肝炎病毒核酸检测及临床诊疗进展

国内行业标准
内标全程参与！ 核酸上样量≥20 ul！
国内现状
陈旧的技术
繁琐的过程
加热煮 沸
高速离 心
过柱吸 附
国内现状
令人揪心的性能
➢ 国内HBV DNA检测方法多为煮沸法，试剂灵敏度 均为500IU/ml或1000IU/ml。
➢ 国内大部分HCV RNA检测方法多为柱提法，试剂 灵敏度≥1000IU/ml。
专家呼吁
专家呼吁：高精度，超敏感的核酸诊断试剂的开 发是目前肝炎诊疗中的关键步骤！
➢ 五种乙型肝炎病毒核酸荧光定量检测试剂盒的比较,中华传染病杂志， 2009年 第3期——吴星,黄维金, 周诚 ,庄辉 等(中国药品生物制品检定所, 北京大学医学部)
➢ 国家“十一五”科技重大专项 “乙型和丙型病毒性肝炎诊断及临床监 测的研究” ——鲁凤民教授 北京大学肝炎试剂研究中心
病毒学不充分应答 HBV-DNA>2000 IU/ml
继续治疗 监测HBV-DNA/6个月
增加药物治疗 监测HBV-DNA/3个月
增加/更换有效的药物治疗 监测HBV-DNA/6个月
* 由美国坦福大学医学中心Keeffe教授（专家组）提供
国内行业指导原则
国家SFDA技术审评中心“863”课题《 HBV DNA定量试剂 技术审评指导原则》中指出： HBV DNA建议最低检测限应≤30 IU/mL。 DNA提取纯化方法不建议采用煮沸法进行DNA提取。
临床验证和对比
以湖南圣湘乙肝磁珠法为例
➢ 灵敏度可达10IU/ml，是国产主流试剂的50-100倍； ➢ 准确定量线性范围为20IU/ml～2.0×109IU/ml ➢ 可检测HBV A、B、C、D、E、F、G、H共8个基因型。 ➢ 设置了监控内标IC,有效避免假阴性。 ➢ 设置内参比荧光ROX，定量更准确。
没有经过ROX校正
经过ROX校正
注*：2倍梯度稀释，5个样本各重复3次检测
发展趋势
自动化的要求
不管技术多么复杂或简单， PCR技术逐步向自动化、高通量的方向发展！
谢谢！
2008年美国肝病协会CHB防治指南：持久消除HBV是乙肝的治疗终点， HBV DNA病毒载量尽可能小于或等于10 IU/ ml。
国际需求
欧洲肝病研究学会EASL2010年指南指出：将HBV DNA病毒载量尽可能控 制在10-15 IU/ ml，能有效防止疾病的复发。 欧洲肝病研究学会EASL2011指南指出：丙肝患者治疗的目标需HCV RNA病 毒载量低于50 IU/ ml。
发展趋势
Part 1 肝病PCR检测国内外需求及现状 Part 2 肝病PCR检测最新解决方案 Part 3 肝病PCR检测的发展趋势
wenku.baidu.com展趋势
简单化的要求
（25×33+288÷3）×15=？
发展趋势
➢ 一步法技术：最简便的PCR技术
一步操作即可实现核酸提取。
发展趋势
➢ 一步法技术优势：
快速，处理96个样本仅需 30min。 成本低，仅需一套移液器即可实现病毒检测。 操作步骤少，减少误差发生率，提高准确性。 极易掌握，对操作人员要求低，方便科室的人 员安排。
肝炎病毒核酸检测及临床诊疗进展
目录
Part 1 肝病PCR检测国内外需求及现状 Part 2 肝病PCR检测最新解决方案 Part 3 肝病PCR检测的发展趋势
目录
Part 1 肝病PCR检测国内外需求及现状 Part 2 肝病PCR检测最新解决方案 Part 3 肝病PCR检测的发展趋势
国际需求
何去何从
面对当前肝病毒 核酸检测技术的 现状，我们真没 有办法了吗？
解决方案
Part 1 肝病PCR检测国内外需求及现状 Part 2 肝病PCR检测最新解决方案 Part 3 肝病PCR检测的发展趋势
核酸检测发展要求
临床核酸提取技术的发展：
酚氯仿法
煮沸法
旋转离心柱法 玻璃粉吸附法 二氧化硅吸附法
发展趋势
准确化的要求
----内标监测系统， 假阴性的克星。
内标的作用
• 内标参与核酸提取与扩增，通过检测内标是否正常来监 测核酸提取和核酸扩增的有效性，试验结果是否有效， 避免PCR假阴性。
FAM:525nm
目的基因 内标
HEX:555nm
HEX 曲线 FAM曲
线 真阴性
ROX的作用
设置了参比荧光ROX，用于校正枪的误差、耗材质量（如管 盖厚度、透光性能不一致）所导致的光能损失、仪器孔间 差异，使结果更准确。
磁珠法
国内主流方法
国际主流方法
核酸检测发展要求
高精度 高品质 高科技
磁珠法技术
磁珠（电子显微镜）
磁珠法
----核酸诊断领域新方向。
磁珠分离器
技术原理
原理
DNA
----通过超顺磁性颗粒富集
核酸，实现样品高纯度、高
灵敏度的检测。
磁珠与DNA的结合
技术性能
磁珠法提取核酸效率高，纯度高，特异性好。 采用最新一代的磁珠提取核酸技术，无需加热、无 需高速离心、灵敏度极高，能够很好的满足临床诊疗 的需求。 抗干扰能力强，能胜任高血脂、强溶血以及药物治 疗标本的检测，是临床疾病检测的有力手段。 极易实现自动化。
国际治疗路线
（一） 核苷(酸)类似物治疗慢性乙肝路线图
开始治疗 HBV-DNA基线水平监测
治疗第12周 评估原发性治疗失败 HBV-DNA水平较基线水平下降幅度<1log/ml
治疗第24周 评估抗病毒疗效的早期预测因子
60IU/ml如何检测？
病毒学完全应答 HBV-DNA<60 IU/ml
病毒学部分应答 HBV-DNA:60 ~2000 IU/ml
临床验证和对比
以湖南圣湘乙肝磁珠法为例
* 9例定值在12 ~50 IU/ml之间
圣湘磁珠法技术在灵敏度方面存在明显优势，与进口试剂具有很好的一致 性，能够很好的胜任临床药物疗效的观察和治疗终点的确定。
Sansure-HBV ：圣湘HBV磁珠法 Roche-HBV ：罗氏 AmpliPrep-Cobas TaqMan HBV Test X-HBV：国内一家上市公司的HBV产品（浓缩煮沸法）