细胞工程第五章生物制品生产改
大学细胞工程考试题及答案
大学细胞工程考试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 细胞工程主要涉及的细胞类型包括以下哪一项？A. 细菌B. 植物细胞C. 动物细胞D. 所有以上选项答案：D2. 下列哪项技术不属于细胞工程的范畴？A. 细胞培养B. 基因编辑C. 组织工程D. 热力学分析答案：D3. 在细胞培养中，通常使用哪种物质作为细胞生长的基质？A. 琼脂B. 纤维素C. 明胶D. 以上都是答案：D4. 细胞融合技术在哪个领域有重要应用？A. 制药B. 农业C. 生物燃料生产D. 所有以上选项答案：D5. 下列哪项不是细胞工程中常用的细胞培养方法？A. 悬浮培养B. 单层培养C. 共培养D. 热处理答案：D6. 细胞工程中的“细胞分裂”通常指的是什么？A. 细胞的物理分离B. 细胞的生长C. 细胞的增殖D. 细胞的分化答案：C7. 在动物细胞工程中，常用的细胞融合诱导剂是什么？A. 聚乙二醇B. 氯化钠C. 乙醇D. 过氧化氢答案：A8. 植物细胞工程中，哪种技术可以用来生产次生代谢产物？A. 组织培养B. 细胞培养C. 基因编辑D. 细胞融合答案：B9. 下列哪项不是细胞工程中常用的细胞标记技术？A. 免疫荧光B. 放射免疫分析C. 流式细胞术D. 电子显微镜答案：D10. 在细胞工程中，哪种细胞器对于蛋白质的合成至关重要？A. 核糖体B. 线粒体C. 高尔基体D. 内质网答案：A二、填空题（每题2分，共20分）11. 细胞工程是一种应用________和________手段，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的生物技术。
答案：细胞培养；遗传操作12. 在植物细胞工程中，通过________技术可以诱导植物细胞分化出完整的植株。
答案：组织培养13. 动物细胞培养中，________是决定细胞能否生存和增殖的重要因素。
答案：营养条件14. 细胞工程在医学领域的应用包括________、________和生产生物制品等。
细胞工程智慧树知到答案章节测试2023年济宁医学院
第一章测试1.下列哪个不是细胞工程的研究对象?（）。
A:酵母B:动植物细胞核C:原生质体D:动物胚胎答案:A2.下列哪项不是细胞工程的特点?（）。
A:理论性B:前沿性C:应用性D:争议性答案:A3.下列哪项不是细胞工程发展经历的阶段?（）。
A:诞生期B:探索期C:缓慢发展期D:快速发展期答案:C4.1907年，从蝌蚪脊索中分离出神经嵴组织，并在淋巴液中成功培养几周，开创了组织培养的先河的是生物学家（）。
A:HaberlandtB:KohlerC:RouxD:Harrison答案:D5.克隆动物是属于（）。
A:组织与器官修复技术B:新品种培育技术C:生物制品生产技术D:动植物快速繁殖技术答案:D第二章测试1.下列细胞工程实验室设置的原则有误的是（）。
A:要求严格保持无菌环境B:实验室一般应建在通风效果较好的位置C:细胞工程实验室应具有无菌操作、培养与观察、制备、清洗与消毒、储藏等功能D:无菌操作室应划分为更衣间、缓冲间与操作间答案:B2.植物细胞工程与动物细胞工程实验室设置最大的区别为（）。
A:无菌环境要求的严格程度B:温度的控制要求C:光照时间与强度的控制要求D:墙面及地面设施的要求答案:C3.下列哪个设置属于细胞工程实验所必须的？（）。
A:超净台B:荧光定量PCR仪C:超速离心机D:酶标仪答案:A4.下列动物细胞常放置在下列哪种仪器中进行培养?（）。
A:电热干燥箱B:光照培养箱C:恒温震荡培养箱D:二氧化碳培养箱答案:A5.埃博拉病毒是一种能够引起人类和灵长类动物产生埃博拉出血热的烈性传染病病毒，死亡率高达50%-90%之间。
目前对埃博拉病毒病尚无特效治疗方法，根据实验室生物安全标准，埃博拉病毒的研究需要在下列哪种级别的实验室开展？（）A:P4实验室B:P1实验室C:P3实验室D:P2实验室答案:A6.下列对细胞工程实验室的生物安全要求说法正确的是？（）。
A:实验使用的器皿需采用专门的高压消毒袋盛放，并在清洗前先进行高压消毒B:所有操作均采用专门的器械吸取，不能口吸C:着专门实验服D:操作前后要消毒答案:BCD7.实验中常常将动物细胞置入-20度冰箱中长期储藏。
第5章 细胞融合-2012
5.3 细胞融合的建立和发展
植物方面： 1937年，Michel用硝酸钠处理原生质体使之融合，但那时还 未用酶法大量分离原生质体，因此，植物细胞融合的起步比动 物细胞融合要迟10年左右。 1960年，Cocking 成功地用酶法制备了大量的原生质体，大 大促进了植物原生质体的融合研究。 1972年，Carlson等首次将粉兰烟草和郎氏烟草两个异种的体 细胞融合成功。 1974年，高国楠发现聚乙二醇能促进植物原生质体融合。 20世纪80年代发展了电诱导原生质体融合技术。
PEG溶液加入，并孵育一段时间（24℃或37℃， 10 － 20 分钟）；缓缓加入高钙高 pH 溶液 15 分钟； 洗涤，收集细胞计算融合率。 • 融合促进剂 : 伴刀豆球蛋白 A ，二甲基亚砜
和链胃蛋白酶等，提高细胞的融合频率。
PEG诱导融合原理
• PEG含有醚键而具有负极性，与水、蛋白质和碳水化合物 等一些正极化基团形成氢键。当PEG分子足够长时，可作 为邻近原生质体表面之间的分子桥而使之粘连。
常用的杂种细胞筛选方法
• 遗传互补筛选法
利用每一亲本贡献一个功能正常等位基因，纠正另外一亲本的
缺陷，从而令杂种细胞表现正常功能的原理选择杂种细胞。
• 抗性互补筛选法
利用亲本原生质体对抗生素、除草剂及其他毒性物质抗性差异
来选择杂种细胞。
• 生长特性筛选法
利用原生质体对培养基成分要求与反应的差异选择杂种细胞。
程序：
紫外线将病毒灭活， 稀释到一定浓度，加入 到细胞悬液中，离心，
诱导细胞融合。
化学法
1. 离子诱导融合法：
•
常用的盐类离子有硝酸钠、硝酸钾、硝酸钙、 钠离子能中和原生质体表面的负电荷，使凝聚 （1970年，Power用硝酸钠使玉米和燕麦根尖细胞原生质体进行
教学课件第五章植物细胞工程制药
愈伤组织(callus）：
由外植体组织增生的细 胞产生的一团无定型的 疏松排列的薄壁细胞。
Each “callus” is a cluster of cells that start differentiating as they grow in a special medium.
