选修三1.1DNA重组技术的基本工具的教案

《DNA重组技术的基本工具》教案设计

当外源DNA侵入时，会用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。（限制性）

由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶（简称限制酶限制酶从哪提取出来的？限制酶的作用是什么？

生：分布：主要在微生物中

作用：能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（专一性），并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸间的磷酸二酯键断开.（黑体字重点讲解）

师：重点讲解专一性（即一种限制酶只能切割特定的核苷酸序列）

磷酸二酯键：（图示并带领学生简要复习下DNA分子的结构，并且明确磷酸二酯键的位置）

师：动态展示:“限制性内切酶作用过程”

讲解“什么叫黏性末端？”什么叫平末端？

举例：大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别

GAA TTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末端。

SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端。

2.由此引出DNA连接酶

3.“分子缝合针”又叫基因针线——DNA连接酶

师：1.种类：根据来源的不同一类是从大肠杆菌中获得的DNA连接酶（E·coliDNA连接酶）只能连接具有互补配对粘性末端的双链。另一类是从T4噬菌体中分离出来的（T4DNA连接酶）：即可缝合粘性末端，又可缝合平末端。但是连接平末端的效率比较低。（原因可选择性的补充，）

2.连接部位：磷酸二酯键。

3.结果：两个相同的末端的连接。（板书）

这部分学生自然联想到的是我们学过的DNA聚合酶，所以要作以区分：由于时间的限制可以当做作业让学生以如下表格作一区分：

三、“分子运输车”又叫基因的运输工具——基因进入受体细胞的载体

师：要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入受体细胞的工具就是运载体。作为基因工程的载体需要怎样的条件呢？思考讨论下列问题：

1、从化学组成来看，载体应含有什么成分？

2、能否用SARS病毒作为基因载体？

3、作为载体，若没有切割位点将怎样？

4、携带目的基因的载体是否进入了受体细胞，如何鉴定？

5、假如目的基因导入受体细胞后不能复制，将怎样？

总结：作为载体的必要条件：

1.能自我复制------能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；

2.有一个至多个限制酶切位点-----能与目的基因结合

3.有遗传标记基因----便于观察

4.对受体细胞无害、易分离---安全、比较容易得到

图片展示：认识常用的载体——质粒

质粒是基因工程常用的载体，一种裸露的、结构简单、独立于染色体或细菌拟核之外，能自我复制的小型环状双链DNA分子，对宿主细胞没有影响，主要存在于细菌和酵母菌体内。其中最常用的是大肠杆菌质粒。

提问：质粒作为运载体的条件？

1、能自我复制

2、具有一个或多个限制酶切点

3、具有遗传标记基因

4、对受体细胞无害、易分离

5、大小适合，便于操作

知识巩固：

1.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ A ）

A.同种限制酶

B. 两种限制酶

C..同种连接酶

D. 两种连接酶

2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是（ D ）