叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定是指测定植物体内叶绿素的含量，主要有荧光法、比色法和HPLC法。
1. 荧光法：是利用叶绿素对荧光的强烈敏感性，用来测定叶绿素的一种方法，是生物体叶绿素含量测定最常用的一种方法。
其原理是根据叶绿素在紫外光照射下产生的荧光强度，可以分析出叶绿素的含量。
2. 比色法：是利用叶绿素和其他物质的吸收光谱差异，从而计算叶绿素含量的一种方法。
其原理是，在不同浓度的叶绿素溶液中添加相应量的比色剂，当叶绿素的浓度达到一定时，会产生色谱变化，根据色谱变化的大小，可以计算出叶绿素的浓度。
3. HPLC法：也称为高效液相色谱法，是一种新型的分析技术，用于测定叶绿素的含量。
其原理是将叶绿素以溶剂溶解后，通过高效液相色谱仪将叶绿素从溶剂中分离并测定叶绿素的含量。
实验10叶绿素含量的测定
叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶 剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。 叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长旳光有最大吸收， 用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液旳吸光度(也 称为光密度)，再根据叶绿素在该波长下旳吸收系数即 可计算叶绿素含量。 利用分光光计测定叶绿素含量旳根据是Lambert-Beer 定律，即当一束单色光经过溶液时，溶液旳吸光度与溶 液旳浓度和液层厚度旳乘积成正比。其数学体现式为： A=Kbc 式中： A为吸光度；K为吸光系数；b为溶 液旳厚度；c为溶液浓度。
叶绿素a、b旳丙酮溶液在可见光范围内旳最大吸收峰 分别位于663、645nm处。叶绿素a和b在663nm处旳吸 光系数（当溶液厚度为1cm，叶绿素浓度为g·L-1时旳 吸光度）分别为82.04和9.27；在645nm处旳吸光系数 分别为16.75和45.60。根据Lambert-Beer定律,叶绿素 溶液在663nm和645nm处旳吸光度（A663和A645）与 溶液中叶绿素a、b和总浓度（a+b）（Ca、Cb 、Ca十 b，单位为g·L-1），旳关系可分别用下列方程式表达：
叶绿素含量旳测定
一.试验原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱旳吸收， 利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度， 即可用公式计算出提取液中各色素旳含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液旳吸光 度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即 A＝αCL.式中：α百分比常数。当溶液浓度以百 分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质 旳吸光系数。多种有色物质溶液在不同波长下 旳吸光系数可经过测定已知浓度旳纯物质在不 同波长下旳吸光度而求得。
漏斗、大试管
三. 试验环节
叶片洗净、吸干、去大叶脉 ↓
称0.5g叶用丙酮研磨 ↓
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定方法
以下是 8 条关于叶绿素含量测定方法：
1. 嘿，你知道吗，分光光度法就可以测定叶绿素含量哦！就像用魔法镜一样，能把叶绿素的秘密都照出来。
比如说，在实验室里，小明拿着样本放在分光光度计前，专注地操作着，那认真的样子，简直酷毙啦！
2. 还有一种方法叫荧光分析法呢！哇哦，这就像是给叶绿素装上了信号灯，一测就知道它的情况啦！想象一下，小红在那里调试着仪器，期待着结果，那心情肯定很激动呀！
3. 说起来，高效液相色谱法也是很厉害的哟！这不就是给叶绿素来个精准的“体检”嘛！记得有一次，小王看着色谱图出来，脸上露出了惊喜的表情，嘿，肯定是发现了什么有趣的结果！
4. 重量法也能行呀！这就像称一称叶绿素有多重一样。
就像那次和小李一起做实验，看着天平上的数字，我们都在猜叶绿素到底有多少呢！
5. 浸提法也不错呢！感觉就像是给叶绿素泡个舒服的“澡”，然后就能知道它在里面的情况。
那次和朋友们一起用这个方法，大家边做边讨论，可有意思了！
6. 哇塞，难道你不知道还有纸层析法呀！这简直就是给叶绿素来一次奇妙的“旅行”嘛！上次看到老师熟练地操作着，那技术，真牛！
7. 原子吸收光谱法也能测定哦！这是不是跟找宝藏一样神奇呀！就像我们有一次好奇地看着仪器，在想它怎么就能找到叶绿素的秘密呢。
8. 近红外光谱法也很管用呢！想想看，就像是给叶绿素照了个特别的“照片”。
我记得有一次和同学一起用这个方法，大家都觉得好新奇呀！
总之呀，这些方法都各有各的奇妙之处，都能帮助我们了解叶绿素含量呢！。
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，叶绿素含量的测定无论是在生理上，还是在选育品种以及抗性研究等方面都很有必要。
叶绿素含量的经典测定方法是光电比色法，即用光电比色计以无机有色溶液为标准进行比色测定。
该方法不仅要配制无机标准溶液，而且不能对溶液中不同色素分子进行定量测定；分光光度法则不需配制标准溶液，又可对溶液中不同色素分子进行定量测定，已得到广泛应用。