继代培养（subculture）：愈伤组织在
具有群体效应，无贴壁依赖性及接触抑制性 培养细胞产物滞留于细胞内，且产量较低 培养过程具有结构与功能全能性
第三节 植物细胞培养的基本技术
植物材料的准备
培养基的组成
植物激素 是指植物代谢过程中自身形成的植物
生长调节剂，在极低浓度时即能调节植物的生长 和发育过程，并能从合成部位转运到作用部位而 发挥作用。迄今为止，已发现植物组织中可形成 五种植物激素，即生长素、分裂素、赤霉素、脱 落酸和乙烯。
培养基上生长一段时间后，营养物枯竭， 水分散失，并已经积累了一些代谢物，此 时需要将这些组织转移到新的培养基上。
次级代谢产物特征：
有明显的分类学区域界限 其合成需在一定的条件下才能发生 缺乏明确的生理功能 是生命的多余成分
次级代谢：特殊蛋白质内源化合物的合
成、代谢及分解作用的综合体现。
保证良好的混合状态，从而获得良好的气体传递 பைடு நூலகம்果
第四节 影响植物次级代谢产物 积累的因素
生物条件 外植体、季节、休眠、分化等
物理条件 温度、光（光照时间、光强、光
质）、通气（O2）、pH和渗透压等
化学条件 无机盐（N、P、K等）、碳源、植物
生长调节剂、维生素、氨基酸、核 酸、抗生素、天然物质、前体等
培养方法
固体培养
琼脂培养 固定化培养
细胞工程 第五章 生物制品生产--改
在收获时，打开纤维管之间的外室开口，产物就流出 来。此时虽然细胞停止分裂，但细胞的存活、健康和核形 态不变，代谢和分化功能仍可保持数月。
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第二节 动物细胞生物制药
用动物细胞的培养技术来生产有功能的蛋
白质，特别是人源细胞的培养，在药物生产中
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培养基分散后,
灌入床层。纤
维管壁薄，半
透膜，截留不 培
同分子量。
养 基
入
纤维管的空腔 口
组成的内室：
灌流含氧气的
培养基
纤维管之间的 空间组成的外 室：细胞生长。
接种孔 水套层 产物出口
产 物 出 口
培养基入口
腔室
细胞
内膜 外膜
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细胞分泌的产物和血清中的成分由于分子量较大而无 法进入内室，产物只能在外室积累和浓缩。
直径0.2～5 mm，孔径20～300 μm，达占总 体积的85%，极大地增加了比表面积，可实现细 胞的固定化，达到高密度培养。
广泛使用的有：Cellsnow、Cytocell（纤维 素基质）、Verax、Cultisphere（胶原）、 Cytoline 1和2（聚苯乙烯）、ImmobaSil（硅橡 胶）及Siran（玻璃）等。
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3、流加式培养
在分批式操作的基础上，在培养过程中根据细 胞对营养物质的不断消耗和需求，流加浓缩的营养 物或培养基，从而使细胞持续生长至较高的密度， 目标产品达到较高的水平。
由于流加式培养能控制更多的环境参数，使得 细胞生长和产物生成容易维持在优化状态，是当前 动物细胞培养工艺中占有主流优势的培养工艺。
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为了提高贴壁能力，对基质表面进行包 埋，如血清蛋白、多聚赖氨酸处理，可加速 贴壁过程。
基于细胞工程的生物制品生产
基于细胞工程的生物制品生产随着科技的不断进步，越来越多的新技术被应用于生物制品生产。
其中，基于细胞工程的生物制品生产技术备受关注。
这种技术利用细胞的生长和分化能力制造药物、食品和医用器械等生物制品。
本文将重点介绍基于细胞工程的生物制品生产技术，探讨其应用前景和影响。
一、细胞工程技术的基本原理细胞工程技术是一种利用人工合成的DNA序列来改变细胞的基因组结构的技术。
该技术基于DNA序列的复制和转录过程，可改变细胞的表型，从而实现所需的生物制品生产。
细胞工程技术主要包括以下三个方面：1. 基因克隆：把所需的DNA序列克隆到宿主细胞中，使它成为新的基因表达载体。
2. 基因转导：改变宿主细胞的DNA序列（包括转座子插入、插入式突变等），使宿主细胞产生新的功能。
3. 基因重组：通过重组不同细胞的DNA序列来获得新的功能，如利用大肠杆菌重组表达细胞来生产足够的蛋白质。
二、基于细胞工程的生物制品生产技术在细胞工程技术的基础上，可以实现基于细胞工程的生物制品生产技术。
这种技术可应用于疫苗、生长因子、酶、激素、血液制品、抗体、细胞疗法等生物制品的生产。
1. 疫苗生产基于细胞工程的疫苗生产技术是一种免疫原病毒或细菌分泌抗原蛋白的方法。
这种技术中，用基因重组技术将所需抗原基因克隆到表达细胞的DNA序列中，再通过大规模培养表达细胞来生产疫苗。
这种疫苗具有优点是无活病毒或细菌感染病原体中抗原蛋白质的高度纯化。
2. 生长因子制品生产生长因子是生物体内的一种多肽激素，可以促进细胞分裂和分化。
利用基于细胞工程的生长因子制品生产技术，可以生产多种生长因子制品，如表皮生长因子、血小板生长因子、肝生长因子等。
这种技术可用于治疗多种疾病，如白血病、贫血、肿瘤等。
3. 酶类生产基于细胞工程的酶类生产技术可以应用于生产多种酶类产品，如转移酶、氧化酶、酯酶和葡萄糖氧化酶等。
这些酶可以应用于工业过程中，也可用于治疗慢性疾病的药物。
4. 细胞疗法细胞疗法是一种新的治疗方法，利用基于细胞工程的技术生产活性细胞，如骨髓、血细胞、干细胞等，用于治疗癌症、淋巴瘤、艾滋病、糖尿病等疾病。
