 +
3 数个大凝集块,背景透明,无游离细胞 +
2 许多小凝集块,肉眼可见,大小均匀,背景基本透明,有游离 + 细胞
盖在输血前实验中抗体反映引起的溶血
5.标本标识：唯一性标识无误、与输血申请单一致
6.使用血浆标本：应排除纤维蛋白原的干扰
7.输血后标本保存：2-8℃,至少一周。
2019/5/20
6
血型
1. 红细胞悬液的配制 2. 离心力的标准 3. 离心后结果观察 4. 盐水试验 5. 正反定型结果不一致原因及处理
血量约为5ml 。
2.使用右旋糖酐、pvp等：
治疗前抽取标本备用,防止RBC缗钱状凝集的干扰
2019/5/20
5
3.24小时内输了12u血后：
可输注未经交叉配血的ABO、RH同型的血液,因为
原始交叉配血用的血清已不能代表患者血清的情况。
4.防止血样的稀释和溶血的产生：
溶血标本一般不使用,因为血清中游离血红蛋白可掩
（6）近期曾异型输血，病人血液标本成为不同型别的红细胞 混合物，定型时显示“混合外观凝集”现象。
交叉配血试验.ppt
谢谢交叉配血试验.ppt
演讲人
交叉配血实验主要是用于供血前确认供者血型与受者血型是不是配合，尽量的避免 输血反应。输血前必须进行两项输血实验，血型鉴定和交叉匹配。
理论上一旦已知受血者血型便可输注配合的血液，是在实践中供者血和受者血可以 仍然有不相容的情况，主要是因为供血可能包含其他非常规血型抗原，而受血者血 清中如存在针对这些抗原的抗体就可能会造成输血反应，所以交叉配血是非常重要 的。
交叉配血实验是观察主副实验是不是发生凝集决定临床输血的可行性，血型完全配 合，输血是最安全的。血型部分配合，尽在应急的时候少量输血并需要严密观察是 不是有输血反应，血型完全不配合是绝对不要输血的。
总之血型完全配合或者是部分配合是可以输血的指征，血型完全不配合也就是主实验和 副实验均凝集是严禁输血的。
演讲人
交叉配血实验主要是用于供血前确认供者血型与受者血型是不是配合，尽量的避免 输血反应。输血前必须进行两项输血实验，血型鉴定和交叉匹配。
理论上一旦已知受血者血型便可输注配合的血液，是在实践中供者血和受者血可以 仍然有不相容的情况，主要是因为供血可能包含其他非常规血型抗原，而受血者血 清中如存在针对这些抗原的抗体就可能会造成输血反应，所以交叉配血是非常重要 的。
交叉配血实验是观察主副实验是不是发生凝集决定临床输血的可行性，血型完全配 合，输血是最安全的。血型部分配合，尽在应急的时候少量输血并需要严密观察是 不是有输血反应，血型完全不配合是绝对不要输血的。
总之血型完全配合或者是部分配合是可以输血的指征，血型完全不配合也就是主实验和 副实验均凝集是严禁输血的。
输血前血型血清学检验PPT参考幻灯片
26
处理方法
获得性“B”现象
• 将抗B试剂酸化到pH6.0，就可区别“真B”和获 得性“B”。
• 酸化的抗B试剂仅与“真B”反应。
2+ 表示部分RBC沉积于胶底，部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。
1+ 表示RBC多数沉积于胶底，可见少数RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。
± 表示RBC绝大多数沉积于胶底，极少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶底。
- 表示RBC全部沉积于胶底。
PH 表示部分溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中有残留红细胞。
H 表示完全溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中无红细胞。
红细胞)； b.撕开检测卡的封膜，于A、B、D、Control微柱管
反应腔中加入1%待检RBC悬液各50ul； c.将检测卡置离心机，1800r/min 2min，
2500r/min 1min离心；
6
ABO、RhD血型抗原检测卡
4+ 表示RBC绝大部分凝聚于凝胶表层。
3+ 表示RBC多数凝聚于凝胶表层，少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层。
10
ABO正反定型不符结果分 析
• 假阳性结果 a.试剂、红细胞或盐水受到细菌污染； b.加样时交叉污染； c.加错样本; d.离心时间、速度过大; e.实验容器不洁; f.记录或结果判读错误。
11
ABO正反定型矛盾
抗体问题
正定型
反定型
抗A 抗B 抗AB
Ac Bc
-- -
--
12
抗体减弱或不产生原因
• 由肠梗阻、结肠或直肠癌和其他低位肠道有关的 疾病引起。