一、原理分光光度法测定叶绿素含量，就是利用叶绿素 a和叶绿素b吸收光谱的不同，测定各特定峰值波长下的光密度，再根据色素分子在该波长下的消光系数，计算出浓度。
叶绿素 a、叶绿素b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于 663nm、 645nm处，同时已知叶绿素a和叶绿素b在663nm处的消光系数分别为82.04和9.27；在645nm处的消光系数分别为16.75和45.60。
这样叶绿素a和叶绿素b的浓度与他们在663nm、645nm处的光吸光密度的关系可用下式表示：D663=82.04C a+9.27C bD645=16.75C a+45.60C b式中D663和D645分别为叶绿素溶液在波长663nm、645nm处的光密度；C a、C b分别为叶绿素a和叶绿素b的浓度，单位g.·L-1。
解方程可得到：计算：C a=12.7D663-2.59D645C b=22.9D645-4.67D663C a+b=20.3D645+8.04D663C a ,C b分别为叶a和叶b的浓度，C a+b为叶a和叶b的总浓度，单位为mg·L-1所测材料单位重量或单位面积的叶绿素含量可按下式进一步计算：叶绿素含量（mg·L-1或mg·dm-2）= C*VA*1000式中C：叶绿素浓度（mg·L-1）；V：提取液总体积（ml）；A：叶片鲜重（g）或面积（dm2）二、丙酮乙醇混合液法提取叶绿素：药品：丙酮：乙醇按1：1体积混合成浸提液仪器：分光光度计-1-1-1方法：丙酮乙醇混合液法1．将丙酮、无水乙醇按1：1比例配成混合浸提液。
植物叶绿素含量的测定
植物叶绿素含量的测定
植物叶绿素含量的测定
一、实验目的
1. 了解叶绿素的含量对植物生长发育的影响。
2. 使用叶绿素测定仪器，熟练掌握叶绿素测定的操作方法。
二、实验原理
叶绿素的含量是植物生长发育的重要参数，它主要受到植物品种、生长环境等因素的影响，叶绿素的测定能了解植物发育及分析植物选择性。
叶绿素测定仪器以叶绿素的吸收波长在670nm处，测定叶绿素的吸收值，从而计算出叶绿素的含量。
三、实验材料
1. 叶绿素测定仪器；
2. 分装标准液；
3. 各种植物叶片；
4. 纸巾；
5. 光学玻璃管（空管，分装标准液管）；
6. 吸管；
7. 水桶；
8. 烧杯；
9. 烧瓶；
四、实验步骤
1. 将叶片裁切为小块，放入烧杯中；
2. 把六个光学玻璃管清洗干净；
3. 用纸巾擦干玻璃管，将空管和标准液管装入叶绿素测定仪中；
4. 在烧杯中加入适量水，把叶片浸泡；
5. 将烧杯中的叶片倒入叶绿素测定仪中，盖上盖子；
6. 按照设备的操作指南，进行实验操作；
7. 记录实验数据；
8. 计算叶绿素含量；
9. 将实验数据做出结果表格。
五、实验结果
植物叶绿素含量（μg/g）
植物 | 叶绿素含量
---- | ----
植物1 | 10.2
植物2 | 15.3
植物3 | 8.1
植物4 | 12.6
植物5 | 13.2
植物6 | 11.4
六、结论
通过实验，可以得出不同植物叶绿素含量的不同，从而了解叶绿素含量对植物生长发育的影响。
叶绿素含量的测定48353
叶绿素含量的测定一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A 与其中溶质浓度C 和液层厚度L 成正比,即A ＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm 时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得.如果溶液中有数种吸光物质,则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a 、b 和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A ，并根据叶绿素a 、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度.在测定叶绿素a 、b 时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰.已知叶绿素a 、叶绿素b 的80％丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm 处。
已知在波长663nm 下叶绿素a 、叶绿素b 在该溶液中的吸光系数的分别为82.04和9。
27；在波长645nm 处的吸光系数分别为16。
75和45.60。
根据加和性原则列出以下关系式：A663=82。
04Ca+9.27Cb （1） A645=16。
76Ca+45。
60Cb （2）式（1)（2）A 663nm 和A645nm 为叶绿素溶液在663nm 和645nm 处的吸光度，C a C b 分别为叶绿素a 、叶绿素b 的浓度，以mg/L 为单位。
解方程（1)（2）组得C a =12。
72 A 663—2.59 A 645 （3） C b =22。
88 A 645—4.67 A 663 (4） 将C a +C b 相加即得叶绿素总量C TC T ＝ C a 十C b ＝20.29A 645-8.05 A 663 (5）从公式（3）、（4）、（5)可以看出，,就可计算出提取液中的叶绿素a 、b 浓度另外,由于叶绿素a 叶绿素b 在652nm 的吸收峰相交,两者有相同的吸光系数（均为30。
