发酵罐排除设备染菌隐患
抗生素生产中发酵罐染菌的原因分析及解决途径
抗生素生产中发酵罐染菌的原因分析及解决途径抗生素生产中发酵罐染菌的原因分析及解决途径抗生素生产一般采用纯种发酵，在生产中出现染菌问题是不可轻视的。
轻度染菌会影响到本批发酵产品的单位和收率，还可能会为下批生产埋下继续染菌的祸根，严重的染菌除严重影响产品产量和质量外，极可能造成生产不能有序进行或无法进行。
[1] 尤其是发酵罐处在发酵的最末阶段，其染菌直接影响到产品优劣和得率，其染菌的途径也很多，笔者在深入一线实践的过程中总结了一些经验，对于预防发酵罐染菌有一定的帮助。
分析染菌原因也可从以下方面判断：从染菌时间分析，发酵早期染菌可能原因有种子带菌、培养基或设备灭菌不彻底、移种操作不当、无菌空气带菌等。
发酵后期染菌可能原因有，中间补料污染、设备渗漏、操作问题等。
从菌型上分析，若染芽孢杆菌，可能是培养基或设备灭菌不彻底、空气带菌引起。
从染菌规模上分析，若大面积染菌，且所染的是同一种杂菌，一般是空气系统出现问题，若个别罐连续染菌一般是设备问题。
这就需要生产人员具备一定的理论知识，提高分析和解决问题的能力，保证发酵正常运行。
据统计引起发酵罐染菌的因素及其所占比重如下表所示：抗生素发酵染菌因素及比例染菌原因百分率染菌原因百分率培养基灭菌不彻底0.79 种子带菌9.64设备因素引起染菌34.36 人为因素10.34空气系统有菌19.96 原因不明24.91下面笔者结合实际对抗生素发酵罐染菌原因从物料因素、设备因素、蒸汽（空气）和人为因素等方面作以分析。
1 物料因素造成染菌1.1物料在存放中变性由于库房条件所限，物料在存放中会受到挤压、受潮而结块，这些块状固体物在消毒当中蒸汽难以穿透，从而有可能染菌。
若购入的物料粉碎程度不高，固体料粒度太大（如玉米粉中掺杂有较多玉米粒）这样的培养基进入发酵罐在灭菌时很难被完全“煮熟”，这也是染菌可能性之一，对此应在打料泵后装置筛板过滤器来解决。
[2]笔者在实践中还发现有因物料发霉而造成染菌的情况，这样即使该批发酵液运转下去也会影响产量。
发酵罐安全检修及维护操作规程(3篇)
发酵罐安全检修及维护操作规程发酵罐是生物发酵过程中的重要设备，安全检修及维护操作规程对于保障发酵罐的正常运行和生产安全具有重要意义。
为了保证文章的连贯性，以下将分段进行说明。
一、安全检修1.发酵罐检查前的准备工作（1）确保检修区域内没有火源，禁止吸烟；（2）戴好个人防护装备，检查设备是否正常；（3）确认发酵罐是否排空，有否残存的介质；（4）联系相关人员，进行联合检查。
2.发酵罐外观检查（1）检查发酵罐外观是否存在损坏、变形等情况；（2）检查罐体焊缝是否有裂纹、腐蚀等问题；（3）检查罐体连接处的密封情况。
3.发酵罐内部检查（1）进入罐内前，确认通风设备是否正常运行；（2）检查罐内是否存在积水、残留物等，清理干净；（3）检查搅拌装置、加热设备、温度控制装置是否正常。
4.发酵罐内部设备检修（1）检查搅拌装置是否运转灵活，有无异响；（2）检查加热设备是否工作正常，温度控制精准；（3）检查气体供应装置是否正常，有无泄漏。
5.安全检修总结（1）记录检修过程中发现的问题及解决方法；（2）及时进行维修和更换设备，预防事故发生；（3）加强培训，提高员工对发酵罐安全检修的认识。
二、维护操作规程1.定期清洁发酵罐（1）根据工艺生产周期，设定清洁计划；（2）先排空罐内介质，然后使用相关清洁剂进行清洗；（3）彻底冲洗清洁剂，确保罐内无残留。
2.定期检查发酵罐密封装置（1）定期检查罐体连接处的密封情况；（2）如发现密封损坏，及时更换维修；（3）定期涂抹防锈剂，增加密封装置的使用寿命。
3.定期润滑设备（1）定期检查搅拌装置等设备的润滑情况；（2）使用适当的润滑剂，保证设备正常运转；（3）加强设备的维护保养，减少故障发生。
4.定期检查安全阀和压力表（1）定期检查安全阀的灵敏度和工作状态；（2）定期检查压力表的准确度和显示情况；（3）如发现问题，及时更换维修。
5.定期进行罐体防腐处理（1）根据生产周期和工艺要求，定期进行罐体防腐处理；（2）选择适当的防腐材料进行处理；（3）定期检查罐体表面是否有腐蚀、起泡等情况。
避免发酵染菌的改进
避免发酵染菌的改进防止杂菌污染是任何发酵工厂的一项重要工作内容，尤其是无菌程度要求高的液体深层发酵，污染防止工作的重要性更为突出。
在发酵前期或中期染菌，杂菌会很快消耗营养物质，使生产菌无法正常生产而引起倒罐。
在发酵后期染菌，一般亦会使产率下降并影响产物的提取.我们可以通过一下几个步骤进行改造:一. 空气净化方面:1 吸入空气前处理设备因为高空空气尘埃少且微生物含量远低于地平面，故空气压缩机吸气口(采风塔)通常以离地面5～10米为宜，如为减少噬菌体出现机会，吸气口更应离地面15～20米为好.吸入的空气在进入压缩机前应先通过粗过滤器过滤，减少进入空气压缩机的灰尘和微生物的数量，以减少机械杂质造成压缩机的磨损，并减轻后空气除菌介质的除菌负荷。
常用的粗过滤器介质有涤纶无纺布或中孔聚氯酯泡沫塑料。
粗过滤器可作成板式或袋式。