• 肠壁渗透性增加，细菌多糖吸附到红细胞上产生 B特异性。
• 也见于普通变形杆菌引起的败血症。
处理方法
获得性“B”现象
• 将抗B试剂酸化到pH6.0，就可区别“真B”和获 得性“B”。
• 酸化的抗B试剂仅与“真B”反应。
2+ 表示部分RBC沉积于胶底，部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。
1+ 表示RBC多数沉积于胶底，可见少数RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。
± 表示RBC绝大多数沉积于胶底，极少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶底。
- 表示RBC全部沉积于胶底。
PH 表示部分溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中有残留红细胞。
H 表示完全溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中无红细胞。
红细胞)； b.撕开检测卡的封膜，于A、B、D、Control微柱管
反应腔中加入1%待检RBC悬液各50ul； c.将检测卡置离心机，1800r/min 2min，
2500r/min 1min离心；
6
ABO、RhD血型抗原检测卡
4+ 表示RBC绝大部分凝聚于凝胶表层。
3+ 表示RBC多数凝聚于凝胶表层，少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层。
10
ABO正反定型不符结果分 析
• 假阳性结果 a.试剂、红细胞或盐水受到细菌污染； b.加样时交叉污染； c.加错样本; d.离心时间、速度过大; e.实验容器不洁; f.记录或结果判读错误。
11
ABO正反定型矛盾
抗体问题
正定型
反定型
抗A 抗B 抗AB
Ac Bc
-- -
--
12
抗体减弱或不产生原因
• 由肠梗阻、结肠或直肠癌和其他低位肠道有关的 疾病引起。
• 肠壁渗透性增加，细菌多糖吸附到红细胞上产生 B特异性。
• 也见于普通变形杆菌引起的败血症。
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试剂
抗A/抗B 标准血清 A1/B反定型细胞 献血者血清或血浆以及5%红细胞悬液 受检者血清或血浆以及5%红细胞悬液 BASO polymatching 试剂盒
标本：抗凝静脉血（EDTA-K2）
操作步骤（盐水法）
标记为主侧的试管中加入受者血清或血浆2滴和供 者红细胞悬液1滴。
标记两支干净的试管-A和-B 在标记为-A的试管中加1滴抗A试剂。 在标记为-B的试管中加1滴抗B试剂。 在每个试管中各加入5%受检者红细胞悬液
(1份压积红细胞+19份0.9%盐水) 轻轻混匀，1000g离心1分钟。 检查上清液是否有溶血。 轻轻重悬细胞扣，检查凝集。
红细胞ABO血型鉴定（试管法反定型）
离心时间、速度严格要求。
要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应注意观 察凝集强度，有助于A、B亚型的发现，观察后立即记录。
抗体筛选
目的
掌握抗体筛选的试验方法
盐水试验法 白蛋白介质法 低离子强度介质法（LISS） 酶技术 抗球蛋白试验 聚凝胺促凝技术 PEG促凝技术
阳性对照 阴性对照
+
-
+
-
待检细胞 + -
结果 + -
报告方式 XXX型，Rh +/-
注意事项
玻片、试管都要标记！！！A及B标准血清绝对不能相混,不要依靠 用染料颜色标记血清。
所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。
红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，
一般先加血清，再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清。
3.抗体筛选的临床意义
交叉配血 Cross Match
目的
掌握交叉配血的试验方法
原理
盐水法 检查供受者之间有无ABO血型不合。用于抗体筛
选阴性和不同血型骨髓移植患者的输血。
原理
凝聚胺法
