腺病毒的包装和感染PDF
腺病毒操作资料说明
腺病毒操作资料说明
1、AdEasy™ Adenoviral Vector System.pdf：这是过表达腺病毒（用于基因过表达）的操作说明书，作为操作指南；
2、AD-293 Cells.pdf：腺病毒包装细胞说明书，作为操作指南；
3、病毒滴度测定-针对有绿色荧光蛋白标记的病毒.doc：病毒滴度测定方法，作为操作指南；
4、病毒滴度测定-针对没有绿色荧光蛋白标记的病毒.doc：病毒滴度测定方法，作为操作指南；
5、Adeno-X Expression System 1 User Manual.pdf：这是过表达腺病毒（用于基因过表达）的操作说明书，作为操作指南；
6、腺病毒扩增和纯化手册.pdf：腺病毒扩增和纯化方法，作为理论学习
7、腺病毒包装、扩增、纯化、滴度测定及感染.doc：腺病毒包装、扩增、纯化、滴度测定及感染操作指南；
8、C0508磷酸钙法细胞转染试剂盒.pdf：磷酸钙转染方法；。
腺病毒操作手册
Shanghai GeneChem Co. Ltd 重组腺病毒操作手册(Version 2.0)上海吉凯基因技术有限公司 二〇〇九年二月地址：上海张江高科技园区蔡伦路 720 弄 1 号 408 室 电话：86-21-51320189 网址： 邮编：201203 传真：86-21-51320179 Email：service@Page 1 of 4 Shanghai GeneChem Co. Ltd 重组腺病毒实验系统腺病毒是一种的线型双链 DNA 无包膜病毒， 它的 DNA 和核心蛋白形成的内核， 蛋白外壳 是直径约 80nm 的正二十面体，由 240 个六 面体和 12 个位于正二十面体顶部的五面体 构成。
Genechem 重组腺病毒系统是将携带外源基 因的腺病毒穿梭质粒与携带腺病毒基因组的 包装质粒共转染 HEK293 细胞， 通过 Cre/loxP 系统的作用实现重组，产生重组腺病毒。
重组腺病毒能够表达较大的外源基因片段， 感染分裂和非分裂细胞，具有广泛的宿主。
GFP-adenovirus 感染的代表细胞――腺病毒可以感染绝大多数细胞TCA8113SGC-7901NRKPC-3Huh-7GliaRabbit Mesenchymal Stem CellsHuman Mesenchymal Stem CellRat Cardiac Fibroblasts地址：上海张江高科技园区蔡伦路 720 弄 1 号 408 室 电话：86-21-51320189 网址： 邮编：201203 传真：86-21-51320179 Email：service@Page 2 of 4 Shanghai GeneChem Co. Ltd 重组腺病毒操作过程一, 注意事项:1. 操作病毒时请尽量使用生物安全柜。
腺病毒感染
临床表现-呼吸系统
腺病毒感染引起的呼吸道感染主要发生在儿童中，大多数无症状或者 症状轻，常见疾病为：鼻炎、咽炎、扁桃体炎、支气管炎等。在6月-2岁 的婴幼儿可以发生致死性肺炎和毛细支气管炎，有人报道可以导致百日 咳样综合征。
实验室检测
腺病毒感染的儿童中几乎一半以上有白细胞增高，可超过15×10^9/L, 血沉高于正常，CRP 高于正常，而在其他病毒感染时，白细胞稍高或正 常 ，CRP 及血沉大部分正常，我国腺病毒3、7型肺炎时白细胞计数大多 不高，尿中可以出现微量蛋白质。
诊断
一 、临床诊断：腺病毒感染常常只能依靠临床诊断、体征和流行病学， 病毒诊断其实很重要，典型临床症状加流行病学史可初步诊断，但对于 散发的需确诊必须找到病原学诊断。 二 、病原学诊断：病毒分离以及抗体检测，检查标本可以来自咽拭子、 刮片、大小便、脑脊液及组织活检，大便因其排毒时间长，故其诊断意 义不如急性期采取标本处理。 三 、血清学检测：测得病人血清特异性抗体晚期较早期上升4倍或4倍以 上有诊断价值。
临床表现-泌尿系
出 血性膀胱炎：在儿童出血性膀胱炎的病人中，20-50 % 左右的患儿尿液 可分离出此病毒，以11 、21型多见，病人血清抗体上升，从尿液脱落细 胞可以找到腺病毒，临床表现以急性膀胱炎症状为主，尿痛、尿频、遗 尿、可伴随发热，在肾移植病人中可分离出病毒，故认为病毒可能非上 行感染所致，可能来自血液病毒。
病毒侵入细胞后引起至少3种作用。 1.溶解性感染：病毒侵入人细胞，通过溶解细胞作用，使细胞死亡。 2.慢性潜伏性感染：常在淋巴细胞内出现，潜伏感染时病毒量极少， 临床症状不明显，机制尚不明确。
腺病毒包装操作手册
汉恒重组腺病毒操作手册目录腺病毒安全使用和注意事项腺病毒储存与稀释的注意事项一、整体实验流程二、实验材料三、腺病毒包装和浓缩四、重组腺病毒滴度(PFU的测定五、重组腺病毒感染目的细胞六、重组腺病毒用于动物实验附1:汉恒生物腺病毒载体附2:腺病毒感染细胞最佳MOI的摸索(表达荧光的病毒附3:汉恒生物常见三种病毒感染目的细胞比较腺病毒安全使用和注意事项➢腺病毒安全使用注意事项(*非常重要!!!*1腺病毒相关实验请在生物安全柜(BL-2级别内操作。