叶绿素含量测定方法
叶绿素含量测定方法一、引言叶绿素是植物体内的一种重要的生物色素，对于植物的光合作用和生长发育有着至关重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究植物生理生态学、环境保护等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的叶绿素含量测定方法。
二、材料与仪器1. 乙醇：纯度为95%。
2. 醋酸：纯度为99%。
3. 氯仿：纯度为99%。
4. 石油醚：纯度为95%。
5. 甲醛：纯度为37%。
6. 碳酸钠：分析纯。
7. NaOH溶液：浓度为0.1mol/L。
8. 蒸馏水：去离子水或超纯水均可。
9. 离心管、比色皿、移液管等实验器具。
三、方法1. 乙醇法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入95%乙醇中，放置在室温下静置20-24小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的95%乙醇；（5）用分光光度计在663nm和645nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
2. 醋酸法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入80%醋酸中，放置在室温下静置24小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的80%醋酸；（5）用分光光度计在652nm和665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
3. 氯仿-甲醛法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入95%甲醛中，在水浴中加热至90℃保持10分钟；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的氯仿，并振荡混合均匀后静置10分钟；（5）用分光光度计在649nm和665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
4. 石油醚-乙醇法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入石油醚中，放置在室温下静置2-3小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的95%乙醇；（5）用分光光度计在663nm和645nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
5. NaHCO3-NaOH法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入NaHCO3-NaOH缓冲液中，在冰箱中保持暗处理2小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，并用蒸馏水稀释至一定浓度；（5）用分光光度计在665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定
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[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定篇一 : 叶绿素含量测定叶绿素含量的测定根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A值与其中溶质浓度C以及光径L成正比，即A,aCL。
,)各种有色物质溶液在不同波长下的吸光值可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下的吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素提取液中叶绿素a、b含量，只需测定该提取液在2 个特定波长下的吸光度度值，并根据叶绿素a与b在该波长下的吸光系数即可求出各自的浓度。
在测定叶绿素a、b含量时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长应选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a、b的80 ,丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm 和645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的比吸收系数分别为82.04 和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.60，可根据加和性原则列出以下关系式:A663=82.04Ca +9.27Cb………………A645=16.75Ca+45.6Cb………………式中A663、A664分别为波长663nm和645nm处测定叶绿素溶液的吸光度值;Ca、Cb分别为叶绿素a、b的浓度。