(完整版)生物技术制药习题答案(夏焕章版)
第一章绪论填空题1. 生物技术制药的特征高技术、高投入、高风险、高收益、长周期。
2. 生物药物广泛应用于医学各领域，按功能用途可分为三类，分别是治疗药物、预防药物、诊断药物。
3.现代生物药物已形成四大类型：一是应用DNA重组技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂；二是基因药物；三是来自动物植物和微生物的天然生物药物；四是合成与部分合成的生物药物；4.生物技术的发展按其技术特征来看，可分为三个不同的发展阶段，传统生物技术阶段；近代生物技术阶段；现代生物技术阶段。
5.生物技术所含的主要技术范畴有基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程；选择题1.生物技术的核心和关键是（A ）A 细胞工程B 蛋白质工程C 酶工程D 基因工程2. 第三代生物技术（ A ）的出现，大大扩大了现在生物技术的研究范围A 基因工程技术B 蛋白质工程技术C 海洋生物技术D细胞工程技术3.下列哪个产品不是用生物技术生产的（D ）A 青霉素B 淀粉酶C 乙醇D 氯化钠4. 下列哪组描述（A ）符合是生物技术制药的特征A高技术、高投入、高风险、高收益、长周期B高技术、高投入、低风险、高收益、长周期C高技术、低投入、高风险、高收益、长周期D高技术、高投入、高风险、低收益、短周期5. 我国科学家承担了人类基因组计划（C ）的测序工作A10% B5% C 1% D 7%名词解释1.生物技术制药采用现代生物技术可以人为的创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医学药品，称为生物技术制药。
2.生物技术药物一般说来，采用DNA重组技术或其它生物新技术研制的蛋白质或核酸来药物称为生物技术药物。
3.生物药物生物技术药物是重组产品概念在医药领域的扩大应用，并与天然药物、微生物药物、海洋药物和生物制品一起归类为生物生物药物。
简答题1.生物技术药物的特性是什么？生物技术药物的特征是：（1）分子结构复杂（2）具有种属差异特异性（3）治疗针对性强、疗效高（4）稳定性差（5）免疫原性（6）基因稳定性（7）体内半衰期短（8）受体效应（9）多效应和网络效应（10）检验特殊性2.简述生物技术发展的不同阶段的技术特征和代表产品？（1）传统生物技术的技术特征是酿造技术，所得产品的结构较为简单，属于微生物的初级代谢产物。
生物工程与生物制品制造技术
自动化发酵设备
通过自动控制和优化发酵条件，提高发酵效率 和产品得率。
自动化灌装与包装设备
实现生物制品的快速、准确灌装和包装，提高生产线的整体效率。
智能化监控系统保障安全生产
智能化环境监测系统
实时监测生产环境中的温度、湿度、洁净度等关键参数，确保生 产环境符合要求。
智能化过程监控系统
对生物制品制造过程中的关键步骤进行实时监控和数据采集，确 保产品质量和安全。
03
血浆站建设与管理
血浆站是血液制品生产的重要源头，加强血浆站建设和管理是确保血液
制品质量和安全的关键环节。未来，将进一步加强血浆站监管力度，提
高采浆量和采浆质量。
诊断试剂市场需求预测
诊断试剂市场概述
诊断试剂是用于疾病诊断的生物制品，包括免疫诊断试剂 、生化诊断试剂等。随着医疗水平的提高和人们健康意识 的增强，诊断试剂市场需求不断增长。
未来政策走向预测
加强产业创新支持
未来政策将更加注重对产业创新 的支持，鼓励企业加大研发投入 ，推动新产品、新技术的研发和 应用。
严格监管保障安全
未来政策将继续加强对生物制品 产业的监管力度，严格把控产品 质量安全关，保障公众用药安全 。
推动国际合作与交流
未来政策将积极推动国际合作与 交流，加强与国际先进水平的对 接和互认，提升我国生物制品产 业的国际竞争力。
03
挑战与机遇并存
人工智能在生物工程中的应用仍面临 数据质量、算法可解释性等挑战，但 同时也为行业带来前所未有的机遇。
可持续发展理念引领产业未来
绿色生物制造技术兴起
以可持续发展为理念，绿色生物制造技术在降低能 耗、减少污染等方面取得显著成果。
生物资源保护与利用并重
生物技术制药——第五章 植物细胞工程PPT幻灯片
动植物细胞区别
细胞壁、质体、液泡三部分是植物细胞特有的结构，动物细 胞没有。植物细胞是完整的 一个健全的植物细胞通过分化 与增殖可发于成一株完整的植物 但动物细胞不可以 。
植物细胞的主要生理活性物质及其他 化学组分
生理活性物质
生理活性物质是一类对细胞内的生化反 应和生理活动起调节作用的物质的总称。 包括：
挥发油：是一类具有芳香气味，在常温下易于 挥发的油类。
有机酸：是糖类代谢的中间产物。常见的植物 有机酸有苹果酸、柠檬酸等。
植物组织培养和动物细胞培养的比较
比较项目 原理
培养基性质 培养基特有成分
培养结果
培养目的
植物组织培养
动物细胞培养
细胞的全能性 细胞增殖
固体培养基
液体培养基
蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清
但不论何种途径，均可进一步发育成同母体相同的植株， 即所谓的植物细胞全能性。
愈伤组织再分化为胚状体是由不正常分化又回到正常分 化，表明植物细胞、组织、器官具有很大的可塑性，这 种特性为利用植物细胞工程来改良植物提供了可能性。
植物无菌培养
植物培养，即幼苗和较大植株的培养技术
愈伤组织培养，即植物体的各种组织、器官等外植体 ，经过脱分化而形成的细胞聚集体的培养
植物细胞有全能性，而动物细胞也具备 全能性吗?