吸气口流速小于lOm／s，粗过滤器气流速度一般为2～2.5m3／m2.min为宜。
2 选用合适空压机发酵生产中要求提供大量的无菌压缩空气供发酵通气用。
工厂常采用往复式，螺杆式、涡轮式空气压缩机作为空压站的主要设备。
发酵生产用压缩机一般以排气压力0.2～0.3Mpa低压居多.往复式空压机的价格比较低廉，操作与维修比较方便，单位比功率较小.但其出口流量因受往复压缩之故很不稳定，有脉冲现象，而且活塞与汽缸往复摩擦必须有润滑装置，使压出空气中夹带大量油雾给压缩空气的除菌带来一定困难。
为了解决这一缺点，目前有些工厂采用由二硫化钼的氟塑料制成的活塞环代替原来的金属环作无油润滑，效果甚好，既有利于后面的空气净化除菌，又节约了润滑油，但由于氟塑料的弹性不及金属环，故气缸中气体泄漏虽增加，改装后的空气压缩机的排气量一般要减少lO％左右。
中型空气压缩机可采用转子表面喷涂自润滑耐磨材料的螺杆压缩机，其体积较小，噪音，振动低。
大型空气压缩机较多采用涡轮式压缩机，与往复式空气压缩机相比，具有体．积小，重量轻，占地小，运转平稳、供气置大，出口压力稳定、输出的压缩空气不含油雾等优点。
发酵罐染菌的解决方法
发酵罐染菌的解决方法
1、种子培养期染菌的处理
一旦发现种子受到杂菌的污染，该种子不能再接入发酵罐中进行发酵，应经灭菌后弃之，并对种子罐、管道等进行仔细检查和彻底灭菌。
同时采用备用种子，选择生长正常无染菌的种子接人发酵罐，继续进行发酵生产。
如无备用种子，则可选择一个适当菌龄的发酵罐内的发酵液作为种子，进行“倒种”处理，接人新鲜的培养基中进行发酵，从而保证发酵生产的正常进行。
2、发酵前期染菌的处理
当发酵前期发生染菌后，如培养基中的碳、氮源含量还比较高时，终止发酵，将培养基加热至规定温度，重新进行灭菌处理后，再接入种子进行发酵；如果此时染菌已造成较大的危害，培养基中的碳、氮源的消耗量已比较多，则可放掉部分料液，补充新鲜的培养基，重新进行灭菌处理后，再接种进行发酵。
也可采取降温培养、调节pH值、调整补料量、补加培养基等措施进行处理。
3、发酵中、后期染菌处理
发酵中、后期染菌或发酵前期轻微染菌而发现较晚时，可以加入适当的杀菌剂或抗生素以及正常的发酵液，以抑制杂菌的生长速度，也可采取降低培养温度、降低通风量、停止搅拌、少量补糖等措施进行处理。
当然如果发酵过程的产物代谢已达一定水平，此时产品的含量若达一定值，只要明确是染菌也可放罐。
对于没有提取价值的发酵液，废弃前应加热至120℃以上、保持30min后才能诽
放。
4、染菌后对设备的处理
染菌后的发酵罐在重新使用前，必须在放罐后进行彻底清洗，空罐加热灭菌后至120℃以上、30min后才能使用。
也可用甲醛熏蒸或甲醛溶液浸泡12h以上等方法进行处理。
发酵过程中控制杂菌的方法
发酵过程中控制杂菌的方法
1.设备与环境消毒：
-在发酵前，应对所有接触发酵物料的设备，如发酵罐、管道、过滤器、阀门等进行全面、彻底的清洁和消毒，可使用高温蒸汽灭菌、化学消毒剂浸泡等方式进行消毒处理。
2.培养基灭菌：
-制备的发酵培养基必须在严格的无菌条件下操作，通过高压蒸汽灭菌或其它适用方式彻底灭菌，确保无任何杂菌存在。
3.无菌操作技术：
-接种、转接、取样等操作应在无菌操作台上进行，操作人员需要穿戴无菌防护装备，遵循无菌操作规程，避免引入杂菌。
4.种子纯化：
-使用纯净、活性良好的种子进行接种，必要时对种子进行多次传代净化，剔除可能携带的杂菌。
5.温度与pH控制：
-发酵过程中适当调整和控制温度、pH值等参数，创造有利于目标菌株生长而不利于杂菌滋生的条件。
6.监控与检测：
-定期对发酵过程进行监测，包括pH值、溶解氧、浊度等指标的变化，及时发现异常。
并对发酵液进行微生物检测，一旦发现杂菌污染，立即采取相应措施。
7.添加抑菌剂：
-在某些情况下，可在发酵过程中添加适量的抑菌剂或抗生素来抑制杂菌生长，但这需要考虑对目标菌株的影响。
8.应急措施：
-若发现早期染菌，可通过降低培养温度、调整补料策略、补充杀菌剂或抗生素等手段尝试挽救；若中后期染菌且不影响产品质量，则可考虑提前终止发酵。
9.优化工艺流程：
-改进工艺流程，如采用一次性使用系统、密闭连续流发酵技术等，减少人为操作带来的污染风险。
发酵工艺染菌综合分析及防止措施
发酵工艺染菌综合分析及防止措施YUKI was compiled on the morning of December 16, 2020发酵工艺：染菌(bacteria infection)综合分析及防止措施原创2016-07-01 arrowone1.造成发酵染菌的可能途径有哪些?菌种培养过程操作不当培养基灭菌不彻底发酵设备(如发酵罐、管道)密封不严空气除菌不净2.既然染菌不可避免，哪我们应该怎样做?要提高生产技术水平，强化生产过程的管理，把握好各个易染菌的环节，尽可能防止发酵染菌的发生；而且一旦发生染菌，要能尽快找出其污染的原因，并采取相应的有效措施，把发酵染菌造成的损失降低到最小。