解联立方程、可得以下方程:Ca=0.0127A663-0.00269A645…………Cb=0.0229A645-0.00468A663…………如把叶绿素含量单位由g/L改为mg/L，、式则可改写为:Ca=12.7A663-2.69A645…………Cb=22.9A645-4.68A663…………叶绿素总量CT=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663……叶绿素总量也可根据下式求导A652=34.5×CT由于652nm为叶绿素a与b在红光区吸收光谱曲线的交叉点，两者有相同的比吸收系数，因此也可以在此波长下测定一次吸光度求出叶绿素总量: CT=A652/34.5CT=A652×1000/34.5………因此，可利用、式可分别计算叶绿素a与b含量，利用式或式可计算叶绿素总量。
叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A 与其中溶质浓度C 和液层厚度L 成正比，即A ＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm 时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a 、b 和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A ，并根据叶绿素a 、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a 、b 时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a 、叶绿素b 的80%丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm 处。
已知在波长663nm 下叶绿素a 、叶绿素b 在该溶液中的吸光系数的分别为82.04和9.27；在波长645nm 处的吸光系数分别为16.75和45.60。
根据加和性原则列出以下关系式：A663=82.04Ca+9.27Cb （1） A645=16.76Ca+45.60Cb （2）式（1） （2）A 663nm 和A645nm 为叶绿素溶液在663nm 和645nm 处的吸光度，C a C b 分别为叶绿素a 、叶绿素b 的浓度，以mg/L 为单位。
解方程（1） （2）组得C a =12.72 A 663—2.59 A 645 (3) C b =22.88 A 645—4.67 A 663 (4) 将C a +C b 相加即得叶绿素总量C TC T ＝ C a 十C b ＝20.29A 645—8.05 A 663 (5) 从公式（3）、（4）、（5）可以看出，，就可计算出提取液中的叶绿素a 、b 浓度另外，由于叶绿素a 叶绿素b 在652nm 的吸收峰相交，两者有相同的吸光系数（均为30.5），也可以在此波长下测定一次吸光度（A 652）而求出叶绿素a 、叶绿素 b 总量所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按下式进行计算： C T ＝5.341000652 A (6)有叶绿素存在的条件下，用分光光度法可同时测出溶液中类胡萝卜素的含量。
叶绿素含量的测定实验报告
叶绿素含量的测定实验报告一、实验目的1、掌握叶绿素含量测定的原理和方法。
2、学会使用分光光度计测定叶绿素的含量。
3、了解叶绿素在植物光合作用中的重要作用。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，包括叶绿素 a 和叶绿素 b 两种类型。
叶绿素在特定波长的光下有吸收峰，利用分光光度计分别测定叶绿素提取液在 665nm 和 649nm 波长下的吸光度，根据朗伯比尔定律，可以计算出叶绿素 a 和叶绿素 b 的含量，进而得出叶绿素的总含量。
叶绿素 a 和叶绿素 b 在 665nm 和 649nm 波长下的吸光系数分别为8331 和 1675，在 649nm 波长下的吸光系数分别为 2454 和 4466。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的菠菜叶片。
2、实验仪器分光光度计、电子天平、研钵、漏斗、容量瓶、移液管、剪刀等。
3、实验试剂95%乙醇、石英砂、碳酸钙。
四、实验步骤1、材料准备选取新鲜的菠菜叶片，用剪刀剪碎，称取 05g 左右，放入研钵中。
2、研磨提取在研钵中加入少量石英砂和碳酸钙，以及 10ml 95%乙醇，充分研磨成匀浆。
3、过滤将研磨好的匀浆用漏斗过滤到 25ml 容量瓶中，用少量 95%乙醇冲洗研钵和漏斗，将滤液收集到容量瓶中，直至刻度线，摇匀。
4、吸光度测定以 95%乙醇作为空白对照，用分光光度计分别测定提取液在 665nm 和 649nm 波长下的吸光度，每个波长重复测定 3 次，取平均值。
五、实验结果与计算1、记录吸光度值665nm 波长下的吸光度平均值记为 A665，649nm 波长下的吸光度平均值记为 A649。
2、计算叶绿素含量叶绿素 a 的浓度（Ca，mg/L）＝ 1395×A665 688×A649叶绿素 b 的浓度（Cb，mg/L）＝ 2496×A649 732×A665叶绿素的总浓度（C，mg/L）＝ Ca ＋ Cb叶绿素含量（mg/g）＝（C×V）／（W×1000）其中，V 为提取液总体积（ml），W 为叶片鲜重（g）。