2操作病毒时请穿实验服,佩戴口罩和手套,尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。
3操作病毒时需要特别小心病毒溅出。
如果操作时超净工作台有病毒污染,请立即用70%乙醇加1%的SDS溶液擦拭干净。
4接触过病毒的枪头、离心管、培养板及培养瓶请用84消毒液浸泡后统一处理。
5如实验过程中需要离心,应使用密封性好的离心管,必要时请用封口膜封口后离心。
6病毒相关的废弃物需要特殊收集,统一经高温灭菌后处理。
7实验完毕后请用香皂清洗双手。
➢腺病毒储存与稀释的注意事项1腺病毒的储存收到病毒液后若在短期内使用,可将病毒放置于4℃保存(一周内使用完最佳;如需长期保存请分装后放置于-80 ℃。
注:a.反复冻融会降低病毒滴度(每次冻融会使病毒滴度降低10%~50%,因此在病毒使用过程中尽量避免反复冻融。
汉恒生物对病毒已进行分装(200 μl/tube,收到后请直接放置-80℃冰箱保存即可。
b.若病毒储存时间超过6个月,汉恒生物建议在使用前重新测定病毒滴度(参见附表2-慢病毒滴度测定方法。
2腺病毒的稀释需要稀释病毒时,请将病毒取出置于冰浴融解后,使用PBS或培养目的细胞用的无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染混匀分装后置于4℃保存(一周内使用完最佳。
重组腺病毒是一种复制缺陷的腺病毒载体系统,在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。
重组腺病毒具有以下几个显著优点:感染范围广,几乎可以感染所有的细胞系、原代细胞和部分组织;感染效率高达100%,可全面超越其他病毒载体工具和脂质体转染;对外源基因容载能力大(可以高达8Kb;不整合基因组;滴度高,操作方便。
腺相关病毒包装手册
腺相关病毒（AAV）构建及包装操作手册目录一、AAV安全注意事项二、AAV储存和稀释注意事项三、AAV介绍四、汉恒生物AAV产品服务及载体信息与现货列表五、AAV整体实验流程六、实验材料七、AAV载体构建八、AAV包装九、AAV收集和纯化十、AAV滴度测定十一、AAV感染细胞测试十二、AAV用于动物实验（重磅干货，五星推荐）十三、案例分享附件1附件2一、AAV安全使用注意事项（*非常重要！！！*）1)AAV相关实验请在生物安全柜（BL-2级别）内操作。
2)操作病毒时请穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。
3)操作病毒时特别小心病毒溅出。
如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用70%乙醇加1%的SDS溶液擦拭干净。
接触过病毒的枪头、离心管、培养板、培养液请用84消毒液浸泡后统一处理。
4)如需要离心，应使用密封性好的离心管，如有必要请用封口膜封口后离心。
5)动物注射操作请在生物安全柜内（BL-2级别）完成。
6)病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌处理。
7)实验完毕用洗手液清洗双手。
二、AAV储存和稀释注意事项1.AAV的储存收到病毒液后若在短期内使用，可将病毒放置于4℃保存（一周内使用完最佳）；如需长期保存请分装后放置于-80℃。
注：a．反复冻融会降低病毒滴度（每次冻融病毒滴度会降低10%-50%），因此在病毒使用过程中应尽量避免反复冻融。
汉恒生物已对病毒进行了分装（200 l/tube），收到后请直接放置-80℃保存即可。
b．若病毒储存时间超过6个月，汉恒生物建议在使用前重新测定病毒滴度。
2.AAV的稀释需要稀释病毒时，请将病毒取出冰浴融解，再使用无菌PBS或生理盐水混匀分装后置于4℃保存(一周内使用完最佳)。
三、AAV介绍腺相关病毒（AAV）属微小病毒科( parvovirus)，为无包膜的单链线状DNA 病毒。
只有在腺病毒或者疱疹病毒等辅助病毒协助下，宿主才能产生具有感染性的AAV，所以AAV被称作腺相关病毒。
腺病毒感染的症状和传播途径
腺病毒感染的症状和传播途径腺病毒是一类常见的病毒，可以引起多种不同部位和系统的感染。
它主要通过空气飞沫和接触传播，具有较强的传染性。
本文将详细介绍腺病毒感染的症状以及传播途径。
一、腺病毒感染的症状1. 呼吸道感染腺病毒最常见的表现之一是呼吸道感染。
患者通常会出现流鼻涕、打喷嚏、喉咙发红等上呼吸道感染的典型症状。
有时还可能伴随轻度发热和咳嗽。
对于健康人来说，这种感染通常是自限性的，只需保持休息和充足饮水即可恢复。
2. 肠道感染除了呼吸道，腺病毒还可以引起肠道感染。
患者可能会出现恶心、呕吐、腹泻等消化系统相关的症状。
肠道感染通常在接触到被感染物品后出现，如未经处理的食物、被感染的水源等。
3. 结膜炎腺病毒还是引起结膜炎的常见病原体之一。
结膜炎主要表现为眼部充血、发痒、泪水过多和眼睛分泌黏液等。
通常情况下，结膜炎并不严重，几天到一周内可以自行缓解。
4. 身体红斑有时，腺病毒感染还可能引起全身皮肤出现红斑。