3.不同发酵过程相对危害最大的杂菌种类？青爲素的发酵细短产气杆菌链霧素的发酵细短杆菌、假单泡杆菌四环素的发酵双球菌、芽他杆菌、荚膜杆菌谷氨酸的发酵噬菌体柠檬酸的发酵青霉菌4.不同生产阶段染菌对发酵的影响：种子培养期染菌:对整个发酵过程的危害极大发酵前期染菌：严重干扰生产菌的生长繁殖发酵中期染菌：干扰生产菌的代谢，影响产物的生成发酵后期染菌：影响相对较小5.不同染菌原因对发酵的影响：种子带菌：将导致染菌范围不断扩大，使生产蒙受重大损失。
空气带菌：使发酵大面积染菌培养基或设备灭菌不彻底：一般不具延续性，使单个（批）发酵罐发酵失败设备渗漏：染菌儿率较大&发酵异常现象及染菌原因分析：（1）溶解氧的异常变化当杂菌是好气性微生物时，溶解氧的变化是在较短时间内下降，直至接近于零，且在长时间内不能回升；当杂菌是非好气性微生物，而生产菌由于受污染而抑制生长，使耗氧量减少，溶解氧升高。
（2）排气的C02异常变化如杂菌污染时，糖耗加快，C02含量含量增加，噬菌体污染后，糖耗减慢，C02 含量减少。
因此，可根据C02含量的异常变化判断染菌。
（3）其它异常现象：如菌体生长不良、pH值的异常变化、发酵过程中泡沫的异常增多、发酵液的颜色异常变化、代谢产物含量的异常下跌、发酵周期的异常拖长、发酵液的粘度异常增加等判断染菌。
发酵罐染菌原因分析和解决办法
发酵罐染菌原因分析和解决办法2016-02-16云中白鹤发酵工程液体菌种替代固体菌种的趋势已经被大家认可了，现在越来越多的工厂开始使用液体菌种进行生产，虽然液体菌种各项生产指标都优于固体菌种，但是液体菌种的风险性却逐渐被人们所忽视。
液体菌种接种前一定要经过严格的检测才能够使用，但是更重要的是一旦发酵罐出现染菌，一定要尽快分析出染菌的原因，并加以解决。
要分析染菌的原因得从每一个环节出现染菌的表现说起，反过来，当出现染菌，我们就能找到是哪个环节出现问题了。
1、灭菌发酵罐灭菌不彻底引起的染菌会在里2-3天内表现出来，表现是培养液逐渐变得浑浊，菌球形成和生长变慢，不同细菌从排气味道上表现的程度有所不同，必须要注意的是如果培养的是低温品种，如金针菇，有表现的时间会延后，甚至到接种前从宏观上也没有明显的表现，只有通过检测才能确定已经感染细菌了。
引起发酵罐灭菌不彻底的原因主要在灭菌锅（韩式发酵罐），单体罐只要在灭菌过程的操作上。
解决办法：韩式发酵罐，检查灭菌锅程序、管路、电磁阀（气动阀）、温度传感器、压力传感器等。
单体发酵罐，检查冷空气是否排净、管路灭菌是否达标等。
经过排查还不能解决，就需要适当增加灭菌时间或者灭菌温度。
2、冷却冷却过程引起染菌主要是因为冷却过程到压力“0”以前没有及时给发酵罐进气，造成负压，虽然管路都安装有单向阀，但是要知道单向阀不是绝对的，而且单向阀使用时间久了出现故障的可能性很高。
一般因为冷却引起的染菌几率不高，染菌表现出来的时间比灭菌不彻底引起的染菌要晚一些。
解决办法：发酵罐冷却时安排专人负责，避免出现负压的情况，加强发酵罐管件的日常检查维护。
3、接种发酵罐接种的过程是罐体开放与外界连通的过程，是最危险的环节，接种引起的染菌表现严重时会很快，在1-2天就有可能表现出来，主要是人员操作不当所引起，食用菌层流罩净化效果下降也会引起染菌。
解决办法：加强接种人员的操作技能，要制定出操作规程；定期检查接种层流罩的净化效果，必要时每天对层流罩进行平板沉降检测。
染菌的检查、原因分析和防止措施
染菌的检查、原因分析和防止措施染菌的检查、原因分析和防止措施1.染菌的检查与判断在发酵过程中对杂菌污染的及早发现，及时处理，是免除染菌造成严重损失的重要问题。
因此，要求有确切、迅速的方法来检出杂菌的污染，目前常用方法主要有以下几种：（1）显微镜检查通常用革兰氏染色法，染色后在高倍显微镜下观察。
对霉菌、酵母发酵，先用低倍显微镜观察生产菌的特征，然后再用高倍显微镜观察有否染菌存在，根据生产菌与杂菌的特征区别，判断是否染菌。
必要时，可进行芽孢和鞭毛染色。
（2）平板划线培养或斜面培养检查法先将经灭菌的固体培养基倒入灭菌的平板中置培养箱摄氏37度，保温24h检查无菌即可使用。
将需要检查的样品，在无菌平板上划线，分别置摄氏37度、摄氏27度培养，以适应嗜中菌和低温菌的生长，一般在8h后即可观察。
噬菌体检查可采用双层平板培养法，底层同为肉汁琼脂培养基，上层减少琼脂用量。
先将灭菌的底层培养基熔后倒平板，凝固后，将上层培养基熔解并保持摄氏40度，加生产菌作为指示菌和待检样品混合后迅速倒在底层平板上，置培养箱保温培养，经12~20h培养，观察有无噬菌斑。
培养基（PH7.0）葡萄糖（%）牛肉膏（%）蛋白胨（%）氯化钠（%）琼脂（%）上层 0.5 1.0 1.0 0.5 1.0下层 0.5 1.0 1.0 0.5 2.0（3）肉汤培养检查法将需要检查样品接入经灭菌并经过检查无菌的肉汤培养基中，放置摄氏37度和摄氏27度分别培养24h，进行观察，并取样镜检。
此法常用于检查培养基和无菌空气是否带菌，也可用于噬菌体检查，此时使用生产菌作为指示菌。
葡萄糖酚红肉汤培养基：牛肉膏0.3%，葡萄糖0.5%，氯化钠0.5%，蛋白胨0.8%，1%酚红溶液0.4%，PH7.2。
用以上的检查方法检查未发现污染，还不能肯定未被污染。
