免疫学技术及应用共36页文档
免疫学检测技术及应用
划痕法
细胞因子的检测技术
一、 生物学检测技术 二、 免疫学检测技术 三、分子生物学检测技术
依赖细胞株测定法 ELISA法
分子杂交、PCR 等检测mRNA
细胞因子检测的特点
• 样品含量低 •样品具有时效性 •生物效应特异性差
Figure 14-12
细胞因子的功能
Cell activation
／immunogold staining)
（一）免疫荧光技术(又称荧光抗体技术) 原理：用荧光素(如异硫氰酸荧光素、罗
丹明B200等) 标记抗体(荧光抗体)，用荧光 抗体浸染细胞或组织切片，抗原与荧光抗体 结合，于荧光显微镜下观察荧光，确定被检 抗原的存在。
免疫荧光技术包括：
直接法
间接法
间接补体增强法
ELISA法： 直接法 间接法 双抗体夹心法(双位点法) 竞争法
ELISA
(三) 同位素标记技术(isotope-labelling technique) 放射免疫分析(radioimmunoassay,
RIA) 是一种用放射性同位素分析抗原抗体反应 相结合方法。 优点：灵敏度高, 可检测0.001pg／mL
Direct and indirect immunofluorescence staining of membrane antigen (mAg).
（二）免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)
是将抗原抗体反应与酶催化底物的作用 相结合的一种方法。
主要有两种类型： 1.免疫酶染色 2.酶免疫测定（enzyme immunoassay, EIA）
•3H-胸腺嘧啶核苷参入法（3H-TdR）: 间接观察DNA 合成含量。灵敏度高，具有放射性。 •四甲基偶氮唑盐法（MTT）: MTT商品名为噻唑蓝。 原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶可将外源性 MTT还原成蓝紫色结晶-甲瓒（formazan）, DMSO使 其溶解，酶标分析仪检测。简便，灵敏度高，稳定性 差。
免疫学技术及应用
直接荧光法: 将荧光素直接标记抗体作标本染 色。该法的优点是特异性强，但其缺点是每检 测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。
间接荧光法: 用一抗与标本中的抗原结合，再 用荧光素标记的二抗染色。该法的优点是敏感 性比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可 用于多种抗原的检测，但非特异性荧光亦会增 加。
放
Ag*
Ab
Ag
射
标记抗原 特异性抗体 待测抗原
免
疫
测
( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗体复合物
定
法
分离Ag*-Ab 和游离Ag*
(RIA)
示
测定Ag*-Ab和/或游离Ag*放射性
意
图
从标准曲线上读知含量
RIA法原理及标准曲线
/
结 合 75
未
结 合 50
的
放 射
30
活
性 10
（
0
）
1
10
4.分阶段反应 ：第一为抗原与抗体发生特异性结合的阶 段，此阶段反应快，仅需几秒至几分钟，但不出现可 见反应。第二为可见反应阶段，此阶段反应慢，往往 需要数分钟至数小时。
5 、敏感性 ：不仅可用于定性，还可用于检测极微量的 抗原抗体，其灵敏程度大大超过当前应用的常规化学 方法。
抗原抗体比例对反应现象的影响
免疫标记技术
用荧光素、同位素或酶等示踪物质
标记抗体（或抗原）进行抗原-抗体反应。
标记物质与抗体（或抗原）的化学连接
未改变抗体（或抗原）的免疫学特性，
同时标记物的性质依然存在，因而极大
的提高了反应的灵敏度，可以对微量物
质进行定量、定性或定位检测。免疫标
记技术主要标记技术。
第一节 免疫学技术的范畴与应用.ppt
半抗原与载体间接联接
2019-7-2
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O-（羟甲基）羟胺法
半抗原-C=O +H2 N-O- CH2 - COOH
半抗原-C=N-O- CH2 - COOH
半抗原与载体间接联接
2019-7-2
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一氯醋酸钠法
半抗原-
- OH + Cl- CH2 - COONa
半抗原-
- CH2 - COOH
免疫反应性 ——选择结合性 （和免疫应答产物特异性结合的特性）
2019-7-2
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免疫细胞的概念与分类
免疫细胞（Immune cells） 泛指所有参与免疫应答及与免疫应答活动相关
的细胞。
免疫活性细胞（Immune competent cell，ICC） 能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、
OO 半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2 + 蛋白质- NH2