这种紫癜样皮疹通常在骨关节痛、发热和喉咙不适等其他症状之后出现。
对于年幼的儿童来说，这种红斑可能会伴随着手足口病的其他典型表现。
二、腺病毒感染的传播途径1. 空气飞沫传播腺病毒主要通过空气中的飞沫传播给其他人。
当一个患者咳嗽或打喷嚏时，他们会将含有腺病毒颗粒的细小飞沫释放到空气中。
其他人如果吸入这些含有病毒的飞沫，就有可能被感染。
2. 直接接触传播腺病毒也可以通过直接接触感染源传播给他人。
当一个患者体内存在病毒时，他们可能会将病毒通过手部接触的方式传递给其他人。
例如，一个带有腺病毒的人摸过鼻子或嘴巴后握手，这些病毒可能会残留在他们触摸过的物体上，并通过下一位接触该物体的人传播。
3. 粪-口传播腺病毒还可以通过粪便-口新方法进行传播。
当一个感染者不洁净的手部接触粪便后没有正确清洁双手，并进食、喝水或用污染物污染好的器皿时，其他人可能会受到感染。
因此保持个人卫生和勤洗手对于预防腺病毒传播非常重要。
4. 水源污染腺病毒还可以通过被感染的水源进行传播。
腺病毒包装技术原理
腺病毒包装技术原理腺病毒（Adenovirus）是一种线性双链DNA无包膜病毒，对分裂期细胞和非分裂期细胞均具有感染能力，且具有嗜上皮细胞性。
重组腺病毒载体是以腺病毒为基础发展起来的工具病毒载体，具有宿主范围广，免疫原性强，基因容量大，不与基因组整合，瞬时表达等特点。
重组腺病毒（AdV）是人血清5型腺病毒（Ad5），一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。
腺病毒缺失了早期表达基因序列E1和E3区。
E1是腺病毒复制所必须的，E1的缺失使其不能自身复制，只能依靠包装细胞如293A 细胞提供的反式互补进行复制扩增，以此保证腺病毒的安全性。
腺病毒呈无囊膜的球形结构,其病毒粒子在感染的细胞核内常呈晶格状排列,每个病毒颗粒包含一个36 kb的线性双链DNA,两端各有一个100~600 bp的反向末端重复序列(inverted terminal repeat, ITR), ITR的内侧为病毒包装信号,是病毒包装所需要的顺式作用元件。
基因组包含早期表达的与腺病毒复制相关的E1~E4基因和晚期表达的与腺病毒颗粒组装相关的L1~L5基因。
线状双股DNA与核心蛋白形成直径为60~65 nm的髓芯,被包裹于衣壳内。
衣壳呈二十面体对称,由252个直径8~10nm的壳粒组成,壳粒排列在三角形的面上,每边6个,其中240个为六邻体(非顶点壳粒) ,另12个为五邻体基底(顶点壳粒)。
每个六邻体是六邻体蛋白的同源三聚体,三聚体的六邻体分子有一个三角形的塔尖和五面体的基底,塔区由4个环构成即loop1、loop2、loop3、loop4,基底包含两个区域P1、P2区。
六邻体上的表位(epitope)是诊断不同血清型的标准,它包括哺乳动物腺病毒属的抗原成分,是病毒体对免疫选择压力最敏感的部位。
每个五邻体基底上结合着1根(哺乳动物腺病毒)或2根(禽腺病毒)纤维突起,这些纤维以五邻体蛋白为基底由衣壳面伸出,纤维顶端形成头节区,纤突有血清特异性,且含有负责体外血细胞凝集的种属特异性抗原决定位点。
腺病毒感染科普宣传PPT
腺病毒感染的误区
不需隔离
有些人认为腺病毒感染不需要隔离，实际上传播 性较强，感染者应适当隔离。
尤其是在家庭或学校环境中，避免交叉感染。
腺病毒感染的误区
疫苗误区
目前尚无针对腺病毒的特效疫苗，公众需了解这 一点。
预防措施依然是抵御腺病毒感染的主要手段。
谢谢观看
腺病毒感染科普宣传
演讲人：
目录
1. 什么是腺病毒？ 2. 腺病毒感染的症状有哪些？ 3. 如何预防腺病毒感染？ 4. 腺病毒感染的治疗方法 5. 腺病毒感染的误区
什么是腺病毒？
什么是腺病毒？
定义
腺病毒是一种常见的病毒，属于腺病毒科，能够 引起多种感染。
腺病毒主要影响呼吸系统、消化系统和眼睛等部 位。
腺病毒感染的常见症状包括发热、咳嗽、喉咙痛 、流感样症状等。
部分患者可能还会出现腹泻、呕吐等消化系统症 状。
腺病毒感染的症状有哪些？
严重症状
在某些情况下，腺病毒感染可能导致严重的肺炎 或其他严重并发症。
特别是在免疫力低下的人群中，风险更高。
腺病毒感染的症状有哪些？
儿童感染
儿童感染腺病毒的风险更高，症状可能更为明显 。
可饮用清水、淡盐水或电解质饮料。
腺病毒感染的治疗方法
就医建议
如症状严重或持续不改善，建议及时就医，进行 相关检查。
医生会根据具体情腺病毒感染的误区
非空气传播
很多人误认为腺病毒是通过空气传播的，实际上 它主要通过接触传播。
保持环境卫生和个人卫生是预防的关键。
如何预防腺病毒感染？
健康生活
保持健康的生活方式，增强免疫力，保证充足的 睡眠和均衡的饮食。
适度锻炼和减压也有助于提高身体抵抗力。
知识分享：腺相关病毒（AAV）表达系统
知识分享：腺相关病毒（AAV）表达系统【维真⽣物】提供AAV现货和AAV包装服务，已助⼒多位客户在顶级期刊发表⽂章。
产品说明书【详见维真⽣物官⽹→（腺相关病毒包装+腺相关病毒制备+腺相关病毒案例分享+腺相关病毒技术⼿册），或联系官⽹在线客服索要相关内容的链接。