除以上方法外，还可以从发酵过程的异常现象来判断是否染菌，如溶解氧、PH值、排气中CO2含量和菌体酶活力等变化来判断。
发酵设备的异常和染菌培训
发酵设备的异常和染菌培训异常情况和处理方法在发酵过程中，发酵设备可能遇到一些异常情况，这些情况可能会影响发酵的结果和产品质量。
因此，我们需要对这些异常情况进行及时的处理和解决。
以下是一些常见的发酵设备异常情况及其处理方法：1.温度异常发酵过程中，温度是一个非常重要的因素。
当发酵设备的温度超过或低于设定的范围时，都可能会影响发酵的结果。
如果发现温度异常，应立即检查温度控制器的设置，并根据需要进行调整。
同时，还应检查温度传感器是否正常工作，如果损坏或故障，应及时更换。
2.pH值异常pH值是另一个重要的因素，它对微生物的生长和发酵过程都有影响。
如果发酵设备的pH值超过或低于设定的范围，可能会导致微生物代谢产物的变化或产量下降。
在发现pH值异常时，应检查pH探头的状态，并根据需要进行校准。
同时，还应检查发酵液中是否存在其他酸碱物质，如果有，应及时调整。
3.氧气供应异常发酵过程中，适当的氧气供应对微生物的生长和代谢都非常重要。
如果氧气供应不足或过多，都可能对发酵结果产生负面影响。
当发现氧气供应异常时，应检查气体供应系统，并根据需要进行调整。
同时，还应检查气体进气孔是否阻塞，如有，应及时清理。
4.搅拌异常搅拌是发酵过程中必不可少的一环，它有助于保持发酵液的均匀性和稳定性。
如果搅拌异常，可能导致不均匀的发酵液，从而影响发酵结果。
在发现搅拌异常时，应检查搅拌装置的状态，并根据需要进行维修或更换。
5.压力异常在一些发酵设备中，可能存在压力控制系统。
当发酵设备的压力异常时，可能会影响发酵的过程和结果。
如果发现压力异常，应检查压力传感器和控制系统的状态，并根据需要进行调整或维修。
染菌培训染菌是一种常见的实验技术，它用于将微生物菌株接种到培养基中，以便进行后续实验研究。
染菌的正确操作对于实验结果的准确性和可重复性至关重要。
以下是染菌的基本步骤和一些建议：步骤1.准备培养基和染菌材料首先，准备所需的培养基和染菌材料。
根据实验的需要选择合适的培养基，并按照要求配制和消毒。
发酵车间安全隐患排查
发酵车间安全隐患排查一、发酵车间的安全隐患及排查方法1、设备和设施安全隐患（1）设备老化损坏：由于发酵车间长期运行，设备容易出现磨损和老化，可能导致设备的功能失效或者安全隐患。
排查方法：定期进行设备巡检和维护，及时更换老化设备。
（2）设备操作安全隐患：设备操作需要符合相关的安全规范，操作不当会引发事故。
排查方法：加强员工的安全操作教育，建立操作规程和操作程序，定期进行安全培训。
（3）设备布局不合理：设备的布局不合理容易产生交叉作业和碰撞，增加安全隐患。
排查方法：重新规划设备布局，调整设备位置，避免交叉作业。
2、化学品和原料安全隐患（1）化学品泄漏：发酵车间使用大量化学品，如酵母、酵素、食品添加剂等，一旦泄漏可能导致火灾、爆炸或中毒事故。
排查方法：严格遵守化学品存储和使用规范，定期进行化学品泄漏应急演练。
（2）原料储存不当：原料储存不当容易引发火灾或中毒事故。
排查方法：严格按照相关规范对原料进行分类存储，并定期进行清理和检查。
3、工作环境安全隐患（1）通风排气不畅：发酵车间的生产会释放大量二氧化碳和其他有害气体，通风排气不畅容易引发中毒事故。
排查方法：增加通风设备，定期清洁通风设备。
（2）工作台面不整洁：工作台面不整洁容易引发细菌滋生和交叉污染。
排查方法：加强工作台面的清洁和消毒，做好卫生防护。
4、火灾和爆炸安全隐患（1）电气线路老化：由于发酵车间的环境湿度大，电气线路容易老化短路，引发火灾。
排查方法：定期进行电气设备检查和维护，及时更换老化电气线路。
（2）静电积聚：发酵车间存在大量粉尘和化学品，易产生静电积聚，一旦遇到火源容易引发爆炸。
排查方法：加强对静电消除措施的规范管理，减少静电积聚。
以上是对发酵车间安全隐患的一些排查和处理方法，实际上，还有许多其他安全隐患需要我们关注和处理。
在排查和处理安全隐患的过程中，应该充分发挥员工的作用，提高员工的安全意识和责任感，同时也要加强安全管理，确保每一个安全隐患都能得到及时处理和整改。
好氧发酵工艺与设备—发酵染菌及防治
2. 染菌的原因分析
（1）发酵罐染菌分析 大部分发酵罐染菌：
染菌时期 发酵前期
发酵后期
原因
种子带菌、灭菌不彻底
中间补料染菌，如补料液带菌、 补料管渗漏，或油管系统发生问 题
个别发酵罐染菌：
一般原因是设备渗漏造成的
（2）从染菌的时间来分析
染菌时期 发酵前期
发酵中、后 期
原因
种子带菌、连消设备染菌
如杂菌类型相同一般是空气净 化系统存在空气系统结构不合理、 空气过滤介质失效或效率下降等 问题
将需要检查的样品在无菌的平板上 划线，分别置37℃、27℃培养，一般在 8h后即可观察。
（三）肉汤检查培养