高度分化的植物细胞仍然有发育成完整植株的能 力，也就是保持着细胞全能性。而高度特化的动 物细胞，从整个细胞来说，它的细胞全能性受到 限制。但是，它的细胞核仍然保持着全能性，这 是因为细胞核内含有保持物种遗传性所需要的全 套遗传物质。
无论是高度分化的植物细胞还是高度分化的动物 细胞，都有全能性。只不过植物细胞的全能性更 容易表达出来，而动物细胞的全能性的表达能力 就还远赶不上植物细胞。因此，任何一个植物细 胞可以很容易的在培养环境下发育成原来的植物 。而动物细胞却没有这种能力。
第五章 植物细胞工程制药
固定化培养常采用固体培养，优点是操作简便易行、培养所占空间 小。
缺点是：
（1）培养基中营养物质的浓度差导致愈伤组织生长不平衡； （2）气体交换不畅，阻碍了组织呼吸作用的正常进行，堆积有害物 质； （3）静止状态下，由于重力作用和向光性导致细胞群体不均匀； （4）培养时需测定一些生理生化指标，此时需转入液体中，会改变 组织的形态和生理状态。
第五节 影响植物次级代谢产物积累的因素
在植物组织培养过程中，影响植物次级代谢产物产生和 累计的因素有：
（1）生物条件：如外植体、季节、休眠等 （2）物理条件：如温度、光、通气等 （3）化学条件：如无机盐、碳源、维生素等 （4）工业培养条件：如培养罐类型、通气等
一、外植体选择
不同外植体的悬 浮细胞培养物，它们的 最大次级代谢产物的积 累时间各异，同一化合 物可以在不同的外植体 的不同生长阶段中积累 ，无论是延迟期、加速 期、对数期还是稳定期 都能够大量积累次级代 谢产物。
1.生理活性物质
生理活性物质是一类对细胞内的生化反应和生理活动起调节作用的物质 的总称。
（1）酶
有机催化剂，生物体内所有的反应都是在酶的催化作用下 进行的。
酶的特性：
①酶具有高效率的催化能力，其效率是一般无机催化剂的107~1013倍 。
②酶具有专一性，每一种酶只能催化一种或一类化学反应。 ③酶在生物体内参与每一次反应后，它本身的性质和数量都不会发生 改变。 ④酶的作用条件较温和，酶所催化的化学反应一般是在比较温和的条 件下进行的。
9.分生组织培养：即生长锥培养，是指在人工培养基上培养茎端 分生组织细胞。（分生组织是在植物体的一定部位，具有持续或 周期性分裂能力的细胞群。）
10.外植体：用于植物组织（细胞）培养的器官或组织，即从活 体植物上切下来用于培养的组织或器官。植物根、茎、叶、花 、果、胚珠、胚乳、花药、花粉等都可以作为外植体。
植物细胞工程课件第五章细胞融合
• 用胰蛋白酶、机械法或二者兼用来分离细 胞，对其进行单层或悬浮培养，获得单个分 散的细胞。
5.3 细胞融合的方法
•自发融合 NaNO3 高pH-高Ca离子
仙台病毒
•诱发融合
PEG
电场
……
5.3.1 生物融合法-----仙台病毒法
• 病毒类是研究得最早的促融剂 • 疱疹病毒、天花病毒、副流感型 病毒、副黏液病毒等致癌、致病 病毒，都能诱导细胞融合
不对称杂种：亲本双方原生质体发生部分融
合，或发生了融合，但融合体在分裂过程中一
方的部分核或质被排斥，因而其体细胞染色体
数目达不到双亲之和。其外部形态呈双亲的中
间型或偏一方形态，一般表现为雄性器官退化，
正常花粉粒极少，育性低。
胞质杂种：携带一个亲本的核和两个亲本的
细胞质。
细胞融合的意义
• 实现远缘遗传重组 植 物
P1
融合液
P2
混合静止1min. P1 P2 加入PEG
选 择
融 合 加入稀释液
稀 释 加入培养基
培 养
洗 涤
洋葱根尖原生质体 （40×）
烟草叶肉原生质体 （40×）
烟草叶肉细胞和洋葱根 尖细胞原生质体融合
烟草叶肉和洋葱根尖细 胞原生质体的异源融合
原生质体的 诱导频率；同时 群体密度 与pH 值相关。
德国生理学家 Johannes Müller 1801-1858
• 毒性大，应用受到限制
• 1958 年 ， 日 本 学 者 冈 田 善 雄 （Okada）发现了HVJ病毒可促
进细胞融合。
• 仙台病毒（HVJ）毒力低，对人
的危害小
日本学者Okada
• 易被紫外线或 β －丙炔内酯所灭 活
第五章 生物制品制造工艺1
致病性细菌所产生的特异性毒性物质――细 菌毒素，经甲醛处理及加温处理以除去毒性 而保留免疫原性，称为类毒素
吸附精制白喉类毒素的制造
1. 菌种及培养基 2. 培养：温度、pH 糖量、通气量、补料和生长因 子、培养时间 3. 脱毒：温度、pH 甲醛含量
五、生物制品的质量检定
（一）理化性质检定
1.物理性状的检查
减毒活疫苗
牛痘苗 流感活疫苗 麻疹活疫苗 腮腺炎活疫苗 水痘活疫苗 风疹活疫苗 斑疹伤寒疫苗 脊椎灰质炎疫苗
灭活疫苗
乙型脑膜炎疫苗 流感疫苗 Q热疫苗 脊髓灰质炎疫苗 乙型肝炎疫苗
亚单位疫苗
流感亚单位疫苗 腺病毒亚单位疫苗
基因工程疫苗
乙肝疫苗
二、分类
1、疫苗(Vaccine)
一切通过注射或黏膜途径接种，可以诱 导机体产生针对特定致病原的特异性抗体 或细胞免疫，从而使机体获得保护或消灭 该致病原的生物制品统称为疫苗，包括蛋 白质、多糖、核酸活载体，感染因子等。
（二）病毒的培养和繁殖 ( Culture and Replication of Viruses)
1、动物培养(Animals) 2、鸡胚培养(Embryonated eggs） 3、组织培养(Organ and tissue culture） Organ culture Embryo culture 4、细胞培养 Cell culture:原代细胞(primary culture cell ) 传代细胞 二倍体细胞
指利用微生物载体，将保护性抗原基因重组 到微生物中，使用这种能表达保护性抗原基因 的重组微生物制成的疫苗（多为活疫苗）
3）核酸疫苗（DNA疫苗，基因疫苗）
指使用能够表达抗原的基因本身即核酸制 成的疫苗。
新生物制品审批办法
新生物制品审批办法第一章总则第一条根据《中华人民共和国药品管理法》、《中华人民共和国药品管理法实施办法》的规定，为加强新生物制品研制和审批的管理，特制定本办法。
第二条生物制品是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备，用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。
第三条新生物制品系指我国未批准上市的生物制品；已批准上市的生物制品，当改换制备疫苗和生物技术产品的菌毒种、细胞株及其他重大生产工艺改革对制品的安全性、有效性可能有显著影响时按新生物制品审批。
第四条新生物制品审批实行国家一级审批制度。
第五条凡在中华人民共和国境内进行新生物制品研究、生产、经营、使用、检定、审批、监督管理的单位和个人，都必须遵守本办法。
第二章新生物制品命名及分类第六条新生物制品的命名应遵照《中国生物制品规程》和药品命名原则的有关规定命名。
第七条新生物制品分为五类：第一类：国内外尚未批准上市的生物制品。