叶绿素含量的测定
一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A ＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a、叶绿素b的80%丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm处。
已知在波长663nm下叶绿素a、叶绿素b在该溶液中的吸光系数的分别为和；在波长645nm 处的吸光系数分别为和。
根据加和性原则列出以下关系式：A663=+ （1）A645=+ （2）式（1）（2）A663nm和A645nm为叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度，C a C b分别为叶绿素a、叶绿素b的浓度，以mg/L为单位。
解方程（1）（2）组得C a= A663— A645 (3)C b= A645— A663 (4)将C a+C b相加即得叶绿素总量C TC T ＝ C a 十C b ＝— A 663 (5)从公式（3）、（4）、（5）可以看出，，就可计算出提取液中的叶绿素a 、b 浓度另外，由于叶绿素a 叶绿素b 在652nm 的吸收峰相交，两者有相同的吸光系数（均为），也可以在此波长下测定一次吸光度（A 652）而求出叶绿素a 、叶绿素 b 总量所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按下式进行计算： C T ＝5.341000652⨯A (6)有叶绿素存在的条件下，用分光光度法可同时测出溶液中类胡萝卜素的含量。
叶绿素含量的测定具体方法
一、叶绿素的测定：乙醇提取比色法，参考陈建勋、王晓峰等方法，有改动。
将实验材料去除大主脉，在0.0001的天平上称取0.5g左右的叶片至于50ml离心管中，依次加入25ml95%的乙醇密封，在黑暗条件下室温提取24-36h，将提取液稀释一定的倍数（根据具体情况而定），随后在UV754N紫外可见分光光度计，波长665、649、470nm下分别进行比色。
根据各波长的OD 值按照李合生的方法计算叶绿素a、b 和类胡萝卜素的浓度（mg·L-1），根据求得的浓度计算出各色素含量（mg·g-1鲜重表示）。
C a=13.95D665－6.88D649
C b=24.96D649－7.32D665
C x.c=(1000D470－2.05Ca－114.8Cb)/245
色素在叶片中的含量(mg /g)=色素浓度(mg /L)×提取液总体积(m l)×稀释倍数/样品质量(g)。
叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定：
1实验仪器：高级型分光光度计，离心机，电子天平，剪刀，研钵，漏斗，移液管。
2实验试剂：丙酮，石英砂。
3实验材料：植物叶片。
4实验步骤：
（1）色素的提取：取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎块，秤取0.5g放入研钵中加纯丙酮5ml ，少许石英砂，研磨成匀浆，，再加入80%丙酮5ml ，将匀浆转入离心管，并用适量80%丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后弃沉淀，上清液用80%丙酮定容至20ml。
（2）测定OD值：取上述色素提取液1ml，加80%丙酮4ml稀释后转入比色杯中，以80%丙酮为对照，分别测定663nm、645nm的OD值。
（3）计算：按照公式计算叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a+b的浓度，再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中色素的含量。
（4）公式：ρa=12.7A663—2.69A645；
ρb=22.9A645—4.68A663；
ρ（a+b）=ρa+ρb =8.02A663 +20.21A645
注意：ρ代表叶绿素浓度，单位：mg/L 。
1.由于植物叶子中含有水分，故先用丙酮进行提取，以使色素提取液中丙酮的最终
浓度近似80% 。
2.由于叶绿素a、b的吸收峰很陡，仪器波长稍有变差，就会是结果产生很大的误
差，因此最好能用波长较正确的高级型分光光度剂。
测定植物叶绿素含量的方法
测定植物叶绿素含量的方法
植物叶绿素是一种广泛存在于植物、藻类和一些细菌中的绿色色素，能够在吸收光子的过程中将光能转化为化学能。
因此，测定植物叶绿素含量是衡量植物光合作用效率的重要指标之一。
1. 乙醇提取法
将待测叶片粉碎后加入适量的95%乙醇中，放置于暗处浸泡数小时或过夜，然后离心收集上清液。
测定上清液吸光度，通过比较不同波长下的吸光度值，可计算出叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量。
将待测叶片粉碎后加入1.5mL 80%乙醇和0.5mL 1mol/L HCl的混合液中，振荡10分钟后加入玻璃珠摇匀，含有叶绿素的乙醇溶液将变为红褐色。
用0.22µm微孔滤纸过滤，取上清液，用分光光度计测定吸光度值后计算叶绿素含量。
3. 醋酸铜法
将待测叶片加入0.05%醋酸铜溶液中，用滚轴摇匀10分钟后过滤，取上清液后测定吸光度并计算叶绿素含量。
4. 液相色谱法
将待测叶片加入甲醇或乙腈中，使用高效液相色谱仪分析样品中的叶绿素和类胡萝卜素含量。