】本产品仅限⽤于研究，严禁⽤于疾病诊断。
本产品仅供购买⽅内部研究使⽤，未经维真⽣物公司书⾯许可，严禁转售。
产品有限责任担保维真⽣物保证您收到的产品符合产品⽬录上的规格。
本担保规定了维真⽣物更换产品的责任。
维真⽣物不提供其他任何形式的对于产品商业或健康⽤途的保证。
维真⽣物不对任何由于使⽤或不正确使⽤本公司产品造成的直接、间接的、衍⽣的或偶然的损害所产⽣的后果负责。
腺相关病毒安全操作规范1. 请在BL2⽣物安全⼆级⽣物安全柜中操作病毒。
2. 操作病毒和转染细胞时，请务必穿着实验服，佩戴⼝罩和⼿套。
3. 请⼩⼼操作，避免产⽣⽓雾或飞溅。
被病毒污染的超净⼯作台，请⽴即⽤70%⼄醇加1% SDS溶液擦拭⼲净。
接触病毒的枪头、离⼼管、培养板、培养液请使⽤新鲜配制的10％漂⽩粉进⾏消毒操作后丢弃。
4. ⽤显微镜观察细胞感染情况时，请先拧紧培养瓶或盖紧培养板，⽤70%⼄醇擦拭培养瓶外壁后，显微镜下观察拍照。
观察完毕，请⽤70%⼄醇再次擦拭显微镜实验台。
5. 离⼼病毒时，应使⽤密封性好的离⼼管，或⽤封⼝膜封⼝后进⾏离⼼，请尽量使⽤组织培养室内的离⼼机。
6. 实验完毕脱掉⼿套后，请⽴即⽤肥皂和⽔清洗双⼿。
个⼈保护措施1. 使⽤⼀次性⼿套。
2. 在注射病毒或是其后的解剖时，使⽤⼀次性⼿术服或是相当的⾐物，如果是感染细胞时，可以穿着实验服。
3. 佩戴护⽬镜或是⾯罩。
4. 所有的操作应当是在 Class II ⽣物安全柜中进⾏。
如果实验条件不能满⾜，则应当在空⽓稳定的空间中操作，减少操作时间和病毒与外界接触的时间。
不慎接触病毒时的急救1. 病毒飞溅或是⽓溶胶与⼈体接触–眼，⽪肤或是粘膜⽤⼤量清⽔冲洗眼睛或是其他接触的部位⾄少15 分钟。
腺病毒包装、扩增、纯化、滴度测定及感染
腺病毒包装、扩增、纯化、滴度测定及感染腺病毒包装、扩增、纯化、滴度测定及感染一、包装1.包装细胞详情见AD-293 Cells.pdf，AdEasy? Adenoviral Vector System.pdf（P31-P32）2.细胞转染方法一、详情见Adeno-X Expression System 1 User Manual.pdf（P28-P29）C0508磷酸钙法细胞转染试剂盒.pdf3.病毒收集详情见AdEasy? Adenoviral Vector System.pdf（P34）二、扩增详情见Adeno-X Expression System 1 User Manual.pdf（P29-P30）三、纯化(i) 病毒上清（接一、包装3.病毒收集）.(ii) Add 51 ml of a 50% PEG 6000 solution.(iii) Add 21.7 ml of a 4 M NaCl stock solution.(iv) Add 23.3 ml of PBS. This will result in a final volume of 300 ml. The final PEG 6000 concentration will be 8.5% and the final NaCl concentration will be B0.3 M.(v) Distribute the sample as 150-ml aliquots in two 250-ml polypropylenewide-mouthed bottles.(vi) Store the bottles at 4 1C for 1.5 h. Mix contents every 20–30 min.(vii) Centrifuge bottles at 7,000g for 10 min at 4 1C using a Beckman fixed-angel JLA-10.500 rotor.(viii) After centrifugation, a white pellet should be visible.(ix) Carefully decant the supernatant and add 1.2 ml of 50 mM Tris-HCl, pH 7.4, perbottle. Resuspend the pellets byvigorously pipetting liquid up and down.(x) Vortex the bottles vigorously for 20–30 s to further resuspend the pellets.(xi) Transfer the vector suspension into screw-cap microfuge tubes in aliquots of 100 ml.(xii) Snap-freeze the tubes in crushed dry ice and store at -80 。
腺病毒感染的预防课件
若与腺病毒感染者有密切接触，应密切观察自身 健康状况。
必要时可进行病毒检测，确保自身健康。
如何预防腺病毒感染？
