血型鉴定抗体筛选交叉合血PPT课件
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在标记好的试管中各加入两滴血浆和一滴5%的O 型红细胞，混匀。
于370C孵育一小时。 用生理盐水洗涤红细胞4-6次，完全倾尽末次洗涤
盐水。 向得到的干细胞扣中加入1-2滴抗球蛋白试剂。 1000rpm，离心1分钟。检查凝集并记录结果。
结果判读
加入抗球蛋白试剂后，如红细胞出现凝集或溶血，则 结果为阳性。
原理
抗人球蛋白法： IgG类抗体，由于其分子量小，与红细胞结合以后在 盐水介质中不发生肉眼可见的凝集，称为不完全抗 体。但在加入抗-IgG的抗体后，以其搭桥则可出现 凝集。
试剂
抗球蛋白试剂 阳性对照血清 阴性对照血清 O型红细胞 生理盐水
标本：抗凝静脉血（EDTA-K2）
操作步骤
阳性对照 阴性对照
+
-
+
-
待检细胞 + -
结果 + -
报告方式 XXX型，百度文库h +/-
注意事项
玻片、试管都要标记！！！A及B标准血清绝对不能相混,不要依靠 用染料颜色标记血清。
所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。
红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，
一般先加血清，再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清。
玻片法
在玻板上标记待检红细胞编号。 加入抗D血清1滴于标记玻片中。 将35－45%的待检细胞1滴滴入玻片并混匀。 室温放置2分钟左右观察结果。
结果判读（ABO血型鉴定）
正定型
抗A
抗B
-
-
+
-
-
+
+
+
反定型
A细胞 B细胞 O细胞
+
+
-
-
+
-
+
-
-
-
-
-
血型
O A B AB
结果判读（Rh血型鉴定）
标记两支干净的试管-A和-B 在标记为-A的试管中加1滴抗A试剂。 在标记为-B的试管中加1滴抗B试剂。 在每个试管中各加入5%受检者红细胞悬液
(1份压积红细胞+19份0.9%盐水) 轻轻混匀，1000g离心1分钟。 检查上清液是否有溶血。 轻轻重悬细胞扣，检查凝集。
红细胞ABO血型鉴定（试管法反定型）
试剂
抗A/抗B 标准血清 A1/B反定型细胞 献血者血清或血浆以及5%红细胞悬液 受检者血清或血浆以及5%红细胞悬液 BASO polymatching 试剂盒
标本：抗凝静脉血（EDTA-K2）
操作步骤（盐水法）
标记为主侧的试管中加入受者血清或血浆2滴和供 者红细胞悬液1滴。
离心时间、速度严格要求。
要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应注意观 察凝集强度，有助于A、B亚型的发现，观察后立即记录。
抗体筛选
目的
掌握抗体筛选的试验方法
盐水试验法 白蛋白介质法 低离子强度介质法（LISS） 酶技术 抗球蛋白试验 聚凝胺促凝技术 PEG促凝技术
DiaMed 卡法结果判读
4＋ 在凝胶柱顶端形成单一层凝集细胞。 3＋ 凝集层主要位于凝胶柱上1/3。 2＋ 凝集位于整个凝胶柱，底部仅有较少细胞。 1＋凝集层位于凝胶柱下1/3。 凝胶中细胞没有凝集或溶血视为阴性。
思考题 1.红细胞ABO血型鉴定正反定型不一致 原因
2.导致Rh血型鉴定出现假阳性和假阴性 原因
加入抗球蛋白试剂后结果为阴性，而加入直抗阳性对 照细胞后呈阳性反应，则结果为阴性。如加入直抗阳 性对照细胞后呈阴性反应，则结果不可靠，必须重复 检测。
操作步骤
在标记好的试管中按下表加入试剂及血清。
阳性对照管
IgG型抗D
1
待检血清
阴性对照血清
5%O型试剂红
1
细胞
待检管 2 1
阴性对照管
2 1
ABO血型鉴定 不规则抗体筛选
输血和输血技术试验
实验内容
血型鉴定 抗体筛选 交叉配血
血型鉴定
目的
掌握红细胞ABO血型及Rh血型鉴定
原理
ABO血型鉴定：根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗 原，以及血清中有无抗A及抗B，可以将血型分为A型、 B型、AB型、O型四种，利用红细胞凝集实验通过正 定型、反定型准确鉴定ABO血型。
玻片法（正定型）
盐水法
试管法 （正定型,反定型）
聚凝胺法 抗人球法
微柱凝集试验技术
达亚美微量定型系统凝胶测试法 基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化