第二类：国外已批准上市，尚未列入药典或规程，我国也未进口的生物制品。
第三类：1．疗效以生物制品为主的新复方制剂。
2．工艺重大改革后的生物制品。
第四类：1．国外药典或规程已收载的生物制品。
2．已在我国批准进口注册的生物制品。
3．改变剂型或给药途径的生物制品。
第五类：增加适应症的生物制品。
第三章新生物制品研制的要求第八条新生物制品研制内容，包括生产用菌毒种、细胞株、生物组织、生产工艺和产品质量标准、检定方法、保存条件、稳定性以及与制品安全性、有效性有关的免疫学、药理学、毒理学、药代动力学等临床前的研究工作和临床研究。
，并根据研究结果提出制造检定规程和产品使用说明书（草案）。
第九条新生物制品研制和生产要分别符合我国《药品非临床研究质量管理规范》（GLP）、《药品生产质量管理规范》（GMP）的有关规定。
第十条新生物制品研制过程一般分为以下几个阶段，各阶段的要求如下。
细胞工程在生物药物生产中的应用
细胞工程在生物药物生产中的应用在当今生物科技领域，细胞工程作为一项关键技术，正以前所未有的速度推动着生物药物生产的发展。
细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。
它为生物药物的研发和生产提供了强大的工具和手段，为人类健康事业带来了新的希望。
细胞工程在生物药物生产中的应用十分广泛，其中一个重要的方面是利用动物细胞培养技术生产生物药物。
动物细胞培养是指在体外模拟体内环境，将动物细胞培养在合适的培养条件下，使其生长、分裂和表达特定的蛋白质或生物活性物质。
这种技术可以用于生产多种生物药物，如单克隆抗体、疫苗、细胞因子等。
单克隆抗体是一种由单个 B 淋巴细胞克隆产生的高度特异性抗体。
通过细胞融合技术，将能够产生特定抗体的 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。
这些杂交瘤细胞可以在体外大量培养，持续分泌单克隆抗体。
单克隆抗体在肿瘤治疗、自身免疫性疾病治疗、抗感染等领域发挥着重要作用。
例如，利妥昔单抗（Rituximab）用于治疗非霍奇金淋巴瘤，曲妥珠单抗（Trastuzumab）用于治疗乳腺癌，都是通过动物细胞培养技术生产的单克隆抗体药物。
疫苗是预防传染病的重要手段，细胞工程也为疫苗的生产带来了革新。
传统的疫苗生产方法往往依赖于病原体的减毒或灭活，但这种方法存在一定的安全隐患。
利用细胞工程技术，可以生产出更加安全、有效的新型疫苗。
例如，基因工程疫苗是通过将病原体的特定基因导入表达载体，然后在细胞中表达相应的抗原蛋白，制成疫苗。
此外，利用细胞培养技术生产的病毒样颗粒疫苗，具有与病毒相似的结构和免疫原性，但不具有感染性，为疫苗的研发和生产提供了新的途径。
细胞因子是一类由免疫细胞和其他细胞分泌的具有调节免疫反应、促进细胞生长和分化等功能的蛋白质。
通过基因工程技术将细胞因子的基因导入合适的细胞中，使其大量表达和分泌细胞因子，然后进行分离和纯化，即可获得高纯度的细胞因子药物。
细胞工程-细胞融合
杂交细胞又可分为两种：一种是种间杂 交细胞(interspecific hybrid cell )，即 亲本细胞来源于不同的种，如小鼠细胞 和人细胞的杂交；另一种是种内杂交细 胞(intraspecific hybrid cell)，即亲本细 胞来源于同一个种，如小鼠成纤维细胞 和小鼠淋巴细胞的杂交。
三、电处理融合法
电融合技术(electrofusion technique)是20世 纪80年代发展起来的细胞融合技术。
电融合技术的原理是： 以电降解及双向电泳的联合作用为基础，使
两个细胞的带电膜被此靠近； 由于膜组分界面的相互作用、电位移或电场
切线力的影响，膜表面的颗粒发生位移，而在 移开颗粒的区域，将暴露出脂质；
仙台病毒为圆球形，由RNA核心、衣壳和囊膜 组成。囊膜实质上是病毒离开宿主细胞时包上 的一层宿主质膜，但又与宿主质膜不完全相同。 最明显的变化就是病毒囊膜上有许多刺突 (spike)，每个刺突都是一个单价血细胞凝集素， 仙台病毒因此具有凝集血细胞和其他细胞的能 力。
另外，刺突还具有唾液酸苷酶的活性，能水解 寡糖链上的唾液酸残基，因而仙台病毒还可以 依赖刺突的唾液酸苷酶活性攻击细胞表面。
目前，动物细胞融合主要用于生产单克 隆抗体、核酸疫苗等特定的生物制品及 用于研究培育动物新品种。
在基础理论研究上，动物细胞融合技术 对研究细胞分化、基因定位、肿瘤发生 机制与诊治等方面都有重要意义。
动物细胞融合技术也应用于基因治疗、 细胞治疗以及组织工程等新的治疗方法 中。
特别是将外源基因在哺乳动物的乳腺中 特异表达的乳腺生物反应器技术的发展， 更是将药用蛋白质的生产带到一个前所 未有的高度。
第二节 细胞融合方法
一、用病毒做促融剂促进细胞融合的方 法
生物制品资料
第一章1.生物制品学的发展史可划分为经典生物技术阶段、近代生物技术阶段、现代生物技术阶段。
生物制品的概念采用现代生物学技术手段来人为地创造一些条件，借用某种微生物、植物或动物体或利用生物体的某一组成部分来生产某些初级代谢产物或次级代谢产物，制成诊断、治疗、预防疾病或达到某种特殊医学目的的医学用品。
生物制品学的概念指研究各类生物制品的来源、结构特点、应用、生产工艺、原理、现状，存在问题与发展前景等诸方面知识的一门科学。
细胞工程的概念指以细胞为基本单位，在体外条件下进行培养、繁殖或人为地使细胞某些生物学特征按人们的意愿发生改变，从而达到改良生物品种或创造新品种，加速繁育动、植物体个体或获得某种有用的活性物质或生物制品的过程。
基因工程的概念指把细胞中的DNA分离出来，在体外进行切割，拼接和重新组合后，引入到适当的细胞中进行复制和表达。
生物制品的分类（按来源分类，按使用对象分类）按来源分：1.人源生物制品：如血液、尿液成分2.动物源生物制品：如干扰素3.植物源生物制品：如植物激素、紫杉醇4.微生物源生物制品：如胰岛素按使用对象分类：1.用于人的生物制品2.用于家畜的生物制品3.用于家禽的生物制品4.用于作物的生物制品生物制品的生产特点有哪些？1.起步晚，发展速度快，前景美好。
2.有巨大的科研价值，重大的经济效益和巨大的社会效益。
3.研发的产品面广，具有高速的成长性和广阔的发展空间。
我国生物制品产业发展的总思路和总目标是什么？总思路：首先，我国的生物医药或生物制品产业要保持以每年26%的速度增长。
第二，要突出自我创新。
第三，是要突出我国的核心竞争力，让新药更多、大药更大，平台能够国际化，能够被美国FDA或OECD认可，要突破关键技术。
培育大型企业。
总目标：第一阶段，到2015年，该战略新兴产业形成健康发展、协调推进的基本格局，产业创新能力大幅提升，增加值占国内生产总值的比重从2010年的约4%力争达到8%左右。
第五章动物细胞工程制药
生产用细胞库：从原始细胞库来，或从单一安瓿 来，或从多个安瓿在融化即刻混合在一起的，然 后经培养扩增到一定数量后，再分装储存形成的 细胞库。