这种方法需要更为精确的仪器和技术，但可以同时测定多种色素。
无论使用哪种方法测定植物叶绿素含量，都需要注意以下几点：
1. 样品采集应在相同的时间、地点和光照条件下进行，以保证结果可比性。
2. 需要控制乙醇、醋酸铜等试剂用量、摇匀时间和过滤条件等因素，以获得准确的结果。
3. 对于不同种类和部位的植物，可能需要针对性地选择不同的测定方法，并对结果进行修正和比较。
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定方法有多种，下面列举几种常用的方法：
1. 酸醇提取法：将待测样品中的叶绿素提取到酸醇溶液中，然后用紫外可见分光光度计测定其吸光度，根据叶绿素和酸醇溶液之间的摩尔吸光系数，计算出叶绿素的含量。
2. 差示吸光度法：将待测样品中的叶绿素提取到有机溶剂中，然后用紫外可见分光光度计分别测定样品在630 nm和680 nm两个波长下的吸光度差，再根据已知浓度的标准曲线进行计算。
3. 荧光法：通过叶绿素在受激发时发射的荧光进行测定。
将待测样品中的叶绿素悬浮于缓冲溶液中，用荧光分光光度计测定其发射光谱，根据标准曲线计算叶绿素的含量。
4. 高效液相色谱法（HPLC）：将待测样品经过酸醇提取或其他方式提取叶绿素，然后用高效液相色谱进行分离和定量分析。
这些方法各有优缺点，选择合适的方法需要根据实际的研究目的和实验条件来确定。
叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定ﻫ一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A 与其中溶质浓度C 与液层厚度Ｌ成正比,即A ＝αCL式中:α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位,液层厚度为1ｃｍ时,α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质,则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总与。
这就就是吸光度的加与性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a 、b 与类胡萝卜素的含量,只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A,并根据叶绿素a 、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a 、b 时为了排除类胡萝卜素的干扰,所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a 、叶绿素b 的8０%丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于6６３、６45nm 处。
已知在波长66３nm 下叶绿素a 、叶绿素ｂ在该溶液中的吸光系数的分别为８2.04与９、27;在波长645n ｍ处的吸光系数分别为1６、75与45.60。
根据加与性原则列出以下关系式:A663=82、04Ca+9、2７Ｃb (1) A645＝16、76Ca+4５、6０Cb (２)式(1) (2)A 6６３nm 与Ａ６45nm 为叶绿素溶液在66３nm 与６45n ｍ处的吸光度,C ａ C b 分别为叶绿素a 、叶绿素b 的浓度,以m ｇ/L 为单位。
解方程(1) (2)组得Ｃa =12.72 A 663—2、59 A 64５ (3) C b =22、８８ A ６４５—4、67 Ａ６63 (4) 将Ｃa +Ｃb 相加即得叶绿素总量C ＴC T ＝ C a 十C b ＝20、２９A 645—8、0５ Ａ66３ (5)从公式(３)、(4)、(5)可以瞧出,,就可计算出提取液中的叶绿素ａ、b 浓度另外,由于叶绿素ａ 叶绿素b 在６5２ｎｍ的吸收峰相交,两者有相同的吸光系数(均为３0、５),也可以在此波长下测定一次吸光度(A 652)而求出叶绿素a 、叶绿素 b 总量所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按下式进行计算: C T ＝5.341000652 A (６)有叶绿素存在的条件下,用分光光度法可同时测出溶液中类胡萝卜素的含量。
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叶绿素含量的测定
一、原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A 与其中溶质浓度C 和液层厚度L 成正比，即A ＝αC L
式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm 时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a 、b 和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A ，并根据叶绿素a 、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a 、b 时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a 、叶绿素b 的80%丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm 处。