学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应，抗人球试验 时血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶间隙 而在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通 过凝胶间隙而在凝胶底部，呈阴性反应。
各加一滴10%受检者红细胞悬液 (1滴压积红细胞+9滴0.9%盐水)
轻轻混匀，室温放置2-15分钟。
观察并记录结果：凝集为阳性结果，不凝集为阴 性结果，对结果有怀疑，应用试管法重新实验。
红细胞Rh血型鉴定
试管法
标记一支75×12mm的试管 加入抗D血清1滴， 加1滴5%的待检细胞。 轻轻混匀，1000g离心1分钟，或3000r/min，15秒。 检查是否溶血，然后轻轻重悬细胞扣，检查凝集
3.抗体筛选的临床意义
交叉配血 Cross Match
目的
掌握交叉配血的试验方法
原理
盐水法 检查供受者之间有无ABO血型不合。用于抗体筛
选阴性和不同血型骨髓移植患者的输血。
原理
凝聚胺法
凝聚胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产 生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细 胞之间的距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异 性凝集。如果是抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则凝 集不可逆。离心后，加入重悬液，凝聚胺的凝聚作用可 通过加入枸橼酸钠而中和，使正常红细胞的凝聚解散， 而抗体引起的凝集仍然存在。
标记两支干净的试管Ac和Bc 每管加入2滴受检者血清。 在标记Ac的试管中加入1滴5%A型试剂红细胞。 在标记Bc的试管中加入1滴5%B型试剂红细胞。 轻轻混匀，1000g离心1分钟。 检查上清有无溶血。 轻轻重悬细胞扣，检查凝集。 判断并记录结果。
红细胞ABO血型鉴定（玻片法）
在标记的玻板上分别加一滴抗A、抗B。
Rh血型鉴定： IgM型盐水抗D试剂能够与D阳性红细 胞在盐水介质中形成肉眼可见的凝集。
原理
试剂
抗A及抗B血清（商品试剂） 5% A型和B型红细胞（试管法） 10% A型和B型红细胞（玻片法） IgM型盐水抗D试剂
标本 抗凝静脉血 EDTA-K2
红细胞ABO血型鉴定（试管法正定型）
于370C孵育一小时。 用生理盐水洗涤红细胞4-6次，完全倾尽末次洗涤
盐水。 向得到的干细胞扣中加入1-2滴抗球蛋白试剂。 1000rpm，离心1分钟。检查凝集并记录结果。
结果判读
加入抗球蛋白试剂后，如红细胞出现凝集或溶血，则 结果为阳性。
原理
抗人球蛋白法： IgG类抗体，由于其分子量小，与红细胞结合以后在 盐水介质中不发生肉眼可见的凝集，称为不完全抗 体。但在加入抗-IgG的抗体后，以其搭桥则可出现 凝集。
试剂
抗球蛋白试剂 阳性对照血清 阴性对照血清 O型红细胞 生理盐水
标本：抗凝静脉血（EDTA-K2）
操作步骤
阳性对照 阴性对照
+
-
+
-
待检细胞 + -
结果 + -
报告方式 XXX型，百度文库h +/-
注意事项
玻片、试管都要标记！！！A及B标准血清绝对不能相混,不要依靠 用染料颜色标记血清。
所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。
红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，
一般先加血清，再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清。
玻片法
在玻板上标记待检红细胞编号。 加入抗D血清1滴于标记玻片中。 将35－45%的待检细胞1滴滴入玻片并混匀。 室温放置2分钟左右观察结果。
结果判读（ABO血型鉴定）
正定型
抗A
抗B
-
-
+
-
-
+
+
+
反定型
A细胞 B细胞 O细胞
+
+
-
-
+
-
+
-
-
-
-
-
血型
O A B AB
结果判读（Rh血型鉴定）
标记两支干净的试管-A和-B 在标记为-A的试管中加1滴抗A试剂。 在标记为-B的试管中加1滴抗B试剂。 在每个试管中各加入5%受检者红细胞悬液
(1份压积红细胞+19份0.9%盐水) 轻轻混匀，1000g离心1分钟。 检查上清液是否有溶血。 轻轻重悬细胞扣，检查凝集。
红细胞ABO血型鉴定（试管法反定型）
试剂
抗A/抗B 标准血清 A1/B反定型细胞 献血者血清或血浆以及5%红细胞悬液 受检者血清或血浆以及5%红细胞悬液 BASO polymatching 试剂盒