生产用细胞库也必须建立档案，而且需要进行无 菌性和无细胞交叉污染的检查，生产时需确定其 最高使用的传代数。
第四节 动物细胞的培养条件和培养基
培养成功必备条件：
2.基因载体的导入和高效表达工程细胞株的筛选
DNA导入动物细胞的常用方法
融合法
化学法
物理法
病毒法
细胞融合法 DNA-磷酸钙沉淀法 电穿孔法
脂质体介导法 DEAE-葡聚糖法 显微注射法
原生质融合法 染色体介导法
基因枪法
微细胞介导法
鬼影红细胞介导法
重组逆转录病毒介导法 重组DNA病毒介导法 多瘤病毒样颗粒介导法
① 所有与细胞接触的设备、器材和溶液，都必须保持绝对 无菌，避免细胞外微生物的污染
② 必须有足够的营养供应，绝对不可有有害的物质，避免 即使是极微量的有害离子的掺入
③ 保证有适量的氧气供应 ④ 需要随时清除细胞代谢中产生的有害产物 ⑤ 有良好的适于生存的外界环境 ⑥ 及时分种，保持合适的细胞密度
一、动物细胞的培养条件
a. 磷酸钙沉淀法：将溶解的DNA加在Na2HPO4 中，逐渐加入CaCl2溶液，当 Na2HPO4和CaCl2形成 沉淀，DNA包裹在沉淀中，形成DNA-磷酸钙共沉 淀物，当沉淀物与细胞表面接触时，通过吞噬作用 将DNA导入胞内。 优点：方法简单，可进行共转化
b. 电穿孔法：借助电穿孔仪产生的高压脉冲电场， 使细胞膜出现瞬时可逆性的小孔，外源DNA沿小孔 进入细胞。 特点：转化效率较高，但进入的DNA拷贝数较低
基因更换多角体蛋白基因，仍能形成有感染力的病毒粒 子； ④ 多角体蛋白基因有非常强的启动子，产生的蛋白质可占 全部蛋白质的20~30%； ⑤ 用光学显微镜可看到多角体，容易以此为标记物来挑选 阳性克隆； ⑥ 如果用家蚕杆状病毒，还可在蚕体直接表达外源基因。
制药行业生物制剂研发方案
制药行业生物制剂研发方案第一章引言 (3)1.1 生物制剂概述 (3)1.2 研发背景与意义 (3)第二章市场调研与分析 (4)2.1 生物制剂市场现状 (4)2.1.1 市场规模 (4)2.1.2 市场结构 (4)2.1.3 市场分布 (4)2.2 竞争对手分析 (4)2.2.1 主要竞争对手 (4)2.2.2 竞争策略 (5)2.3 市场需求分析 (5)2.3.1 疾病谱变化 (5)2.3.2 政策支持 (5)2.3.3 市场潜力 (5)2.3.4 市场竞争格局 (5)第三章技术研究与发展趋势 (5)3.1 生物技术概述 (5)3.2 生物制剂研发趋势 (6)3.2.1 个性化治疗 (6)3.2.2 精准医疗 (6)3.2.3 生物类似物 (6)3.2.4 跨学科融合 (6)3.3 技术创新与应用 (6)3.3.1 基因工程技术 (6)3.3.2 细胞工程技术 (6)3.3.3 生物信息学技术 (6)3.3.4 人工智能技术 (7)3.3.5 纳米技术 (7)第四章目标产品筛选与评估 (7)4.1 产品筛选标准 (7)4.2 产品候选物评估 (7)4.3 产品研发策略 (8)第五章研发流程与方法 (8)5.1 研发流程设计 (8)5.2 研发方法选择 (9)5.3 关键技术攻关 (10)第六章生产工艺优化 (10)6.1 生产工艺流程 (10)6.1.1 原料准备 (10)6.1.2 细胞培养 (10)6.1.5 质量检验 (11)6.2 工艺参数优化 (11)6.2.1 培养工艺参数优化 (11)6.2.2 提取纯化工艺参数优化 (11)6.2.3 制剂工艺参数优化 (11)6.3 生产成本控制 (11)6.3.1 原材料成本控制 (11)6.3.2 设备投入与维护成本控制 (11)6.3.3 人力资源成本控制 (11)6.3.4 能源与环保成本控制 (11)第七章质量控制与安全评价 (12)7.1 质量标准制定 (12)7.1.1 引言 (12)7.1.2 质量标准内容 (12)7.1.3 质量标准修订 (12)7.2 质量控制方法 (12)7.2.1 引言 (12)7.2.2 原料质量控制 (12)7.2.3 生产过程质量控制 (12)7.2.4 成品质量控制 (13)7.2.5 包装材料质量控制 (13)7.3 安全性评价 (13)7.3.1 引言 (13)7.3.2 非临床安全性评价 (13)7.3.3 临床安全性评价 (13)7.3.4 安全性评价方法 (13)第八章临床试验与注册 (13)8.1 临床试验设计 (13)8.1.1 研究目的 (14)8.1.2 研究类型 (14)8.1.3 研究人群 (14)8.1.4 研究方法 (14)8.1.5 样本量计算 (14)8.1.6 监测和评估 (14)8.2 临床试验实施 (14)8.2.1 伦理审查 (14)8.2.2 研究者培训 (14)8.2.3 研究药物管理 (14)8.2.4 数据收集与记录 (14)8.2.5 安全性监测 (14)8.2.6 质量控制 (15)8.3 注册申请与审批 (15)8.3.1 注册申请资料 (15)8.3.3 审批程序 (15)8.3.4 审批结果 (15)8.3.5 注册证书 (15)第九章市场推广与销售 (15)9.1 市场推广策略 (15)9.2 销售渠道建设 (16)9.3 客户服务与维护 (16)第十章总结与展望 (17)10.1 研发成果总结 (17)10.2 项目不足与改进 (17)10.3 未来发展展望 (17)第一章引言生物制剂作为一种新兴的药物形式，在现代医药领域占据了日益重要的地位。
第五章细胞工程制药
杂交瘤细细的克隆化：
单个细胞通过无性繁殖而获得细胞集团的 整个培养过程，集团内每个细胞的生物学 特性和功能完全相同 多数情况下初选的阳性克隆中不是来自 单个细胞，可能混有不分泌目的抗体的克 隆（长的快）或遗传不稳定的杂交瘤细胞。 为避免发生竞争性生长抑制，或发生变异 不再产生抗体，以保证分泌性克隆生长的 稳定性，需要再进行3-4克隆化 克隆培养方法：软琼脂法、有限稀释法
四、动物细胞的培养技术
（一）动物细胞培养的基本概念 （二）可供进行动物细胞培养的材料 （三）动物组织块培养法 （四）动物细胞单层培养法 （五）单细胞分离培养 （六）单细胞微量板克隆技术 （七）二倍体细胞培养 （八）传代细胞株的培养
3、平衡盐溶液（BSS）
功效： ①维持渗透压 ②提供缓冲系统 ③提供水分如----血清，血浆，组织浸出液等 优点----营养成分丰富，培养效果好 缺点----来源受限。成分复杂，影响对某些实验产 物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污染 天然培养基的类型： [A]乳蛋白水解物培养基 [B]酪蛋白水解物培养基 [C]血清及胚胎浸出液培养基
免疫脾细胞的选择与培养
• （1）所选的免疫动物种系要与骨髓瘤细胞系一致