液体培养基的检查:将需要检查的样品接入经灭菌，并经过检查无 菌的肉汤培养基中，放置37℃和27℃分别培养24h，进行观察，观 察肉汤是否浑浊。并取样镜检。 无菌空气的检查:将葡萄糖酚红肉汤培养基装在吸气瓶中，灭菌后， 37℃培养24h，若培养液未变浑浊，表明吸气瓶中的培养液是无菌 的，把过滤后的空气引入吸气瓶中，培养后，若培养液变混或变 黄色，表明空气中仍有杂菌，说明过滤系统有问题。
（3） 从染菌的类型来分析
杂菌
原因
耐热的芽孢 培养基或设备灭菌不彻底、设备存在死
杆菌
角等
球菌、酵母、 种子带菌、空气过滤效率低、除菌不彻
无芽孢杆菌 底、发酵罐的冷却管或加套等设备渗漏、
等
操作问题等
真菌
无菌室灭菌不彻底、无菌操作不当、灭 菌不彻底等
二、 染菌对不同发酵过程的影响
（1）青霉素发酵过程：由于许多杂菌都能产生青霉素酶，因此 在整个发酵过程中都会使青霉素迅速分解，造成目的产物得 率降低，危害十分严重。
微生物的浓度过低，发酵液转稀： 指发酵尚未进入放罐阶段，发酵液就变稀。 （1）原因：感染噬菌体、培养条件不合适。 （2）措施：防噬菌体、控制合适培养条件。 未知的其它原因：可补充氮源促菌丝生长，或补充碳源也可。 微生物的浓度过高，发酵液过浓： （1）原因：氮源过多，菌丝生长快、浓度大，从而降低发酵液中溶解 氧的浓度，影响发酵正常进行。 （2）措施：补入大量的水。
发酵染菌问题的预防
编者： 您好 我是《发酵科技通讯》的读者， 贵刊 ２００８ 年第 １ 期 ３９ 页《味精生产问答》题 ８８ 里面的“汽
泡传热较漫”应为“汽泡传热较慢”。 遥祝 工作顺利！ 宝鸡阜丰生物科技有限公司 包鑫
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!"
—３５—
管道设计必须遵循的原则： ａ、管道阀门越简单越好； ｂ、各罐排气、排污管道必须分开：
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!"
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!"
第 ３７ 卷第 ２ 期 ２００８ 年 ４ 月
发酵科技通讯
ｃ、物料管道流向应自上而下； ｄ、避免 Ｕ 型管道的设计等； ｅ、管道设计必须保证管道中物料无残留。 ３．２ 管道安装质量必须保 证 ： 法 兰 必 须 内 外 焊 接， 内部采用氩弧焊， 外面采用普通电焊， 确保管 内无焊渣、死角； 此外还必须注意的是管道与法兰 必须确保垂直， 否则安装后很容易发生渗漏。本厂 有一只发酵罐在投产后经常染菌， 怀疑是设备死 角所致， 花费了大量的人力进行罐内死角的清查， 但仍未能解决染菌问题， 最后发现接种分配站处 法兰与管道不垂直， 连接螺丝拧紧后仍然有微小 渗漏， 造成接种时带菌， 重新更换法兰后， 染菌问
膜过滤器在灭菌或通气过程中， 必须缓慢开 启阀门， 防止气流冲击滤芯导致滤芯损坏。
此外， 必须定期检测 膜过滤器滤芯的完好性， 可 以 通 过 泡 点 检 查 、在 位 空 气 肉 汤 培 养 、尘 埃 粒 子 计数器等方法来检验。
２ 设备死角及渗漏
一般情况下除非设 备设计有缺陷造成的死 角外， 只要加强罐内的清 洗， 尤其是视镜、排气管、 联轴器等地方的清洗， 确 保无积料， 就不会有设备 死角； 而设备渗漏造成的 染菌更为常见。
发酵生产中染菌的主要原因及检查方法
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发酵工程制药—发酵染菌及防治
三、不同染菌途径对发酵的影响
04 设备渗漏 染菌几率较大
03 培养基或设备灭菌不彻底 一般不具延续性，使单个（批）发 酵罐发酵失败
01 种子带菌 将导致染菌范围不断扩大，使生产 蒙受重大损失。
02 空气带菌 使发酵大面积染菌
四、不同染菌时间对发酵的影响
染菌时间：指无菌检查方法确准的污染时间，不是杂菌进入培养液的时间
（四）培养基灭菌不彻底导致染菌及防治
原料性状及灭菌技术的好坏影响灭菌质量。 1、原料性状 稀薄的培养基易灭菌彻底；而淀粉质原料特别是有颗粒时易灭菌不彻底或是升温过快或混 合不均时，易结块，使中心部位在灭菌时“夹生”，导致在发酵过程中团块散开而染菌。 防止措施： 淀粉质培养基以实罐灭菌为好，在升温时先搅拌均匀，加入一定量的a-淀粉酶进行液化， 并将原料大颗粒筛去。
放掉部分料液，补入必要营 养，重新灭菌再接种发酵
降温培养、调节ｐＨ、补加 培养基
发酵中后期染菌的处理
发
轻微染菌
酵
中
后
期
染
代谢产物已达一定水平
菌
的
处
无提取价值的发酵液
理
适当加入杀菌剂或抗生素及正 常的发酵液以抑制杂菌的生长 速度。
明确是染菌可放罐或继续培养
加热至1２0℃，保持30分钟 后排放
处理措施应具体问题具体分析、多种方法综合应用，如 案例：柠檬酸发酵中期染菌，处理措施：
✓ Ⅰ发酵初期，溶解氧基本不变 ✓ Ⅱ对数生长期，溶解氧浓度迅速下降 ✓ Ⅲ发酵中期，溶解氧有波动但变化不大 ✓ Ⅳ发酵后期，溶解氧浓度上升
ⅠⅡ Ⅲ
Ⅳ
➢ 异常的溶解氧曲线
1、当感染噬菌体时，生产菌的呼 吸作用受抑制，溶解氧浓度迅速上 升。感染噬菌体时的溶解氧的变化 比菌体浓度变化更灵敏。