半抗原-CO- NH -蛋白质 + HO-CH2CH（CH3）2
半抗原与载体直接联接
2019-7-2
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琥珀酸酐法
OO 半抗原-CH2 –OH + C-O-C
CH3 CH3
O 半抗原-CH2 –O-C-(CH2 ) 2-COOH
2019-7-2
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1
2019-7-2
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第一节 免疫学技术的范畴与应用
一、免疫学技术的范畴 二、免疫学技术的应用特点
2019-7-2
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免疫学技术的范畴
1、对具有免疫活性物质的定性、 定量测定
免疫学技术及其在生物学中的应用前景
免疫学技术及其在生物学中的应用前景随着技术的不断发展，免疫学技术也不断得到了完善。
作为一门跨学科的科学，免疫学技术已经成为许多领域的重要工具。
它不仅可以广泛应用于医学领域，还可以在生物学，生物工程学，农业领域等方面得到应用。
免疫学技术是指基于免疫学原理开发的一系列技术，包括免疫荧光染色、ELISA技术、流式细胞术等。
这些技术基于抗体和抗原的特异性结合，可以检测和鉴定复杂的分子和细胞，从而广泛应用于疾病诊断、药物开发、病原体检测等临床和研究领域。
在疾病诊断方面，免疫学技术可以迅速检测出某些病原体或疾病标志物，包括传染病、肿瘤等。
例如，ELISA技术可以检测出HIV、乙肝、结核等疾病的存在，有助于及早发现患者的感染情况，采取合适的治疗措施。
在药物开发领域，免疫学技术也是不可缺少的工具。
药物研究人员可以利用免疫学技术检测药物的作用和效果，帮助筛选和研发具有治疗性的分子。
例如，流式细胞术可以评估药物治疗后对细胞的影响，有助于判断药物治疗效果的好坏。
免疫学技术在基因组学、蛋白质组学等生物学领域也得到了广泛应用。
例如，我们可以利用免疫染色技术检测蛋白质在细胞内的分布和定位。
同时，免疫学技术还可以在蛋白质组学方面进行鉴定和分离，有助于深入研究蛋白质功能以及生命活动的本质。
未来，免疫学技术将继续在各个领域得到应用。
例如，在植物保护中，我们可以利用免疫学技术检测植物的抗病性，有助于筛选高抗性的品种。
在食品工业方面，免疫学技术可以检测食品污染，确保食品的安全性和卫生性。
在环境保护领域，免疫学技术也可以应用于污染物的监测和分析，有助于提高环境质量，保障人类健康。
总的来说，免疫学技术已经成为现代生物学研究和临床诊断的重要工具。
在未来的发展中，不断推动免疫学技术的创新和改进，将会更好地服务于人类健康和生物学研究的发展。
第一节 免疫学技术的范畴与应用.ppt
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抗原纯度鉴定
方法：层析性质测定 电泳法 免疫法
指标：电泳纯 免疫纯
2019-6-30
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第三节 半抗原免疫原制备的方法
一、载体的选择 二、半抗原与载体的联接
2019-6-30
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载体的选择
蛋白质载体：BSA、HAS、OVA、KLH 聚合多肽载体：多聚赖氨酸 高分子聚合物载体：PVP、羧甲基纤维素
2019-6-30
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处理与粉碎
组织粉碎：机械、生物 细胞破碎：物理、化学、生物
2019-6-30
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32
蛋白质分离
选择性沉淀：盐析 有机溶剂沉淀 水溶性非离子型聚合物沉淀
透析技术：
超滤技术：
2019-6-30
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单一组分提取
层析技术：凝胶过滤 离子交换 亲和层析
抗原B
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抗原C
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可逆性
K（亲和常数）=
Ag+Ab Ag Ab
2019-6-30
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适合比例性
抗体含量
抗原含量
前带
2019-6-30
等价带
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后带
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抗体过剩
抗体抗体比例合适
