琼脂糖凝胶电泳注意事项

电泳槽
4、EB染色
溴化乙锭是一种扁平分子，可以嵌入核酸 双链的配对碱基之间。在紫外线照射EBDNA复合物时，出现不同的效应。 注意：严格区分污染区和非污染区，不把污 染区的物品拿到非污染区，碰过EB的手套 要及时丢弃！
EB染胶区
5、成像拍照
Tanon-2500数码凝胶图像分析系统把 图像摄录、处理、打印一体化。采用高 分辨率CCD，高质量、高清晰度，保证 摄录凝胶图像在低照度下的灵敏 度、不 掉失条带。
2、点样！
根据样品不同可分两种点样体系： A、样品+6Xloading buffer B、样品可直接点样（如ssp） 最后记得点marker，并摆正胶的位置
点样
Fra Baidu bibliotek
3、电泳！
点完样后连接电源，设置好电源的参数， 开始电泳。当溴酚兰的带（蓝色）的移动 至一定长度即可停止电泳。
电压要求：≤20V/CM胶，在样品出孔用 低压（3V/CM，15min），然后调回标准 电压，跑出的条带较好。
四、Tanon Tanon-2500 数码凝胶图像 分析仪的使用
1.使用前要注意清洁，以免影响胶图的清 晰度。
2.照胶时尽量减少开紫外灯的时间。 3.拍照时先关摄像头再关紫外灯，不可颠
倒，严格按照照胶的流程进行。 4.照好的胶及时丢弃。
• 3.点完样后及时盖上胶垫，注意不要盖反。
• 4.点电泳前最好检查待用胶是否合格；点电泳 时要对准胶孔，尽量点完所有的样。
• 5.点完样勿忘点marker并摆正胶位，电泳仪 正负极不要插反，电泳槽的盖子要盖紧。
三、EB染色
1.切胶要准，取胶要稳，泡胶要慎，避免 EB溅起。
2.碰到EB的手套要及时丢弃。 3.EB液要适时跟换，盘子要清洗。 4.抹布要严格区分，不可交叉使用。
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☺什么是电泳？
带电颗粒在电场作用下，向着 与其电性相反的电极移动，称 为电泳。 生物大分子如蛋白 质,核酸,多糖等大多都有阳离 子和阴离子基团,称为两性离 子在电场中,带电颗粒向正极 或负极迁移,迁移的方向取决 于它们带电的符号。
☺电泳有几类？
按分离原理的不同，电泳分为4类: 移动界面电泳 区带电泳 等电聚焦电泳 等速电泳
• 3.倒胶前胶托一定要洗干净，并擦干；倒胶 时要待胶冷到一定温度摇匀尽量不要产生气 泡。若胶液的温度太高要顶在胶托防止胶托 变形。
二、点样电泳
• 1.96孔塑料板要干净，loading要点均匀，控 制在1~2ul的量，并做好对应标记。
• 2.加样时，枪头要上紧，吸样均一准确，排液 时吸头不要有残留。
Tanon-2500数码凝胶图像分析 系统
6、胶图分析
以SBT-PCR为例，主要做A、B、DR三个 位点，每个位点条带大小不同.
一、配胶
• 1.电子称的使用，要时刻注意保持电子称的 精确性，保持清洁，根据不同的浓度的胶称 琼脂糖。
• 2.加TAE的量要适当，以免配出来的胶太薄 导致胶孔太浅或浓度太低。
☺琼脂糖凝胶电泳原理
琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、 鉴定DNA、RNA分子混合物的方法， 以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分 子在泳动时的电荷效应和分子筛效应， 达到分离混合物的目的。
☺琼脂糖凝胶电泳的操作
操作步骤
配胶
点样
电泳
成像拍照
EB染色
胶图分析
、配胶
按所要分离的DNA分子的大小，称取适量的琼 脂糖粉末，放入锥形瓶，加适量1×TAE电泳缓 冲液; 然后置微波炉内加热摇匀至完全溶化呈透明状， 适当冷却后倒入胶托; 胶完全冷凝后放入电泳槽，电泳槽里的缓冲液必 须没过胶面。