发酵罐染菌处理
发酵罐染菌处理
发酵罐染菌处理是指发酵产生污染杂菌后，根据染菌时间、所染杂菌的危害性即时进行处理，同时对所涉及的设备也要及时处理。
发酵罐染菌处理1、种子罐染菌的处理：
种子罐染菌后都不能往下道工序移种，要即时用高压蒸汽直接灭菌后经过滤处理放下水。
发酵罐染菌处理2、发酵罐染菌的处理：
发酵罐前期产生染菌，污染的杂菌对产生菌的危害性大，采用蒸汽灭菌经过滤处理后放掉；如果危害性不大，可用重新灭菌、重新接种的方式处理，如营养成分消耗较多，可放掉部分培养液补入部分新培养基后进行灭菌,重新接种；如污染的杂菌量少且生长缓慢，可以继续运转下去，但要时刻注意杂菌数量和代谢的变化。
在发酵的中后期染菌，一是加入适量的杀菌剂，如呋喃西林或某些抗生素，抑制杂菌的生长。
二是降低培养温度或控制补料量来控制杂菌的生长速度。
如果采用上述两种措施仍不见效,就要考虑提前放罐。
发酵罐染菌处理3、染菌后的设备处理：
染菌后的罐体用甲醛等化学物质处理，再用蒸汽灭菌(各种附属设备)。
在再次投料之前，要彻底清洗罐体以及附件，同时进行严密程度检查，以防渗漏杂菌。
染菌后的处理尤为重要，很多大面积染菌都是由于处理不彻底而造成的系统污染，造成无法及时处理好各个环节出现连续污染。
发酵工程-浅析发酵中的染菌问题
浅析发酵中的染菌问题一．染菌问题的影响几乎所有的发酵工业，都有可能遭受杂菌的污染。
染菌的结果，轻者影响产量或产品质量，重者可能导致倒罐，甚至停产。
防止杂菌污染是任何发酵工程的一项重要工作内容。
尤其是无菌程度要求高的液体深层发酵，污染防止工作的重要性更为突出。
发酵设备、空气除菌系统和培养基灭菌系统等的有关设备以及管道的配置都必须严格符合无菌要求。
如果设备结构和管道配置不合理，制造、安装不注意或在发酵过程中操作不慎就会使发酵液污染杂菌，导致产量下降甚至得不到产品。
1.染菌对不同发酵过程的影响（1）青霉素发酵过程：由于许多杂菌都能产生青霉素酶，因此不管染菌是发生在发酵前期、中期或后期，都会使青霉素迅速分解破坏，使目的产物得率降低，危害十分严重。
（2）核苷或核苷酸发酵过程：由于所用的生产菌种是多种营养缺陷型微生物，其生长能力差，所需的培养基营养丰富，因此容易受到杂菌的污染，且染菌后，培养基中的营养成分迅速被消耗，严重抑制了生产菌的生长和代谢产物的生成。
（3）柠檬酸等有机酸发酵过程：一般在产酸后发酵液的pH值比较低，杂菌生长十分困难，在发酵中、后期不太会发生染菌，主要是要预防发酵前期染菌。
（4）谷氨酸发酵：周期短，生产菌繁殖快，培养基不太丰富，一般较少污染杂菌，但噬菌体污染对谷氨酸发酵的影响较大。
2.染菌发生的不同时间对发酵的影响（1）种子培养期染菌：由于接种量较小，生产菌生长一开始不占优势，而且培养液中几乎没有抗生素（产物）或只有很少抗生素（产物）。
因而它防御杂菌能力低，容易污染杂菌。
如在此阶段染菌，应将培养液全部废弃。
（2）发酵前期染菌：发酵前期菌量不很多，与杂菌没有竞争优势；且还未合成产物（抗生素）或产生很少，抵御杂菌能力弱。
如果前期染菌，且培养基养料消耗不多，可以重新灭菌，补加一些营养，重新接种再用。
（3）发酵中期染菌：发酵中期染菌会严重干扰产生菌的代谢。
杂菌大量产酸，培养液pH下降；糖、氮消耗快，发酵液发粘，菌丝自溶，产物分泌减少或停止，有时甚至会使已产生的产物分解。
发酵过程中染菌的有效控制及预防
发酵过程中染菌的有效控制及预防邢攀科摘要：针对微生物发酵过程中的染菌现象，分析了导致发酵染菌的几种主要原因，并提出了有效控制方法，以预防为主，及时观察分析，杜绝发酵染菌的隐患。
关键词：发酵染菌微生物发酵前言：杂菌感染，简称染菌，普遍存在于微生物发酵工业生产中。
特别是夏季，随着气温的不断升高．在丙酮、醇粮食发酵法工业生产中尤其突出[5]。
发酵过程是利用某种特定的微生物在一定的环境中进行新陈代谢，从而获得某种产品。
现代发酵工业要求纯种培养，不仅斜面、种子和培养基以及发酵罐、管道等须经严格灭菌除去各种杂菌，而且在需氧发酵中通入的空气也需经过除菌处理。
只有这样，才能确保生产不受杂菌污染，从而保证生产菌的旺盛生长。
染菌的结果，轻者影响产量或产品质量，重者导致倒罐，甚至停产。
工业发酵中污染杂菌造成的损失是十分惊人的，所以必须认真对待除菌。
1 发酵过程对设备的要求1.1发酵罐发酵罐在使用之前，需要进行认真检查，以消除染菌隐患，如搅拌系统转动有无异常;机械密封是否严密:罐内的螺丝是否松动;罐内的管道有无堵塞;夹层或罐内盘管是否泄漏;罐体连接阀门严密度等等。
机械密封目前在发酵罐上得到广泛应用，取代了以前搅拌轴采用的填料密封形式，但是由于安装精度不高或选用的机械密封不合适，仍然会由于轴封泄露造成染菌，因此在安装搅拌轴时要注意对中，为了便于观察罐内发酵情况，在人型发酵罐内一般设置有冲洗视镜的蒸汽管道，但是蒸汽一旦冷凝在管道中，冷凝水并不能完全保证无菌，因此冲洗视镜的蒸汽管道要去除，杜绝染菌隐患。
如果罐内雾气大看小清楚，可以采用更高亮度的视镜灯[6]。
