发酵染菌与防治案例

（三）发酵中后期染菌处理1、发酵中、后期染菌 或发酵前期轻微染菌而发现较晚时，可以适当加入 杀菌剂或抗生素以及正常的发酵液，以抑制杂菌的 生长速度，也可采取降低培养温度、降低风量、停 止搅拌、少量补糖等措施，进行处理2、如果发酵 过程的产物代谢已到达一定水平，此时产品的含量 若达一定值，只要明确是染菌也可放罐3、对没有 提取价值的发酵液，加热后排放
（四）染菌后对设备的处理：必须放罐后进行彻底 清洗，空罐加热灭菌至120℃以上、保持30min才 能使用
四、污染的防治策略
（一）强化空气处理过程：1、空气净化 流程2、过滤介质选择3、过滤介质的填 装4、空气净化系统的管理
（二）严格培养原料及设备的灭菌
1、原料预处理
原料除杂目的：为了清除谷物或水果原料中的土块 、石块、掉落的铁质零件，以免使机械收到磨损， 发生故障。影响后面的发酵工序
（三）发酵染菌原因
总结为发酵工艺流程中的各环节漏洞和发酵过程中管 理不善两方面。
各环节漏洞包括：1、培养基灭菌不彻底2、无菌空气 带菌3、种子带菌4、消泡剂带菌5、工艺用水带菌6、 管道及附属设备或罐体出现渗漏或死角7、泡沫逃溢8 、批次发酵后清洗不彻底等
发酵过程中管理不善：1、工人的培训不到位导致操 作上的认识2、发酵车间卫生环境差3、设备未定期检 修4、管理制度不完善
防止发酵生产中杂菌污染有着重要的意 义：1、保证发酵产品的质量、收率的温 度2、保持发酵生产正常有序的进行3、 有利于节约型社会的建立
一、发酵异常现象及染菌分析
（一）种子培养基和发酵的异常现象
1、种子培养基异常 出现菌体生长缓慢的原因是：1、种子自身的原因，菌种使用时间过 长，传代频繁、菌体老化及接种量少2、培养基的原因：批次间原料 成分波动大。种子培养基营养缺乏3、操作过程中的原因，培养基灭 菌不彻底、供氧不足等原因
出现菌丝结团的原因是：通气不足、溶氧条件差、搅拌的剪切力力
过大、培养基质量下降等原因
出现代谢不正常的原因是：培养环境差、接种量少、杂菌污染等原
因 2、发酵异常 1、菌体生长差2、PH异常3、溶解氧水平异常4、泡沫 过多5、菌体浓度过高或过低
（二）染菌隐患检查
发酵过程是否染菌应以无菌试验的结果 为依据。无菌试验方法主要有：显微镜 检查法、肉汤培养法、平板培养法、发 酵过程中的异常观察法。
3、不同污染阶段分析：1、染菌发生在种子 培养阶段，或称种子培养期染菌2、在发酵 过程中的初始阶段发生染菌，或称发酵前期 染菌3、发酵后期染菌大部分由空气过滤不 彻底，中间补料染菌，设备渗漏、泡沫顶盖 以及操作问题引起。
（五）染菌隐患处理
在正式发酵之前必须做到以下几点：1 、严格按照生产工艺要求的各项指标、 参数、条件进行操作2、投产前进行整个 发酵系统的无菌测试3、严格工人的管理 ，实行操作记录制度4、加强在线加测的 技术手段，各种生物传感器、探头要定 期校正5、定期对设备进行检修
（四）染菌原因分析
1、染菌杂菌分析表7-5
2、发酵染菌的规模分析
大批量发酵罐染菌：
染菌时期
原因
发酵前期
种子带菌、连消设备染菌
发酵中后期
一般空气净化系统结构不合理、空气过滤介质失效等
染菌时期 发酵前期 发酵后期
原因 种子带菌、联销系统灭菌不彻底 中间补料染菌，如补料液带菌、补料管渗漏
个别发酵染菌：大都是由于设备渗漏造成， 应仔细检查阀门、罐体、管路是否清洁。
粉碎的目的：为了增大原料的比表面积，减少固体 的团块
浸泡的目的：为了使原料与水充分接触，进而使营 养物质便于菌体的利用
2、培养基的灭菌
灭菌要求：在保证杀灭杂菌的前提下，尽可能多的保 留营养物质
3、设备灭菌
一、实罐灭菌。应该充分排净发酵罐内的冷空气二、 对设备死角的处理1、法兰连接的死角2、渣滓在罐 底用环式空气分布所形成的死角3、不锈钢衬里的死 角4、接种管路的死角5、排气管的死角6、不合理补 料管配置造成的死角7、压力表安装不合理形成的死 角
（二）发酵前期染菌处理：1、发酵前期发生染菌 后，如培养基中的碳、氮源含量还比较高时，终止 发酵，将培养基加热至规定温度，重新进行灭菌处 理后，再接入种子进行发酵2、如果此时染菌已造 成较大的危害，培养基中的碳、氮源的消耗量已比 较多，则可以放掉部分料液，补充新鲜的培养基， 重新进行灭菌处理后，再接种进行发酵3、也可采 取降温培养、调节PH、调整补料量、补加培养基等 措施进行处理
三、染菌污染后的挽救和处理
（一）种子培养期染菌的处理：若发现种子罐被 杂菌污染，应立即停止向发酵罐内在输送种子， 进行灭菌后排放，然后对种子罐连接的物料管道 、供气管道进行彻底的灭菌，与此同时，采用未 受污染的正常种子接入发酵罐中，以保证生产的 连续性，如无备用的种子，则可以选择一个适当 菌领的发酵罐中的发酵液作为种子，接入新鲜的 培养基中进行发酵，从而保证生产的正常进行。
无菌室无菌度的要求：把无菌培养皿平板 打开盖子在无菌室内放置30min，根据一 般工厂的经验，长出的菌落在3个以下为好
2.灭菌锅
注意：排气管是否畅通，因为灭菌锅的 排气管较小，易被铁锈或瓶子破碎后的 培养基等所堵塞
3、接种用具要求：1、新购置的玻璃仪 器的处理2、移种前的操作3、移种操作 过程的要求
（三）定期检测设备及管道
1、发酵设备ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ定期检查：机械密封在发酵 罐上得到广泛的应用
2、管道、阀门的定期检查：使用最多的是 截止阀，阀门分为公称级、低漏级、蒸汽级 和原子级
（四）严格培养物的移接
1.无菌室
配合使用化学灭菌药剂有：75%酒精、 0.6%-0.1%漂白粉、0.5%高锰酸钾等
二、染菌对发酵的影响
（一）染菌对不同发酵过程的影响
（二）杂菌的种类和性质对发酵过程的影响
（三）染菌发生的时间不同对发酵的影响：1 、种子培养期染菌2、发酵前期染菌3、发酵中 期染菌4、发酵后期染菌
（四）染菌程度对发酵的影响：染菌程度越大 ，发酵罐内的杂菌量越多，对发酵的危害也就 越大，如果染菌严重尤其是发酵的前期、中期 ，对发酵的影响是非常严重的。