树突状细胞的分离纯化

DC的来源和分布
DC分布全身各组织脏器（除脑组织外）。 langgerhans cells（LC） ，分布于表皮、胃肠道上皮 interstitial DC，分布于心、肝、肺、肾等脏器 follicular dendritic DC（FDC），分布于淋巴结滤泡区 interdigitating cell（IDC ），胸腺依赖区和胸腺髓质
Discussion
斯坦曼获得诺贝尔医学奖说明了现在科学 界对通过免疫治疗各种疾病是十分有信心 的。 免疫磁珠方法选择性很强，但选择性强的 话干扰就变大了，我们可以在这一方面入 手。
References
• 唐岩，唐军民，李银生，伊焕发，戴燕。 免疫磁珠技术在分离人外周血树突状细胞 中的应用。解剖学通报，2003 • 陈向荣，石汉平。树突状细胞的分离纯化 与鉴定。上海免疫学杂志，2001 • 伊焕发，唐 岩，甄昱，唐军民，孙红亚。 人外周血 CD4+树突状细胞的纯化及鉴定。 解剖科学进展，2003
免疫磁珠的分离原理
抗CD3磁球 磁球 加入B和 细 加入 和T细 胞中 磁球结合T细 磁球结合 细 胞 磁架进行分离
正向选择 负向选择
人外周血树突细胞分离纯化
T细胞 NK细胞 单核细胞的去除
CD4+ 血液树突状细胞的直接 、阳性选择
T细胞 NK细胞 单核细胞的去除 NK细胞
1.取新鲜的人抗凝外周血 , 用密度梯 1.取新鲜的人抗凝外周血 度离心法从中分离获得单个核细胞 2.加入阻断剂及连有半抗原的抗体 2.加入阻断剂及连有半抗原的抗体 3.离心 3.离心 4.加MACS磁珠标记的抗半抗原抗体 4.加MACS磁珠标记的抗半抗原抗体 5.细胞分离柱冲洗 5.细胞分离柱冲洗
DC的应用
• 通过不同形式的肿瘤抗原致敏的DC体内注 射后 可诱导出特异性抗肿瘤免疫应答 ,但肿 瘤患者DC功能均存在一定缺陷 ,应用肿瘤 的各种抗原 ,诸如肿瘤特异性抗原、肿瘤相 关抗原及完全性细胞抗原 ,以各种手段修饰 DC制成疫苗 ,以此免疫荷瘤宿主 ,可产生抗 肿瘤免疫。
DC分离纯化方法
•谢谢
Steinman
Steinman因他在“树突状细胞及其在适应性 免疫系统方面作用的发现”取得成就，获 得2011年诺贝尔生理学或医学奖的1/2.
• 拉尔夫·斯坦曼于麦吉尔大学学习生物学和化学获 得学士学位后，曾就读于美国哈佛大学医学院， 并于1968年获得医学博士学位。1970年起就职于 洛克菲勒大学，他在1973年提出了树突状细胞的 概念，其时他在赞威尔·A·科恩的实验室做博士后。 1988年起任该大学免疫学教授，同时担任其免疫 学和免疫疾病中心主任 。 • 虽然专家并不同意斯坦曼依靠自己的治疗方案把 寿命延长了4.5年这种说法，但斯坦曼实验室的同 事这样相信（好同事呀……）。斯坦曼得的是胰 腺癌，一般说来，只有不到5%的人能够多活1年。
树突状细胞
• 树突状细胞(dendritic cell , DC)是Steinman 在 1973 年首先发现 ,是目前所知的功能最 强的抗原提呈细胞（APC）。它的表面表 达丰富的与抗原呈递有关的MHCⅠ 类和 Ⅱ 类分子以及多种共刺激分子 ,可能高效地摄 取、加工处理和呈递抗原。 成熟DC能有效激活初始型T细胞，DC处于 启动、调控、并维持免疫应答的中心环节。
CD4+ 血液树突状细胞的直接 、阳性选择
1.将富含树突状细胞的悬液离心 1.将富含树突状细胞的悬液离心 2.加磁珠标记的CD4单克隆抗体 2.加磁珠标记的CD4单克隆抗体 3.离心 3.离心 4.分离柱冲洗 4.分离柱冲洗 冲出即为CD4标记的树突状细胞 冲出即为CD4标记的树突状细胞
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用FITC 标记HLA-DR, 与表达HLA-DR 细胞结合,通过与 对照组相比去除假阳性率 M1, M2为所测样本阳性细胞百 分比。在 PBMC 中HLA-DR+细胞占13%左右( 图1) ,而在 纯化的CD4+DC细胞中HLA-DR 的表达率达到80%以上 (图1) 。
• 物理法：1.根据细胞的黏附性进行分离 • 2.根据胞的大小比重进行分离
• 免疫法：淘汰法、流式细胞术法、磁性细 胞分离术
பைடு நூலகம் 免疫磁珠技术原理
• 免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠 的特异性单抗相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相 连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞 由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不 在磁场中停留，从而使细胞得以分离。 • 免疫磁珠法分为阳性分离法和阴性分离法： 阳性分离法－磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞 阴性分离法－磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细 胞为所需细胞