或有相近亲缘关系，一般采用与骨髓瘤供品系一 致的动物 • 如BALB/C系小白鼠的淋巴细胞与同种白鼠的骨 髓瘤细胞融合，所得杂交瘤细胞的染色体稳定， 也能较理想的分泌目的抗体 • （2）所选的动物品系对抗原免疫应答要强
细胞工程-第5章-mdf-文档资料-课件-课件
(2)抗原
• 抗原分类： • 可溶性抗原，蛋白质、核酸、多肽、
多糖等，可添加佐剂提高免疫效果，或可 将其固定于载体，成为颗粒性抗原。 • 颗粒性抗原，病毒、细菌、真菌、细 胞等，抗原性较强，可不加佐剂免疫。 • 抗原免疫的方法：
(3)载体：
• 作用： 固定抗原，使之缓慢释放的惰性、无毒物质。
此处加标题
细胞工程-第5章-mdf
眼镜小生制作
学习须知
• 主要内容：细胞融合与单克隆抗体的制备 原理与技术。
• 重点：细胞融合与单克隆抗体的制备原理 与技术
• 难点：单克隆抗体的制备原理
前言
• 细胞融合(cell fusion)，又称体细胞杂交(somatic hyhridization)或细胞杂交(cell hybridization)，指在 离体条件下用人工方法将不同种生物或同种生物不同类型 的单细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。
本章内容
• 5.1.单克隆抗体技术 • 5.2.人源单克隆抗体制备 • 5.3.单克隆抗体在医学上的应用
5.1.单克隆抗体技术
• 5.1.1 单克隆抗体技术的原理 • 5.1.2 杂交瘤制备 • 5.1.3 单克隆抗体的大量制备
5.1.1 单克隆抗体技术的原理
• 1. HAT选择原理
• 利用HAT选择性培养基结合突变细胞株来分 离杂交瘤细胞。
•
DMEM，主要用于小鼠细胞融合；
•
RPMI-1640，多用于制备人单克隆抗体。
• 配制，国内多用培养基干粉，去离子水或双蒸水 直接溶解，过滤除菌后分装，4℃保存。
•
菌检，同时作细菌检验证明无菌。
•
配制完全培养基，使用前，添加适量胎牛血
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细胞工程第五章生物制品生产改
工作原理
反应器运转时，圆筒以30-60 r/min的速度转动， 由于离心力的作用，搅拌器中心管内产生负压，使搅 拌器外培养基流入中心管，沿管螺旋上升，再从导流 筒口排出，从搅拌器外沿下降，形成循环流动。在气 腔内气体由分布管鼓泡，气体溶于液体中，依靠气腔 丝网外液体的循环流动及扩散作用，使溶于液体中的 气体成分均匀地分布到反应器内。
• 细胞分泌的产物和血清中的成分由于分子量较大而 无法进入内室，产物只能在外室积累和浓缩。
• 细胞代谢的废物是小分子物质，可渗透进入内室， 从内腔开口排出，避免了对细胞的毒性。
• 在收获时，打开纤维管之间的外室开口，产物就流 出来。此时虽然细胞停止分裂，但细胞的存活、健康和核 形态不变，代谢和分化功能仍可保持数月。
悬浮培养
§ 与微生物的肉汤培养基本相同。 § 悬浮培养细胞增殖快、产量高，没有接触抑
制特性，是动物大规模培养的理想方法。 § 但只有极少数动物细胞适宜进行悬浮培养，
适用于确立细胞株（系）、杂交瘤细胞、肿 瘤细胞、血液和淋巴细胞培养。
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细胞工程第五章生物制品生产改
微载体培养
§ 微载体为三维培养系统，细胞贴附于微载体上伸展和 增殖，微载体悬浮于培养液中。
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细胞工程第五章生物制品生产改
• Celltech公司采用气升式反应器培养 杂交瘤细胞，生产单克隆抗体。生产周期为 14~400h。从10L逐级放大到10000L。17d生 产抗体100g，抗体合成大多数处于稳定期和 衰退期，比传统摇瓶提高约5倍。
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细胞工程第五章生物制品生产改
• 广泛使用的有：Cellsnow、Cytocell（纤维 素基质）、Verax、Cultisphere（胶原）、 Cytoline 1和2（聚苯乙烯）、ImmobaSil（硅橡 胶）及Siran（玻璃）等。
• 主要用于搅拌、固定床和流化床反应器。
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细胞工程第五章生物制品生产改
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•培养基分散后,
灌入床层。纤
维管壁薄，半
透膜，截留不 培
同分子量。
养 基
入
•纤维管的空腔 口
组成的内室：
灌流含氧气的
培养基
•纤维管之间的 空间组成的外 室：细胞生长。
• •
•接种孔 水套层 产物出口
产 物 出 口
•培 养 基 入 口
•腔室
•细胞
•内膜 •外膜
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细胞工程第五章生物制品生产改
§ 微载体培养具贴壁和悬浮培养的双重优点，有很大的 比表面积，供单层细胞贴附和增殖。
§ 悬浮微球使细胞生长的环境均一，培养基利用率高， 重复性好，容易放大。
§ 20世纪80年代正式用于工业化生产干扰素、疫苗和尿 激酶原等。
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细胞工程第五章生物制品生产改
v 理想的微载体所具备的性能：
v 质地柔软，微球间摩擦轻；
葡聚糖微载体：带正电，干粉在pH7.2的磷
酸盐缓冲液中吸胀，清洗灭菌后使用。
Cytodex 2：电荷性大大下降，吸附能力很低，
适合于蛋白质药物的生产。
纤维素微载体DE52和DE53：适合多种细
胞培养。
聚丙烯酰胺载体：贴壁较快，亲水性。
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细胞工程第五章生物制品生产改
•多孔微载体：
• 直径0.2～5 mm，孔径20～300 μm，达占总 体积的85%，极大地增加了比表面积，可实现细 胞的固定化，达到高密度培养。
常见的动物细胞培养产物
疫苗
小儿麻痹症疫苗、狂犬疫苗、脑炎疫苗、 疱疹疫苗、风疹疫苗
单克隆抗体 IgG、IgM、IgA等
⑤是传统的、常用的方法，可直接放大。其工业反应器规模 可达 12000L。
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细胞工程第五章生物制品生产改
2、半连续式（流加式）培养
指在分批式培养的基础上，将分批培养的 培养液部分取出，并补充加入等量的新鲜培 养基，使反应器内培养液的总体积保持不变。
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细胞工程第五章生物制品生产改