标本：抗凝静脉血（EDTA-K2）
操作步骤（盐水法）
标记为主侧的试管中加入受者血清或血浆2滴和供 者红细胞悬液1滴。
离心时间、速度严格要求。
要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应注意观 察凝集强度，有助于A、B亚型的发现，观察后立即记录。
抗体筛选
目的
掌握抗体筛选的试验方法
盐水试验法 白蛋白介质法 低离子强度介质法（LISS） 酶技术 抗球蛋白试验 聚凝胺促凝技术 PEG促凝技术
DiaMed 卡法结果判读
4＋ 在凝胶柱顶端形成单一层凝集细胞。 3＋ 凝集层主要位于凝胶柱上1/3。 2＋ 凝集位于整个凝胶柱，底部仅有较少细胞。 1＋凝集层位于凝胶柱下1/3。 凝胶中细胞没有凝集或溶血视为阴性。
思考题 1.红细胞ABO血型鉴定正反定型不一致 原因
2.导致Rh血型鉴定出现假阳性和假阴性 原因
加入抗球蛋白试剂后结果为阴性，而加入直抗阳性对 照细胞后呈阳性反应，则结果为阴性。如加入直抗阳 性对照细胞后呈阴性反应，则结果不可靠，必须重复 检测。
操作步骤
在标记好的试管中按下表加入试剂及血清。
阳性对照管
IgG型抗D
1
待检血清
阴性对照血清
5%O型试剂红
1
细胞
待检管 2 1
阴性对照管
2 1
ABO血型鉴定 不规则抗体筛选
输血和输血技术试验
实验内容
血型鉴定 抗体筛选 交叉配血
血型鉴定
目的
掌握红细胞ABO血型及Rh血型鉴定
原理
ABO血型鉴定：根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗 原，以及血清中有无抗A及抗B，可以将血型分为A型、 B型、AB型、O型四种，利用红细胞凝集实验通过正 定型、反定型准确鉴定ABO血型。
玻片法（正定型）
盐水法
试管法 （正定型,反定型）
聚凝胺法 抗人球法
微柱凝集试验技术
达亚美微量定型系统凝胶测试法 基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化
学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应，抗人球试验 时血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶间隙 而在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通 过凝胶间隙而在凝胶底部，呈阴性反应。
各加一滴10%受检者红细胞悬液 (1滴压积红细胞+9滴0.9%盐水)
轻轻混匀，室温放置2-15分钟。
观察并记录结果：凝集为阳性结果，不凝集为阴 性结果，对结果有怀疑，应用试管法重新实验。
红细胞Rh血型鉴定
试管法
标记一支75×12mm的试管 加入抗D血清1滴， 加1滴5%的待检细胞。 轻轻混匀，1000g离心1分钟，或3000r/min，15秒。 检查是否溶血，然后轻轻重悬细胞扣，检查凝集
3.抗体筛选的临床意义
交叉配血 Cross Match
目的
掌握交叉配血的试验方法
原理
盐水法 检查供受者之间有无ABO血型不合。用于抗体筛
选阴性和不同血型骨髓移植患者的输血。
原理
凝聚胺法
凝聚胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产 生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细 胞之间的距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异 性凝集。如果是抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则凝 集不可逆。离心后，加入重悬液，凝聚胺的凝聚作用可 通过加入枸橼酸钠而中和，使正常红细胞的凝聚解散， 而抗体引起的凝集仍然存在。
标记两支干净的试管Ac和Bc 每管加入2滴受检者血清。 在标记Ac的试管中加入1滴5%A型试剂红细胞。 在标记Bc的试管中加入1滴5%B型试剂红细胞。 轻轻混匀，1000g离心1分钟。 检查上清有无溶血。 轻轻重悬细胞扣，检查凝集。 判断并记录结果。
红细胞ABO血型鉴定（玻片法）
在标记的玻板上分别加一滴抗A、抗B。
Rh血型鉴定： IgM型盐水抗D试剂能够与D阳性红细 胞在盐水介质中形成肉眼可见的凝集。
原理
试剂
抗A及抗B血清（商品试剂） 5% A型和B型红细胞（试管法） 10% A型和B型红细胞（玻片法） IgM型盐水抗D试剂
标本 抗凝静脉血 EDTA-K2
红细胞ABO血型鉴定（试管法正定型）