凝聚胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产 生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细 胞之间的距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异 性凝集。如果是抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则凝 集不可逆。离心后，加入重悬液，凝聚胺的凝聚作用可 通过加入枸橼酸钠而中和，使正常红细胞的凝聚解散， 而抗体引起的凝集仍然存在。
玻片法
在玻板上标记待检红细胞编号。 加入抗D血清1滴于标记玻片中。 将35－45%的待检细胞1滴滴入玻片并混匀。 室温放置2分钟左右观察结果。
结果判读（ABO血型鉴定）
正定型
抗A
抗B
-
-
+
-
-
+
+
+
反定型
A细胞 B细胞 O细胞
+
+
-
-
+
-
+
-
-
-
-
-
血型
O A B AB
结果判读（Rh血型鉴定）
标记两支干净的试管Ac和Bc 每管加入2滴受检者血清。 在标记Ac的试管中加入1滴5%A型试剂红细胞。 在标记Bc的试管中加入1滴5%B型试剂红细胞。 轻轻混匀，1000g离心1分钟。 检查上清有无溶血。 轻轻重悬细胞扣，检查凝集。 判断并记录结果。
红细胞ABO血型鉴定（玻片法）
在标记的玻板上分别加一滴抗A、抗B。
加入抗球蛋白试剂后结果为阴性，而加入直抗阳性对 照细胞后呈阳性反应，则结果为阴性。如加入直抗阳 性对照细胞后呈阴性反应，则结果不可靠，必须重复 检测。
操作步骤
在标记好的试管中按下表加入试剂及血清。
阳性对照管
IgG型抗D
1
待检血清
阴性对照血清
5%O型试剂红
1
细胞
待检管 2 1
阴性对照管
2 1
ABO血型鉴定 不规则抗体筛选
各加一滴10%受检者红细胞悬液 (1Leabharlann 压积红细胞+9滴0.9%盐水)
轻轻混匀，室温放置2-15分钟。
观察并记录结果：凝集为阳性结果，不凝集为阴 性结果，对结果有怀疑，应用试管法重新实验。
红细胞Rh血型鉴定
试管法
标记一支75×12mm的试管 加入抗D血清1滴， 加1滴5%的待检细胞。 轻轻混匀，1000g离心1分钟，或3000r/min，15秒。 检查是否溶血，然后轻轻重悬细胞扣，检查凝集
输血和输血技术试验
实验内容
血型鉴定 抗体筛选 交叉配血
血型鉴定
目的
掌握红细胞ABO血型及Rh血型鉴定
原理
ABO血型鉴定：根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗 原，以及血清中有无抗A及抗B，可以将血型分为A型、 B型、AB型、O型四种，利用红细胞凝集实验通过正 定型、反定型准确鉴定ABO血型。
Rh血型鉴定： IgM型盐水抗D试剂能够与D阳性红细 胞在盐水介质中形成肉眼可见的凝集。
原理
试剂
抗A及抗B血清（商品试剂） 5% A型和B型红细胞（试管法） 10% A型和B型红细胞（玻片法） IgM型盐水抗D试剂
标本 抗凝静脉血 EDTA-K2
红细胞ABO血型鉴定（试管法正定型）
在标记好的试管中各加入两滴血浆和一滴5%的O 型红细胞，混匀。
于370C孵育一小时。 用生理盐水洗涤红细胞4-6次，完全倾尽末次洗涤
盐水。 向得到的干细胞扣中加入1-2滴抗球蛋白试剂。 1000rpm，离心1分钟。检查凝集并记录结果。
结果判读
加入抗球蛋白试剂后，如红细胞出现凝集或溶血，则 结果为阳性。
原理
抗人球蛋白法： IgG类抗体，由于其分子量小，与红细胞结合以后在 盐水介质中不发生肉眼可见的凝集，称为不完全抗 体。但在加入抗-IgG的抗体后，以其搭桥则可出现 凝集。
试剂
抗球蛋白试剂 阳性对照血清 阴性对照血清 O型红细胞 生理盐水
标本：抗凝静脉血（EDTA-K2）
操作步骤
DiaMed 卡法结果判读
4＋ 在凝胶柱顶端形成单一层凝集细胞。 3＋ 凝集层主要位于凝胶柱上1/3。 2＋ 凝集位于整个凝胶柱，底部仅有较少细胞。 1＋凝集层位于凝胶柱下1/3。 凝胶中细胞没有凝集或溶血视为阴性。
思考题 1.红细胞ABO血型鉴定正反定型不一致 原因
2.导致Rh血型鉴定出现假阳性和假阴性 原因
玻片法（正定型）
盐水法
试管法 （正定型,反定型）
聚凝胺法 抗人球法
微柱凝集试验技术
达亚美微量定型系统凝胶测试法 基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化
学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应，抗人球试验 时血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶间隙 而在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通 过凝胶间隙而在凝胶底部，呈阴性反应。