如何预防腺病毒感染？
保持个人卫生
勤洗手，使用肥皂和清水，特别是在吃饭前和如 厕后。
可使用含酒精的免洗洗手液作为补充措施。
如何预防腺病毒感染？
注意环境卫生
定期清洁和消毒常接触的物品和表面，特别是在 公共场所。
如流感疫苗可以降低呼吸道感染的风险。
还有哪些其他注意事项？
及时就医
若出现严重症状，应及时就医，以获取专业的治 疗和建议。
特别是在呼吸困难或高热不退的情况下。
还有哪些其他注意事项？
健康生活方式
保持良好的作息、均衡的饮食和适度的锻炼，有 助于增强免疫力。
良好的身体状态可有效预防病毒感染。
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什么是腺病毒感染？
传播途径
腺病毒通过直接接触、空气飞沫以及被污染的物 品传播。
病毒在体外环境中可以存活较长时间，容易在公 共场所传播。
什么是腺病毒感染？症状Fra bibliotek腺病毒感染的常见症状包括发热、咳嗽、喉咙痛 、流感样症状等。
部分患者可能出现腹泻或皮疹，严重病例可导致 肺炎。
谁需要关注腺病毒感染？
谁需要关注腺病毒感染？
腺病毒感染的预防
演讲人：
目录
1. 什么是腺病毒感染？ 2. 谁需要关注腺病毒感染？ 3. 何时采取预防措施？ 4. 如何预防腺病毒感染？ 5. 还有哪些其他注意事项？
什么是腺病毒感染？
什么是腺病毒感染？
定义
腺病毒是一种常见的病毒，能够引起多种疾病， 包括呼吸道感染、眼结膜炎和胃肠炎等。
腺病毒通常在人群密集的场所传播，如学校和托 儿所。
腺病毒感染诊疗指南PPT课件
02
诊断方法与标准
实验室检测
01 病毒分离培养
通过细胞培养方法，从患者标本中分离出腺病毒 ，并进行病毒鉴定。
02 抗原检测
利用特异性抗体进行免疫荧光或免疫酶染色，检 测患者标本中的腺病毒抗原。
03 核酸检测
采用PCR或实时荧光PCR等方法，检测患者标本 中的腺病毒核酸。
影像学表现
01 X线检查
诊断技术的创新
未来腺病毒感染的诊断将更加依赖于 高灵敏度、高特异性的检测技术，如 基于纳米技术的生物传感器、高通量
测序等。
疫苗研发与应用
随着疫苗研发技术的不断进步，未来 将有更多安全、有效的腺病毒疫苗问 世，为预防和控制腺病毒感染提供有
力武器。
个性化治疗策略
针对不同患者群体和病毒类型，将制 定更加个性化的治疗策略，包括精准 医疗和基因治疗等。
强调个人卫生习惯的重要性， 如勤洗手、戴口罩等，以降低 感染风险。
提供相关宣传资料或推荐权威 医学网站，供患者及家属深入 了解腺病毒感染相关知识。
心理干预和辅导技巧
评估患者的心理状态，及时发现焦虑 、恐惧等心理问题，采取针对性措施 进行干预。
提供心理辅导服务，如认知行为疗法 、放松训练等，以缓解患者的心理压 力。
06
总结回顾与展望未来
本次指南重点内容回顾
腺病毒感染的流行病学特征
介绍了腺病毒的传播途径、易感人群以及季节性变化等特 点。
临床表现与诊断
详细阐述了腺病毒感染的临床症状、体征以及实验室诊断 方法，包括病毒分离、血清学检测和分子生物学技术等。
治疗与预防
系统介绍了腺病毒感染的治疗措施，包括抗病毒治疗、免 疫调节和对症治疗等，同时强调了预防措施的重要性，如 疫苗接种、个人防护和公共卫生管理等。
腺病毒载体产品
产品——腺病毒产品（Adv）腺病毒载体质粒携带报告基因的腺病毒载体（Ad5、Ad5F35）携带治疗基因的腺病毒AdMax腺病毒载体包装系统腺病毒相关检测试剂腺病毒载体质粒在AdMax TM腺病毒载体包装系统中，Kit D为广大科研学者常选用的试剂盒之一。
为了方便研究者使用，本公司可单独提供该试剂盒中的pDC315、pDC316、pDC311、pDC312腺病毒载体质粒。
pDC315和pDC316的区别在于多克隆位点的差异，pDC311和pDC312与前两者的区别是无CMV和poly A，方便插入完整表达盒。
客户可根据质粒构建需要任意选择。
pDC315和pDC316载体质粒除了可以作为腺病毒包装的穿梭质粒外，还可以作为真核表达质粒。
pDC316-EGFP-U6 是siRNA通用腺病毒载体质粒。
它是以pDC316 质粒为骨架改造的，启动子是人U6 启动子，同时表达EGFP，便于示踪和估计转导效率。
请点击下面链接：>>> 腺病毒载体穿梭质粒pDC315（AdMax Kit D）说明书[pdf]>>> 腺病毒载体穿梭质粒pDC316（AdMax Kit D）说明书[pdf]>>> 腺病毒载体穿梭质粒pDC311（AdMax Kit D）说明书[pdf]>>> 腺病毒载体穿梭质粒pDC312（AdMax Kit D）说明书[pdf]>>> 腺病毒载体siRNA穿梭质粒pDC316-EGFP-U6说明书[pdf]目录号产品名称Promoter Poly A 浓度规格价格Ad0001 pDC316-EGFP-U6 hU6 --- 1ug/ul 10ul 4000.00PD-01-25 pDC311 无无1ug/ul 10ul 3000.00PD-01-26 pDC312 无无1ug/ul 10ul 3000.00PD-01-27 pDC315 mCMV SV40 1ug/ul 10ul 3000.00PD-01-28 pDC316 mCMV SV40 1ug/ul 10ul 3000.00携带报告基因的腺病毒载体（Ad5、Ad5F35）公司提供3种报告基因（EGFP，lacZ，Luc）和2种血清型（Ad5, Ad5F35)的腺病毒载体产品。