抗原过剩
网格学说（lattice 2019-6-30
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theory）
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抗原抗体反应的影响因素
免疫反应性 ——选择结合性 （和免疫应答产物特异性结合的特性）
2019-6-30
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免疫细胞的概念与分类
免疫学临床应用ppt课件
（二） 抗原或抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术
颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等 ）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。
副作用：明显 ，主要是骨髓抑制、肝肾毒性等
其抑制作用是非特异性的，长期应用可导致：继 发性免疫缺陷 、 严重感染、 肿瘤
抗体为基础的免疫治疗
一、免疫血清
抗毒素血清、胎盘（丙种）球蛋白、抗菌免疫血清、抗病毒免疫血清、抗 淋巴细胞丙种球蛋白等
二、单克隆抗体（mAb）：用于靶向治疗等。 三、基因工程抗体：降低抗体的免疫原性
化学制剂 1、烷化剂：环磷酰胺 2、抗代谢药：激素：糖皮质激素 真菌代谢产物 1、 环孢素A：对T，尤其是TH有较好的选择性抑制作用 2、FK-506：其作用强于环孢素A10-100倍，且与环孢素A
有明显的协同作用。 中药及其有效成分 雷公藤多甙
适应症：免疫功能过高引起机体损害的患者
1、抗移植排斥 2、超敏反应性疾病：激素 3、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 4、感染性炎症：激素
3、细胞因子检测
可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功 能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。 ①免疫学方法：ELISA、RIA等。 ②细胞生物学方法
③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等
4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验
（1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损
免疫学技术在疾病诊断和治疗中的应用
免疫学技术在疾病诊断和治疗中的应用免疫学技术是一种以免疫现象为基础的科学技术，它能够识别和量化各种分子，包括蛋白质和抗体。
这些技术广泛应用于医疗领域，包括疾病诊断、预防和治疗，其中最常见的应用是用于检测和诊断感染性疾病以及其它检测身体免疫系统和器官功能的方法。
一般来说，免疫学技术分为两大类：免疫化学和免疫细胞学。
免疫化学用于识别和检测各种免疫相关的分子，比如抗体和病原体。
免疫细胞学则用于研究和识别免疫系统的不同细胞类型，对于一些自身免疫性疾病的治疗有着非常重要的作用。
在疾病诊断方面，免疫学技术可以用于监测疾病的存在和活动情况。
例如，通过血液检测可检测出人体中是否存在病原体，如病毒或细菌等。
另外，检测抗体的水平也可以用于判断某个病人是否感染过某种疾病或是否已经获得了这种疾病的免疫力。
这些检测都可以通过ELISA试剂盒和流式细胞术等免疫技术来完成。
除了诊断疾病之外，免疫学技术还能够用于治疗各种感染性和免疫性疾病。
例如，通过使用融合蛋白和霍乱毒素等技术，可以生产出人工合成的抗体，用于治疗感染性疾病。
还有一些目前正在研究中的免疫细胞治疗技术，例如CAR T细胞治疗，其使用T细胞经过改造的方法来识别和攻击癌细胞，被认为是一项有前景的癌症治疗技术。
除了在医疗领域中，免疫学技术也扮演了一个重要的角色，帮助我们对疾病和免疫系统的机制有更深的理解。
例如，免疫学技术可以用于在分子水平上研究疾病的发展过程，以及与疾病相关的生物标志物在细胞和分子层面上的作用。
这些资料为新型治疗药物和疾病预防提供了前沿的基础研究。
总结来说，免疫学技术在疾病诊断和治疗中的应用非常广泛。
这些技术在诊断病症和监测疾病进展方面起着至关重要的作用，同时还能够用于生产人工合成抗体和进行免疫细胞治疗等治疗方法。
免疫学技术不仅有助于我们更好地理解疾病的生物学机制，同时还为制定新型治疗方案提供了重要的数据。
免疫学技术在疾病诊断中的应用
免疫学技术在疾病诊断中的应用一、引言免疫学技术是一种应用免疫学原理，利用抗原-抗体反应进行检测分析的技术，广泛应用于疾病诊断和治疗等领域。
随着技术的发展，免疫学技术在疾病诊断中的应用越来越广泛，并且已经成为疾病诊断的重要手段之一。
本文将从原理、分类、应用等方面详细介绍免疫学技术在疾病诊断中的应用。
二、免疫学技术的原理免疫学技术基于抗原-抗体反应原理，其本质是利用人体内的免疫机制，通过检测不同情况下免疫反应的特异性和灵敏性，从而实现疾病的早期诊断。