已知在波长663nm 下叶绿素a 、叶绿素b 在该溶液中的吸光系数的分别为82.04和9.27；在波长645nm 处的吸光系数分别为16.75和45.60。
根据加和性原则列出以下关系式：
A663=82.04Ca+9.27Cb （1） A645=16.76Ca+45.60Cb （2）
式（1） （2）A 663nm 和A645nm 为叶绿素溶液在663nm 和645nm 处的吸光度，C a C b 分别为叶绿素a 、叶绿素b 的浓度，以mg/L 为单位。
解方程（1） （2）组得
C a =12.72 A 663—2.59 A 645 (3) C b =22.88 A 645—4.67 A 663 (4) 将C a +C b 相加即得叶绿素总量C T
C T ＝ C a 十C b ＝20.29A 645—8.05 A 663 (5) 从公式（3）、（4）、（5）可以看出，，就可计算出提取液中的叶绿素a 、b 浓度另外，由于叶绿素a 叶绿素b 在652nm 的吸收峰相交，两者有相同的吸光系数（均为30.5），也可以在此波长下测定一次吸光度（A 652）而求出叶绿素a 、叶绿素 b 总量
所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按下式进行计算： C T ＝
5
.341000
652 A (6)
有叶绿素存在的条件下，用分光光度法可同时测出溶液中类胡萝卜素的含量。
Licht-enthaler 等对Arnon 进行了修正，提出了 80%丙酮提取液中3种色素含量的计算公式：
C a ＝12.21A 663—2.59 A 646 (7)
C b =20.13 A 646—5.03A 663 (8) Cx.c ＝
229
10427.31000470b
a C C A -- (9)
式中：C a C b 分别为叶绿素a 、叶绿素b 的浓度； Cx.c 为类胡萝卜素的总浓度；A 663 A 646 A 470 分别为叶绿素提取液在波长663nm 646nm 470nm 下的吸光度。
由于叶绿素在不同溶剂中的吸收光谱有差异，因此，在使用其他溶剂提取色素时，计算公式也有所不同。
绿素a 、叶绿素b 在95%乙醇中最大吸收峰的波长分别为665nm 和649nm,类胡萝卜素为470nm,可据此列出以下关系式；
C a ＝13.95A 665—6.8A 649 (10)
C b =24.96 A 649—7.32A 665 (11) Cx.c ＝
248
8.11405.21000470b
a C C A -- (12)
二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料
新鲜（或烘干）的植物叶片。
（二）仪器设备 1. 分光光度计；2. 电子顶载天平（感量0.01g ）；3. 研钵；4. 棕色容量瓶；5. 小漏斗；6. 定量滤纸；7. 吸水纸；8. 擦境纸；9. 滴管。
（三）试剂
1.96％乙醇（或80％丙酮）。
2.石英砂。
3.碳酸钙粉。
三、实验步骤
1. 取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。
2. 称取剪碎的新鲜样品0.2g ，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml ，继续研磨至组织变白。
静置3～5min 。
3. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml 棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
4. 用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。
直至滤纸和残渣中无绿色为止。
最后用乙醇定容至25ml ，摇匀。
5. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm 的比色杯内。
以95％乙醇为空白，在波长665nm 、649nm 下测定吸光度。
四、实验结果计算与分析
按公式 (10) 、 (11) 、 (12) （如用80%丙酮，按公式7、8、9）分别计算绿素a 、叶绿素b 和类胡萝卜素的浓度（mg/L ）。
(10) 、 (11)式相加即得叶绿素总浓度。
求得色素的浓度后再按下式计算组织中个色素的含量（mg/L 鲜质量或干质量表示）： 叶绿素含量（mg/g ）=
1000
⨯⨯⨯W N
V C
式中：C 为色素含量(mg/L);V 为提取液体积 (mL)；N 为稀释倍数；W 为样品鲜质量或干质量(g)；1000即1L=1000ml 。
注意事项
(1) 为了避免叶绿素光解，操作时应在弱光下进行，淹没时间应尽量短些。
(2) 叶绿体色素提取液不能 浑浊。
可在710nm 或750nm 下测量吸光度，其值应小于当波长为叶绿素a 吸收峰时吸光之哦的5%，否则应重新过滤。
(3)用分光光度计法测定叶绿素含量，对分光光度计的波长精确度要求较高。
如果波长与原吸收峰波长相差1nm,则叶绿素a 的测定误差为2%，叶绿素b 为19%，使用前必须对分光光度计的波长进行校正。
校正方法除按仪器说明书外，还应以纯的叶绿素a 和叶绿素来校正（表2-12-1）
表2-12-1叶绿素含量测定记载表。