腺病毒感染健康教育PPT课件
如何预防腺病毒感染？ 环境消毒
定期对家庭和公共场所进行清洁和消毒，特 别是经常接触的表面。
可以使用含氯的消毒剂进行表面清洁。
如何预防腺病毒感染？
健康生活方式
保持良好的睡眠、均衡的饮食和适量的运动 ，以增强免疫力。
健康的生活方式可以帮助抵御感染，提高身 体的抵抗力。
腺病毒感染的治疗与管理
腺病毒感染的治疗与管理
医生可能会根据病史和症状安排必要的检测。
何时寻求医疗帮助？ 避免自我诊断
不要自行判断病情或随意用药，专业医生的意见 至关重要。
不恰当的用药可能导致病情加重或产生耐药性。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
如何预防腺病毒感染？
如何预防腺病毒感染？
基本卫生习惯
勤洗手、避免与感染者密切接触、保持良好 的个人卫生是预防的有效措施。
使用肥皂和水洗手至少20秒，或使用含酒精 的洗手液。
遵循医生的建议，必要时进行相关检测。
谢谢观看
谁容易感染腺病毒？
高风险人群
婴幼儿、老年人及免疫系统较弱的人群更容 易受到腺病毒感染。
在群体中，特别是在学校和托幼机构，腺病 毒传播风险较高。
谁容易感染腺病毒？
健康状况的影响
有慢性疾病或近期接受过免疫抑制治疗的人 ，感染风险更大。
对于这些人群，感染后可能出现更严重的并 发症。
谁容易感染腺病毒？ 季节性因素
腺病毒感染健康教育
演讲人：
目录
1. 什么是腺病毒感染？ 2. 谁容易感染腺病毒？ 3. 何时寻求医疗帮助？ 4. 如何预防腺病毒感染？ 5. 腺病毒感染的治疗与管理
什么是腺病毒感染？
什么是腺病毒感染？
腺病毒概述
腺病毒是一种常见的病毒，能够引起多种感染， 影响呼吸系统、胃肠道、眼睛和尿路等。
CARex和PTDtat基因重组5型腺病毒的包装及鉴定
分 别 引入 Ｋ ｐ ｎ Ｉ 与 Ｘ ｈ ｏ Ｉ 酶 切 位 点 。上 游 引 物 ： ５ 一
Ｇ Ｇ Ｃ Ｃ Ａ Ｔ Ｇ Ｇ Ｃ Ｇ Ｃ Ｔ Ｃ Ｃ Ｔ Ｃ Ｔ Ｇ Ｔ Ｇ Ｃ Ｔ Ｔ Ｃ Ｇ Ｔ Ｇ Ｃ － ３ ， 下 游 弓Ｉ 物： ５ 一 Ｃ Ｔ Ｃ Ｇ Ａ Ｇ Ｔ Ｉ Ｔ Ａ ｒ Ｉ Ｔ Ｉ Ｔ Ｇ Ａ Ａ Ｇ Ｇ Ａ Ｇ Ｇ Ｇ Ａ Ａ Ａ Ｃ Ｇ １ ７ ＂ －
Ｒ ３ ７ ３ ． ９ 中 图分 类 号
Ｏ Ｐ ｔ ｉ — ＭＥ Ｍ 培养基 、 Ｔ Ｒ Ｉ ｚ ｏ ｌ 、 逆 转 录
试剂 盒购 自美 国 Ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ｇ ｅ ｎ 公 司； 无 内毒素 高纯 度 质
粒快速提取试剂盒购 自北京艾德莱生物公司； 其余 试剂 为 国产分 析纯 。
１ ． １ ． ２ 质 粒、 菌株 、 细 胞 株 腺 病 毒 穿 梭 质 粒
ｐ Ａ ｄ ｔ ｒ ａ ｃ ｋ — Ｃ Ｍ Ｖ、 骨架质粒 ｐ Ａ ｄ ｅ ａ ｓ ｙ 一 １ 、大 肠 杆 菌 Ｂ Ｊ ５ １ ８ ３ 、 ２ ９ ３ Ａ细胞 由安徽 医科 大学 生 物化 学教 研 室 周 海胜 副教授 惠赠 ； 大肠杆菌 Ｘ Ｌ １ ． ｂ ｕ ｌ ｅ 、 Ｄ Ｈ ５ ｃ ￣ 由本 实 验室保 存 。
ｆ ｅ ｃ ｔ ａ ｍｉ ｎ ｅ ～２ ０ ０ ０
、
量制备重组腺病毒质粒 ， 经过 Ｐ ａ ｃ Ｉ 线性化后 回收 ， 在脂 质体 介导下转染 ２ ９ ３ Ａ细胞 ， 通 过倒置荧 光显微 镜观察 绿色荧 光 蛋 白（ Ｇ Ｆ Ｐ ） 的表 达来 确定 病毒在细胞内复制 ， 当细胞发 生病
１ ． ２ 方 法
文 献标 志码 Ａ 文 章 编 号 １ ０ ０ ０—１ ４ ９ ２ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ７—０ ７ ３ ４— ０ ５
腺病毒载体构建ppt课件
安全性好 无需整合进宿主细胞基因组中，目的基因在宿主细胞
基因组外游离状态下表整达理版，课整件合突变致癌可能性小。
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几种病毒载体的区别
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腺病毒载体大多以5型（Ad5）、2型（Ad2）为基础
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重组系统由2种质粒 构成：一、包含全
部（或右侧大部分） 腺病毒基因组DNA 的大质粒，即骨架 质粒
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二、小的穿梭质粒，其带有