在免疫学技术中，抗原是识别并被抗体所作用的物质，而抗体则是由机体产生的一种蛋白质，能够识别并与相关的抗原发生特异性反应。
通过检测样品中抗体或抗原水平的变化，可以诊断出各种疾病，例如肝炎、艾滋病、结核病、乙型流感、癌症等。
三、免疫学技术的分类免疫学技术可以按照不同的分类方式进行分析，常见的分类方式包括免疫捕捉试验（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）、免疫印迹技术、流式细胞术和免疫组织化学等。
（一）免疫捕捉试验（ELISA）免疫捕捉试验是一种多样化的技术，是运用固定化抗体捕捉特定抗原的方法，在固定化的抗体和加入试样的抗原之间发生特异性的抗原-抗体反应，从而检测样本中的抗原。
ELISA 技术广泛应用于医学、生物学、环境科学等领域，在疾病诊断和生命科学研究中占据着重要地位。
例如，ELISA 技术可以用于检测血清中的抗体，以监测感染的程度和治疗效果；也可以用于检测癌症标记物等。
（二）放射免疫测定法（RIA）放射免疫测定法是利用放射性核素标记抗原或抗体，通过固相法或溶液相法，检测样品中特定的抗原或抗体。
相比于其他技术，RIA 技术具有很高的敏感度和特异性，可以检测非常低浓度的抗原或抗体，因此在肿瘤标志物、药物浓度等检测中得到广泛应用。
（三）免疫印迹技术免疫印迹技术是一种利用特异性抗体对抗原分子进行检测和鉴定的技术。
它包括多个步骤，包括 SDS-PAGE 分离、蛋白质转移、蛋白质固定、非特异性结合、特异性结合和信号检测等。
免疫学技术在食品安全检测应用
多残留同时检测
发展多残留同时检测技术，实现在一 次检测中同时识别多种有害物质，提 高检测效率。
免疫学技术与其他技术联用
将免疫学技术与色谱、质谱等分离分 析技术相结合，提高检测的准确性和 可靠性。
自动化和智能化
开发自动化和智能化的免疫学检测技 术，降低人为操作误差，提高检测效 率和准确性。
检测方法
化学发光免疫分析法是一种新兴的免疫学检测方法，具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽等优点，适用于 粮食作物中多种真菌毒素的同时检测。
应用实例
国内外多个粮食检测机构已采用免疫学技术对粮食作物进行真菌毒素检测，有效防止了受污染粮食进入市场 和食品链。
05 免疫学技术优缺点及改进 方向
免疫学技术优点
发光免疫技术等。
根据应用领域分类
可分为临床诊断免疫学技术、生 物制品学免疫学技术、食品免疫
学技术和环境免疫学技术等。
02 食品安全检测现状及挑战
食品安全检测意义
保障公众健康
01
食品安全检测能够及时发现并防止食品中的有害物质对消费者
造成健康危害。
维护市场秩序
02
通过对食品的安全检测，可以确保市场上流通的食品符合国家
应用
用于食品中微生物、毒素、重金属等的快速检测。
优点
快速、简便、可现场检测。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
1 2
原理
将抗原或抗体与酶结合，形成酶标抗原或抗体， 通过酶与底物的显色反应来检测目标物质。
应用
用于食品中过敏原、激素、抗生素等的定量检测。
3
优点
高灵敏度、高特异性、可定量检测。
免疫学方法及其应用PPT课件
第一节 抗原与抗体
二、抗 体 2、抗体的基本结构
两条重链(H链) 440个氨基酸残基组成，分子量约50～70kD 二硫键(-S·S-)
两条轻链(H链) 220个氨基酸组成，分子量约22.5kD。
根据重链的氨基酸顺序同源程度的差异，可将Ig分为类和亚 类。人的免疫球蛋白共5类：IgG 、IgA 、Ig M、IgD和IgE
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第一节 抗原与抗体
一、抗 原
2、抗原的种类 按抗原性的完整与否及其在机体内刺激抗体产生的特点， 可分为完全抗原和不完全抗原。
（1）完全抗原与不完全抗原 ①完全抗原 既有免疫原性又有反应原性。即能刺激机体产生抗体，并 与产生的抗体在体内或体外(试管内)发生反应的抗原。 如细菌、病毒、外毒素、血清白蛋白、花粉蛋白、 ②不完全抗原（半抗原） 只有反应原性而没有免疫原性。即不能单独刺激机体产生 抗体，若与蛋白质或胶体颗粒结合，形成大分子复合物成 为完全抗原，则可刺激机体产生抗体。 如各种低分子量的药物、脂类和多糖等都属于不完全抗原。
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第一节 抗原与抗体
二、抗 体 4、人工制备抗体
（3）基因工程抗体（重组抗体）
在基因水平上对Ig分子进行切割、拼接或修饰，重新组装成的 新型抗体分子。。
特点：保留天然抗体的特异性和主要生物学活性，去除或减少 了无关结构，并可赋予抗体分子以新的生物学活性。
迄今已成功构建多种基因工程抗体，如人-鼠嵌合抗体、人源化 抗体、单链抗体(ScFv)、双特异性抗体(BsAb)及噬菌体抗体等。
2.免疫系统
免疫系统：具有自身的运行机制并可与其他系统相互 配合、相互制约，共同维持机体在生命过程中总的生 理平衡。
免疫系统的任务是消灭“异己”
“异己”来自两个方面: (1)外来的入侵者：