机械搅拌式主要是通过不锈钢搅拌系 统使培养物的混匀。在罐体顶端有一些传 感器，监测培养物的温度、pH值、溶氧 度(DO)、葡萄糖消耗、NH3、NH4+等参数。 这种反应器培养规模可达2 000 L。
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细胞工程第五章生物制品生产改
§该系统优点：
（1）设计简单，操作方便，易于放大生产； （2）细胞密度高，达到107/mL以上； （3）便于无菌操作，不易污染； （4）氧的转换率高，能满足细胞在生长时所需
这种培养方法是生产单克隆抗体、干扰素 的一种有效培养方法。目前，美国药用产品大 规模生产常用此法进行。
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中空纤维（微导管）培养
§ 是模拟体内细胞三维生长环境而发明的。 § 将由硝酸纤维素或醋酸纤维素构成外径不超过
的要求。
§缺点：
对细胞损伤较大，产物含量不高。
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气升搅拌式
气体从罐底的喷射管进入反应器的导 流管。湍流温和而均匀，循环量大，细胞 与培养液混合均匀。剪切力小，细胞的伤 害小。喷射供氧，氧传递速率高，供氧良 好。适用于悬浮细胞分批培养、微载体和连续
培养。
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细胞工程第五章生物制品生产改
§ 该反应器是将细胞种植到微载体后，将其移入 RCCS圆柱状的培养容器内，加满培养液。整个容 器由电机驱动沿水平轴旋转，细胞微载体颗粒在水 平轴内建立均质的液体悬浮轨道，并随容器一起旋 转且不与容器壁和其它物体相撞。细胞通过膜式气 体交换器来吸氧和排出CO2。
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微囊化培养
利用固定化细胞技术，将一定量细胞与 约4％的褐藻酸钠混合后，滴到CaCl2溶液中，
构成半透性微胶囊。又称固定化细胞、大载 体培养法。
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细胞工程第五章生物制品生产改
1） 细胞在微胶囊内生长，既吸收外界营养， 又可排出自身代谢物。
2）细胞所受的剪切力损伤小， 细胞生长良好， 纯度提高。便于连续培养，提高培养细胞的 利用率；
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细胞工程第五章生物制品生产改
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细胞工程第五章生物制品生产改
二、大规模细胞培养方法
按供养方式分为三种：
搅拌式、气升式、旋转式
按细胞固定分为四种：
悬浮培养、 微载体培养、 微囊化培养、 微导管培养（中空纤维培养）。
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细胞工程第五章生物制品生产改
机械搅拌式(Spinner)
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4、连续灌注式培养
是把细胞接种后进行培养，新鲜的培 养液不断从反应器一头加入，从另一头不断 取出等量的培养液，细胞仍留在反应器内， 使细胞处于一种营养不断供应状态。使反应 条件处于一种恒定状态。
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连续灌注式培养特点
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第二节 动物细胞生物制药
用动物细胞的培养技术来生产有功能的蛋
白质，特别是人源细胞的培养，在药物生产中
的位置越来越重要。
一、表达蛋白的宿主系统
二、生产用动物细胞的要求
三、常用动物细胞的特性
四、基因工程细胞构建和筛选
五、细胞库的建立
PPT文档演模板ຫໍສະໝຸດ 细胞工程第五章生物制品生产改
悬浮培养早期，还可向培养液补充丙酮 酸、腺嘌呤、次黄嘌呤、胸腺嘧啶等。
将这些微载体悬浮在培养液中，大大增 加细胞的贴壁面积，可使每毫升培养基达到 1000万个（108）细胞的密度。
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常用微载体
玻璃珠：直径约2～3 μm，密度1.5 g/cm3。
在玻璃表面覆盖塑料或中空玻璃也可达到此 密度。
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细胞工程第五章生物制品生产改
开放式连续培养----细胞随排出培养液一起流出 且速度恒定。在稳定状态下流出细胞的速率 等于培养系统中新细胞的增长速率。
封闭式连续培养----新鲜培养液和老培养液以等 量方式进出，而收集的细胞重新放入原培养 系统中继续培养，故培养系统中细胞数量是 在不断增加的。
3）细胞培养密度高，生长缓慢，有利于次生代 谢产物的积累，提高产量。
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细胞工程第五章生物制品生产改
4）次生代谢物直接分泌到培养液中，可简化分离、 收获步骤，提高工作效率。如次生代谢物不分 泌， 培养结束后，收获微囊，破微囊，纯化抗 体。
5）固定化细胞的氧气、营养供应与传递及细胞的 遗传稳定性等问题有待于进一步研究解决。
§ 由于系统无推进器、气泡或搅拌器,使破坏性应力减 到最小。因此，细胞可以在相对温和的环境中进行 三维生长，得到类似人体内的培养产物.
§ 近年来已经广泛应用于微载体系统，至今已有近百 种组织细胞均在该系统内成功进行了大规模扩增。
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细胞工程第五章生物制品生产改
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细胞工程第五章生物制品生产改
一、细胞培养的操作方式 二、大规模细胞培养系统
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细胞工程第五章生物制品生产改
一、细胞培养的操作方式
培养方式分为： 分批式 流加式培养 半连续式 连续灌注式
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细胞工程第五章生物制品生产改
1、分批式培养
指先将细胞和培养液一次性装入反应器 内进行培养，细胞不断生长，产物不断形 成，经一段时间后，终止培养。