目的基因的表达盒以及表达
盒两侧的与大质粒上的目的
基因拟插入部位同源序列
（左右臂）
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包装和其他蛋白表达翻译所必须的，但其对细胞毒性也是很强的。
E2蛋白涉及AdDNA复制
E3蛋白对抗宿主的抗病毒防御系统
E4蛋白调节有效的晚期基因转录
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腺病毒分类
第一代腺病毒载体：一般将E1或E3基因缺失的腺病毒载体成为一代
载体。此类型载体在未纯化时可引发机体产生较 强的炎症反应和免疫反应，纯化后可安全使用， 体内表达周期可达4周。（科研、临床应用最广泛 ，一般常用Ad5型腺病毒）
第二代腺病毒载体：一般将E2A或E4基因缺失的腺病毒载体成为二代
载体。产生的免疫反应较弱，其安全性和载体容 量有所改进，但病毒包装难度和出毒滴度下降厉 害，应用局限。
第三代腺病毒载体：缺失了全部的（无病毒载体等）或大部分腺病毒
基因，仅保留ITR和包装信号序列。这一载体系 统需要一个腺病毒突变体作为辅助病毒。
•腺病毒可见于人、鸡、牛、狗、鼠、猪和猴中，并各自具 有严格的寄主特异性，不感染他种动物。对人类可引起感冒 症状、呼吸系统不适等。
腺病毒的包装步骤 自己总结 很详细
Adenoviruses Expression System1、从NCBI网站上查找相应基因（如小鼠KL14基因）的编码区，即CDS序列。
2、根据KLF14 CDS设计相应的引物，PCR来扩增KLF14的编码序列，即KLF14的cDNA3、将扩增出来的cDNA序列连接到PGEM-Teasy载体，蓝白斑筛选，挑取白斑摇菌，提质粒，EcoR I 酶切鉴定，然后送测序4、测序正确后用限制性内切酶把cDNA切下来连接到pcDNA3.1载体(很重要的一种表达载体)上，做报告基因实验。
5、双荧光报告基因检测其对下游的靶基因启动子有作用以后，用合适（HindIII和XhoI）的限制性内切酶将连接到pcDNA3.1上的KLF14 cDNA切下来，凝胶回收，同时也切pAdTrack-CMV 回收。
把KLF14 cDNA连接到pAdTrack-CMV载体上。
6、在包装腺病毒之前要先用western检测一下连接到pAdTrack-CMV的KLF14的cDNA能否表达出蛋白。
把第5步连接好的质粒用转染试剂转染293A细胞，然后收细胞（RAPI裂解液，加蛋白酶抑制剂），提取蛋白，做western，杂标签抗体（Myc或Flag）。
只有在293A细胞有表达之后才可以继续包装。
7、在第5步最好多提取一些连接好的KLF14 cDNA-CMV质粒，浓度高点。
然后用PmeI酶切，让这个质粒线性化（大概要切10ug左右，50ul的体系）。
然后跑胶回收切开的质粒，一般PmeI都可以完全切开，大概要回收3-4ug。
8、将回收的线性化产物加入到BJ5183感受态细菌中（该细菌中已经含有pAdEasy-1质粒），电转化让其发生重组。
然后在kanamycin抗性的平板上筛选，就按一般的热激，涂板的方法转化就可以。
因为重组后的pAdTrack-CMV-KLF9+ pAdEasy-1非常大，大约41.5kb，所以要差不多在37度细菌孵箱中生长16-20h才可以，即使长出菌落，也是非常小的那种。
腺病毒的包装系统是什么？
腺病毒的包装系统是什么？腺病毒包装系统按照重组方式主要分为两种，一种在细菌（BJ5183）中重组，为AdEasy TM腺病毒重组系统，另外一种在QBI-293A细胞中重组，为AdMax腺病毒重组系统。
一、 AdEasyTM腺病毒重组系统AdEasyTM腺病毒重组系统1998年由He Tong Chuan等改造的一种非常简单易用的双质粒系统，腺病毒基因组质粒pAdEasy-1和转移质粒pShuttle-CMV，pAdEasy-1质粒是Ad5腺病毒基因组，其中删除了E1基因（1-3533bp）和E3基因（28130-30830bp），E1基因的功能区在293A细胞中得到补充；pShuttle-CMV质粒包含目的基因插入位点、Ad5基因组左右同源臂、Ad5末端重复序列（ITR）、包装信号序列、PacI双酶切位点和卡那霉素抗性。
第一步：将目的基因cDNA插入转移质粒pShuttle-CMV；第二步：将得到的质粒用PmeI或ECORI内切酶线性化；第三步：pShuttle-CMV和pAdEasy-1共同转化大肠杆菌BJ5183，双质粒在BJ5183中发生重组，卡那霉素筛选重组子，并酶切鉴定。
因为BJ5183有recA重组酶活性但同时又缺失介导细菌本身基因组重组的酶，可以用于质粒重组和转化，得到候选重组子；第四步：将酶切鉴定正确的重组子转化DH5a感受态，在DH5a 中扩大培养，质粒提取，鉴定，PacI酶切线性化，暴露其反向末端重复序列（ITR）。
第五步：线性化质粒回收后转染293A细胞，产生重组病毒颗粒，收毒，后续纯化浓缩。