1.2发酵罐附属设备发酵罐附属设备有空气净化系统，温度、压力流量等控制系统及相应的管道阀门。
哪一个环节出问题都会造成发酵失败[3]。
1.2.1空气净化系统传统的空气净化使用活性炭、棉花、超细玻璃纤维纸做过滤器Ul，过滤效果差，操作复杂。
目前国内的膜过滤技术比较成熟，用偏二氟乙烯((PVDF)制成的折叠微孔滤膜滤芯，过滤精度高，流量大。
发酵工程中的染菌原因及解决办法
学生综述性论文题目：发酵过程中染菌的分析、检测及预防姓名：刘莉学号：2008132114专业：生物技术班级：083班课程名称：微生物工程指导教师：燕平梅课程学期：2010至2011学年第一学期发酵过程中染菌的分析、检测及预防姓名：刘莉指导老师：燕平梅（太原师范学院生物系083班学号：2008132114）摘要：通过分析发酵过程中染菌的各种原因，总结检测染菌的方法，并提出染菌后应采取哪些措施及预防染菌的方法。
关键词：发酵；染菌；危害；检查；预防前言：发酵工业生产中，污染杂菌造成发酵失败的事故时常发生，严重影响发酵生产，关于发酵过程是否污染杂菌，如何检测，染了菌后如何处理等等，这些问题的研究是十分有意义的。
内容：1发酵染菌的危害1.1不同种类的杂菌对发酵的影响青霉素发酵：污染细短产气杆菌比粗大杆菌的危害大链霉素发酵：污染细短杆菌、假单孢杆菌和产气杆菌比粗大杆菌的危害大四环素发酵：污染双球菌、芽孢杆菌和夹膜杆菌的危害较大柠檬酸发酵：最怕污染青霉菌肌苷、肌苷酸发酵：污染芽孢杆菌的危害最大谷氨酸发酵：最怕污染噬菌体高温淀粉酶发酵：污染芽孢杆菌和噬菌体的危害较大1.2不同染菌时间对发酵的影响1.2.1种子培养期染菌菌体浓度低、培养基营养丰富1.2.2发酵前期染菌杂菌与生产菌争夺营养成分，干扰生产菌的繁殖和产物的形成1.2.3发酵中期染菌严重干扰生产菌的繁殖和产物的生成1.2.4发酵后期染菌如杂菌量不大，可继续发酵。
如污染严重，可采取措施提前放罐1.3不同染菌途径对发酵的影响种子带菌：种子带菌可使发酵染菌具有延续性空气带菌：空气带菌也使发酵染菌具有延续性，导致染菌范围扩大至所有发酵罐培养基或设备灭菌不彻底：一般为孤立事件，不具有延续性设备渗漏：这种途径造成染菌的危害性较大1.4染菌对产物提取和产品质量的影响1.4.1对过滤的影响发酵液的粘度加大；菌体大多自溶；由于发酵不彻底，基质的残留浓度加度。
造成过滤时间拉长，影响设备的周转使用，破坏生产平衡；大幅度降低过滤收率。
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只要注意对过滤器前压缩空气进行除湿脱油，并 按规范对过滤器进行灭菌，即可保证空气无菌。 另外，由于 PVDF 膜对压缩空气中的水分不敏感，
膜本身的疏水性强，因此可解决以往当空气湿度
过大时棉花过滤器等不能使用的问题。新疆某发
还煮了茶叶蛋给我们作为第二天的早餐。同学都感叹道：我们不是土豪，但我们
酵车间对 10 吨发酵罐采用 PVDF 过滤器的净化效 果进行了考察。技术人员在过滤器后挂了一个测 样瓶，测样瓶用灭菌后不接种的 LB 通用细菌培
还煮了茶叶蛋给我们作为第二天的早餐。同学都感叹道：我们不是土豪，但我们
内盘管是否泄漏，以及罐体连接阀门是否严密 等。 目前，机械密封在发酵罐上得到广泛应用， 其取代了以前搅拌轴的填料密封形式，但是如果 安装精度不高或选用的机械密封系统不合适，仍
然会发生轴封泄露，造成染菌。因此，在安装搅 拌轴时要注意对中。据了解，新疆某发酵车间采 用拉杆固定可调的中间轴承，通过调整中间轴承
目前，国产截止阀多为多层填料结构，且填
料结构中还附加了硬质隔环，或密封环上部具有
碟形弹簧，从而提高了密封力自调节的能力，改 善了密封性能。如发生上密封泄漏，而改动国产 阀门的上密封结构比较困难，可以通过更换填料
种类来解决泄漏问题。例如，用目前新型膨胀聚
四氟乙烯密封填料替代常规的石棉和膨胀石墨
还煮了茶叶蛋给我们作为第二天的早餐。同学都感叹道：我们不是土豪，但我们
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程度；罐体的密闭性，尤其是一些死角要特别注 意； 如果要移种，也要保证管路的无菌程度以及 死角；要保证种子的正常，没有染菌，无变异； 如果有中期补料，补料系统一定要保证以无菌。
1ck0f7c7a 发酵罐/
的阀门，例如用于控制流量的阀门。蒸汽级密封
适用于蒸汽和大部分其他工业用阀门的阀座、阀
还煮了茶叶蛋给我们作为第二天的早餐。同学都感叹道：我们不是土豪，但我们
杆和阀体连接部的密封。原子级密封适用于介质 密封性要求极高的场合，如宇宙飞船和原子能动 力设备等。由于发酵工业中使用高温蒸汽对发酵
设备进行灭菌，因此阀门对介质的密封性要求是
蒸汽级密封。
由于在发酵过程中阀门开启频繁，经常受介 质腐蚀、冲刷和气蚀的损害，因此对于阀门副结 构，即阀座与关闭件互相接触进行关闭的部分的
选择较为关键。阀门副结构的密封分为软密封和
硬密封两种。硬密封的密封副结构是靠阀座与关
还煮了茶叶蛋给我们作为第二天的早餐。同学都感叹道：我们不是土豪，但我们
闭件互相挤压发生微小弹塑性变形而形成一条 闭合的圆形密封接触线。虽然这类阀门在应用初 期密封效果良好，但是发酵阀门开启比较频繁，
种现象被称为阀门“上密封泄露”。然而，在发
酵生产中，阀门的上密封检查经常被忽视。2003
还煮了茶叶蛋给我们作为第二天的早餐。同学都感叹道：我们不是土豪，但我们
年，阀门的上密封泄漏事故就曾使新疆某虫草发 酵车间连续 1 个月染菌倒罐，企业经济损失很大。 因此，对发酵用的阀门不仅要重视密封副结构的
泄漏，更要重视上密封泄漏。 在发酵生产中，由于发酵工艺的要求，一些
阀门并不是按流体流向安装的，如在一些发酵罐 中，取样阀门是靠近发酵罐的第一阀门，为了在 取样前对该阀门进行灭菌，阀门的安装和发酵液
流向是相反的，这样才能在取样阀底部加我们作为第二天的早餐。同学都感叹道：我们不是土豪，但我们
构的密封要求非常高，否则发酵液可能渗入该取 样阀的上密封结构中甚至从上密封结构中泄漏， 从而造成发酵染菌。
可以采用更高亮度的视镜灯。 ■PVDF 膜净化效果可靠
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传统的空气净化系统使用活性炭、棉花、超 细玻璃纤维纸作为过滤芯，其过滤效果差，且操 作复杂。目前，国内的膜过滤技术已比较成熟，
如用偏二氟乙烯（PVDF）制成的折叠微孔滤膜滤
芯不仅过滤精度高，且流量大。使用时技术人员
填料，其耐磨、耐腐蚀，密封效果很好。 最
主要的是空气系统和罐内死角，其次才是种
子、操作和设备系统。如果是芽孢的话多可能是
死角，大面积的多为空气系统。你可以跟踪无菌 检验，看染菌时间及菌型关系，最好把种子制备 到发酵罐都有无菌跟踪。
无菌操作。种子不能有杂菌。空气过滤器要
保质。注意泡沫不要太多。保证空气系统的无菌
容易磨损先前形成的接触线，或者由于管道不清
洁而使密封面产生压痕而损坏。而硬密封的密封
副结构弹性变形量很小，形成新的密封接触线很 困难，因此长期使用可能导致阀门泄漏，使发酵 失败。软密封的阀门关闭件一般采用软质垫片，
利用垫片较大的弹塑性形变形成较宽的环形密
封接触带，以添塞密封面上的不平、消除间隙形
还煮了茶叶蛋给我们作为第二天的早餐。同学都感叹道：我们不是土豪，但我们
在发酵罐及其附属设备（空气净化系统，温 度、压力流量等控制系统及相应的管道阀门）中，
哪一个环节出现问题都可能造成发酵失败。因
此，企业首先应树立“预防为主”的观念，从设
备入手杜绝可能引起发酵染菌的各种隐患。
■保证发酵罐密封性 发酵罐是发酵生产的主要设备。在使用之 前，需要对发酵罐进行认真检查，如检查其搅拌 系统转动有无异常，机械密封是否严密，罐内的 螺丝是否松动，罐内的管道有无堵塞，夹层或罐
系统。因此，定期对这类探头、传感器等进行检
测十分重要。另外，随着发酵罐体积增大，相同
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罐压对应的罐温有所降低，因此当发现温度与压 力的相关性发生变化时，应以温度为准。 ■阀门宜采用软密封 阀门是在发酵设备中使用最多的附属设备，
其中使用最多的是截止阀。阀门对介质的密封性 可分为 4 级，即公称级、低漏级、蒸汽级和原子 级。公称级与低漏级密封适用于关闭要求不严密
对发酵培养基进行彻底的灭菌处理是利用 高温过饱和蒸汽使各种细菌、真菌蛋白质凝固而 死亡。在医药工业灭菌中，对预热时间、蒸汽阀
门的开度、灭菌温度、灭菌压力和泡沫控制等都
有严格要求，其中任何一个环节出现问题都很容
易导致染菌。一般工业上灭菌温度在 110℃，灭 菌压力在 0.5 兆帕以上，而保证灭菌温度和压力 的准确依赖于各种温度探头、压力传感器等监控
位置来减少搅拌轴的摆动，并采用多弹簧平衡型
机械密封，利用不同方向的弹簧弹力抵消搅拌轴
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的部分偏移，有效地实现了密封。 ■去除视镜冲洗管道
为了便于观察发酵罐内的发酵情况，在大型
发酵罐内一般都设置了冲洗视镜的蒸汽管道。但
是，蒸汽一旦冷凝在管道中，就无法完全保证冷 凝水的无菌，因此应该去除冲洗视镜的蒸汽管 道，减少染菌隐患。如果因罐内雾气大看不清楚，
养基，连续通入过滤后的压缩空气以监测过滤器
效果（只要 LB 通用细菌培养基保持清澈，就说
明过滤器运行正常）。结果表明，该车间 10 吨发 酵罐的过滤器在连续使用 3 个月后，测样瓶镜检 表明 LB 细菌培养基无菌，因此微孔滤膜（PVDF）
的净化效果是可靠的。 ■定期检测监控系统
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成密封。其加工精度一般要求不高，如有特殊要 求，阀体材料可采用不锈钢，软密封关闭件用可 更换的聚四氟乙烯垫片，这样可通过经常更换聚
四氟乙烯垫片来保证阀门的密封性。 ■重视阀门上密封检查
如果截止阀的阀杆和阀体内孔的加工质量 不好，或因长期使用导致磨损而使填料与阀杆的 配合间隙增大，都会导致介质由阀杆处泄漏，这