另外，也可以采用单质粒两步法重组，即将AdEasy转入感受态细胞BJ5183中，再将pADEasy-BJ5183制备成感受态细胞，将构建好的穿梭质粒pShuttle-CMV用PmeI线性化后直接转化pADEasy-BJ5183感受态细胞，卡那霉素筛选重组子，并酶切鉴定，线性化后转染293A细胞。
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腺病毒的包装，纯化和感染
技术背景：Adeasy系统利用了腺病毒具有的高感染能力，可高度浓缩等优点，并破坏了腺病毒基因组中的早期基因E1，使之成为较为安全、高效的病毒载体。
利用带有E1基因的293细胞作为包装细胞，通过倍比扩增，富集病毒颗粒，并通过CsCl梯度离心，透析进行分离纯化。
对绝大多数的细胞株可以达到近乎100％的感染效率。
但需要指出的是Adeasy同样具有所有病毒载体或转染试剂都不可避免的细胞毒性问题。
所需试剂：
●293细胞；
●重组好的腺病毒质粒；
●Pac I限制性内切酶；
●质粒回收相关试剂；
●细胞培养、转染相关试剂；
●TBS：10mM Tris,0.9%NaCl,pH8.1;
●40%CsCl：28.45g CsCl溶于42.7ml的TBS中，4度保存；
●15%CsCl：9.085g CsCl溶于47.69ml的TBS中，4度保存；
●Beckman离心管：14*89mm，SW41转头；
●Polybrene(sigma)，10mg/ml；
●透析袋：Spectrum Co.（成卷供应，带少量甘油，硫化物与重金属），
MW=8000~14400；
●灭菌甘油。
操作流程：
1.293细胞（E1-transformed human embryonic kidney cells在转染前24小时接种
于1或2个60mm培养盘中，使之在转染时细胞汇合率为50-70%；
2.在转染前，用Pac I处理目的质粒（一般一个60mm细胞盘需要6µg DNA）。
处理后质粒用乙醇沉淀并重悬于20µl无菌水中；
3.用PEI或其他转染试剂将6µg Pac I处理过的质粒转染细胞；
4.8个小时后移去混合液，加入4ml DMEM完全培养液（10%CBS，1%
Pen/Strep）；
5.在转染后7到10天用细胞刮（而不是胰酶）将细胞从瓶中刮下并移入50ml
锥形管。
离心后将细胞重悬于2.0ml PBS或全培液中。
于液氮中冻结细胞，37℃水浴中溶解，剧烈振荡。
此步骤共进行4次。
注意保存时不要反复冻融，可保存于-20℃；
6.将293细胞以50-70%的汇合率铺于60mm培养盘中，以30-50%的体积比加
入含病毒上清液。
在感染后2-3天即可看到明显的细胞裂解或CPE现象；7.在有1/3到1/2的细胞脱离漂浮时，通常是感染后3-5天收集病毒。
可进一
步通过Western blot或PCR（5µl病毒上清加上10µl PCR-grade Protease K，55℃消化1小时，然后煮沸样品5min，离心后取1-2µl进行PCR反应）证实重组腺病毒的存在；
8.按步骤5的方法收集病毒上清。
在这种情况下一般至少可收集到107infectious
particles/ml的病毒。
每轮的扩增应能提高一个数量级的梯度；
9.为了进一步扩增，将步骤8获得的病毒上清进一步感染100mm培养盘的细
胞，按步骤5的方法收集病毒，并进而将其感染150mm细胞培养盘中的293细胞，以获得足够量的病毒；
10.将15%CsCl和40%CsCl加入Beckman离心管中制备CsCl梯度溶液；
11.将最终富集病毒颗粒的病毒上清滴加于CsCl梯度溶液上；
12.超速离心，30000rpm，4度离心16个小时；
13.离心后，应有两条带。
位置较高，颜色较弱的条带主要为腺病毒空壳，不具
感染能力；位置较低，颜色较亮的条带含有我们需要收集的活病毒颗粒。
用16号针头将这一条带收集；
14.在TBS中透析一小时，随后在含有10％甘油的TBS中透析两次，每次一小
时；
15.将纯化的腺病毒分装于EP管中；
16.在Eppendorf Biophotometer中测量透析液中的总蛋白量，1µg病毒蛋白相当
于4×109病毒颗粒；
17.长期保存于-70度中，短期可保存于4度，切忌反复冻溶；
18.由于腺病毒对不同细胞株的感染效率存在差异，且考虑到病毒颗粒的细胞毒
副作用，通常通过梯度感染的方法确定所需的病毒用量。
以相对细胞数1：1，10：1，100：1，1000：1的病毒颗粒感染靶细胞；加入相对培养液体积1：1000的Polybrene。
在37度下平板离心30分钟；
19.感染8~12小时后换液。
将含有病毒的培养液小心移入含有消毒液的废液缸
中，加入适量全培液。
参考文献：
1．A，V ol.95,pp.2509–2514,March1998，A simplified system for generating recombinant adenoviruses.
2．Current Protocols in Human Genetics(2004)12.4.1-12.4.25.。